Monoclonal Mouse Anti-Human Smooth Muscle Actin

Monoclonal Mouse
Anti-Human Smooth Muscle Actin
Clone 1A4
Codice N. M0851
Uso previsto
Per uso diagnostico in vitro.
Monoclonal Mouse Anti-Human Smooth Muscle Actin, clone 1A4, viene utilizzato nelle indagini di
immunoistochimica. L'anticorpo marca fibre muscolari lisce, miofibroblasti e cellule mioepiteliali ed è un utile
strumento per individuare leiomiomi, leiomiosarcomi (1, 2) e adenomi pleomorfi (3). L’interpretazione clinica di
un’eventuale colorazione o della sua assenza deve essere integrata mediante studi morfologici avvalendosi di
controlli adeguati e deve essere valutata nell’ambito dell’anamnesi del paziente e di altri test diagnostici da
parte di un patologo qualificato.
Cenni e spiegazioni
Le actine citoplasmatiche, appartenenti al sistema di microfilamenti delle proteine citoscheletriche, figurano tra
le proteine eucariotiche meglio conservate nei mammiferi e negli uccelli. L'actina è una proteina costituita da
sei isoforme, caratterizzate da differenti sequenze aminoacide ma da identica massa molecolare, pari a 42
kDa. Nelle isoforme, l'omologia di sequenza complessiva è superiore al 90%, ma è solo pari al 50-60% nei 18
residui N-terminali. La regione N-terminale rappresenta una regione antigenica fondamentale (4). Esistono
differenti isoforme α specifiche per i tessuti muscolari, ad es. α muscolo scheletrico, α muscolo cardiaco e α
muscolo liscio (1). Le actine β e γ possono essere presenti sia nelle cellule muscolari che in gran parte degli
altri tipi cellulari (dell’organismo), incluse le cellule non muscolari (5).
Reagente fornito
Anticorpo monoclonale murino disponibile in forma liquida come supernatante di coltura cellulare, dialisato contro
0,05 mol/L di tris/HCl, pH 7,2, contenente 15 mmol/L di NaN3.
Clone: 1A4. Il clone 1A4 è identico all'anti-asm-1 descritto in (4). Isotipo: IgG2a, kappa.
Concentrazione di IgG murine: vedi etichetta sulla fiala.
La concentrazione della proteina tra i lotti potrebbe variare senza influenzare la diluizione ottimale. La
titolazione di ogni lotto è confrontata e regolata in base a un lotto di riferimento, per garantire la prestazione
della procedura di colorazione immunoistochimica da lotto a lotto.
Immunogeno
Decapeptide sintetico N-terminale di α actina muscolo liscio abbinato a emocianina di patella del tipo fissurella
(KLH) (4).
Specificità
Nel Western blot e nell'immunoblotting SDS-PAGE dell'isoforma di actina α muscolo liscio, l'anticorpo marca
una banda corrispondente all'actina α muscolo liscio (4).
Come dimostrato mediante Western blot e/o immunocitochimica, l'anticorpo ha una reazione crociata con
l'equivalente della α actina muscolo liscio nel pollo, nella mucca e nel ratto (4).
Precauzioni
1. Per operatori specializzati.
2. Questo prodotto contiene sodio azide (NaN3), sostanza chimica altamente tossica allo stato puro. Alle
concentrazioni indicate, il prodotto non è classificato come pericoloso, ma la sodio azide potrebbe reagire con
le tubature in piombo e rame formando azidi metalliche altamente esplosive. Per lo smaltimento del prodotto è
consigliabile sciacquare abbondantemente per prevenire la formazione di azidi metalliche nelle tubature.
3. Come per ogni prodotto di derivazione biologica, utilizzare procedure di manipolazione adeguate.
4. Indossare dispositivi di protezione personali per evitare il contatto con la cute e gli occhi.
5. Una soluzione inutilizzata deve essere smaltita secondo le direttive locali, statali e federali
Conservazione
Conservare a 2-8 °C. Non utilizzare dopo la data di scadenza stampata sulla fiala. Se i reagenti sono custoditi
con modalità diverse da quelle specificate, verificarne lo stato di conservazione. Non vi sono segni evidenti che
indichino l'instabilità del prodotto. Pertanto, i controlli positivi e negativi devono essere condotti
simultaneamente ai campioni del paziente. Contattare il Servizio Tecnico se si osserva una colorazione
inattesa non imputabile a modifiche delle procedure di laboratorio e si sospetta un problema dovuto
all'anticorpo.
Preparazione dei campioni
Sezioni in paraffina: L'anticorpo può essere usato per marcare sezioni di tessuto incluse in paraffina e fissate
con formalina. Si raccomanda di effettuare il pretrattamento dei tessuti con smascheramento termoindotto
dell'epitopo. Risultati ottimali si ottengono con 10 mmol/L di tampone tris, 1mmol/L di EDTA, pH 9,0. Risultati
meno ottimali si ottengono con la soluzione di riconoscimento bersaglio Dako, a pH elevato, codice n. S3308, o
10 mmol/L di tampone citrato, pH 6,0.Tuttavia, la soluzione di riconoscimento bersaglio Dako, codice n. S1700,
si è dimostrata inefficace. Il pretrattamento dei tessuti con proteinasi K ha portato alla distruzione dell'epitopo.
Le sezioni di tessuto non devono andare a secchezza durante il trattamento, né durante la successiva
procedura di colorazione immunoistochimica.
Sezioni congelate e preparati cellulari: L'anticorpo può essere usato per la marcatura di sezioni congelate
fissate in acetone (1).
(103898-003)
M0851/IT/KRM/2008.09.30. p 1/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Procedura di colorazione
Diluizione: In sezioni di colon umano normale, incluse in paraffina e fissate con formalina, l’anticorpo
monoclonale murino anti-actina muscolo liscio umana, codice n. M0851, può essere usato in un rapporto di
diluizione da 1:50 a 1:100, utilizzando smascheramento termoindotto dell'epitopo per 20 minuti in 10 mmol/l di
tampone tris, 1 mmol/L di EDTA, pH 9,0, e incubando per 30 minuti a temperatura ambiente in anticorpo
primario. Le condizioni ottimali possono variare in funzione del campione e del metodo di preparazione e
devono essere determinate dai singoli laboratori. Come controllo negativo si raccomanda di utilizzare IgG2a
murine Dako, codice n. X0943, diluite alla stessa concentrazione di IgG murine dell'anticorpo primario. Se non
è stato possibile accertare la stabilità dell'anticorpo diluito e del controllo negativo durante la procedura di
colorazione, si raccomanda di diluire i reagenti immediatamente prima dell'uso o diluire con Dako Antibody
Diluent, codice n. S0809. I controlli positivi e negativi devono essere condotti simultaneamente ai campioni del
paziente.
Visualizzazione: Si raccomanda di usare il kit Dako LSAB™+/HRP, codice n. K0679, e i kit Dako
EnVision™+/HRP, codici n. K4004 e K4006. Per le sezioni congelate e i preparati cellulari, il kit APAAP Dako,
codice n. K0670, è un'alternativa valida se si teme una colorazione da perossidasi endogena. Attenersi alla
procedura prevista per il kit di visualizzazione prescelto.
Procedura automatizzata: L'anticorpo è ideale per la colorazione immunoistochimica utilizzando piattaforme
automatizzate, come l'Autostainer Dako.
Caratteristiche Specifiche
della Performance
Le cellule marcate dall'anticorpo evidenziano un pattern di colorazione del citoplasma.
Tessuti normali: L'anticorpo marca le fibre muscolari lisce nei vasi sanguigni oltre alle cellule dei dotti salivari e alle
cellule mioepiteliali intorno agli acini delle ghiandole salivari (3). Inoltre, è stata registrata marcatura positiva delle
cellule muscolari lisce di 35/36 miometri normali (2). È stata osservata anche una marcatura temporanea degli
epatociti perisinusoidali (6). Nei tessuti congelati, l'anticorpo marca i miofibroblasti e le cellule mioepiteliali intorno
agli acini e ai dotti della mammella, mentre risultano negative le cellule epiteli (epitelio ghiandolare e squamoso), i
linfociti, le cellule muscolari cardiache e scheletriche, le cellule endoteliali, le cellule adipose, le cellule di Schwann
e i fibroblasti (1).
Tessuti anomali: L'anticorpo ha marcato 24/26 leiomiomi, 6/7 leiomiomi atipici e 21/25 leiomiosarcomi dell'utero,
oltre a 13/13 leiomiosarcomi extrauterini non gastrointestinali a cellule fusate (2). L'anticorpo, inoltre, ha marcato un
numero variabile di cellule in 8/8 tumori miofibroblastici pseudosarcomatosi della vescia in bambini (7). Negli
adenomi pleomorfi, l'anticorpo ha marcato le cellule epiteliali tumorali (cellule mioepiteliali) in 19/20 casi (3). Nei
tessuti congelati, l'anticorpo, oltre a 5/5 leiomiomi e 6/7 leiomiosarcomi, ha marcato anche 4/22 istocitomi fibrosi
maligni e 1/2 rabdomiosarcomi. Sono risultati negativi 6/6 schwannomi maligni, oltre a 13/13 tumori dei tessuti
molli, comprendenti 1 fibrosarcoma, 6 liposarcomi, 1 angiosarcoma, 1 emangioma capillare, 1 tumore maligno
misto (Triton tumour) e 3 sarcomi sinoviali (1).
Riferimenti bibliografici
1. Roholl PJM, Elbers HRJ, Prinsen I, Claessens JAJ, van Unnik JAM. Distribution of actin isoforms in
sarcomas: an immunohistochemical study. Hum Pathol 1990;21:1269-74.
2. Rizeq MN, van de Rijn M, Hendrickson MR, Rouse RV. A comparative immunohistochemical study of
uterine smooth muscle neoplasms with emphasis on the epithelioid variant. Hum Pathol 1994;25:671-7.
3. Brennan PA, Umar T, Zaki GA, Langdon JD, Spedding A, Buckley J, et al. Are myoepithelial cells
responsible for the widespread expression of inducible nitric oxide synthase in pleomorphic adenoma? An
immunohistochemical study. J Oral Pathol Med 2000;29:279-83.
4. Skalli O, Ropraz P, Trzeciak A, Benzonana G, Gillessen D, Gabbian G. A monoclonal antibody against αsmooth muscle actin: a new probe for smooth muscle differentiation. J Cell Biol 1986;103:2787-96.
5. Alberts B, Bray D, Lewis J, Raff M, Roberts K, Watson JD. The cytoskeleton. In: Alberts B, Bray D, Lewis J,
Raff M, Roberts K, Watson JD, editors. Molecular biology of the cell. 2nd ed. New York and London:
Garland Publishing; 1989. p. 613-629.
6. Schmitt-Gräff A, Krüger S, Bochard F, Gabbiani G, Denk H. Modulation of alpha smooth muscle actin and
desmin expression in perisinusoidal cells of normal and diseased livers. Am J Pathol 1991;138:1233-42.
7. Hojo H, Newton WA, Hamoudi AB, Qualman SJ, Wakasa H, Suzuki S, et al. Pseudosarcomatous
myofibroblastic tumor of the urinary bladder in children: a study of 11 cases with review of the literature. Am
J Surg Pathol 1995;19:1224-36.
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