VENTANA anti-CD10 (SP67) Rabbit Monoclonal Primary

VENTANA anti-CD10 (SP67) Rabbit Monoclonal Primary
Antibody
790-4506
05857856001
50
La concentrazione di proteina totale del reagente è di circa 3 mg/ml. La concentrazione
specifica dell’anticorpo è di circa 4,9 μg/ml. Il prodotto non presenta alcun tipo di reattività
aspecifica nota degli anticorpi.
VENTANA anti-CD10 (SP67) è un anticorpo monoclonale ricombinante prodotto da
surnatante di coltura cellulare purificato.
Fare riferimento al foglietto illustrativo del kit di rivelazione VENTANA appropriato per le
descrizioni dettagliate di quanto segue: (1) Principi della procedura, (2) Materiali e
reagenti necessari ma non forniti, (3) Prelievo dei campioni e preparazione per l’analisi,
(4) Procedure di controllo della qualità, (5) Risoluzione dei problemi, (6) Interpretazione
dei risultati e (7) Limiti generali.
MATERIALI RICHIESTI MA NON FORNITI
FINALITÀ D’USO
I reagenti di colorazione come i kit di rivelazione VENTANA e i componenti ausiliari,
compresi i vetrini di controllo dei tessuti positivi e negativi, non sono forniti.
È possibile che non tutti i prodotti elencati nel foglietto illustrativo siano disponibili in
tutte le zone geografiche. Rivolgersi al rappresentante dell’assistenza locale.
VENTANA anti-CD10 (SP67)
Rabbit Monoclonal Primary
Antibody è diretto contro la
molecola CD10, o antigene
della leucemia linfoblastica acuta
comune (CALLA), espressa
sulla superficie delle cellule linfoidi
precoci e su vari tessuti non linfoidi,
tra cui le cellule mioepiteliali della
mammella, i dotti biliari, i fibroblasti,
Figura 1. VENTANA anti-CD10 (SP67)
le membrane tubulari brush border
esibisce una colorazione della membrana
dei reni e l'epitelio dell'intestino
e/o del citoplasma in un tessuto di linfoma.
tenue. Questo anticorpo mostra
un pattern di colorazione della
membrana e/o del citoplasma che può essere utilizzato per aiutare nell'identificazione del
linfoma di Burkitt e del linfoma delle cellule germinali del follicolo, nonché nella classificazione di
alcuni carcinomi quali il carcinoma delle cellule renali. L’anticorpo è concepito per la colorazione
qualitativa di sezioni di tessuto fissate in formalina e incluse in paraffina.
Questo prodotto deve essere interpretato da un patologo qualificato unitamente
all’esame istologico, alle informazioni cliniche pertinenti e ai controlli appropriati.
Questo anticorpo è indicato per uso diagnostico in vitro (IVD).
I tessuti trattati normalmente, cioè fissati in formalina e inclusi in paraffina, sono utilizzabili con
questo anticorpo primario se usati con i kit di rivelazione VENTANA e gli strumenti
automatizzati VENTANA BenchMark IHC/ISH. Il fissativo consigliato per i tessuti è formalina
neutra tamponata al 10%7. I vetrini devono essere immediatamente colorati, poiché
l'antigenicità delle sezioni di tessuto tagliate può diminuire con il passare del tempo.
È auspicabile eseguire contemporaneamente controlli positivi e negativi ai campioni da testare.
RIASSUNTO E SPIEGAZIONE
AVVERTENZE E PRECAUZIONI
CONSERVAZIONE
Al ricevimento e quando non è in uso, il prodotto va conservato a 2-8 °C. Non congelare.
Per garantire la corretta erogazione di reagente e la stabilità dell’anticorpo, dopo ogni
utilizzo riposizionare il tappo e riporre immediatamente il dispensatore in frigorifero in
posizione verticale.
Ogni dispensatore di anticorpi riporta la data di scadenza. Se conservato adeguatamente,
il reagente resta stabile fino alla data indicata sull’etichetta. Non utilizzare il reagente oltre
la data di scadenza indicata.
PREPARAZIONE DEI CAMPIONI
VENTANA anti-CD10 (SP67) è un anticorpo monoclonale di coniglio ricombinante. Il CD10,
antigene della leucemia linfoblastica acuta comune (CALLA), è una glicoproteina di
membrana integrale da 90 a 110 kd.1 Nonostante la sua iniziale identificazione come marker
per le leucemie linfoblastiche acute (ALL), il CD10 funziona come una metalloendopeptidasi
neutrale, che rompe una varietà di peptidi biologicamente attivi.2,3 Il CD10 viene espresso
in vari tipi di tessuto normale, tra cui i precursori delle cellule linfoidi e in varie leucemie
e linfomi.4 La rivelazione del CD10 risulta utile nella caratterizzazione di un sottogruppo
di linfomi maligni, inclusi i precursori del linfoma linfoblastico B, il linfoma follicolare e il linfoma
di Burkitt, in cui il CD10 è spesso espresso.5 In aggiunta, il CD10 può essere utilizzato come
parte di un pannello di marker per carcinomi renali a cellule chiare o papillari sospette,
poiché l'espressione del CD10 è forte in quasi tutte queste neoplasie.6
1.
2.
3.
PRINCIPIO DELLA PROCEDURA
7.
8.
L'anticorpo VENTANA anti-CD10 (SP67) è un anticorpo monoclonale di coniglio diretto
contro un peptide sintetico corrispondente alla proteina umana CD10. VENTANA anti-CD10
(SP67) si lega alla proteina CD10 in sezioni di tessuto incluse in paraffina ed esibisce un
pattern di colorazione della membrana e/o citoplasmatico. Questo anticorpo può essere
visualizzato utilizzando l'OptiView DAB IHC Detection Kit (Cat. No. 760-700/06396500001)
oppure l'ultraView Universal DAB Detection Kit (Cat. No. 760-500/05269806001). Per
maggiori informazioni, fare riferimento al foglietto illustrativo di OptiView DAB IHC
Detection Kit o ultraView Universal DAB Detection Kit.
4.
5.
6.
Per uso diagnostico in vitro (IVD).
Solo per uso professionale.
La soluzione ProClin 300 viene utilizzata come conservante nel reagente. È
classificata come irritante e può causare la sensibilizzazione della cute. Adottare
precauzioni ragionevoli durante la manipolazione. Evitare il contatto dei reagenti
con occhi, pelle e mucose. Indossare guanti e indumenti di protezione adeguati.
I materiali di origine umana o animale devono essere considerati materiali a rischio
biologico e smaltiti mediante precauzioni appropriate.
Evitare il contatto dei reagenti con gli occhi e le mucose. Se i reagenti entrano in
contatto con aree sensibili, lavare con acqua abbondante.
Evitare la contaminazione microbica dei reagenti poiché può causare risultati non
corretti.
Consultare le autorità locali o statali in relazione al metodo di smaltimento consigliato.
Per ulteriori informazioni sulla sicurezza, consultare la Scheda dati di sicurezza del
prodotto e la Guida ai simboli e alle frasi di rischio alla pagina www.ventana.com.
REAGENTE FORNITO
VENTANA anti-CD10 (SP67) contiene reagente sufficiente per 50 test.
Un dispensatore da 5 ml di VENTANA anti-CD10 (SP67) contiene circa 24,5 μg di
anticorpo monoclonale di coniglio.
L'anticorpo è diluito in soluzione salina tamponata con fosfato contenente la proteina di
trasporto e 0,05% di ProClin 300, un conservante.
2016-09-12
FT0700-410m
1/4
1008496IT Rev F
PROCEDURA DI COLORAZIONE
Gli anticorpi primari VENTANA sono stati sviluppati per l'uso con gli strumenti
BenchMark IHC/ISH in combinazione con i kit di rivelazione e gli accessori VENTANA.
Vedere la Tabella 1 e Tabella 2 per i protocolli di colorazione consigliati.
Questo anticorpo è stato ottimizzato per tempi di incubazione specifici,
tuttavia l’utilizzatore deve convalidare i risultati ottenuti con questo reagente.
È possibile visualizzare i parametri per le procedure automatizzate, stamparli e modificarli
conformemente alla procedura descritta nel manuale d’istruzioni dello strumento. Fare
riferimento al foglio illustrativo del kit di rivelazione VENTANA pertinente per ulteriori
dettagli sulle procedure di colorazione immunoistochimiche.
Tabella 1. Protocollo di colorazione consigliato per VENTANA anti-CD10 (SP67) con la
rivelazione OptiView DAB IHC su strumento BenchMark XT, BenchMark GX e
BenchMarkULTRA.
Tipo di procedura
Metodo
Sparaffinatura
Selezionato
Cell Conditioning
(smascheramento dell’antigene)
Cell Conditioning 1
Strumento BenchMark ULTRA: 92 min
Strumento BenchMark XT: 92 min
Strumento BenchMark GX: 92 min
Inibizione perossidasi pre-primaria
Selezionato
Anticorpo (primario)
Strumento BenchMark ULTRA
28 min, 36 °C
Strumento BenchMark XT
12 min, 37 °C
Strumento BenchMark GX
32 min, 37 °C
Amplificazione
Hematoxylin II, 4 min
Post Controcolorazione
Bluing, 4 min
Sparaffinatura
Selezionato
Cell Conditioning 1
Strumento BenchMark ULTRA: 92 min
Strumento BenchMark XT: esteso (90 min)
Strumento BenchMark GX: esteso (90 min)
Anticorpo (primario)
Strumento BenchMark ULTRA
20 min, 36 °C
Strumento BenchMark XT
16 min, 37 °C
Strumento BenchMark GX
28 min, 37 °C
Amplificazione*
ULTRA (coniglio), XT, GX
Controcolorazione
Hematoxylin II, 4 min
Post Controcolorazione
Bluing, 4 min
INTERPRETAZIONE DELLA COLORAZIONE / RISULTATI PREVISTI
Il sistema OptiView è generalmente più sensibile del sistema di rivelazione ultraView.
L'utilizzatore deve convalidare i risultati ottenuti con questo reagente e i sistemi di rivelazione.
CARATTERISTICHE PRESTAZIONALI
Sono state condotte prove di colorazione di specificità, sensibilità e riproducibilità
e i risultati sono elencati nella Tabella 3, nella Tabella 4 e nella sezione Ripetibilità.
Specificità
Tabella 3. La specificità di VENTANA anti-CD10 (SP67) è stata determinata testando
tessuti normali fissati in formalina e inclusi in paraffina.a
Metodo
Cell Conditioning
(smascheramento
dell’antigene)
Il controllo positivo di tessuto raccomandato è costituito da tonsilla o linfonodo normale.
Le cellule B dei centri germinali devono mostrare un pattern di colorazione della
membrana moderato ma distinto. I neutrofili e le cellule endoteliali devono anche colorarsi
positivamente. Le cellule B della zona mantellare e le cellule epiteliali squamose devono
risultare negative.
LIMITAZIONI SPECIFICHE
* Amplification Kit (RIF 760-099)
Tabella 2. Protocollo di colorazione consigliato per VENTANA anti-CD10 (SP67)
ultraView Universal DAB IHC su strumento BenchMark XT, BenchMark GX e
BenchMark ULTRA.
Tipo di procedura
CONTROLLO POSITIVO DI TESSUTO
Il pattern di colorazione cellulare per VENTANA anti-CD10 (SP67) è di tipo membranoso
e citoplasmatico.
ULTRA (8/8 min), XT (12/12 min),
GX (8/8 min)
Controcolorazione
A causa delle variazioni nella fissazione e nella processazione dei tessuti, nonché delle
condizioni ambientali e degli strumenti di laboratorio generali, può essere necessario
aumentare o diminuire il tempo di incubazione, il cell conditioning o il pretrattamento con
proteasi dell’anticorpo primario in funzione dei singoli campioni, della rivelazione utilizzata
e delle preferenze scelte per il lettore. Per ulteriori informazioni sulle variabili di fissazione,
fare riferimento a “Immunohistochemistry Principles and Advances”. 8
Tessuti
N. casi
positivi /
totali
Tessuti
N. casi
positivi /
totali
Cervellob
0/3
Timob
0/3
Cervelletto
0/3
Midollo osseo
1/3
Ghiandola surrenaleb
1/3
Mesotelio polmonare
3/6
Ovaio
0/3
Polmone
3/3
Pancreasb
0/3
Cuore
0/3
Linfonodo
2/3
Esofago
0/3
Ghiandola paratiroidea
3/3
Stomaco
0/3
Ipofisi (ghiandola
pituitaria)b
0/3
Intestino tenue
3/3
Testicoloc
0/3
Colonb
0/3
Tiroide
0/3
Fegato
3/3
Seno
3/3
Ghiandola salivare
3/3
Milzab
2/3
Rene
3/3
Tonsille
3/3
Prostata
3/3
Endometrio
3/4
Cerviceb
0/3
Muscolo scheletrico
4/4
Cute
0/3
Nervo periferico
2/3
Vescica
3/3
a i casi positivi mostrano normale colorazione di una o più delle seguenti strutture: brush
border, cellule mioepiteliali, cellule alveolari polmonari, canalicoli biliari, tubuli prossimali,
glomeruli, cellule ghiandolari della prostata e linfociti derivanti da centri germinali
* Amplification Kit (RIF 760-080)
b colorazione di cellule endoteliali e linfociti
c colorazione nucleare focale delle cellule spermatogeniche
2016-09-12
FT0700-410m
2/4
1008496IT Rev F
Sensibilità
Patologia
Tabella 4. La sensibilità di VENTANA anti-CD10 (SP67) è stata determinata testando
un'ampia gamma di tessuti neoplastici fissati in formalina e inclusi in paraffina.
Patologia
N. casi positivi /
totali
N. casi positivi /
totali
Rabdomiosarcoma embrionale
0/1
Melanoma maligno (retto)
0/1
Glioblastoma con necrosi
1/1
Carcinoma delle cellule basali
0/1
Meningioma atipico
0/1
Carcinoma della pelle a cellule squamose
0/1
Ependimoma maligno
0/1
Mesotelioma maligno
1/1
Oligodendroglioma
0/1
Carcinoma a cellule di transizione della vescica
1/1
Adenocarcinoma ovarico sieroso
0/1
Leiomiosarcoma maligno di basso grado
0/1
Adenocarcinoma ovarico
0/1
Osteosarcoma (scarso)
0/1
Tumore delle cellule insulari
1/1
Rabdomiosarcoma a cellule fusiformi
0/1
Adenocarcinoma pancreatico
0/1
Leiomiosarcoma maligno moderato
0/1
Seminoma
0/1
Linfoma diffuso a grandi cellule B
Seminoma con trombo tumore vascolare (scarso)
0/1
Linfoma di Hodgkin
0/3
Carcinoma midollare della tiroide
0/1
Linfoma a cellule B non diversamente specificato
4/30
Carcinoma papillare della tiroide
1/1
1/3
Carcinoma duttale invasivo
0/3
Linfoma della zona marginale del tessuto associato alle
mucose (MALT)
Carcinoma polmonare non differenziato a piccole cellule
0/1
Linfoma a cellule mantellari
3/9
Carcinoma polmonare a cellule squamose
1/1
Linfoma anaplastico a cellule grandi
0/1
Adenocarcinoma polmonare
0/1
Linfoma linfocitico piccolo
1/1
Carcinoma neuroendocrino esofageo
0/1
Linfoma a cellule T
3/13
Adenocarcinoma esofageo
0/1
Carcinoma papillare renale
3/7
Carcinoma gastrico a cellule a castone
0/1
Adenocarcinoma renale
0/1
Adenocarcinoma dell'intestino tenue
0/1
Carcinoma uroteliale
9/13
Sarcoma stromale dell'intestino tenue
0/1
Oncocitoma
0/2
Adenocarcinoma del colon
0/1
Cromofobo RCC
1/8
Interstizioma del peritoneo
0/1
Variante eosinofila del carcinoma renale cromofobo
1/1
Adenocarcinoma (retto)
0/1
Carcinoma renale a cellule squamose
2/4
Interstizialoma maligno moderato del retto
0/1
Carcinoma midollare renale
0/1
Carcinoma epatocellulare
0/1
Carcinoma non differenziato NOS
1/1
Epatoblastoma
0/1
Nefroblastoma
2/3
Linfoma di Burkitt
1/1
Carcinoma renale a cellule chiare
52/56
Adenocarcinoma (grado di Gleason: 4; punteggio di Gleason:
4+5) (prostata)
1/1
Adenocarcinoma (grado di Gleason: 3; punteggio di Gleason:
3+4) (prostata)
1/1
Leiomioma uterino
0/1
Adenocarcinoma uterino
0/1
Carcinoma uterino a cellule chiare
0/1
Carcinoma della cervice a cellule squamose
0/2
2016-09-12
FT0700-410m
37/98
Ripetibilità
Sono stati completati degli studi sulla ripetibilità per VENTANA anti-CD10 (SP67) al fine
di dimostrare quanto segue:
•
Riproducibilità dell’anticorpo da un lotto a un altro.
•
Riproducibilità all’interno dello stesso ciclo e tra cicli diversi usando uno strumento
BenchMark XT.
•
Riproducibilità sulla stessa piattaforma sullo strumento BenchMark XT,
sullo strumento BenchMark GX e sullo strumento BenchMark ULTRA.
•
Riproducibilità tra piattaforme diverse sullo strumento BenchMark XT,
sullo strumento BenchMark GX e sullo strumento BenchMark ULTRA.
Tutti gli studi hanno soddisfatto i criteri di accettazione.
3/4
1008496IT Rev F
BIBLIOGRAFIA
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Shipp MA, Richardson NE, Sayre PH, et al. Molecular cloning of the common
acute lymphoblastic leukemia antigen (CALLA) identifies a type II integral
membrane protein. Proc Natl Acad Sci USA. 1988;85:4819-4823.
Kaufmann O, Flath B, Spath-Schwable E, et al. Immunohistochemical
detection of CD10 with monoclonal antibody 56C6 on paraffin sections. Am J
Clin Pathol. 1999;111:117-122.
Shipp MA, Vijayaraghavan J, Schmidt EV, et al. Common acute lymphoblastic
leukemia antigen (CALLA) is active neutral endopeptidase 24.1 1
(“enkephaljnase”): direct evidence bycDNA transfection analysis. Proc Natl
Acad Sci USA. 1989;86:297-301.
Arber DA, Weiss LM. CD10: a review. Appl lrnnamohistock mism 1997;5:125-140.
Chu P, Chang K, Weiss L, et al. Immunohistochemical Detection of CD10 in
Paraffin Sections of Hematopoietic Neoplasms: A comparison with flow
cytometry detection in 56 cases. Appl Immunohistochem & Molec Morphol.
2000;8:257-262.
Avery A, Beckstead J, Renshaw A. Use of Antibodies to RCC and CD10
in the differential diagnosis of renal neoplasms. Am J Surg Pathol.
2000;24:203-210.
Carson F, Hladik, C. Histotechnology A Self Instructional Text, 3rd edition.
Hong Kong: American Society for Clinical Pathology Press; 2009.
Roche PC, Hsi ED. Immunohistochemistry-Principles and Advances.
Manual of Clinical Laboratory Immunology, 6th edition. In: NR Rose, ed.
ASM Press; 2002.
PROPRIETÀ INTELLETTUALE
BENCHMARK, OPTIVIEW, ULTRAVIEW, VENTANA e il logo VENTANA sono marchi di
fabbrica di Roche.
Tutti gli altri marchi commerciali sono di proprietà dei rispettivi titolari.
© 2016 Ventana Medical Systems, Inc.
INFORMAZIONI DI CONTATTO
Ventana Medical Systems, Inc.
1910 E. Innovation Park Drive
Tucson, Arizona 85755
USA
+1 520 887 2155
+1 800 227 2155 (USA)
www.ventana.com
Roche Diagnostics GmbH
Sandhofer Strasse 116
D-68305 Mannheim
Germany
2016-09-12
FT0700-410m
4/4
1008496IT Rev F