Anti-Cytokeratin (CAM 5.2) Mouse Monoclonal Primary

Anti-Cytokeratin (CAM 5.2) Mouse Monoclonal Primary
Antibody
790-4555
06478425001
FINALITÀ D’USO
Anti-Cytokeratin (CAM 5.2) Mouse
Monoclonal Primary Antibody (antiCytokeratin (CAM 5.2)) è diretto contro
la citocheratina 7 e la citocheratina
8 presenti sugli epiteli secretori ma non
sugli epiteli squamosi stratificati.
Questo anticorpo può essere utilizzato
per facilitare l'identificazione di tumori
di origine epiteliale come cancro
Figura 1. Colorazione adenocarcinoma
colorettale, del pancreas e polmonare
del colon mediante anti-Cytokeratin
non a piccole cellule e per distinguere
(CAM 5.2).
i carcinomi da altri tumori maligni di
origine non epiteliale. L’anticorpo è concepito per la colorazione qualitativa di sezioni di
tessuto fissate in formalina e incluse in paraffina.
Questo prodotto deve essere interpretato da un patologo qualificato unitamente all’esame
istologico, alle informazioni cliniche pertinenti e ai controlli appropriati.
Questo anticorpo è indicato per uso diagnostico in vitro (IVD).
SOMMARIO E SPIEGAZIONE
Anti-Cytokeratin (CAM 5.2) è un anticorpo monoclonale di topo prodotto contro la linea
cellulare HT29 del carcinoma del colon e riconosce le proteine citocheratine intracellulari a
più basso peso molecolare (citocheratine 7 e 8).1 Anti-Cytokeratin (CAM 5.2) Mouse
Monoclonal Primary Antibody è diretto contro la citocheratina 7 e la citocheratina 8 presenti
sugli epiteli secretori ma non sugli epiteli squamosi stratificati. Questo anticorpo può essere
utilizzato per facilitare l'identificazione dei carcinomi neuroendocrini in vari tessuti, compresi
carcinomi tiroidei, pancreatici, polmonari non a piccole cellule e mammari.2,3
PRINCIPIO DELLA PROCEDURA
Anti-Cytokeratin (CAM 5.2) si lega alla citocheratina 7 e alla citocheratina 8 in sezioni di tessuto
incluse in paraffina e dimostra un pattern di colorazione citoplasmatico. Questo anticorpo può
essere visualizzato utilizzando ultraView Universal DAB Detection Kit (Cat. No. 760-500; Order
No. 05269806001) o iVIEW DAB Detection Kit (Cat. No. 760-091; Order No. 05266157001).
Per maggiori informazioni, fare riferimento ai foglietti illustrativi di ultraView Universal DAB
Detection Kit o iVIEW DAB Detection Kit.
REAGENTE FORNITO
Anti-Cytokeratin (CAM 5.2) contiene reagente sufficiente per 50 test.
Un dispenser da 5 ml di anti-Cytokeratin (CAM 5.2) contiene circa 57 μg di un anticorpo
monoclonale di topo.
L'anticorpo è diluito in 0,05 M Tris-HCL contenente l’1% di proteina vettore e ProClin 300
come conservante.
La concentrazione di proteina totale del reagente è di circa 10 mg/ml. La concentrazione
specifica dell'anticorpo è di circa 11 μg/ml. Il prodotto non presenta alcun tipo di reattività
aspecifica nota degli anticorpi.
Anti-Cytokeratin (CAM 5.2) è un anticorpo monoclonale prodotto come supernatante di
coltura cellulare.
Fare riferimento al foglietto illustrativo del VENTANA detection kit appropriato per le
descrizioni dettagliate di quanto segue: (1) Principi della procedura, (2) Materiali e
reagenti necessari ma non forniti, (3) Prelievo dei campioni e preparazione all'analisi,
(4) Procedure di controllo di qualità, (5) Risoluzione dei problemi, (6) Interpretazione dei
risultati e (7) Limitazioni generali.
FT0700-410
I reagenti di colorazione come i VENTANA detection kit e i componenti ausiliari, compresi i
vetrini di controllo dei tessuti positivi e negativi, non sono forniti.
È possibile che non tutti i prodotti elencati nel foglietto illustrativo siano disponibili in tutte
le zone geografiche. Rivolgersi al distributore locale.
CONSERVAZIONE
50
2016-04-06
MATERIALI NECESSARI MA NON FORNITI
1/3
Al ricevimento e quando non è in uso, il prodotto va conservato a 2-8 °C. Non congelare.
Per garantire la corretta erogazione di reagente e la stabilità dell'anticorpo, dopo ogni utilizzo
riposizionare il tappo e riporre immediatamente l'erogatore in frigorifero in posizione verticale.
Ogni dispensatore di anticorpi riporta la data di scadenza. Se conservato adeguatamente,
il reagente resta stabile fino alla data indicata sull'etichetta. Non utilizzare il reagente oltre
la data di scadenza indicata.
PREPARAZIONE DEI CAMPIONI
I tessuti trattati normalmente, cioè fissati in formalina e inclusi in paraffina, sono utilizzabili
con questo anticorpo primario se usati con i detection kit VENTANA, il VENTANA
BenchMark XT e i coloratori automatici di vetrini BenchMark ULTRA. Il fissativo consigliato
per i tessuti è formalina neutra tamponata al 10%4. I vetrini devono essere
immediatamente colorati, poiché l'antigenicità delle sezioni di tessuto tagliate può
diminuire con il passare del tempo.
È auspicabile eseguire contemporaneamente controlli positivi e negativi ai campioni da testare.
AVVERTENZE E PRECAUZIONI
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Per uso diagnostico in vitro (IVD).
Solo per uso professionale.
La soluzione ProClin 300 viene utilizzata come conservante nel reagente.
È classificata come irritante e può causare la sensibilizzazione della cute. Adottare
precauzioni ragionevoli durante la manipolazione. Evitare il contatto dei reagenti con
occhi, pelle e mucose. Indossare guanti e indumenti di protezione adeguati.
I materiali di origine umana o animale devono essere considerati materiali a rischio
biologico e smaltiti mediante precauzioni appropriate.
Evitare il contatto dei reagenti con gli occhi e le mucose. Se i reagenti entrano in
contatto con aree sensibili, lavare con acqua abbondante.
Evitare la contaminazione microbica poiché può causare risultati non corretti.
Consultare le autorità locali o statali in relazione al metodo di smaltimento consigliato.
Per ulteriori informazioni sulla sicurezza, consultare la Scheda dati di sicurezza del
prodotto e la Guida ai simboli e alle frasi di rischio alla pagina www.ventana.com.
PROCEDURA DI COLORAZIONE
Gli anticorpi primari VENTANA sono stati sviluppati per l’uso in un VENTANA
BenchMark XT e nei coloratori automatici di vetrini BenchMark ULTRA, in combinazione
con i detection kit e gli accessori VENTANA. Per i protocolli di colorazione consigliati, fare
riferimento alla Tabella 1 e alla Tabella 2.
Questo anticorpo è stato ottimizzato per un tempo di incubazione specifico, tuttavia
l'utilizzatore deve convalidare i risultati ottenuti con questo reagente.
È possibile visualizzare i parametri per le procedure automatiche, stamparli e modificarli
conformemente alla procedura descritta nel manuale d'istruzioni dello strumento. Fare
riferimento al foglietto illustrativo del VENTANA detection kit per ulteriori dettagli sulle
procedure di colorazione immunoistochimiche.
Tabella 1. Protocollo di colorazione consigliato per anti-Cytokeratin (CAM 5.2) con ultraView
Universal DAB Detection Kit su uno strumento BenchMark XT e BenchMark ULTRA.
Tipo di procedura
Metodo
Sparaffinatura
Selezionato
Cell Conditioning
(smascheramento dell’antigene)
Non richiesta
Enzima (Protease)
Protease 1, 8 minuti
Anticorpo (primario)
Strumento BenchMark XT
16 minuti, 37 °C
Strumento BenchMark ULTRA
16 minuti, 36 °C
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Tipo di procedura
Metodo
Controcolorazione
Hematoxylin II, 4 minuti
Post-controcolorazione
Bluing, 4 minuti
Tessuto
Tabella 2. Protocollo di colorazione consigliato per anti-Cytokeratin (CAM 5.2) con iVIEW
DAB Detection Kit su uno strumento BenchMark XT.
N. casi
positivi/totali
Tessuto
N. casi
positivi/totali
Mammella
(epitelio)
3/3
Rene
3/3
Milza
2/3
Prostata
3/3
Tonsille (epitelio
squamoso)
0/3
Cervice
0/3
0/3
Tipo di procedura
Metodo
Sparaffinatura
Selezionato
Endometrio
0/3
Cute
Cell Conditioning
(smascheramento dell’antigene)
Non richiesta
Muscolo
scheletrico
0/3
Mesotelio e polmone
Enzima (Protease)
Protease 1, 8 minuti
Nervo periferico
0/3
Anticorpo (primario)
Strumento BenchMark XT
32 minuti, 37 °C
Controcolorazione
Hematoxylin II, 4 minuti
Post-controcolorazione
Bluing, 4 minuti
13/18
Sensibilità
Tabella 4. La sensibilità di anti-Cytokeratin (CAM 5.2) è stata determinata testando una
varietà di tessuti neoplastici fissati in formalina e inclusi in paraffina.
A causa delle variazioni nella fissazione e nella processazione dei tessuti, nonché delle
condizioni ambientali e degli strumenti di laboratorio, può essere necessario aumentare
o diminuire il tempo di incubazione, il cell conditioning o il pretrattamento con proteasi
dell’anticorpo primario in funzione dei singoli campioni, della rivelazione utilizzata e delle
preferenze scelte per il lettore. Per ulteriori informazioni sulle variabili di fissazione, fare
riferimento a “Immunohistochemistry Principles and Advances”.5
Patologia
N. casi
positivi/totali
Glioblastoma a
1/1
Meningioma atipico
0/1
Ependimoma anaplastico
0/1
CONTROLLO POSITIVO DI TESSUTO
Oligodendroglioma
0/1
Esempi di tessuti di controllo positivi per questo anticorpo sono il carcinoma pancreatico
e il colon.
Adenocarcinoma ovarico sieroso
1/1
INTERPRETAZIONE DELLA COLORAZIONE / RISULTATI PREVISTI
Adenocarcinoma mucinoso ovarico
1/1
Il pattern di colorazione cellulare per anti-Cytokeratin (CAM 5.2) è di tipo citoplasmatico.
Neoplasia endocrina pancreatica (carcinoma delle cellule insulari)
0/1
LIMITAZIONI SPECIFICHE
Adenocarcinoma pancreatico
Questo anticorpo è stato ottimizzato per un tempo di incubazione specifico, tuttavia
l'utilizzatore deve convalidare i risultati ottenuti con questo reagente.
Carcinoma adenosquamoso pancreatico
2/3
Carcinoma pancreatico a cellule acinose
2/2
Carcinoide pancreatico
3/3
Carcinoma neuroendocrino pancreatico
2/2
Carcinoma pancreatico solido-pseudopapillare
2/2
Carcinoma non differenziato pancreatico
1/1
Seminoma b
1/1
PRESTAZIONI
Sono state condotte prove di colorazione di specificità, sensibilità e riproducibilità e i
risultati sono elencati nella Tabella 3, nella Tabella 4 e nella sezione Ripetibilità.
Specificità
Tabella 3. La specificità di anti-Cytokeratin (CAM 5.2) è stata determinata testando tessuti
normali fissati in formalina e inclusi in paraffina.
Tessuto
N. casi
positivi/totali
Cervello
0/3
Timo (linfoide)
0/3
Carcinoma embrionale
1/1
Cervelletto
0/3
Mieloide
(midollo osseo)
0/3
Carcinoma midollare
1/1
Ghiandola
surrenale
3/3
Cuore
(muscolo cardiaco)
0/3
Carcinoma papillare
1/1
Carcinoma intraduttale mammario
1/1
Ovaio (stroma)
0/3
Esofago
2/3
Carcinoma lobulare mammario in situ
0/1
24/25
Stomaco
3/3
Carcinoma duttale invasivo mammario
1/1
Linfoma diffuso a cellule B
0/2
Pancreas
Tessuto
N. casi
positivi/totali
104/106
Ghiandola
paratiroidea
2/3
Intestino tenute
3/3
Adenoipofisi
3/3
Colon
6/7
Testicolo
0/3
Fegato
3/3
Tiroide
3/3
Ghiandola salivare
3/3
2016-04-06
FT0700-410
La positività focale può essere dovuta alla reattività crociata di AntiCytokeratin (CAM 5.2) con la proteina acida fibrillare gliale (GFAP), con
conseguente colorazione aberrante dei tumori gliali6
b Focalmente positivo
a
2/3
1009934IT Rev D
Patologia
N. casi
positivi/totali
Ripetibilità
Carcinoma polmonare a cellule squamose
20/23
Adenocarcinoma polmonare
33/33
Carcinoide polmonare atipico
0/2
Carcinoma a cellule giganti
2/2
Carcinoma a grandi cellule
2/2
Sono stati completati studi di ripetibilità per anti-Cytokeratin (CAM 5.2) allo scopo
di dimostrare:
•
Riproducibilità dell'anticorpo da un lotto a un altro.
•
Riproducibilità all'interno dello stesso ciclo e tra cicli diversi usando uno strumento
BenchMark XT.
•
Riproducibilità sulla stessa piattaforma sullo strumento BenchMark XT e sullo
strumento BenchMark ULTRA.
•
Riproducibilità tra piattaforme diverse tra gli strumenti BenchMark XT e
BenchMark ULTRA.
Tutti gli studi hanno soddisfatto i criteri di accettazione.
Carcinoma esofageo a cellule squamose
0/1
BIBLIOGRAFIA
Adenocarcinoma esofageo
1/1
Adenocarcinoma mucinoso dello stomaco
1/1
2.
Adenocarcinoma mucinoso colorettale
13/13
3.
Adenocarcinoma colorettale
56/57
Carcinoma polmonare non differenziato a piccole cellule
2/8
Adenocarcinoma dell'intestino tenue
1/1
GIST
0/3
Carcinoma epatocellulare
0/1
Epatoblastoma
0/1
Carcinoma renale a cellule chiare
1/1
Adenocarcinoma prostatico
1/1
Carcinoma a cellule transizionali della prostata
1/1
Leiomioma
0/1
Adenocarcinoma endometriale
1/1
Carcinoma a cellule chiare dell'endometrio
1/1
Carcinoma cervicale a cellule squamose
1/2
Rabdomiosarcoma embrionale
0/1
Melanoma anale maligno
0/1
Carcinoma delle cellule basali
1/1
Carcinoma della pelle a cellule squamose
1/1
Neurofibroma
0/1
Neuroblastoma
0/1
Mesotelioma
1/1
Linfoma diffuso
0/2
Linfoma di Hodgkin
0/1
Carcinoma uroteliale
1/1
Leiomiosarcoma a basso grado
0/1
Osteosarcoma
0/1
Rabdomiosarcoma a cellule fusiformi
0/1
Leiomiosarcoma di grado intermedio
0/1
2016-04-06
FT0700-410
1.
4.
5.
6.
Makin CA, et al. Monoclonal antibody to cytokeratin for use in routine
histopathology. J Clin Pathol. 1984;37:975-983.
Chu PG, et al. Keratin expression in endocrine organs and their neoplasms. Endocr
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Quinlan RA, et al. Patterns of Expression and Organization of Cytokeratin
Intermediate Filaments. Annals New York Academy of Sciences. 282-306.
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Kong: American Society for Clinical Pathology Press; 2009.
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2006;19(1):115-121.
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