Monoclonal Rabbit Anti-Human AMACR Clone 13H4 Codice M3616

Monoclonal Rabbit
Anti-Human AMACR
Clone 13H4
Codice M3616
Uso previsto
Per uso diagnostico in vitro.
Monoclonal Rabbit Anti-Human AMACR, Clone 13H4, è previsto per l'utilizzo in immunoistochimica. Questo
anticorpo è utile per l'identificazione degli adenocarcinomi della prostata (1-9). L’interpretazione clinica di
un’eventuale colorazione o della sua assenza deve essere integrata mediante studi morfologici avvalendosi di
controlli adeguati e deve essere valutata nell’ambito dell’anamnesi del paziente e di altri test diagnostici da parte
di un patologo qualificato.
Sinonimi per
l'antigene
P504S, alfa metilacil coenzima A racemasi (1, 2).
Cenni introduttivi
Monoclonal rabbit anti-AMACR (alfa metilacil coenzima A racemasi) riconosce una proteina a 382 aminoacidi
identificata mediante la sottrazione della libreria di cDNA in congiunzione con un'elevata capacità di trattamento
microarray screening di adenocarcinomi della prostata (1). AMACR, noto anche come P504S, è un enzima
coinvolto nella biosintesi dell'acido biliare e nella β-ossidazione di acidi grassi a catena ramificata (10). AMACR si
esprime nelle cellule di neoplasie prostatiche intraepiteliali premaligne di grado elevato (HGPIN) e
dell'adenocarcinoma della prostata, ma è presente in livelli bassi o non rilevabili nelle cellule epiteliali ghiandolari
della prostata normale e nell'iperplasia prostatica benigna (1-9). AMACR è espresso in epitelio normale non
prostatico e in carcinomi dall’esterno della prostata (2, 11-23).
Fare riferimento alle General Instructions for Immunohistochemical Staining della Dako o alle istruzioni sul
sistema di rilevazione per le procedure IHC per: (1) Principio della procedura, (2) Materiali necessari ma non
forniti, (3) Conservazione, (4) Preparazione dei campioni, (5) Procedura di colorazione, (6) Controllo della qualità,
(7) Risoluzione dei problemi, (8) Interpretazione della colorazione, (9) Limiti generali.
Reagente fornito
Anticorpo monoclonale di coniglio fornito in forma liquida come supernatante per colture cellulari (contenente
siero bovino fetale), dializzato contro Tris-HCl 0,05 mol/l a pH 7.2 e contenente sodio azide 0,015 mol/l. Contiene
una proteina stabilizzante.
Clone: 13H4 (1-3).
Concentrazione di Ig di coniglio (mg/L): vedere l'etichetta stampata sulla fiala.
La concentrazione della proteina tra i lotti potrebbe variare senza influenzare la diluizione ottimale. La titolazione
di ogni lotto è confrontata e regolata in base a un lotto di riferimento, per garantire la prestazione della procedura
di colorazione immunoistochimica da lotto a lotto.
Immunogeno
AMACR ricombinante a tutta lunghezza (1).
Specificità
La specificità dell'anti-AMACR monoclonale di coniglio è stata valutata mediante metodiche immunoistochimiche
e Western blot. L'anti-AMACR ha formato legami positivi con cellule HEK293 fissate in formalina che
presentavano una sovraespressione di AMACR, ma non ha reagito con cellule transfettate con un plasmide
vuoto. Nel Western blot dei lisati derivati da campioni di carcinoma prostatico primario, l'anti-AMACR
monoclonale di coniglio ha identificato una proteina con peso molecolare 54 kDa coerente con il peso molecolare
noto del AMACR (3).
Precauzioni
1.
Per uso professionale.
2.
Questo prodotto contiene sodio azide (NaN3), una sostanza chimica fortemente tossica in forma pura.
Sebbene non sia classificata come prodotto pericoloso, la sodio azide alle concentrazioni indicate può
reagire con il rame e il piombo delle tubature formando azidi metalliche fortemente esplosive. Durante lo
smaltimento, sciacquare le tubature con abbondante acqua per prevenire l’eventuale accumulo di azide
metallica.
3.
Adottare le normali procedure previste per il trattamento dei prodotti di origine biologica.
Conservazione
(108081-003)
4.
Indossare indumenti di protezione personale adeguati, per evitare il contatto con gli occhi e la pelle.
5.
Smaltire la soluzione inutilizzata nel rispetto delle disposizioni locali, regionali e nazionali in materia.
Conservare a 2–8 °C. Non utilizzare dopo la data di scadenza stampata sulla fiala. Se i reagenti sono conservati
in condizioni diverse da quelle specificate, le loro condizioni dovranno essere verificate dall'utente. Non sono stati
osservati segni evidenti che suggeriscano l'instabilità di questo prodotto, pertanto è opportuno analizzare un
controllo positivo e un controllo negativo insieme ai campioni dei pazienti. Qualora si ottenga una colorazione
imprevista, che non sia cioè giustificata da un cambiamento delle procedure di laboratorio ma sia dovuta ad un
probabile problema dell'anticorpo, contattare l’Assistenza Tecnica di Dako.
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Specimen preparation
(Allestimento tessuto)
compresi i materiali
necessari ma non
forniti
Sezioni incluse in paraffina
L’anticorpo può essere utilizzato per marcare sezioni di tessuto incluse in paraffina, fissate in formalina. Evitare
che le sezioni di tessuto si secchino durante il trattamento o nella successiva fase di colorazione
immunoistochimica.
È necessario il pretrattamento di sezioni di tessuto deparaffinate con la tecnica del recupero termoindotto di
epitopi (HIER). I risultati ottimali si ottengono pretrattando i tessuti con HIER utilizzando Dako Target Retrieval
Solution, pH 9 (Codici S2368/S2367).
La tecnica HIER (Heat-Induced Epitope Retrieval) comporta l’immersione delle sezioni di tessuto in una
soluzione tampone preriscaldata e il mantenimento di una temperatura costante di 95–99 °C in un bagnomaria.
Adottare un protocollo di riscaldamento della durata di 20 minuti per la tecnica HIER eseguita a 95–99 °C. Dopo il
trattamento termico, lasciare raffreddare la vaschetta con il tampone e i vetrini per 20 minuti a temperatura
ambiente. Al termine della procedura HIER, sciacquare accuratamente con tampone o acqua deionizzata. Per
fare in modo che le sezioni di tessuto aderiscano perfettamente al vetro dei vetrini, si consiglia di utilizzare gli
appositi vetrini silanizzati (Silanized Slides, codice S3003).
Sezioni congelate e strisci cellulari
L'anticorpo è consigliato per l'uso con per sezioni congelate, fissate in acetone oppure su strisci cellulari fissati.
Procedura per la
colorazione
compresi i materiali
necessari ma non
forniti
Diluizione: Monoclonal Rabbit Anti-Human AMACR, Codice M3616, può essere utilizzato a una diluizione di
1:100 – 1:300 per l'applicazione su sezioni pretrattate, fissate in formalina e incluse in paraffina, con
un'incubazione a temperatura ambiente per 30 minuti. È opportuno diluire l'anticorpo nel reagente Dako Antibody
Diluent (Codice S0809). Queste informazioni sono fornite esclusivamente come linee guida. La condizione
ottimale può variare a seconda del tipo di campione e del metodo di preparazione adottato, pertanto dovrà
essere definita autonomamente da ogni laboratorio. Il reagente di controllo negativo consigliato è Dako Negative
Control, Rabbit Immunoglobulin Fraction (Solid-Phase Absorbed) (Cod. X0936), diluito alla stessa concentrazione
di proteine dell'anticorpo primario. A meno che la stabilità dell'anticorpo e del controllo negativo diluiti non sia
stata verificata nella procedura effettiva di colorazione, è opportuno diluire tali reagenti immediatamente prima
dell'uso. I controlli positivi e negativi devono essere analizzati insieme ai campioni dei pazienti.
I controlli positivi e negativi con i tessuti devono essere analizzati contemporaneamente, utilizzando lo stesso
protocollo dei campioni dei pazienti.
Visualizzazione: i sistemi consigliati sono Dako EnVision™+ System/HRP, Dual Link Rabbit/Mouse (Codice
K4061), Dako EnVision™+ System/HRP, Rabbit (Codici K4002/K4003/K4010/K4011). Seguire la procedura
fornita con i sistemi di visualizzazione selezionati.
Automatizzazione: l'anticorpo è idoneo per le procedure di colorazione immunoistochimica su piattaforme
automatizzate, come ad esempio Dako Autostainer, Autostainer Plus e Autostainer Link.
Interpretazione dei
risultati della
colorazione
Il pattern di colorazione cellulare è di tipo citoplasmatico.
Caratteristiche
prestazionali
Tessuti normali:
(108081-003)
Tipo di tessuto (n. di campioni) 2-5,11-14
Surrene (12)2
Vescica urinaria (7)2
Cervello (5)2
Mammella (12)2
Colon (24)11,12
Colon, polipo iperplastico (28)12
Endometrio (17)2,11
Cistifellea (10)2
Cuore (5)2
Rene (12)2
Fegato (31)2,13
Polmone (18)2,11
Linfonodo (7)2
Ovario (14)2,11
Pancreas (15)2
Prostata, normale (34)2,11
Prostata, benigna (156)3,4,5
Ghiandola salivare (7)2
Cute (10)2,11
Intestino tenue (18)2
Milza (12)2
Stomaco (13)2
Stomaco, epitelio non neoplastico (44)14
Testicolo (5)2
Tiroide (5)2
Elementi del tessuto con colorazione positiva
0/12
0/7
0/5
0/12
20/24 epitelio colonico di superficie sia focale che luminale
1/28
0/17
10/10 cellule epiteliali
0/5
12/12 cellule epiteliali tubulari
18/31 epatociti
12/18 cellule epiteliali bronchiali
0/7
0/14
0/15
0/34
11/156
0/7
0/10
0/18
0/12
0/13
2/44
0/5
0/5
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Tessuti patologici:
L'anti-AMACR è immunoreattivo con la maggior parte dei carcinomi della prostata analizzati (2- 8, 11).
Tipo di tessuto (n. di campioni) 2,11-23
Tumore adrenocorticale (20)2
Carcinoma delle cellule basali della cute (20)2
Colangiocarcinoma dei dotti biliari (14)2
Adenocarcinoma della mammella (315)2,11,15
Tumori carcinoidi; polmone e GI (10)2
Carcinomi del colon (233)11,12,16,17
Colon (35)11,16
Ben differenziati (58)12
Moderatamente differenziati (88)12
Poco differenziati (30)12
Metastatico (22)17
Carcinoma endometroide (10)2
Tumori delle cellule germinali (14)2
Carcinoma epatocellulare (72)2,13
Carcinoma polmonare (300)2,11,18
Carcinoma (28)11
Adenocarcinoma (151)2,18
Carcinoma epidermoide (121)18
Melanoma (41)2,11
Carcinoma neuroendocrino; GI, polmone e fegato (167)2,18
Adenocarcinoma dell'ovaio (76)2,11,17
Adenocarcinoma del pancreas (13)2
Mesotelioma pleurico (16)2
Adenocarcinoma della prostata (640)2-8,11
Tumori renali (105)19,20
Carcinoma a cellule chiare (77)19,20
A cellule cromofobe (24)19,20
Oncocitoma (29)19,20
Bellini/uroteliale (5)19
Carcinoma mucinoso e a cellule fusate (5)19
Papillare (96)19,20
Sarcomatoide (15)20
Tumori della ghiandola salivare (28)2
Carcinoma a piccole cellule; polmone e pelle (15)2
Sarcoma epitelioide del tessuto molle (12)2
Sarcoma sinoviale del tessuto molle (6)2
Carcinoma epidermoide; pelle e mucosa (25)2
Adenocarcinoma dello stomaco (413)2,14,21,22
Timoma (8)2
Tumori della tiroide (54)2
Carcinoma non differenziato (27)2
Carcinoma uroteliale (50)2,20,23
Carcinoma uroteliale (17)20
Carcinoma a cellule transizionali della vescica
urinaria (29)2
Adenocarcinoma a cellule chiare (4)23
(108081-003)
Tumori con colorazione positiva
1/20
0/20
2/14
54/315
0/10
16/35
45/58
66/88
11/30
7/22
0/10
0/14
59/72
4/28
75/151
27/121
2/41
95/167
2/76
1/13
0/16
587/640
17/77
1/24
4/29
0/5
5/5
96/96
0/15
1/28
0/15
1/12
0/6
0/25
262/413
0/8
0/54
0/27
2/17
9/29
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