dynabeads ivd dynabeads® hla class ii dynabeads® hla class ii

lte in rosetastra. Dopo
1 µl di solucun pozzetminuti. La
giunta della
a EDTA per
può essere
nto:
Corporation. La adquisición de este producto confiere al
LIMITACIONES
comprador el derecho intransferible de usar la cantidad adEste producto esta protegido por patentes o patentes penquirida del producto y los componentes de producto solo
dientes que pertenecen y están controladas por Invitrogen
para su uso en diagnostico in Vitro. Ningún otro derecho
Corporation. La adquisición de este producto confiere al
esta transferido. Este producto no puede ser reformulado,
comprador el derecho intransferible de usar la cantidad adreacondicionado o vendido de ninguna manera sin aceptaquirida del producto y los componentes de producto solo
ción previa de Invitrogen Dynal AS, PO Box 114, Smestad,
para su uso en diagnostico in Vitro. Ningún otro derecho
N-0309 Oslo, Norway.
esta transferido. Este producto no puede ser reformulado,
reacondicionado o vendido de ninguna manera sin aceptación previa de Invitrogen Dynal AS, PO Box 114, Smestad,
N-0309 Oslo, Norway.
ITALIANO
ENGLISH
Cat. no. 210.03D
210.04D
® Rev. no.: 011
013
DYNABEADS
ITALIANO
IVD
HLA CLASS II
For In Vitro Diagnostic Use
® Only
Per uso diagnostico In Vitro
DYNABEADS
DYNABEADS
per cellule
HLA
CLASS
II®HLA di CLASSE II
DYNABEADS
Per l’isolamento
rapidoIndelle
cellule HLA di Classe II+
Vitro
Per
uso diagnostico
HLA
IIcome
del sangueCLASS
periferico adatte
cellule bersaglio nei
®
ndicata dal
a piastra per
1 ora quanreazione di
sere difficile
elle di sfonsere inibita
iostro India
ONE
e isolate
157 g
98 g
1.48 g)
1g
000 ml
ne finale) al
e.
pH 7.4, per
4.0 g
0.2 g
0.1 g
29.25 mg
30.00 mg
13.5 mg
0.5 g
(1.0 mg)
9.55 g
5.0 ml
1.000 ml
vitello 2%
ermoattiva-
e usare altri
mpletato con
oluzione sao PBS (pH
analitico.
emoglobina
Deve essere
Far raffred-
occo possoraneamente
ere 49 ml di
di 1 ml e
uire 1:10 in
n un flacone
no a 1 mese
accordo con
truzioni per
utilizzo, es-
/0 domande
Corporation.
acquirente il
o acquistato
on sono conezionare, rilcuna forma
l AS, PO Box
DYNABEADS
perper
cellule
HLAdidiCLASSE
CLASSE
® per
test rapid
microcitotossici
la tipizzazione
HLA. HLA
For
isolation
of peripheral
blood
DYNABEADS
cellule
HLA
IIIIClass
Per l’isolamento
rapido as
delletarget
cellule cells
HLA diin
Classe
II+
II+
cells suitable
microPer
l’isolamento
rapidoadatte
delle come
cellulecellule
HLA di
Classe II+
del
sangue
periferico
bersaglio
nei
UTILIZZOHLA-typing assays.
cytotoxic
del
sangue
periferico
adatte
come
cellule
bersaglio
nei
test microcitotossici per la tipizzazione HLA.
Le biglie
Dynabeadsper
perlacellule
HLA diHLA.
Classe II sono
test
microcitotossici
tipizzazione
INTENDED
UTILIZZO
state studiateUSE
specificatamente per l’isolamento rapido
Le
Dynabeads
cellule
HLA
di
II sono
dei biglie
linfociti
B (CD4+)
dalClasse
sangue
periDynabeads
HLA
Classper
IIdirettamente
has
been
especially
designed
UTILIZZO
state
specificatamente
per l’isolamento
rapido
ferico.
L’intera
procedura
di isolamento
cellulare
può
for
thestudiate
rapid
isolation
of B lymphocytes
(HLA
Class
II+
Le biglie Dynabeads per cellule HLA di Classe II sono
dei
linfociti
Bfrom
(CD4+)
direttamente
dalwhole
sangue
periessere
eseguita
in peripheral
15 minuti
e non The
richiede
lacell
centricells)
directly
blood.
isostate studiate specificatamente per l’isolamento rapido
ferico.
L’intera
procedura
di isolamento
può
fugazione
con gradiente,
che
prevede
di eseculation
procedure
can be performed
in tempi
15 cellulare
minutes
and
dei linfociti B (CD4+) direttamente dal sangue periessere
eseguita
15 minuti
egradient
non
richiede
la centrizione lunghi.
Le incellule
isolate
possono
essere
usate
requires
no time-consuming
centrifugation.
ferico. L’intera procedura di isolamento cellulare può
fugazione
gradiente,
chedirectly
prevede
tempi
esedirettamente
nei
test be
di used
microcitotossicità
delledicellule
The
isolatedcon
cells
can
in microcytotoxic
essere eseguita in 15 minuti e non richiede la centricuzione
lunghi.
cellule
isolate possono essere usate
HLA Class
di Classe
IILe
(DR,
DQ).
HLA
II (DR,
DQ)
assays.
fugazione con gradiente, che prevede tempi di esecudirettamente nei test di microcitotossicità delle cellule
zione lunghi. Le cellule isolate possono essere usate
DESCRIZIONE
DEL PRODOTTO
PRODUCT
DESCRIPTION
HLA
di Classe
II (DR,
DQ).
direttamente nei test di microcitotossicità delle cellule
Le biglie
Dynabeads
M-450
sono arivestite
da un anticorpo
Dynabeads
M-450
coated
with
monoclonal
antibody
HLA
di Classe
II (DR,
DQ).
DESCRIZIONE
DEL
PRODOTTO
monoclonale
(MAb)
per
monomorfico
(MAb)
specific
for aspecifico
HLA
Class
IIunbepitomo
chain monomorphic
Le
biglie
Dynabeads
M-450
sono
rivestite
da un antidella catena
delle
cellule
HLA
di Classe
(1).
Questo
epitope
(1). bThe
product
is
supplied
in IIan
acqueous
DESCRIZIONE
DEL
PRODOTTO
corpo
monoclonale
(MAb)
specifico
per
un
epitomo
prodotto viene
fornito
in sospensione
acquosa
di di
soluzione
suspension
of della
phosphate
buffered
saline
(PBS)
contaimonomorfico
catena
b delle
cellule
Classe
Le
biglie Dynabeads
M-450 sono
rivestite
daHLA
un anticorpo
salina
tamponata
conserum
fosfato
(PBS)
contenente
ning
0.1%
bovine
albumin
(BSA)
andalbumina
0.02%
II
(1).
Questo
prodotto
viene
fornito
in
sospensione
monoclonale (MAb) specifico per un epitomo monomorfico
di siero azide.
bovino
(BSA) 0.1%
e sodio
azide 0.02%.
sodium
acquosa
di
soluzione
salina
tamponata
con
fosfato
della catena b delle cellule HLA di Classe II (1). Questo
(PBS) contenente
albumina
di siero acquosa
bovino (BSA)
0.1%
prodotto
viene fornito
in sospensione
di soluzione
PRINCIPLE
ePRINCIPIO
sodio
azide 0.02%.
salina
tamponata
con fosfato (PBS) contenente albumina
Lasiero
tecnica
di isolamento
si
The
immunomagnetic
cellcellulare
isolation
technique
using the
di
bovino
(BSA) 0.1%
e sodioimmunomagnetico
azide 0.02%.
PRINCIPIO
basa sull’utilizzo
Dynabeads
perand
cellule
HLA
Dynabeads
HLA delle
Class biglie
II enables
a rapid
specific
La tecnica di isolamento cellulare immunomagnetico
di Classeof
II HLA
e permette
di isolare
in modo
rapido
speisolation
Class II+
cells directly
from
ACDe(acid
PRINCIPIO
si basa sull’utilizzo delle biglie Dynabeads per cellule
cifico le cellule HLA
Classeblood.
II+ (cellule
CD4+
diretcitrate-dextrose)
or di
heparin
Following
a B)
brief
inLa
di isolamento
cellulare
immunomagnetico
si
HLAtecnica
di Classe
II e permette
di isolare
in modo rapido
tamente dal
sangue
(acido
citrato-destrosio)
cubation
period,
the con
HLAACD
Class
II+ cells
form rosetteso
basa
sull’utilizzo
delle biglie
cellule HLA
e specifico
le cellule
HLA diDynabeads
Classe II+perdirettamente
sangue
eparinizzator.
Dopo
un
breve
periodo
di
incubawith the Dynabeads HLA Class II product. The rosetted
di
II con
e permette
di isolare
in modo rapido
e spedalClasse
sangue
ACD (acido
citrato-destrosio)
o sangue
HLA Class II+ cells are subsequently isolated and wascifico
le celluleDopo
HLA diunClasse
(cellule
B) direteparinizzator.
breveII+
periodo
di CD4+
incubazione
le
hed with the help of a magnet. After resuspension, the
tamente
dal di
sangue
(acidodelle
citrato-destrosio)
o
cellule HLA
Classecon
II+ACD
formano
rosette con le
isolated HLA Class II+ cells can be used directly for misangue
eparinizzator.
Dopo un
breve
periodo
biglie Dynabeads
attaccate
alle
cellule
HLA didiincubaClasse
crocytotoxic HLA Class II (DR, DQ) typing (2, 3). DynaII. Le cellule
HLAIIdiattached
Classe II+
in rosette
beads
HLA Class
to raccolte
the cell surface
dovennot
gono successivamente
isolate
e lavate
l’ausilio di
affect
the cell viability. The
sensitivity
of con
the microcytoun
magnete.
Dopo
la
ri-sospensione,
le
cellule
HLA
di
toxic assay is increased (2, 3).
Classe II+ isolate possono essere usate direttamente
perPRECAUTIONS
la tipizzazione microcitotossica delle cellule HLA di
Classe II (DR, DQ) (2, 3). Le biglie Dynabeads si attacin vitroHLA
Dynabeads
HLA Class
II is
for cellule
diagnoscano
alla superficie
cellulare
delle
di Classe
tic use.
II senza
alterarne la vitalità cellulare. La sensibilità del
test
di microcitotossità
è quindi
Because
mammalian
cells maggiore
are used(2,in3).this
procedure, appropriate laboratory guidePRECAUZIONI
lines must be followed. Detailed information
on uso
suchdiagnostico
guidelines In
canVitro.
be obtained from:
Per
Protection
of Laboratory
from
Dato
che in questa
proceduraWorkers
vengono utilizOccupationally
Acquired
M-29-A2
zate
cellule prelevate
da Infection;
mammiferi,
occorre
ISBN 1056238-435-8 Approved Guidelines –
eseguire le tecniche di laboratorio approSecond Edition http://www.nccls.org. Handle
priate. E’ possibile ottenere informazioni
all samples as if capable of transmitting disease.
dettagliate su queste linee guida: Protection
All work should be performed wearing gloves
of Laboratory Workers from Occupationally
and appropriate protection.
Acquired Infection; M-29-A2 ISBN 1056238Dynabeads
HLA Class
II should be
at
435-8
Approved
Guidelines
– stored
Seconda
2-8°C. Resuspend
thehttp://www.nccls.org.
Dynabeads HLA Class
Edizione,
sito web
II
well
before
use
to
obtain
homogenous
Maneggiare i campioni come materiali
suspension of Dynabeads
before
pipetting.
potenzialmente
infettivi. Tutto
il lavoro
deve
Precautions
should
be taken toguanti
prevent
essere
eseguito
indossando
e bacinduterial contamination
of the opened vials.
menti
protettivi appropriati.
®
Le biglie Dynabeads per cellule HLA di Classe
STORAGE
II devono essere conservate a 2-8°C. Prima
When
unopened
and stored at accuratamente
2-8°C Dynabeads HLA
dell’uso,
ri-sospendere
le
Class
II are
stable untilper
the cellule
expiry date
printed
on the
biglie
Dynabeads
HLA
di Classe
vial
Precautions
should be taken
to prevent bacII label.
in modo
da ottenere
una sospensione
terial
contamination
the opened
vials. prima di
omogenea
delleofbiglie
Dynabeads
pipettarle. Prendere adeguate precauzioni
MATERIALS
per evitare la contaminazione batterica delle
fiale aperte.
Materials
needed to perform cell isolation procedures
with Dynabeads HLA Class II, but not supplied include:
CONSERVAZIONE
A
separation
(Dynal eMPC™-1,
Dynal
Semagnetic
la confezione
non èdevice
viene aperta
viene conserMPC™-L).
vata a 2-8°C, le biglie Dynabeads per cellule HLA di
Blood
tubes stabili
containing
(ACD or
Classecollecting
II rimangono
fino anticoagulant
alla data di scadenza
Heparin)
stampata sull’etichetta della fiala. Prendere adeguate
Tilting/rotating
apparatus
(e.g.
Dynal
Sample
Mixer
or
precauzioni per evitare la contaminazione batterica
alternative).
delle fiale aperte.
Pasteur pipettes, 5 ml pipettes
MATERIALI
Glassware
I materialiforche
sono
necessari
Container
blood
and
disposal per l’esecuzione delle
procedure
di isolamento cellulare con Dynabeads per
Cooling
device
cellule
HLA
di
Classe
II,
ma che non vengono forniti,
Buffers and staining solutions
comprendono:
CELL
ISOLATION
PROCEDURE
Un apparecchio
magnetico
per la separazione (www.
invitrogen.com/magnets)
Blood
samples should be as fresh as possible and preferably
not
older
than 4 days.
Blood samples
fromconteuraeProvette
per
la raccolta
dei campioni
di sangue
mic
leukaemic patients
be processed within
nentiand
anticoagulante
(ACD oshould
eparina)
24
hours aftervortex
collection.
Apparecchio
per inclinazione e rotazione (ad es.
il miscelatore
campioni
Dynal™
o unblood
altro collecappa1.
Collect 5 mlper
blood
(ACD) in
a standard
recchio)
ting tube, and cool to 2-8°C. Cooling prevents
Pipette:
pipetteofpasteur,
5 ml cells to the immunomagattachment
phagocytic
Contenitori
in vetro
netic beads.
For rapid cooling, use an ice water bath
Contenitori
per il sangue
e per
l’eliminazione
or a pre cooled
iron block
stand.
Apparecchio
il raffreddamento
2.
Add 5 ml per
of cold
(2-8°C) PBS with 0.6% Na-citrate
Tamponi
e soluzioni
per will
la colorazione
to each
sample. This
reduce the viscosity of the
blood and thereby facilitate the rosetting of target
cells and the subsequent magnetic isolation of rosetted cells.
3. Resuspend all the Dynabeads HLA Class II product
well by gently mixing. Add 100 µl of the Dynabeads
directly into the cooled blood sample.
4. Mix for 5 minutes at 2-8°C by gentle tilting and rotating. Do not use end over end rotation, as this may
damage target cells and increase background in the
microcytotoxic assay. A proper, continuous mixing is
essential for
obtaining good
210.03_04D_5språ
k_web.indd
5 yield of HLA Class II+ cells.
PROCEDURA DI ISOLAMENTO CELLULARE
affetti da uremia o leucemia devono essere sottoposti
I campioni ematici devono essere il più freschi possibile
alla procedura entro 24 ore dal prelievo.
e preferabilmente non devono essere stati prelevati da
1. Prelevare
di sangue
(ACD)
in una
più
di 4 giorni.5 I ml
campioni
ematici
prelevati
da provetta
pazienti
standard
per io prelievi
ematici
raffreddarla
a 2affetti
da uremia
leucemia
devonoe essere
sottoposti
Il raffreddamento
che alle biglie immunoalla 8°C.
procedura
entro 24 oreevita
dal prelievo.
magnetiche si attacchino fagociti. Per un raffredda1. Prelevare 5 ml di sangue (ACD) in una provetta
mento rapido, immergere le provette in un bagno di
standard per i prelievi ematici e raffreddarla a 2acqua ghiacciata o collocarle su un blocco di acciaio
5.
Isolate
the HLA
Class II+
by
the test
8°C. Il raffreddamento
evitacells
che CELLULARE
alleplacing
biglie immunoPROCEDURA
DI ISOLAMENTO
precedentemente raffreddato.
tube
in aematici
rare
magnet
holder
(Dynal
MPC™-1,
magnetiche
si earth
attacchino
fagociti.
un raffreddaI campioni
devono
essere
il piùPer
freschi
possibile
2. Aggiungere 5 ml di PBS fredda (2-8°C) contenente
Dynal
MPC™-L)
for
2-3minutes.
mento
rapido,
immergere
le
provette
in
un
bagno
di
e preferabilmente non devono essere stati prelevati da
na-citrato 0.6% a ciascun campione. In questo modo
6.
the supernatant
whilesuthe
are
acqua
ghiacciata
o collocarle
unrosetted
bloccodadicells
acciaio
piùDiscard
di 4 giorni.
I campioni
ematici
prelevati
pazienti
si riduce la viscosità del sangue e si facilita quindi la
attracted
to theo wall
of thedevono
test tube
by thesottoposti
magnet.
precedentemente
raffreddato.
affetti
da uremia
leucemia
essere
formazione a rosette delle cellule bersaglio e il suc7.
the isolated
HLA
Class
cells 4-5x
with PBS
2.
Aggiungere
5 ml di
PBS
fredda
(2-8°C)
contenente
allaWash
procedura
entro
24
ore
dal II+
prelievo.
cessivo
isolamento
magnetico
delle cellule presenti
using
the following
procedure:
na-citrato
0.6% a ciascun
campione. In questo modo
1. Pnelle
relevare
5 ml di sangue (ACD) in una provetta stanrosette.
A.
Separate
the magnet
from the
si riduce
la viscosità
del sangue
e sitube.
facilita quindi la
per i prelievi
ematici e raffreddarla
a 2-8°C.
Il
3. dard
Procedere
alla ri-sospensione
accurata delle
biglie
B.
Resuspend
the rosetted
cells bersaglio
in 5 ml eofil cold,
formazione
a rosette
delle cellule
sucraffreddamento
cheHLA
alle di
biglie
immunomagneDynabeads per evita
cellule
Classe
II mediante
2-8°C,
PBS (pH magnetico
7.4). (Use delle
PBS with
Nacessivo
isolamento
cellule0.6%
presenti
tiche
si attacchinodelicata.
fagociti.
Per un raffreddamento
una miscelazione
Aggiungere
100 µl di Dynain the first wash).
nellecitrate
rosette.
rapido,
immergere lenel
provette
in un
acqua
beads direttamente
campione
di bagno
sanguediraffredApply magnet
for a minimum
of 30 delle
seconds
to
3. C.
Procedere
alla ri-sospensione
accurata
biglie
ghiacciata
o collocarle su un blocco di acciaio precedato.
collect the
Dynabeads
perrosetted
cellule cells.
HLA di Classe II mediante
raffreddato.
4. dentemente
Mescolare per
5 minuti a 2-8°C mediante inclinando
D.
PBS delicata.
while the
tube is100still
the
unaDiscard
miscelazione
Aggiungere
µl diinDynaruotando 5
delicatamente
le provette.
eseguire
2. Aeggiungere
ml di PBS fredda
(2-8°C)Non
contenente
magnet
holder. nel campione di sangue raffredbeads
direttamente
una rotazione
poiché
in questo
si
na-citrato
0.6%completa,
a ciascun
campione.
In modo
questo
8. The
dato.isolated HLA Class II+ cells are resuspended in
possono
danneggiare
le cellule
edsiaumenmodo
riduce
la viscosità
del bersaglio
sangue
mlsiTris-balanced
solution
(TBSS)einclinando
or facilita
Hanks
4. 0.2
Mescolare
per 5 minutisalt
a 2-8°C
mediante
tare lolasfondo
nel test
di microcitotossicità.
quindi
formazione
a rosette
delle
cellule
++ or
++bersaglio
Mg
supple(HBSS),
pHdelicatamente
7.4, containing
Ca
e ruotando
le provette.
Non
eseguire
5. eIsolare
le celluleisolamento
HLA di Classe
II+ collocando
la proil successivo
magnetico
dellemodo
cellule
mented
with 2%
FCS or 2%
HS in
(heat
inactivated).
una
rotazione
completa,
poiché
questo
si
vetta
del
test
in
un
magnete
a
lantanide
(Dynal
presenti
nelle
This yields
a rosette.
cell concentration
suitable
HLA
possono
danneggiare
le cellule bersaglio
ed for
aumenMPC™-1,
Dynal
MPC™-L) per 2-3
minuti.delle biglie
3. Ptare
rocedere
alla
ri-sospensione
accurata
ClassloIIsfondo
typing nel
in microcytotoxic
assays.
test di microcitotossicità.
6. Eliminare il per
supernatante
mentre
le cellule
raccolte
HLA
diII+
Classe
II mediante
5. Dynabeads
Isolare le cellule cellule
HLA di Classe
collocando
la pronelle rosette vengono
attratte
alla parete 100
dellaμlprouna
delicata.
Aggiungere
di
NOTE
vettamiscelazione
del test in un
magnete
a lantanide (Dynal
vetta
del
test
dal
magnete.
Dynabeads
direttamente
nel 2-3
campione
di sangue
MPC™-1,
Dynal
MPC™-L)
per
minuti.
some
the
number
HLA Class
7. In
Lavare
le patients
cellule HLA
di Classe
II+ofisolate
4-5x con
raffreddato.
6. II+
Eliminare
ilis supernatante
mentre le celluledisorraccolte
cells
PBS
eseguendo
la(e.g.:
procedura
illustrata
di seguito:
4. M
escolare
perlow
5 minuti
a haematological
2-8°C
mediante
inclinando
nelle
rosette
vengono
attratte
della
proders,
leukaemic,
uraemic)
oralla
theparete
serum
may
A.Separare
il magnete
dalla
evetta
ruotando
delicatamente
le provetta.
provette.
Non eseguire
del
test
dal
magnete.
contain
high quantities
of
soluble
HLA
Class
B.Ri-sospendere
le cellulepoiché
raccolte
rosette
in si5
una
rotazione
completa,
in nelle
questo
modocon
7. II
Lavare
le
cellule
HLA
di
Classe
II+
isolate
4-5x
molecules,
interfering
with
celled
isolaml di PBS
(pH
7.4) raffreddata
athe
2-8°C
(nel
primo
possono
danneggiare
le cellule
bersaglio
aumenPBS
eseguendo
la
procedura
illustrata
di
seguito:
tion
capacity
of PBS
Dynabeads.
Samples
known
lavaggio
usare
Na-citrato
0.6%).
tare
lo
sfondo
nel
test con
di
microcitotossicità.
A.Separare
il lymphocyte
magnete
dalla
provetta.
give le
low
yields
in30conventioC.Applicare
per HLA
un minimo
di II+
secondi per
5. to
IB.Ri-sospendere
solare
cellule
di Classe
collocando
leprocedures,
cellule
raccolte
nelle
rosette
in la
5
nal
cell
isolation
should
be
trearaccogliere
le
cellule
raccolte
in
rosette.
provetta
del (pH
test 7.4)
in unraffreddata
magnete aa 2-8°C
lantanide
(Dynal
mlasdidescribed
PBS
(nel
primo
ted
below.
This
procedure
gives
D.Eliminare
la
soluzione
PBS
mentre
la
provetta
si
MPC™-1,
2-3 minuti.
lavaggioDynaMag™-15)
usarecell
PBSyield
con per
Na-citrato
0.6%).II tysatisfactory
for HLAle Class
trova ancora
nel magnete.
6. a
EC.Applicare
liminare
il supernatante
mentre
raccolte
per
un minimo
di 30cellule
secondi
per
ping
in
most
cases:
8. nelle
Le cellule
HLA
di Classe II+ isolate
vengono
rosette
vengono
parete
dellasottoproraccogliere
le cellule attratte
raccoltealla
in rosette.
poste
quindi
ri-sospensione
in 0.2
di soluzione
1.
Centrifuge
10
ml ofPBS
blood
at ml
2000
RPM si
vetta
del
testlaadal
magnete.
D.Eliminare
soluzione
mentre
la provetta
salina
tri-bilanciata
(TBSS)
o
Hanks
(HBSS),
pH
7.4,
(800-1000
Xg)
forClasse
5 minutes
without
7. Lavare
leancora
cellule++
HLA
di
II+ isolate
4-5x con
trova
nel
magnete.
Mg++ completato con
FCS 2% o
contenente
Ca la oprocedura
brakes.
eseguendo
di seguito:
8. PBS
Le cellule
HLA di
Classe II+ illustrata
isolate vengono
sottoHSSeparare
2% (termoattivato).
Questo
porta ad una
con2.
Discard
and
transfer
buffy
A.
dalla
provetta.
poste
quindiilplasma
amagnete
ri-sospensione
in 0.2 mlthe
di soluzione
centrazione
adatta
per
la nelle
tipizzazione
HLA
andcellulare
the le
very
upper
layer
of erythroB.
Rcoat
i-sospendere
cellule
raccolte
rosette
in 5
salina
tri-bilanciata
(TBSS)
o Hanks
(HBSS),
pH 7.4,
neiml
test
di
microcitotossicità.
++
++
cytes
toCa
a clean
10
ml
test tube.
di PBS
(pH
7.4)
raffreddata
a 2-8°C
o Mg
completato
con (nel
FCS primo
2% o
contenente
3.
Add
5
ml
of
cold
PBS
with
0.6%
Na-citrausare PBS conQuesto
Na-citrato
HSlavaggio
2% (termoattivato).
porta0.6%).
ad una con(pH 7.4)
to minimo
the buffy
and per
mix
C.
Ate
pplicare
per un
di 30
secondi
raccentrazione
cellulare
adatta
per
lacoat
tipizzazione
HLA
gently.
le cellule raccolte in rosette.
neicogliere
test di microcitotossicità.
4.
cell isolation
as described
D. EContinue
liminare lathe
soluzione
PBS mentre
la provetta si
fromancora
point 3
trova
nelabove.
magnete.
8. Le cellule HLA di Classe II+ isolate vengono sottoposte quindi
a ri-sospensione
in 0.2 ml di
soluzione
PURITY
AND VIABILITY
OF ISOLATED
CELLS
salina tri-bilanciata
o Hanks
(HBSS),
7.4,
Dynabeads
HLA Class (TBSS)
II product
usually
yields pH
a very
contenente
Ca++and
o Mg++
2%
high
purity (>99%)
viabilitycompletato
(>95%) ofcon
the FCS
isolated
HS 2%
(termoattivato).
Questo
porta
ad unarapid
conHLAo Class
II+
cells (2, 3). The
method
is simple,
centrazione
cellulare
adatta
per
la
tipizzazione
HLA
and specific. The Dynabeads HLA Class II bound to the
test dido
microcitotossicità.
cellnei
surface
not interfere with the binding of HLAtyping antibodies and complement to the cells.
NOTA
MICROCYTOTOXIC
HLA
TESTINGdi
WITH
In alcuni pazienti,
il numero
cellule HLA
®
DYNABEADS
di Classe II+
è basso (ad es. nel caso di
The
times for
incubation with
serum
and complements
disturbi
ematologici
e nei
pazienti
affetti da
are
only indications.
The optimal
time conhas to
leucemia
o uremia)
oppureincubation
il siero può
betenere
established
according
to the serum
set used in
the tray.
quantità
elevate
di molecole
solubili
HLA di Classe II, interferendo quindi con la
capacità di isolamento
NOTEcellulare delle biglie
Dynabeads. I campioni nei quali si prevede
A.
HLA-typing
with
Dynabeads
Class
II
un rendimento linfocitico
basso HLA
con le
procecells iscellulare
more sensitive
than
dureisolated
di isolamento
convenzionali,
conventional
HLA-typing
si deve
eseguire la
procedura techniques.
descritta di
When
using
Dynabeads
HLA
isoseguito.
Nella
maggior
parte
deiClass
casi, II
questa
lated cells in HLA-microcytotoxic assays,
procedura offre una resa cellulare soddisfaa reduction of incubation time with HLA
cente per la tipizzazione HLA di Classe II:
typing serum (30+ minutes) and comple1. C
entrifugare
10 ml di is
sangue
a 2000 GPM
ment (30+ minutes)
recommended.
× g) per
minuti
senza interB.(800-1000
Careful titration
of 5typing
antisera
may
ruzioni.
be necessary prior to use (2, 3).
2.
E
liminare
il
plasma
e
trasferire
il
rivestiC. Because of the higher sensitivity of the
mento
e lo strato
superiore
di erassay,tampone
it is important
not to
use diluents
itrociti
in unacytotoxic
provettasubstances.
da 10 ml pulita.
containing
3.
5 ml
PBS raffreddata
con
D.Aggiungere
Do not flush
thediisolated
cells up and
Na-citrato
(pHdispensing
7.4) 0.6%syringe,
al rivestimento
down in the
as this
tampone
e mescolare
delicatamente.
will damage
the isolated
cells.
4. Continuare l’isolamento cellulare nel modo
descritto dal punto 3 illustrato sopra.
Tissue typing procedure
sostanze citotossiche.
potrebbe danneggiare le cellule isolate.
D. Non muovere le cellule isolate verso
l’alto o verso il basso nella siringa di somProcedura
per la tipizzazione
tissutali
ministrazione,
poiché questo
movimento
potrebbe
danneggiare
cellule HLA
isolate.
1. Piastre
Terasaki
con 1 µl dileantisieri
diluiti in
grado ottimale per ciascun pozzetto vengono scongelate immediatamente
primatissutali
dell’uso.
Procedura
per la tipizzazione
2. Mescolare bene la sospensione cellulare isolata.
1. Piastre Terasaki con 1 µl di antisieri HLA diluiti in
Riempire
la siringa di somministrazione e aggiunStaining
procedures:
grado ottimale
per ciascun
pozzetto vengono sconNOTA
gere 1 µl di sospensione
cellulare a ciascun pozzetgelate immediatamente
prima
dell’uso.
Alternative
A: Dynabeads
rosetted
cells oare
dispersed
to.
Non
muovere
le cellule
verso
l’alto
verso
ilper
basA.
L
a
tipizzazione
HLA
con
Dynabeads
2. Mescolare
bene
la sospensione
cellulare with
isolata.
into
the
wells
of
thee tray.
Following
incubation
the
so
nella
siringa
non
agitare
in
modo
vigoroso.
cellule
HLA
di
Classe
II
isolate
è
più
sen-is
Riempire
la siringa1diµl somministrazione
e aggiunsera
and
complement,
of
AO/EB
working
solution
3. Incubare
per 30-45
minuti
a 20-22°C (temperatura
sibile
delle
tecniche
convenzionali
di
tipizgere
1
µl
di
sospensione
cellulare
a
ciascun
pozzetdispensed
intoaleach
and the tray is incubated for
ambiente)
buio.well
HLA.
siwithin
usano
lehour
biglie
to.zazione
Non
leQuando
cellule
verso
l’altoone
o verso
il after
bas15
Themuovere
tray
should
be read
4. min.
Aggiungere
5 µl
di complemento
a ciascun
pozzetto
HLA
diisvigoroso.
Classe
II
soDynabeads
nella
siringa eper
noncellule
agitare
in
modo
adding
the
staining
solution
when
EDTA
not used
for
(oisolate
il volume
indicato
dal
produttore
delle
piastre
nei
test
per
microcitotossicità
HLA,
3. Incubare
per 30-45
minuti a 20-22°C (temperatura
blocking
the staining
reaction.
commerciali).
Può
essere necessario
il comsi consiglia
di ridurre
il tempotitolare
di incubaambiente)
al buio.
Alternative
B: The
staining
solution
can be
dispensed
plemento
per
evitare
reazioni
aggiuntive
con
le HLA
cellule
zione con
per
tipizzazione
4. Aggiungere
5 µlil disiero
complemento
a ciascun pozzetto
intoDynabeads
the wells
together
thecomplemento
complement: (30+
isolate.e with
minuti)
con
(o(30+
il volume
indicato
dalil produttore
delle piastre
Incubare
per 30-45 minuti a 20-22°C (temperatura
minuti).
25.mlcommerciali).
rabbit complement
Può essere necessario titolare il comambiente)
al buio.
PAO/EB
rima dell’uso
può
essere
necessario
50B.µl
stock
solution
plemento
per evitare
reazioni
aggiuntive
con le esecellule
6. Aggiungere
1titolazione
µl di soluzione
per colorazione
AO/EB.
guire unaisolate.
attenta
degli antisieri
Dynabeads
Add
the amount
of minuti
complement
indicated
by the tray
7. Incubare
per
15
a
20-22°C
(temperatura
amper tipizzazione
(2,
3).a 20-22°C (temperatura
5. Incubare
per
minuti
manufacturer
and30-45
incubate
the tray for 35+ minutes.
biente)
al
C.ambiente)
Datashould
labuio.
sensibilità
del
test,
èis
almaggiore
buio.
The
tray
be
read
within
one
hour
when
EDTA
8. Leggere
in un microscopio
invertito
entro
1 ora. Se
importante
non
usarereaction.
diluenti
contenenti
6. Aggiungere
1 µlthe
di staining
soluzione
per colorazione
AO/EB.
not
used
to block
necessario,
è
possibile
aggiungere
5
µl
di
soluzione
sostanze
7. Incubare
percitotossiche.
15 minuti
20-22°C
(temperatura
amWhen
using Terasaki
trays EDTA.
itacan
be difficult
to distinguish
diNinibizione/di
blocco
D.biente)
on muovere
cellule
verso l’alto
al buio.
the
negative
(green) lecells
from isolate
the background.
This
o verso
il basso
nella
siringaentro
di sommi8. Leggere
in
un
microscopio
invertito
1 ora. Se
background
staining
may CELLULE
be quenched
COLORAZIONE
DELLE
CONby adding 5 µl
nistrazione,
poiché
movimento
necessario,
è possibile
aggiungere
5 µl
di each
soluzione
appropriately
diluted
Ink
orquesto
Hemoglobin
to
DYNABEADS
PER India
CELLULE
HLA
DI CLASSE
IIwell.
danneggiare
dipotrebbe
inibizione/di
blocco EDTA.le cellule isolate.
ISOLATE NEI TEST DI MICROCITOTOSSICITA’
BUFFERS
AND
STAINING
SOLUTIONS
HLA
Procedura
per la
tipizzazione
COLORAZIONE
DELLE
CELLULEtissutali
CON
PBS,
7.4,
for
isolated
cells
1.
Terasaki
con 1cellule
μlofdi
antisieri
HLA
diluiti
PerPiastre
lapH
colorazione
delle
isolate
con
Dynabeads
DYNABEADS
PERwashing
CELLULE
HLA
DI CLASSE
II in
PO4 ottimale
xNEI
H2O TEST
1.57
gvengono
0.157
g
NaH
ciascun
pozzetto
scong2cellule
pergrado
HLA
di per
Classe
II usate
nei testi
di microcitoISOLATE
DI
MICROCITOTOSSICITA’
HPO
x
12H
O
19.80
g
1.98
Na
primaconsiglia
dell’uso.di eseguire gla
2elate 4immediatamente
2
tossicità,
la Invitrogen
Dynal
HLA
HPO
x
7H
O
(14.82
g)
(1.48
g)
(or
Na
2
4
2
2.
M
escolare
bene
la
sospensione
cellulare
isolata.
colorazione con colori fluorescenti (ad es. Arancio di
Per
la colorazione delle cellule 81.00
isolategcon Dynabeads
NaCl
8.1 g
Riempire
la siringa
somministrazione
aggiungeAcridina
(AO)
Etidio di
Bromuro
(EB)). La evalutazione
per
cellule
HLA di Classe II usate
nei ml
testi di microcitoDistilled
10.000
1.000
ml
re 1cellule
μlwater
di sospensione
a ciascun
pozzetto.
delle
vive (verdi) ecellulare
delle
cellule
morte
(rosse)
tossicità, la Invitrogen Dynal consiglia di eseguire la
può
essere
eseguita
con unverso
microscopio
fluorescenza
Non
muovere
le cellule
l’alto o averso
il basso
PBS
with
0.6%
colorazione
conNa-Citrate:
colori fluorescenti (ad es. Arancio di
(filtro
disiringa
eccitazione
nm)
(4). Le
reazione
nella
e non450/490
agitare
in modo
vigoroso.
Add
0.6%
Na-citrate
concentration)
PBS. citoMix
Acridina
(AO)
Etidio (final
Bromuro
(EB)). La to
valutazione
tossiche
proseguono
dopo
l’aggiunta
della (temperatura
soluzione per
3.
Incubare
per 30-45
minuti
a 20-22°C
well,
e.g.
overnight.
delle
cellule
vive (verdi) e delle cellule morte (rosse)
la colorazione.
ambiente) alQueste
buio. reazioni possono essere fermate
può essere eseguita con un microscopio a fluorescenza
aggiungendo
al
pozzetto
EDTA (TBSS)
8%a ciascun
dissolto
in PBS.
Tris
- balanced
salt
solution
pH 7.4,
for
4.
Aggiungere
5 μl
di450/490
complemento
pozzetto
(filtro
di eccitazione
nm) (4).
Le reazione
citoL’EDTA
laisolated
leggibilità
della piastradelle
per tutta
la
resuspension
ofindicato
cells
(o il conserva
volume
produttore
piastre
tossiche
proseguono
dopo dal
l’aggiunta
della soluzione
per
notte.
commerciali).
Può
essere
necessario
titolare
il
comNaCl
4.0 g
la
colorazione. Queste reazioni possono essere fermate
plemento
per
evitare
reazioni
aggiuntive
con
le
celI colori fluorescenti
richiedono
piasKCl
g
aggiungendo
al pozzetto
EDTAl’incubazione
8% dissoltodelle
in 0.2
PBS.
Dynabeads
trelule
al 4buio
temperatura
ambiente
(+20-22°C).
I 0.1
coloxconserva
7Ha2O
g
MgSO
L’EDTA
laisolate.
leggibilità
della piastra
per tutta
la
5.
IHPO
ncubare
perO 30-45
minuti
a dalla
20-22°C
(temperatura
ri devono
essere
tenuti
al
riparo
luce
diretta
e
conx
2H
29.25
mg
Na
notte.
2
4
2
ambiente)
servati
buio.al buio.
30.00 mg
KH
2PO4 al
I6.colori
fluorescenti richiedono l’incubazione delle piasAggiungere
x 2H2O 1 μl di soluzione per colorazione
13.5 AO/
mg
CaCl
2
tre EB.
al buio a temperatura ambiente (+20-22°C). I coloGlucose
0.5 g
ri
devono
essere
tenuti
al
riparo
dalla
luce
diretta
e con7. Incubare per 15 minuti a 20-22°C (temperatura
(Phenolred)
(1.0 mg)
servati
al buio.
Trisambiente) al buio.
9.55 g
8. Leggere
in un microscopio invertito entro 1 ora.
Se
HCl
Concentrated
5.0 ml
necessario,
è
possibile
aggiungere
5
μl
di
soluzione
Sterile Water Ad
1.000 ml
inibizione/di
Adddi 2%
fetal calfblocco
serumEDTA.
(FCS) or 2% human serum
(HS)
(heat inactivated)
before
use. CON DYNACOLORAZIONE
DELLE
CELLULE
BEADS
PER CELLULE
HLAfor
DIresuspension
CLASSE II ISOOther
buffers
may be used
of cells.
LATE
NEIused
TEST
DI MICROCITOTOSSICITA’
and
The
buffer
should
be supplemented with Ca++HLA
Per++laand
colorazione
isolate
con
Dynabeads
2% FCS delle
or 2%cellule
HS, eg:
Hanks
balanced
salt
Mg
per
cellule
HLA
di
Classe
II
usate
nei
testi
di
microsolution (HBSS), pH 7.4, RPMI 1640 or PBS (pH 7.4).
citotossicità, la Invitrogen Dynal consiglia di eseguire
All
reagents used
analytical grade.
la colorazione
conshould
coloribefluorescenti
(ad es. Arancio
di Acridina (AO) Etidio Bromuro (EB)). La valutazione
Quenching solution:
delle cellule vive (verdi) e delle cellule morte (rosse)
India Ink diluted to 2.5% v/v in PBS or 15% bovine
può essere eseguita con un microscopio a fluorescenza
haemoglobin appropriately diluted.
(filtro di eccitazione 450/490 nm) (4). Le reazione citotossiche proseguono dopo l’aggiunta della soluzione
Blocking solution:
per la colorazione. Queste reazioni possono essere
8g Na2 EDTA qs. to 100 ml PBS. Must be heated to disfermate aggiungendo al pozzetto EDTA 8% dissolto
solve the EDTA. Cool. Adjust pH to 7.4 with NaOH.
in PBS. L’EDTA conserva la leggibilità della piastra per
The quenching and blocking solutions may be mixed
tutta la notte.
and added to the well simultaneously.
I colori fluorescenti richiedono l’incubazione delle
piastre al solutions:
buio a temperatura ambiente (+20-22°C). I
Staining
colori devono essere tenuti al riparo dalla luce diretta
AO/EB - stock solution
e conservati al buio.
15 mg Acridine Orange (Sigma A6014)
Procedure
perBromide
la colorazione:
50
mg Ethidium
(Sigma E8751)
Dissolve
in 1 ml
ethanol.
Add 49 ml
PBS. Mix
well.
Alternativa
A: 95%
Le cellule
Dynabeads
raccolte
in rosetDivide
into 1 disperse
ml aliquots
freeze.della piastra. Dopo
te vengono
neiand
pozzetti
l’incubazione con i sieri ed il complemento, 1 μl di soluAO/EB
working
solution
zione di-lavoro
AO/EB
viene disperso in ciascun pozzetto e1 la
viene
fatta and
incubare
15inminuti.
La
Thaw
mlpiastra
of stock
solution
diluteper
1:10
PBS (pH
piastra
1 ora
dall’aggiunta
della
7.4).
Mixdeve
well.essere
Store letta
in anentro
amber
bottle
at 2-8°C for
up
soluzione
di
colorazione
quando
non
si
usa
EDTA
per
to one month (3).
bloccare la reazione di colorazione.
PUREZZA
VITALITA’
CELLULE
1.
Terasaki Etrays
with 1 µl DELLE
of optimally
dilutedISOLATE
HLA antiLe sera
biglieper
Dynabeads
per cellule
HLA di Classe
perwell are thawed
immediately
before II
use.
2.
Mix the
isolated cell suspension
well.un
Fillgrado
the dispenmettono
generalmente
di raggiungere
molto
sing syringe
and (>99%)
add 1 µl eofdicell
suspension
to each
elevato
di purezza
vitalità
(>95%)
delle
well.HLA
Do not
flush the
up and
down inè
cellule
di Classe
II+isolated
isolate cells
(2, 3).
Il metodo
the syringe
or e
shake
vigorously.
semplice,
rapido
specifico.
Le biglie Dynabeads per
3.
Incubate
30-45IImin.
at legano
20-22°C
(room
temperacellule
HLA difor
Classe
che si
alla
superficie
celture)
in interferiscono
the dark.
lulare
non
con il legame degli anticorpi
4.
Add 5 µl of complement
to each well
the volume
di tipizzazione
HLA e complimentano
le (or
cellule.
indicated by the manufacturer of commercial trays).
TEST
MICROCITOTOSSICITA’
TheDI
complement
may ®need to be titrated to avoid
HLA
CON
DYNABEADS
extra
reactions
with Dynabeads isolated cells.
I tempi
di incubazione
conat il20-22°C
siero e(room
i complementi
5.
Incubate
for 30-45 min.
temperasono
solamente
indicativi. Il tempo di incubazione ottiture)
in the dark.
male
deve
essere
stabilito
in
relazione
al
set
di siero
6. Add 1 µl of AO/EB staining solution.
usato
nella piastra.
7.
Incubate
for 15 min. at 20-22°C (room temperature)
in the dark.
8. Read in an inverted microscope within one hour. 5 µl
quenching/EDTA blocking solution may be added if
needed. If blocking solution is added, the tray can
be read the next day, when stored at 2-8°C.
2 ml to
di complemento
coniglio
only
conform to thedi specifications
indicated on the
unit
for a period
of one year
from the date of pur50 μllabel
di soluzione
polivalente
AO/EB
chase.
INVITROGEN
DYNAL’s
obligation
the purAggiungere la quantità di complementoand
indicata
dal
chaser’s
exclusive
remedyeunder
thisincubare
warranty la
is piastra
limited
produttore
della piastra
lasciare
either
to replacement,
at INVITROGEN
DYNAL’s
per 30+
minuti. La piastra
deve essere
lettaexpenentro
se,
of any
products
be EDTA
defective
manufac1 ora
quando
non which
bieneshall
usato
per inbloccare
la
ture,
anddi which
shall be returned to INVITROGEN
reazione
colorazione.
DYNAL, transportation prepaid, or at INVITROGEN
Quando option,
si usano
le piastre
può essere
DYNAL’s
refund
of the Terasaki,
purchase price.
It shalldifbe
ficileresponsibility
distinguere leofcellule
negative (verdi)
da returned
quelle di
the
the purchaser
to pack
sfondo.inQuesta
colorazione
di sfondo
può essere
iniitem(s)
a manner
to avoid shipping
damage
to the unit.
bita aggiungendo in ciascun pozzetto 5 μl di inchiostro
Claims
merchandise
damaged in transit
India o for
di emoglobina
adeguatamente
diluiti. must be
submitted to the carrier.
TAMPONI E SOLUZIONI DI COLORAZIONE
This warranty shall not apply to any products which
PBS,have
pH 7.4,
il lavaggio
cellule isolate
shall
beenper
altered
outside delle
INVITROGEN
DYNAL,
NaHshall
PO4 it×apply
H2O to any products
1.57
g have been
0.157
nor
which
sub-g
2
Na2HPO
× 12H2O
19.80
1.98 g
jected
to4 misuse
or mishandling.
ALLgOTHER
WARRAN(o Na2EXPRESS,
HPO4 × 7H
O) OR(14.82
g) ARE HEREBY
(1.48 g)
TIES,
IMPLIED
STATUTORY,
2
NaCl
81.00 g BUT NOT LIMI8.1 g
SPECIFICALLY
EXCLUDED, INCLUDING
Acqua
10.000 ml 1.000
ml
TED
TOdistillata
WARRANTIES OF MERCHANTABILITY
OR FITNESS
FOR
A
PARTICULAR
PURPOSE.
INVITROGEN
PBS con Na-Citrato 0.6% :
DYNAL’s
maximum
liability
is limited
in all events
to the
Aggiungere
Na-citrato
0.6%
(concentrazione
finale)
al
price
of the products
by durante
INVITROGEN
DYNAL. IN
PBS. Mescolare
bene, sold
ad es.
la notte.
NO EVENT SHALL INVITROGEN DYNAL BE LIABLE FOR
ANY SPECIAL, INCIDENTAL OR CONSEQUENTIAL DAMAGES. Some states do not allow limits on warranties,
or on remedies for breach in certain transactions. In
such states, the limits set forth above may not apply.
STAINING OF DYNABEADS HLA CLASS II
ISOLATED CELLS IN HLA-MICROCYTOTOXISITY
ASSAYS
For staining of cells isolated with Dynabeads HLA Class
II used in microcytotoxic assays, Invitrogen Dynal recommends to use fluorescent dyes (eg. Acridine
Orange (AO) and Ethidium Bromide (EB)). Assessment
of viable (green) and dead (red) cells can be made with
a fluorescence microscope (exitation filter 450/490 nm)
(4). The cytotoxic reactions will proceed after addition
of staining solution. These reactions may be stopped if
8% EDTA dissolved in PBS is added to the well. The
EDTA will maintain the readability of the tray overnight.
Fluorescent stains require the trays to be incubated in
the dark at room temperature (+20-22°C). The stain
should be kept out of direct light and stored in the dark.
WARRANTY
Alternativa B: La soluzione di colorazione può essere
introdotta
nei are
pozzetti
insiemetoalthe
complemento:
The
products
warranted
original purchaser
LIMITATIONS
This product is covered by patent and/or patent applications owned or controlled by Invitrogen Corporation. The
purchase of this product conveys to the buyer the nontransferable right to use the purchased amount of the product solely for activities of the buyer within the field of human
in vitro diagnostics. No other rights are conveyed. This product may not be repackaged, reformulated or resold in any
form without the written consent of Invitrogen Dynal AS,
Inchiostro India diluito al 2.5% v/v in PBS o emoglobina
quanto
basta per 100
ml di PBS. Deve essere
8g Na2EDTA
bovina
al 15%
adeguatamente
diluita.
riscaldata per dissolvere la soluzione EDTA. Far raffreddare. Regolare
il pH a 7.4 con NaOH.
Soluzione
di blocco:
La Na
soluzione
di inibizione
e la100
soluzione
di blocco
basta per
ml di PBS.
Deve possoessere
8g
2EDTA quanto
no essere per
mescolare
ed aggiunte
contemporaneamente
riscaldata
dissolvere
la soluzione
EDTA. Far raffrednel pozzetto.
dare.
Regolare il pH a 7.4 con NaOH.
La soluzione di inibizione e la soluzione di blocco possoSoluzioni di colorazione:
no
essere
mescolare
ed aggiunte contemporaneamente
Soluzione
salina tri-bilanciata
(TBSS) pH 7.4,
ENGLISH
AO/EB
– soluzione polivalente
nel
pozzetto.
per
la ri-sospensione
delle cellule isolate
INVITROGEN
DYNAL
PRODUCTS
FOR
HLA TYPING
NaCl
4.0 g
15 mg
di Arancio SEPARATION
di Acridina (Sigma A6014)
AND
MAGNETIC
Soluzioni
di colorazione:
KCl
0.2 g
50 mg di Etidio
Bromuro (Sigma E8751)
MgSO
×
7H
O
0.1
g
4 – soluzione
2
AO/EB
polivalente
DEUTSCH
Dissolvere
1 ml
49 mlmg
di
Na
HPO
×in2H
Odi etanolo al 95%. Aggiungere
29.25
2
4
2
PBS.
Mescolare
bene.
Dividere
in
aliquote
di
1
ml
15
mg
di
Arancio
di
Acridina
(Sigma
A6014)
KH2PO4
30.00 mge
INVITROGEN
DYNAL-PRODUKTE ZUR HLA-TYPISIERcongelare.
50
mgUND
Etidio
E8751)
CaCl
×di2H
O Bromuro (Sigma
13.5 mg
UNG
MAGNETISCHEN
SEPARATION
2
2
Glucosio in 1 ml di etanolo al 95%. Aggiungere 49 0.5
Dissolvere
ml dig
AO/EB
–
soluzione
di
lavoro
FRANCAISE
(Rosso
fenolo) bene. Dividere in aliquote di(1.0
mg)
PBS.
Mescolare
1 ml
e
Scongelare 1INVITROGEN
ml di soluzione
polivalente
diluire 1:10
in
Tris
9.55
g
congelare.
PRODUITS
DYNAL
POURe TYPAGE
HLA
PBS
(pH
7.4).
Mescolare
bene.
Conservare
in
un
flacone
HClMAGNETIQUE
Concentrato SEPARATION
5.0 ml
ET
ambratoSterile
2-8°C per un
periodo di tempo fino a1.000
1 mese
Acqua
ml
AO/EB
–a soluzione
di lavoro
(3). ESPANOL
Prima
dell’uso,
aggiungere
siero fetalee diluire
di vitello
Scongelare
1 ml di
soluzione polivalente
1:102%
in
(FCS)
o 7.4).
sieroMescolare
di originebene.
umana
2% (HS)in(termoattiPBS
(pH
Conservare
un flacone
PRODUCTOS
GARANZIA INVITROGEN DYNAL PARA TIPAJE HLA
vato).
ambrato
a
2-8°C
per
un
periodo
di
tempo
fino
a
1
mese
Y SEPARACIÓN MAGNETICA
Il prodotto
è garantitodelle
solocellule
se utilizzato
in accordo
con
(3).
Per
la ri-sospensione
è possibile
usare altri
le quantità
il metodo
descritti
per
tamponi.
Il ed
tampone
usato
deve nelle
essereistruzioni
completato
ITALIANO
l'uso.
Non
viene
garantito
qualsiasi
altro
utilizzo,
esGARANZIA
Ca++ e INVITROGEN
Mg++ e FCS DYNAL
2% o HS
ad es.: soluIcon
PRODOTTI
PER2%,
LA TIPIZZAZIONE
presso
o
implicito.
zione
salina
bilanciata
(HBSS),
pH
7.4,
RPMI
1640
o
Il
prodotto
è
garantito
solo
se
utilizzato
in
accordo
con
HLA E LA SEPARAZIONE MAGNETICA
PBS
(pH 7.4).
le
quantità
ed il metodo descritti nelle istruzioni per
LIMITAZIONI
Cat.
no.
l'uso.
vieneusati
garantito
utilizzo,
esTutti i Non
reagenti
devonoqualsiasi
essere dialtro
grado
analitico.
®
HLA Class
I
Dynabeads
I prodotti
sono coperti
da numerosi
brevetti e/0 domande
presso
o implicito.
2 oml,
20 isolations
210.01D
Soluzione
di inibizione:
di brevotto detenuti
conrollati
da Invitrogen Corporation.
®
Inchiostro
India
diluito
al 2.5%
v/v in PBS
o emoglo-il
L’acquisto del
presente
all’acquirente
LIMITAZIONI
HLA prodotto
Class
I conferisce
Dynabeads
bina
al 15%
adeguatamente
diluita. acquistato
dirittobovina
non cedibile
di 50
utilizzare
il prodotto
5 ml,
isolations
210.02D
I prodotti sono coperti
da numerosi
brevetti e/0 domande
in
vitro
.
Non
sono conesclusivamente
per
uso
diagnostico
®di blocco:
di
brevotto detenuti
o conrollati
Corporation.
Soluzione
Dynabeads
HLA
Class
II da Invitrogen
cessi ulteriori diritti.
Non
è permesso
ri-confezionare, riL’acquisto
del presente
prodotto
conferisce
il
8g Na2EDTA
quanto
basta
per
100 ml all’acquirente
di PBS. Deve
2 ml,questo
20 isolations
formulare o rivendere
prodotto sotto alcuna210.03
forma
diritto
utilizzare lail soluzione
prodotto EDTA.
acquistato
essere non
riscaldata
perdidissolvere
Far
®cedibile
senza il consenso
scritto
dellaIIInvitrogen Dynal AS, PO Box
HLA Class
Dynabeads
in vitro
. Non sono conesclusivamente
per uso diagnostico
raffreddare.
Regolare
il
pH
a
7.4
con
NaOH.
114, Smestad, N-0309
Norway.
5 ml,Oslo,
50 isolations
210.04D
cessi ulteriori diritti. Non è permesso ri-confezionare, riLa soluzione di inibizione e la soluzione di blocco posDynal
MPC™-1
formulare
o rivendere questo prodotto sotto alcuna forma
sono essere mescolare ed aggiunte contemporanea(Magnetic
Particlescritto
Concentrator
senza il consenso
della Invitrogen Dynal AS, PO Box
mente nel pozzetto.
holding
one x N-0309
10-50 ml
tube)
120.01D
114, Smestad,
Oslo,
Norway.
Dynal
MPC™-L
Soluzioni
di colorazione:
(Magnetic Particle Concentrator
AO/EB – soluzione polivalente
holding six x 5 ml tubes)
120.21D
15 mg di Arancio di Acridina (Sigma A6014)
50 mg di Etidio Bromuro (Sigma E8751)
REFERENCES
Dissolvere in 1 ml di etanolo al 95%. Aggiungere 49 ml
1.
Kvalheim
G et al.:
Cancer
res. 1987;47:846-51
di PBS.
Mescolare
bene.
Dividere
in aliquote di 1 ml e
2.
Vartdal F et al.: Tissue Antigens 1986;28: 301-12
congelare.
3. Vartdal F et al.: Transpl. Proc., 1987; XIX:655-57
4.
Park D
et al.: PNAS
AO/EB
–R
soluzione
di 1987;76:1962
lavoro
Scongelare 1 ml di soluzione polivalente e diluire 1:10
in PBS (pH 7.4). Mescolare bene. Conservare in un flacone ambrato a 2-8°C per un periodo di tempo fino
a 1 mese (3).
DEUTSCH
GARANZIA
Il prodotto è garantito solo®se utilizzato in accordo
con le quantità ed il metodo descritti nelle istruzioni
per l’uso. Non viene garantito qualsiasi altro utilizzo,
espresso o implicito.
Nur zur In Vitro Diagnostik
LIMITAZIONI
Für
eine schnelle
Isolierung
von B-Zellen
I prodotti
sono coperti
da numerosi
brevetti(HLA
e/0
Klasse
II-positive
Zellen)
aus peripherem
Blut,
domande
di brevotto
detenuti
o conrollati
da
die
als
Targetzellen
für
die
HLA-Typisierung
in
Invitrogen Corporation. L’acquisto del presente
einem
Mikrolymphozytotoxizitätstest
eingesetzt
prodotto
conferisce all’acquirente il diritto
non
werden.
cedibile di utilizzare il prodotto acquistato esclusivamente per uso diagnostico in vitro. Non
ANWENDUNG
sono concessi ulteriori diritti. Non è permesso
ri-confezionare,
riformulare
o rivendere
questo
Die
Dynabeads HLA
Klasse II sind
speziell für
eine
prodotto
sotto
alcuna von
forma
senza
il perpherem
consenso
rasche,
direkte
Isolierung
B-Zellen
aus
scritto
della Invitrogen
Dynal
AS, POkann
Boxinner114,
Blut
vorgesehen.
Die gesamte
Isolierung
Smestad,
Oslo, Norway.
halb
von 15N-0309
Min. durchgeführt
werden und macht eine
zeitaufwendige Gradientenzentrifugation überflüssig.
Riferimenti Bibliografici
Die isolierten Zellen können direkt in einem Mikro1. Kvalheim G et al.: Cancer res. 1987;47:846-51
lymphozytotoxizitätstest für die Typisierung von HLA
2. Vartdal F et al.: Tissue Antigens 1986;28: 301-12
Klasse II (DR, DQ) eingesetzt werden.
3. Vartdal F et al.: Transpl. Proc., 1987; XIX:655-57
4. Park D R et al.: PNAS 1987;76:1962
PRODUKTBESCHREIBUNG
DYNABEADS
HLA CLASS II
Dynabeads M-450 sind mit einem monoklonalen Antikörper gegen ein HLA Klasse II b-Monomorphisches
Antigen beschichtet, das B-Zellen und Antigen presentierenden Zellen exprimiert wird (1). Das Produkt wird
in PBS (mit Zusatz von 0,1% BSA und 0,02% NaN3)
geliefert.
PRINZIP
Das immunomagnetische Zellseparationsverfahren mit
den Dynabeads HLA Klasse II ermöglicht die direkte,
schnelle und spezifische Isolierung von HLA Klasse IIpositiven Zellen aus ACD-Blut (Citratdextrose). Nach
einer kurzen Inkubationszeit bilden die HLA Klasse IIpositiven Zellen Rosetten mit den Dynabeads HLA
Klasse II. Die rosettierten HLA Klasse II-positiven Zellen
werden anschließend mit Hilfe eines Magneten isoliert
und gewaschen. Nach Resuspendieren können die HLA
Klasse II-positiven Zellen direkt für die HLA Klasse II
Typisierung in einem Mikrolymphozytotoxizitätstest eingesetzt werden (Ref. 2, 3). Die an der Zelloberfläche
anhaftenden Dynabeads beeinträchtigen die Vitalität
der Zellen nicht. Die Sensitivität des Mikrolymphozytotoxizitätstest wird erhöht (Ref. 2, 3).
ZUR BEACHTUNG
Nur zur in vitro Diagnostik
Da Säugetierzellen verwendet werden, müssen geeignete Laborbedingungen eingehalten
werden. Detaillierte Information über die
Invitrogen Dynal is a part of the Invitrogen
Richtlinien im Umgang mit Säugetierzellen
Group.
können aus folgender Literaturstelle entnomContact
detailsProtection
for your
local Invitrogen
men werden:
of Laboratory
Worsales
support
can be
found at
kersoffice/technical
from Occupationally
Acquired
Infection;
http://www.invitrogen.com/contact
M-29-A2 ISBN 1-56238-435-8. Approved
- Second
EditionDynal AS,
©Guidelines
Copyright 2009
Invitrogen
http://www.nccls.org.
Oslo,
Norway.
Betrachten Sie alle Proben als potentiell infekAll rights reserved.
tiös. Deshalb sollten alle Arbeiten mit HandSPEC-05718
schuhen und unter geeigneten Sicherheitsmassnahmen durchgeführt werden.
Dynabeads HLA Class II sollten bei 2-8°C gelagert werden. Vor der Benutzung sollten die
Dynabeads HLA Class II gewissenhaft suspendiert werden um eine homogene Suspension zu erhalten. Treffen Sie Vorsichtsmass09-03-19 10.15.59
nahmen um eine bakterielle Kontamination
Dynabea
all
sampl
2-8°C.
All
workR
II well
and
appr
suspens
Dynabea
Precaut
2-8°C. R
terial co
II well
suspens
STORAGE
Precauti
When
unop
terial
co
Class II are
vial label. P
STORAGE
terial contam
When unop
Class II are
MATERIAL
vial label. P
Materials
n
terial
contam
with Dynab
MATERIAL
A magnetic
MPC™-L).ne
Materials
BloodDynabe
collec
with
Heparin)
A magnetic
Tilting/rotat
MPC™-L).
alternative)
Blood collec
Pasteur pipe
Heparin)
Glassware
Tilting/rotat
Container fo
alternative).
Cooling dev
Pasteur pipe
Buffers and
Glassware
Container fo
CELL ISOL
Cooling dev
Blood samp
Buffers
and
ferably not
mic and
leu
CELL
ISOL
24 hours af
Blood samp
1. Collect
ferably
not 5o
tub
mic ting
and leu
attachm
24 hours
aft
netic bea
1. Collect 5
or a pre
ting tub
2. Add 5 m
attachme
to each
netic bea
blood an
or a pre
cells and
2. Add 5 m
setted ce
to each s
3. Resuspe
blood an
well by g
cells and
directly
setted ce
4. Mix for 5
3. Resuspe
ting. Do
well by g
damage
directly i
microcyt
4. Mix for 5
essential
ting. Do
damage
microcyt
essential