Progesterone II - laboratorioprivitera.it

12142236001V12
Progesterone II
Progesterone
12145383 122
100 test
• Indica gli analizzatori su cui la confezione può essere usata
Elecsys 1010 Elecsys 2010
•
•
MODULAR
ANALYTICS
E170
cobas e 411
cobas e 601
•
•
•
Italiano
Finalità d’uso
Test immunologico per la determinazione quantitativa in vitro del
progesterone nel siero e nel plasma umani.
L’esecuzione dell’ImmunoAssay in ElettroChemiLuminescenza “ECLIA” è
destinata all’uso sugli immunoanalizzatori Elecsys e cobas e.
Sommario
Il gestageno progesterone è un ormone steroideo con un peso molecolare
di 314,5 Da. Il progesterone viene prodotto prevalentemente nelle cellule
del corpo luteo e durante la gravidanza nella placenta.
La concentrazione di progesterone è in correlazione con lo sviluppo e con la
regressione del corpo luteo. Mentre il progesterone è quasi irrilevabile nella
fase follicolare del ciclo mestruale, si osserva un aumento del progesterone
1 giorno prima dell’ovulazione. Si verifica una maggiore sintesi del progesterone
durante la fase luteale. Nella seconda metà del ciclo viene espulso nell’urina il
pregnandiolo come principale prodotto di degradazione del progesterone.1
Il progesterone provoca la conversione della mucosa uterina in un tessuto ricco
di ghiandole (fase secretoria) per preparare l’impianto intrauterino dell’uovo
fecondato. Durante la gravidanza il progesterone inibisce la contrazione del
miometrio. Nella ghiandola mammaria, il progesterone, insieme agli estrogeni,
favorisce la proliferazione e la disponibilità secretoria degli alveoli.1,2
La determinazione del progesterone viene impiegata nell’ambito
della diagnostica della fertilità, per rilevare l’ovulazione e
per valutare la fase luteale.2,3
Principio del test
Principio di competizione. Durata complessiva del test: 18 minuti.
• 1a incubazione: per il rilascio del progesterone, in presenza di un anticorpo
monoclonale biotinilato specifico anti-progesterone e di un derivato del
progesterone marcato con complesso di rutenioa, 30 µL di campione
vengono incubati con danazolo. Il progesterone del campione compete
con il derivato del progesterone marcato per il sito di legame dell’anticorpo.
• 2a incubazione: dopo l’aggiunta di microparticelle rivestite di
streptavidina, il complesso si lega alla fase solida mediante l’interazione
biotina-streptavidina. La quantità del derivato del progesterone
marcato e legato alla fase solida è inversamente proporzionale alla
concentrazione di progesterone nel campione.
• La miscela di reazione viene aspirata nella cella di misura
dove le microparticelle vengono attratte magneticamente alla
superficie dell’elettrodo. Successivamente si eliminano le sostanze
non legate impiegando ProCell. Applicando una tensione
all’elettrodo, si induce l’emissione chemiluminescente che viene
misurata mediante il fotomoltiplicatore.
• I risultati vengono calcolati in base ad una curva di calibrazione, che viene
generata in modo specifico per lo strumento con una calibrazione a 2 punti
e con una curva master fornita insieme al codice a barre del reattivo.
a) Complesso di rutenio (II) tris(2,2’-bipiridile) (Ru(bpy)2+
3 )
Reattivi – soluzioni pronte all’uso
M
Microparticelle rivestite di streptavidina (tappo trasparente),
1 flacone, 6,5 mL:
microparticelle rivestite di streptavidina 0,72 mg/mL; conservante.
R1
Anticorpi anti-progesterone~biotina (tappo grigio), 1 flacone, 10 mL:
anticorpo (murino) monoclonale biotinilato anti-progesterone
0,15 mg/L; tampone fosfato 25 mmol/L, pH 7,0; conservante.
R2
Progesterone-peptide~Ru(bpy)2+
3 (tappo nero), 1 flacone, 8 mL:
peptide sintetico marcato con un complesso di rutenio e legato
al progesterone (di origine vegetale) 10 ng/mL; tampone
fosfato 25 mmol/L, pH 7,0; conservante.
2009-05, V 12 Italiano
Precauzioni e avvertenze
Per uso diagnostico in vitro.
Osservare le precauzioni normalmente adottate nella manipolazione
dei reagenti di laboratorio.
Lo smaltimento di tutti i rifiuti deve avvenire secondo le direttive locali.
Scheda dati di sicurezza disponibile su richiesta per gli utilizzatori professionali.
Evitare la formazione di schiuma con tutti i reattivi e tipi di campione
(campioni, calibratori e controlli).
Utilizzo dei reattivi
I reattivi contenuti nella confezione formano un’unità inseparabile
e sono pronti all’uso.
Tutte le informazioni necessarie per l’utilizzo corretto vengono lette nello
strumento con i codici a barre dei rispettivi reattivi.
Conservazione e stabilità
Conservare a 2–8 °C.
Conservare la confezione di reattivi Progesterone II Elecsys in posizione
verticale in modo da garantire la completa disponibilità delle microparticelle
durante il mescolamento automatico prima dell’uso.
Stabilità:
prima dell’apertura a 2–8 °C
dopo l’apertura a 2–8 °C
su MODULAR ANALYTICS E170
e cobas e 601
su Elecsys 2010 e cobas e 411
su Elecsys 1010
fino alla data di scadenza indicata
12 settimane
8 settimane
8 settimane
4 settimane (se conservati alternativamente
in frigorifero e sullo strumento – a
temperatura ambiente (20–25 °C), aperti
per non più di 20 ore complessivamente)
Prelievo e preparazione dei campioni
Solo i tipi di campione elencati di seguito sono stati testati e risultano accettabili.
Siero, prelevato con provette standard per prelievi di campioni o
con provette contenenti gel di separazione.
Plasma con sodio/litio eparina, K3-EDTA, citrato di sodio e fluoruro
di sodio/ossalato di potassio. Se si impiega il citrato di sodio,
correggere i risultati del +10 %.
Valutazione: recupero 90–110 % del valore nel siero o slope 0,9–1,1 + intercetta
< ±2 x limite di sensibilità analitica + coefficiente di correlazione > 0,95.
Stabilità: 5 giorni a 2–8 °C, 6 mesi a –20 °C. Congelare solo 1 volta.
Stabilità del siero prelevato con provette contenenti gel di separazione:
48 ore a 2–8 °C (vedere le istruzioni del produttore delle provette).
I tipi di campione elencati sono stati testati impiegando una selezione di
provette per il prelievo di campioni disponibili in commercio al momento
dell’analisi; non sono, quindi, state testate tutte le provette disponibili di tutte
le case produttrici. Alcuni sistemi per il prelievo di campioni di vari produttori
possono contenere diversi materiali e in alcuni casi possono interferire sui
risultati del test. Quando si trattano i campioni in provette primarie (sistemi per
il prelievo di campioni), seguire le istruzioni del produttore delle provette.
I campioni contenenti precipitati devono essere centrifugati prima
dell’esecuzione del test. Non impiegare campioni inattivati a caldo. Non
impiegare campioni e controlli stabilizzati con azide.
Assicurarsi che i campioni prelevati dai pazienti, i calibratori ed i controlli al
momento della misura siano a temperatura ambiente (20–25 °C).
Per evitare un’eventuale evaporazione, misurare i campioni, calibratori
e controlli che si trovano sugli strumenti entro 2 ore.
Materiali a disposizione
Per i reattivi, vedere la sezione “Reattivi – soluzioni pronte all’uso”.
Materiali necessari (ma non forniti)
• Art. n. 12145391122, Progesterone II CalSet, per 4 x 1 mL
• Art. n. 11731416122, PreciControl Universal, per 2 x 3 mL ciascuno di
PreciControl Universal 1 e 2, oppure
Art. n. 11731416190, PreciControl Universal, per 2 x 3 mL ciascuno di
PreciControl Universal 1 e 2
• Art. n. 11731416160, PreciControl Universal, per 2 x 3 mL ciascuno di
PreciControl Universal 1 e 2 (per gli USA)
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Analizzatori Elecsys e cobas e
Progesterone II
Progesterone
• Art. n. 03028542122, Diluent Estradiol/Progesterone Elecsys,
2 x 22 mL di diluente
• Normale attrezzatura da laboratorio
• Analizzatore Elecsys 1010/2010, MODULAR ANALYTICS E170 o cobas e
Accessori per gli analizzatori Elecsys 1010/2010 e cobas e 411:
• Art. n. 11662988122, ProCell, 6 x 380 mL di tampone del sistema
• Art. n. 11662970122, CleanCell, 6 x 380 mL di soluzione di lavaggio
per celle di misura
• Art. n. 11930346122, SysWash Elecsys, 1 x 500 mL di additivo
per l’acqua di lavaggio
• Art. n. 11933159001, adapter per SysClean
• Art. n. 11706829001, AssayCup Elecsys 1010, 12 x 32 coppette di reazione,
oppure
Art. n. 11706802001, AssayCup Elecsys 2010, 60 x 60 coppette di reazione
• Art. n. 11706799001, AssayTip Elecsys 2010, 30 x 120 puntali di pipettaggio
Accessori per gli analizzatori MODULAR ANALYTICS E170 e cobas e 601:
• Art. n. 04880340190, ProCell M, 2 x 2 L di tampone del sistema
• Art. n. 04880293190, CleanCell M, 2 x 2 L di soluzione di lavaggio
per celle di misura
• Art. n. 12135027190, CleanCell M, 1 x 2 L di soluzione di lavaggio
per celle di misura (per gli USA)
• Art. n. 03023141001, PC/CC-Cups, 12 coppette per il preriscaldamento
di ProCell M e di CleanCell M prima dell’uso
• Art. n. 03005712190, ProbeWash M, 12 x 70 mL di soluzione di lavaggio
per la conclusione del run ed il lavaggio al cambio di reattivi
• Art. n. 12102137001, AssayTip/AssayCup Combimagazine M, 48 supporti
da 84 coppette di reazione e 84 puntali di pipettaggio, sacchetti per rifiuti
• Art. n. 03023150001, WasteLiner, sacchetti per rifiuti
• Art. n. 03027651001, SysClean Adapter M
Accessori per tutti gli analizzatori:
• Art. n. 11298500316, SysClean Elecsys, 5 x 100 mL di
soluzione di lavaggio per il sistema
Disponibile solo negli USA:
• Art. n. 12145413122, Progesterone II CalCheck Elecsys, 3 concentrazioni
Esecuzione
Per una performance ottimale del test, attenersi alle indicazioni
riportate nel presente documento per l’analizzatore in questione. Per
le istruzioni specifiche dell’analizzatore relative all’esecuzione del test,
consultare il manuale d’uso dello strumento.
La risospensione delle microparticelle prima dell’uso avrà luogo
automaticamente. Leggere i parametri test-specifici nello strumento dal
codice a barre del reattivo. Nel caso eccezionale che non sia possibile
leggere il codice a barre, digitare la sequenza di 15 cifre.
Analizzatori MODULAR ANALYTICS E170, Elecsys 2010 e cobas e: portare
i reattivi conservati al fresco alla temperatura di ca. 20 °C e collocarli
nel rotore portareattivi (20 °C) dell’analizzatore. Evitare la formazione di
schiuma. La regolazione della temperatura esatta, l’apertura e la chiusura
dei flaconi avranno luogo automaticamente nello strumento.
Analizzatore Elecsys 1010: portare i reattivi conservati al fresco alla
temperatura di ca. 20–25 °C e collocarli nel rotore portacampioni/portareattivi
dello strumento (temperatura ambiente: 20–25 °C). Evitare la formazione di
schiuma. Aprire a mano i tappi dei flaconi al momento dell’uso e chiuderli
poi manualmente. Dopo l’uso conservare a 2–8 °C.
Calibrazione
Tracciabilità: questo metodo è stato standardizzato mediante l’ID-GC/MS
(gas-cromatografia/spettrometria di massa con diluizione isotopica).4
Ogni set di reattivi Progesterone II Elecsys possiede un’etichetta con
codice a barre contenente le informazioni specifiche per la calibrazione
del rispettivo lotto di reattivo. La curva master preimpostata viene adattata
all’analizzatore impiegando Progesterone II CalSet Elecsys.
Analizzatori Elecsys e cobas e
Frequenza di calibrazione: effettuare una calibrazione per ogni lotto con
reattivo fresco (al massimo 24 ore dopo l’identificazione della confezione di
reattivo sullo strumento). Si consiglia di ripetere la calibrazione come segue:
Analizzatori MODULAR ANALYTICS E170, Elecsys 2010 e cobas e:
• dopo 1 mese (28 giorni) se si impiega lo stesso lotto di reattivo
• dopo 7 giorni (se si impiega la stessa confezione di reattivo sullo strumento)
Analizzatore Elecsys 1010:
• con ogni nuova confezione di reattivo
• dopo 7 giorni (temperatura ambiente: 20–25 °C)
• dopo 3 giorni (temperatura ambiente: 25–32 °C)
Per tutti gli analizzatori:
• all’occorrenza: ad es. se un controllo di qualità si trova al di fuori
dei limiti indicati
Controllo di qualità
Per il controllo di qualità, impiegare PreciControl Universal 1 e 2 Elecsys.
In aggiunta, è possibile utilizzare altro materiale di controllo appropriato.
I controlli per le diverse concentrazioni devono essere eseguiti con
determinazione in singolo almeno 1 volta ogni 24 ore quando il test è in uso,
al cambio di ogni confezione di reattivi e dopo ogni calibrazione. Gli intervalli
e limiti del controllo dovranno essere conformi alle esigenze individuali di
ogni laboratorio. I valori ottenuti devono rientrare nei limiti definiti.
Ogni laboratorio deve definire delle misure correttive da attuare nel
caso che alcuni valori siano al di fuori dei limiti.
Per il controllo di qualità, attenersi alle normative vigenti e alle linee guida locali.
Calcolo
L’analizzatore effettua il calcolo automatico della concentrazione dell’analita
di ogni campione (in nmol/L, in ng/mL oppure in µg/L).
Fattori di conversione:
nmol/L x 0,314 = ng/mL (µg/L)
ng/mL x 3,18 = nmol/L
Limiti del metodo – interferenze
L’ittero (bilirubina ditaurato < 54 mg/dL oppure < 923 µmol/L), l’emolisi
(Hb < 1,0 g/dL oppure < 0,621 mmol/L), la lipemia (Intralipid < 720 mg/dL) e la
biotina < 82 nmol/L oppure < 20 ng/mL non interferiscono sul test.
Valutazione: recupero entro ±10 % del valore iniziale.
Ai pazienti sottoposti a terapia con alti dosaggi di biotina (>5 mg/die), il campione
dovrà essere prelevato almeno 8 ore dopo l’ultima somministrazione di biotina.
Non sono state osservate interferenze da fattori reumatoidi fino
ad una concentrazione di 2000 IU/mL.
Tra 18 farmaci di frequente impiego, testati in vitro, solo il
fenilbutazone a dosaggi terapeutici ha presentato interferenze con
il test (valori di progesterone diminuiti).
In casi rari possono riscontrarsi interferenze causate da titoli estremamente alti
di anticorpi diretti contro anticorpi specifici anti-analita (quali anticorpi umani
anti-topo (HAMA)), di anticorpi anti-streptavidina o di anticorpi anti-rutenio. Tali
effetti sono ridotti al minimo attraverso un procedimento appropriato del test.
Ai fini diagnostici, i risultati devono sempre essere valutati congiuntamente con
la storia clinica del paziente, con gli esami clinici e con altre evidenze cliniche.
Intervallo di misura
0,095–191 nmol/L oppure 0,030–60,0 ng/mL (definito dal limite di
sensibilità inferiore e dal massimo valore della curva master). I valori
al di sotto del limite di sensibilità vengono indicati come <0,095 nmol/L
oppure <0,030 ng/mL. I valori al di sopra dell’intervallo di misura vengono
indicati come >191 nmol/L oppure >60,0 ng/mL (oppure, su campioni
diluiti 1:10, fino a 1910 nmol/L oppure 600 ng/mL).
Diluizione
I campioni con concentrazioni di progesterone al si dopra dell’intervallo di
misura possono essere diluiti impiegando Diluent Estradiol/Progesterone
Elecsys o un siero umano appropriato con una bassa concentrazione
dell’analita. È raccomandata la diluizione 1:10. La concentrazione del
campione diluito deve essere > 6 nmol/L (> 2 ng/mL). Dopo la diluizione,
moltiplicare il risultato per il fattore di diluizione.
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Progesterone II
Progesterone
Valori di riferimento
In studi con il test Progesterone II Elecsys sono stati ottenuti
i seguenti valori di progesterone:
Soggetti del test
N
Uomini
Donne
• in fase follicolare
• in fase ovulatoria
• in fase luteale
• in postmenopausa
33
Percentili
5–95o
50o
5–95o
ng/mL
nmol/L
1,8
0,7–4,3
0,6
0,2–1,4
192
13
158
89
2,1
3,9
36
1,0
50o
0,6–4,7
2,4–9,4
5,3–86
0,3–2,5
0,7
1,2
11
0,3
0,2–1,5
0,8–3,0
1,7–27
0,1–0,8
Valutazione multicentrica del test Progesterone II Elecsys, 5/99
Ogni laboratorio deve controllare l’applicabilità dei valori di
riferimento alla propria popolazione di pazienti e, se necessario,
determinare intervalli di riferimento propri.
Dati specifici sulla performance del test
Qui di seguito sono riportati i dati rappresentativi delle prestazioni sugli
analizzatori. I risultati dei singoli laboratori possono differire da questi.
Precisione
La riproducibilità è stata determinata impiegando reattivi Elecsys, pool di
sieri umani e controlli, eseguiti in base ad un protocollo modificato (EP5-A)
dell’NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standards): 6 volte al
giorno per 10 giorni (n = 60); precisione nella serie sull’analizzatore MODULAR
ANALYTICS E170, n = 21. Sono stati ottenuti i seguenti risultati:
Analizzatori Elecsys 1010/2010 e cobas e 411
Prec. nella serie
Precisione totale
Camp.
Media
DS
CV
DS
CV
%
%
nmol/L ng/mL nmol/L ng/mL
nmol/L ng/mL
4,99
1,57
0,13
0,04
2,4
0,29
0,09
5,4
SUb 1
38,2
12,0
0,54
0,17
1,5
1,53
0,48
4,1
SU 2
5,5
96,0
30,2
2,42
0,76
2,7
4,90
1,54
SU 3
8,83
0,60
0,19
2,3
1,21
0,38
4,6
PC Uc1 28,1
20,8
1,11
0,35
1,7
2,45
0,77
3,7
PC U2 66,1
b) SU = siero umano
c) PC U = PreciControl Universal
Analizzatori MODULAR ANALYTICS E170 e cobas e 601
Precisione nella serie
Precisione totale
Camp.
Media
Media
DS
CV
DS
nmol/L ng/mL nmol/L ng/mL % nmol/L ng/mL nmol/L ng/mL
2,31 0,73 0,07 0,02 2,9 2,52 0,79 0,12 0,04
SU 1
9,57 3,01 0,13 0,04 1,4 10,0 3,13 0,28 0,09
SU 2
103 32,4 0,96 0,30 0,9 112 35,3 2,23 0,70
SU 3
PC U1 15,6 4,89 0,17 0,05 1,1 16,7 5,26 0,55 0,17
PC U2 61,5 19,3 0,45 0,14 0,7 64,7 20,4 1,19 0,38
CV
%
4,8
2,8
2,0
3,3
1,8
Sensibilità analitica (limite di sensibilità inferiore)
0,095 nmol/L (0,030 ng/mL)
Il limite di sensibilità rappresenta la minima concentrazione misurabile
dell’analita che può essere distinta dallo zero. Viene calcolato come il valore
che si trova 2 deviazioni standard al di sopra dello standard più basso
(calibratore master, standard 1 + 2 DS, precisione nella serie, n = 21).
Confronto tra metodi
Il confronto del test Progesterone II Elecsys (y) con il test Progesterone
Elecsys (x), impiegando campioni prelevati da pazienti ospedalizzati,
ha prodotto le seguenti correlazioni (ng/mL):
Numero dei campioni misurati: 88
Regressione lineare
Passing/Bablok5
y = 0,91x + 0,29
y = 0,90x + 0,50
τ = 0,933
r = 0,998
Le concentrazioni dei campioni erano comprese tra ca. 0,6 e 140 nmol/L
(tra ca. 0,2 e 44 ng/mL).
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Specificità analitica
Per il derivato dell’anticorpo impiegato sono state riscontrate le
seguenti reazioni crociate (in %):
Androstendiolo
Androstendione
Corticosterone
Cortisolo
Danazolo
DHEA-S
D-(-)-Norgestrel
Estradiolo
Etisterone
Etinoldioldiacetato
Medrossiprogesterone
Noretindrone
Noretindrone acetato
Testosterone
4-Pregnen-11β-17α-diol-3,20-dione
11-Desossicorticosterone
11-Deossicortisolo
5-α-Diidrotestosterone
5-β-Diidroprogesterone
5α-Pregnen-3β-ol-20-one
5β-Pregnan-3α-ol-20-one
6α-Metil-17α-idrossi-progesterone-acetato
6α-Metilprednisolone
17α-Idrossipregnenolone
17α-Idrossiprogesterone
20α-Idrossi-4-pregnen-3-one
0,002
0,136
0,687
0,005
0,002
0,009
0,008
0,009
0,002
n.r.d
0,812
0,010
n.r.
0,020
0,338
0,296
0,392
0,040
20,7
0,858
0,211
0,257
n.r.
0,018
1,30
0,016
d) n.r. = non rilevabile
Sensibilità funzionale
0,48 nmol/L (0,15 ng/mL)
La sensibilità funzionale rappresenta la concentrazione minima dell’analita
che può essere misurata in modo riproducibile con un coefficiente
di variazione fra le serie inferiore al 20 %.
Letteratura
1. Johnson MR, Carter G, Grint C, Lightman SL. Relationship between
ovarian steroids, gonadotrophins and relaxin during the menstrual
cycle. Acta Endocrinol 1993;129:121–125.
2. Runnebaum B, Rabe T. Gynäkologische Endokrinologie und
Fortpflanzungsmedizin Springer Verlag 1994; Volume 1:36–38,70,116
Volume 2:137,360,398–399,408–409,422–423. ISBN 3-540-57345-3,
ISBN 3-540-57347-x.
3. Guillaume J, Benjamin F, Sicuranza B, Wang CF, Garcia A,
Friberg J. Maternal serum levels of estradiol, progesterone and
h-Choriongonadotropin in ectopic pregnancy and their correlation with
endometrial histologic findings. Surg Gynecol Obstet 1987;165:9–12.
4. Thienpont LM, Verhseghe PG, Van Brussel KA, De Leenheer AP.
Efforts by industry toward standardization of serum estradiol-17β
measurements. Clin Chem 1998;44(3):671–674.
5. Passing H, Bablok W et al. A General Regression Procedure for Method
Transformation. J Clin Chem Clin Biochem 1988;26:783–790.
Per ulteriori informazioni, consultare il manuale d’uso appropriato per il
relativo analizzatore, i rispettivi fogli di applicazione, la Product Information
e le metodiche di tutti i componenti necessari.
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Analizzatori Elecsys e cobas e
Progesterone II
Progesterone
Le aggiunte o modifiche significative sono indicate mediante una linea verticale posizionata al margine.
Le modifiche riguardanti i parametri test-specifici del codice a barre del reattivo già letti nello strumento
vanno introdotte manualmente.
© 2009, Roche Diagnostics
Roche Diagnostics GmbH, D-68298 Mannheim
Analizzatori Elecsys e cobas e
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