Polyclonal Rabbit Anti-S100 Codice Z0311

Polyclonal Rabbit
Anti-S100
Codice Z0311
Uso previsto
Per uso diagnostico in vitro.
Polyclonal Rabbit Anti-S100 è previsto per l'utilizzo in ambito immunoistochimico. L'anticorpo marca le cellule che esprimono S100 e rappresenta uno strumento utile per la
classificazione delle neoplasie positive per S100. L'identificazione differenziale è supportata dai risultati ottenuti con un gruppo di anticorpi. L'interpretazione clinica della
colorazione o dell'assenza di colorazione deve essere integrata con studi morfologici e istologici eseguiti con i controlli opportuni, deve tenere conto dell'anamnesi del
paziente e deve basarsi su ulteriori esami diagnostici eseguiti da un patologo qualificato. Questo anticorpo deve essere utilizzato una volta formulata la diagnosi primaria
mediante esame istopatologico convenzionale eseguito utilizzando tecniche di colorazione istochimica non immunologica.
Riepilogo e spiegazione
2+
S100 è una famiglia multigenica di proteine a basso peso molecolare (Mr tra 9.000 e 13.000) leganti il Ca . La famiglia comprende 19 membri che si esprimono in maniera
differenziale in un gran numero di tipi di cellule. Pertanto, S100B (precedentemente S100β) è più abbondante nelle cellule gliali del sistema nervoso centrale e periferico, in
melanociti, condrociti e adipociti, mentre S100A1 (precedentemente S100A/S100α) è più abbondante in cardiomiociti, cellule del muscolo scheletrico a contrazione lenta,
cellule epiteliali salivari e cellule renali. Inoltre, S100B si trova nelle cellule tumorali e nelle sottopopolazioni di neuroni, mentre S100A1 è stato rilevato anche nei neuroni
dell'ippocampo. S100A6 è espresso da fibroblasti e cellule del muscolo liscio e cardiaco (1).
I membri della famiglia S100 sono risultati coinvolti nella regolazione Ca 2+-dipendente di una serie di attività intracellulari, ad esempio la fosforilazione delle proteine, la
proliferazione cellulare (compresa la trasformazione neoplastica) e la differenziazione (2).
Reagente fornito
Frazione di immunoglobulina purificata da antisiero di coniglio in forma liquida. In NaCl 0,1 mol/L, NaN 3 15 mmol/L, pH 7,2.
Concentrazione proteica in g/L: vedere l'etichetta sul flacone.
La variazione di titolazione dell'anticorpo tra lotti diversi è inferiore al 10%, secondo le misurazioni tramite immunodiffusione radiale semplice. Questa viene raggiunta
regolando la titolazione di ogni singolo lotto in modo che corrisponda alla titolazione di una preparazione di riferimento conservata a –80 °C.
Immunogeno
S100 isolato da cervello di vacca.
Specificità
L'anticorpo è stato adsorbito in fase solida con proteine di plasma umano e siero bovino.
Nei test di immunoelettroforesi crociata, condotti utilizzando 50 µL di anticorpo per ogni cm 2 di area gel, non si osserva alcuna reazione con 2 µL di plasma umano e 2 µL di
siero bovino. Con estratti di cervello umano e bovino, l'anticorpo mostra un picco doppio ben distinto (S100). Colorazione: Coomassie Brilliant Blue.
Il saggio ELISA indiretto non ha evidenziato nessuna reazione dell'anticorpo con plasma umano e siero bovino.
Nei test Western blotting di proteine S100 ricombinanti umane purificate, l'anticorpo marca S100B fortemente, S100A1 debolmente e S100A6 molto debolmente. Non è stata
osservata alcuna reazione con le altre proteine S100 analizzate, S100A2, S100A3 ed S100A4 (3).
Come dimostrano i test immunoistochimici eseguiti su sezioni di tessuti fissati in formalina, l'anticorpo presenta reazioni crociate con la proteina equivalente a S100 di gatto,
cavallo, topo, ratto e maiale. Mostra inoltre una reazione forte con la proteina S100 umana e bovina.
Precauzioni
1. Per uso professionale.
2. Questo prodotto contiene sodio azide (NaN3), una sostanza chimica altamente tossica in forma pura. Sebbene alle concentrazioni del prodotto non sia classificata come
pericolosa, la sodio azide può reagire con il rame e il piombo delle tubature formando azidi metalliche fortemente esplosive. Durante lo smaltimento del prodotto, far scorrere
abbondante acqua nelle tubature per impedire la formazione di azidi metalliche.
3. Adottare le normali procedure previste per il trattamento dei prodotti di origine biologica.
4. Indossare dispositivi di protezione individuale appropriati per evitare il contatto con gli occhi e la cute.
5. La soluzione non utilizzata deve essere smaltita in conformità alle normative locali e nazionali vigenti in materia.
Conservazione
Conservare a 2-8 °C. Non utilizzare dopo la data di scadenza stampata sul flacone. Se i reagenti venissero conservati in condizioni diverse da quelle specificate, se ne deve
verificare lo stato prima dell'utilizzo. Non è possibile indicare segni evidenti di instabilità del prodotto. Pertanto, è necessario analizzare gli opportuni controlli positivi e negativi
contemporaneamente ai campioni dei pazienti. Se si osserva una colorazione inattesa non imputabile a variazioni delle procedure di laboratorio e si sospetta un problema
associato all'anticorpo, contattare l'Assistenza tecnica Dako.
Preparazione dei campioni
Sezioni in paraffina: è possibile utilizzare l'anticorpo per la marcatura delle sezioni di tessuto incluse in paraffina e fissate in formalina. Si consiglia di eseguire lo
smascheramento antigenico termoindotto in Dako Target Retrieval Solution, codice S1700, o in tampone citrato 10 mmol/L, pH 6,0. Le sezioni di tessuto non devono
essiccarsi durante il trattamento o durante la successiva procedura di colorazione immunoistochimica.
Sezioni congelate e preparazioni cellulari: in sezioni congelate la molecola S100, altamente solubile, tende a mostrare una distribuzione anomala o a essere eluita dal
tessuto.
Procedura di colorazione
Diluizione: Polyclonal Rabbit Anti-S100, codice Z0311, può essere utilizzato a una diluizione di 1:400 in applicazioni su sezioni fissate in formalina, incluse in paraffina, con un
trattamento di smascheramento antigenico termoindotto di 20 minuti in Dako Target Retrieval Solution, codice S1700, e un'incubazione con l'anticorpo primario di 30 minuti a
temperatura ambiente. Le condizioni ottimali possono variare in base al campione e al metodo di preparazione e devono essere determinate da ogni singolo laboratorio. Il
controllo negativo raccomandato è Dako Rabbit Immunoglobulin Fraction (Solid-Phase Absorbed), codice X0936, diluito alla stessa concentrazione proteica dell'anticorpo
primario. A meno che la stabilità non sia stata determinata nel sistema di test effettivo, si consiglia di diluire il prodotto immediatamente prima dell'uso o di diluirlo in Dako
Antibody Diluent, codice S0809.
Visualizzazione: si consiglia di utilizzare i kit Dako EnVision™+/HRP, codice K4008 e K4010.
Automazione: l'anticorpo è adatto alla colorazione immunoistochimica con piattaforme automatizzate, ad esempio Dako Autostainer.
Caratteristiche di prestazione
Nelle cellule marcate dall'anticorpo è visibile una colorazione limitata al citoplasma.
Tessuti normali: si è osservata una marcatura positiva con l'anticorpo in alcune cellule di Langerhans e melanociti della cute, cellule interdigitanti del reticolo nei linfonodi,
cellule reticolari epiteliali midollari nel timo, condrociti nel tessuto cartilagineo, adipociti in alcune biopsie ma non in altre, cellule mioepiteliali nelle ghiandole salivari e nella
mammella, cellule follicolostellate della ghiandola pituitaria e cellule di Schwann e gliali del tessuto nervoso. Si è rilevata una marcatura debole nelle cellule epiteliali delle
(104921-005)
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ghiandole mammarie e sudoripare. Si è osservata una reazione negativa con l'anticorpo in epatociti normali, epitelio del dotto biliare, epitelio della cistifellea, esofago,
stomaco ed epiteli dell'intestino tenue e crasso, epiteli renali e cellule uroteliali ed endoteliali (4).
Tessuti anomali: tra i melanomi maligni, sono stati marcati dall'anticorpo 31 casi su 31 (100%) di melanoma maligno cutaneo convenzionale, 23 casi su 24 (96%) di
melanoma maligno metastatico, tra cui 10 amelanotici, 6 casi su 6 di melanoma maligno desmoplastico e 1 caso su 1 di melanoma maligno mixoide. In 30 nevi benigni e 15
displastici, è stata riscontrata una marcatura universale omogenea in tutti i casi (5). In un altro studio su melanomi cutanei maligni primari (6), sono risultati positivi con
l'anticorpo 67 casi su 67 (100%), compresi 5 casi su 5 di tumori a cellule fusiformi e desmoplastici. Si è osservata una marcatura con l'anticorpo nell'88,5% di 27 casi di
istiocitosi di Langerhans, sia nella patologia localizzata sia in quella disseminata (7). In tutti i 30 condroblastomi esaminati con l'anticorpo è stata osservata una forte
marcatura dei condroblasti (8). Dei neurinomi benigni tipici, 12 casi su 12 sono risultati positivi all'anticorpo, così come 2 casi su 4 di neurinomi maligni. Tra i neurofibromi,
6 casi su 6 hanno mostrato una debole espressione di S100, eccetto per alcune cellule isolate e diversi processi cellulari anguiformi che sono risultati chiaramente positivi (1).
Si noti che S100 è risultato espresso in 15 su 133 casi di neoplasmi cutanei primari non melanocitici, ovvero 7 su 16 carcinomi eccrini, 2 su 8 carcinomi viscerali metastatici,
2 su 2 neurinomi maligni e 4 su 5 leiomiosarcomi (6). Tra gli adenocarcinomi primari, sono stati marcati positivamente dall'anticorpo, gli adenocarcinomi dell'ovaio in 24 casi
su 25 (84%), della ghiandola salivare in 12 casi su 15 (80%), dell'endometrio in 28 casi su 36 (78%), renali in 15 casi su 23 (65%), della mammella in 12 casi su 20 (60%), del
colon/retto in 7 casi su 28 (25%), dello stomaco in 2 casi su 10 (20%) e del polmone in 2 casi su 27 (7%). Nello stesso studio, gli adenocarcinomi di esofago, cistifellea,
pancreas e prostata sono risultati tutti negativi. La maggior parte dei neoplasmi primari che esprimevano S100 sono risultati positivi per la proteina anche nei foci metastatici
(9). Dei rabdomiosarcomi, 7 casi su 60 (12%) sono stati marcati dall'anticorpo. I tumori positivi per S100 sono risultati positivi anche per vimentina e desmina (10).
Bibliografia
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10. Coindre J-M, de Mascarel A, Trojani M, de Mascarel I, Pages A. Immunohistochemical study of rhabdo-myosarcoma. Unexpected staining with S100 protein and
cytokeratin. J Pathol 1988;155:127-32.
Spiegazione dei simboli
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