TdT - DCS - Innovative Diagnostik
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TdT - DCS - Innovative Diagnostik
Anti- Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) [TdT88] AM373-5M MU373-UC 4600 Norris Canyon Road San Ramon, CA 94583 USA Tech Support: 925-275-0550 Fax: 925-275-1999 [email protected] Emergo Europe Molenstraat 15 NL-2513 BH The Hague The Netherlands Tel: (+31) 70-345-8570 Fax: (+31) 70-346-7299 Doc. No. 932-373M-4 Rev. D Release Date: May 20, 2004 ENGLISH Specifications: Immunogen: Clone: Species: Immunoglobulin Class: Protein Conc.: Anti-Human Terminal deoxynucleotidy l transferase (TdT) Peptide containing specific sequence for N-terminal of human TdT protein TdT88 Catalog No. AM373-5M MU373-UC Description 6 ml of Ready-to-Use Antibody for Use with BioGenex Super Sensitive Detection Systems. 1 ml of Concentrated Antibody for Use with BioGenex Super Sensitive Detection Systems or Other Equivalent Detection Systems. Mouse IgG Recommended Detection System: LINK-LABEL 10 – 15 mg/ml* *Lot specific Ig concentration available upon request. Intended Use This antibody is currently available for in vitro diagnostic use. This monoclonal antibody is designed for the specific localization of TdT in formalin-fixed, paraffin-embedded tissue sections. Summary and Explanation Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) is a unique enzyme that possesses the ability to add deoxynucleoside triphosphates to DNA without the use of template instruction. In normal tissue, TdT is found in a subpopulation of cortical thymocytes and bone marrow lymphocytes. TdT is usually not present in normal mature T and B lymphocytes. This antibody identifies a 58 kD peptide normally found in cortical thymocytes and immature bone marrow lymphocytes. TdT expression has been reported to occur in over 90% of cases of acute lymphocytic leukemia (ALL). TdT staining is found in all subtypes of ALL with the exception of pre-B-cell ALL. In most TdT positive cases, nuclear staining is present in greater than 40% of bone marrow blasts. Studies of acute myeloid leukemia indicate that from 5% to 46% of these cases may contain TdT positive cells. TdT positivity has also been observed in approximately one third of all cases of chronic myeloid leukemia. In these cases TdT staining may be associated with a better response to chemotherapy and improved prognosis. Principles of the Procedure The demonstration of antigens by immunohistochemistry is a two-step process involving first, the binding of a primary antibody to the antigen of interest, and second, the detection of bound antibody by a chromogen. The primary antibody may be used in immunohistochemistry using manual techniques or using BioGenex Automated Staining System. BioGenex offers a variety of Super Sensitive detection systems including link-label and polymer based technologies to detect the chromogenic signal from the stained tissues and cells. Reagents Provided Mouse monoclonal antibody from ascites diluted in phosphate buffered saline, pH 7.6, containing 1% BSA and 0.09% sodium azide. Dilution of Primary Antibody This Ready-to-Use antibody has been optimized for use with detection system as indicated above and should not require further dilution. Further dilution may result in loss of sensitivity. The user must validate any such change. BioGenex Concentrated antibodies must be diluted in accordance with the staining procedure when used with BioGenex Super Sensitive Detection Systems. Use of non-BioGenex systems other than recommended systems and protocols require validation by the user. Antibody dilutions should be appropriately adjusted and verified according to the detection system used. Materials Required But Not Provided All the reagents and materials required for immunohistochemistry are not provided. Pretreatment reagents, Super Sensitive detection systems, control slides, control reagents and other ancillary reagents are available from BioGenex. Please refer to the product insert(s) of the BioGenex Super Sensitive Immunohistochemistry detection systems for detailed protocols and instructions. The immunohistochemistry procedure may need other lab equipment that are not provided including oven or incubator (capable of maintaining 56-60oC), BioGenex Automated Staining System, Humidity Chamber, Microwave oven, Staining Jars or baths, Timer (capable of 3-20 minute intervals), Wash Bottles, Absorbent Wipes, Microscope slides (pre-treated with poly-L-Lysine), Coverslips, Lens paper and Light microscope with magnification of 200X. Storage and Handling Antibodies should be stored at 2-8°C without further dilution. Fresh dilutions, if required, should be made prior to use and are stable for up to one day at room temperature (20-26°C). Unused portions of antibody preparations should be discarded after one day. This antibody is suitable for use until expiry date when stored at 2-8°C. Do not use product after the expiration date printed on vial. If reagents are stored under a condition other than those specified in the package insert, they must be verified by the user (U.S. Congress, 1992). The presence of precipitate or an unusual odor indicates that the antibody is deteriorating and should not be used. Positive and negative controls should be run simultaneously with all patient specimens. If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected, contact BioGenex Technical Support at 925-275-0550 or your local distributor. Specimen Collection and Preparation Tissues fixed in 10% (v/v) formalin are suitable for use prior to paraffin embedding. Consult references (Kiernan, 1981: Sheehan & Hrapchak, 1980) for further details on specimen preparation. Treatment of Tissues Prior to Staining Pretreatment of tissues if any, should be done as suggested in the staining procedure section. Precautions This antibody contains no hazardous material at a reportable concentration according to U.S. 29 CFR 1910.1200, OSHA Hazard Communication Standard and EC Directive 91/155/EC. However, this product contains sodium azide, at concentrations of less than 0.1%. Sodium azide is not classified as a hazardous chemical at the product concentrations. However, toxicity information regarding sodium azide at product concentrations has not been thoroughly investigated. Sodium azide may react with lead or copper plumbing to form highly explosive metal azides. Upon disposal, flush with large volumes of water to prevent azide build-up in plumbing (Center for Disease Control, 1976, National Institute for Occupational Safety and Health, 1976). For more information, a Material Safety Data Sheet for sodium azide in pure form is available upon request. Do not pipette reagents by mouth, and avoid contact of reagents and specimens with skin and mucous membranes. If reagents or specimens come in contact with sensitive area, wash with copious amounts of water. Minimize microbial contamination of reagents or increase in nonspecific staining may occur. Refer to appropriate product inserts for instructions of use and safety information on detection reagents and other materials, which may be used with the antibody. Staining Procedure Refer to the following table for conditions specifically recommended for this antibody. Refer to the detection system package insert for guidance on specific staining protocols or other requirements. Parameter BioGenex Recommendations Control Tissue THYMUS Tissue Type Formalin-fixed, Paraffin-embedded Concentrated Dilution 10-20 Pretreatment AR Citra Incubation Time and Temperature 2 hrs. @ RT Quality Control The recommended positive control tissue for this antibody is THYMUS. No/ tissues are available from BioGenex for QC. Refer to the appropriate detection system package inserts for guidance on general quality control procedures. Troubleshooting Refer to the troubleshooting section in the package inserts of BioGenex Super Sensitive Detection Systems (or other equivalent detection systems) for remedial actions on detection system related issues, or contact BioGenex Technical Support Department at 925-275-0550 to report unusual staining. Expected Results This antibody stains predominantly nuclear TdT in normal and neoplastic cells in formalin-fixed, paraffin-embedded tissue sections. Interpretation of the staining result is solely the responsibility of the user. Any experimental result should be confirmed by a medically established diagnostic product or procedure. Limitations of the Procedure Immunohistochemistry (IHC) is a complex technique involving both histological and immunological detection methods. Tissue processing and handling prior to immunostaining can also cause inconsistent results. Variations in fixation and embedding or the inherent nature of the tissue may cause variations in results (Nadji and Morales, 1983). Endogenous peroxidase activity or pseudoperoxidase activity in erythrocytes and endogenous biotin may cause non-specific staining depending on detection system used. Tissues containing Hepatitis B Surface Antigen (HBsAg) may give false positive with horseradish peroxidase systems (Omata et al, 1980). Improper counterstaining and mounting may compromise the interpretation of results. Performance Characteristics BioGenex has conducted studies to evaluate the performance of the antibody with BioGenex detection systems and accessories. The antibodies have been found to be sensitive and show specific binding to the antigen of interest with minimal to no binding to non-specific tissues or cells. BioGenex antibodies have shown reproducible and consistent results when used within a single run, between runs, between lots and wherever applicable between manual and automated runs. The products have been determined to be stable for the periods specified on the labels either by standard real time or accelerated methods. BioGenex ensures product quality through 100% quality control for all products released and through surveillance programs. ITALIANO, ITALIAN Specifiche tecniche: Immunogeno: Clone: Specie: Classe immunoglobulina: Conc. proteine: Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) antiumano Peptide contenente una sequenza specifica per la regione N-terminale della proteina TdT umana TdT88 Topo IgG 10 – 15 mg/ml* N. di catalogo AM373-5M MU373-UC Descrizione 6 ml di anticorpo pronto per l'uso con i diversi BioGenex Super Sensitive Detection Systems. 1 ml di anticorpo concentrato per l'uso con i diversi BioGenex Super Sensitive Detection Systems o altri sistemi di rilevamento equivalenti. Raccomandate Sistema di Rivelazione: LINK-LABEL *Concentrazione delle Ig specifica per il lotto disponibile su richiesta. Uso previsto Questo anticorpo è attualmente disponibile per uso diagnostico in vitro. Questo anticorpo monoclonale è studiato per la localizzazione specifica della proteina TdT in sezioni di tessuto fissate in formalina, incluse in paraffina. Riassunto e spiegazione La deossinucleotidil transferasi terminale (TdT) è un enzima particolare che possiede la capacità di aggiungere deossinucleosidi trifosfati al DNA senza l'utilizzo di stampo. Nel tessuto normale, la TdT è presente in una sottopopolazione di timociti corticali e di linfociti del midollo osseo. Di solito, la TdT non è presente nei linfociti T e B maturi normali. Questo anticorpo identifica un peptide di 58 kD normalmente rinvenibile nei timociti corticali e nei linfociti immaturi del midollo osseo. Si è osservato che l'espressione di TdT ricorre nel 90% dei casi di leucemia linfocitica acuta (ALL). La colorazione TdT è riscontrabile in tutti i sottotipi di ALL, tranne l'ALL a cellule pre-B. Nella maggioranza dei casi TdT positivi, la colorazione nucleare è presente in oltre il 40% dei blasti di midollo osseo. Studi sulla leucemia mieloide acuta indicano che dal 5 al 46% di questi casi possono contenere cellule TdT positive. La positività per TdT è stata osservata anche in circa un terzo di tutti i casi di leucemia mieloide cronica. In questi casi, la colorazione TdT può essere associata ad una migliore risposta alla chemioterapia e ad una prognosi migliore. Principi della procedura La dimostrazione degli antigeni mediante tecnica immunoistochimica è un processo in due fasi: la prima è il legame tra un anticorpo primario e l'antigene d'interesse e la seconda è il rilevamento dell'antigene legato ad opera di un cromogeno. L'anticorpo primario può essere utilizzato in immunoistochimica mediante tecniche manuali o mediante il BioGenex Automated Staining System (sistema automatico di colorazione BioGenex). BioGenex offre un'ampia gamma di sistemi di rivelazione Super Sensitive, comprendenti le tecnologie basate su streptavidina/biotina e su polimeri alternativi alla biotina, per rilevare il segnale cromogenico dai tessuti e dalle cellule colorate. Reagenti forniti Anticorpo monoclonale murino ottenuto da asciti, diluito in soluzione salina tamponata (PBS), pH 7,6, contenente BSA 1% e sodio azide 0,09%. Diluizione dell'anticorpo primario Questo Ready-to-Use anticorpo è stato ottimizzato per l’uso con il sistema di rilevamento come sopra indicato, e non dovrebbe richiedere un’ulteriore diluizione. L'ulteriore diluizione può comportare una perdita di sensibilità. Variazioni di questo tipo devono essere convalidate dall'utilizzatore. Gli anticorpi BioGenex Concentrated devono essere diluiti secondo la procedura di colorazione, quando sono utilizzati coi BioGenex Super Sensitive Detection Systems . L'uso di sistemi e protocolli diversi da quelli raccomandati da BioGenex richiede la convalida da parte dell'utilizzatore. Le diluizioni degli anticorpi devono essere opportunamente adattate e verificate in funzione del sistema di rivelazione utilizzato. Materiali necessari, ma non forniti Tutti i reagenti e i materiali richiesti per l'immunoistochimica non sono forniti. I reagenti di pretrattamento, i sistemi di rivelazione Super Sensitive, i vetrini di controllo, i reagenti di controllo ed altri reagenti accessori sono disponibili presso BioGenex. Per conoscere nel dettaglio i protocolli e le istruzioni, consultare i foglietti illustrativi dei BioGenex Super Sensitive Immunohistochemistry Sistemi di Rivelazione. La procedura di immunoistochimica potrebbe richiedere altre attrezzature di laboratorio non fornite, come un forno o un'incubatrice (capace di mantenere una temperatura di 56-60°C), il BioGenex Automated Staining Systems (sistema automatico di colorazione BioGenex), una camera umidostatica, un forno a microonde, vaschette o bagni per colorazione, un timer (capace di calcolare intervalli di 3-20 minuti), flaconi di lavaggio, salviette assorbenti, vetrini (pretrattati con poli-L-lisina), vetrini coprioggetti, cartine per lenti e un microscopio luminoso con un ingrandimento da 200X. Conservazione e manipolazione Gli anticorpi devono essere conservati alla temperatura di 2-8°C, senza ulteriore diluizione. Le nuove diluizioni, se necessarie, devono essere effettuate prima dell'uso; esse rimangono stabili fino ad un giorno a temperatura ambiente (20-26°C). Le parti non utilizzate dei preparati di anticorpi devono essere gettate dopo un giorno. Questo anticorpo può essere utilizzato fino alla data di scadenza, se conservato alla temperatura di 2-8°C. Non utilizzare il prodotto oltre la data di scadenza impressa sulla fiala. Se i reagenti sono conservati in condizioni diverse da quelle specificate nel foglietto illustrativo del prodotto, devono essere verificati dall'utilizzatore (U.S. Congress, 1992). La presenza di precipitato o di un odore inconsueto indica che l'anticorpo si sta deteriorando e non deve essere utilizzato. I controlli positivo e negativo devono essere eseguiti contemporaneamente su tutti i campioni tratti dai pazienti. Se si osserva una colorazione inaspettata, che non può essere spiegata con variazioni apportate alle procedure di laboratorio, e si sospetta un problema con l'anticorpo, rivolgersi all'assistenza tecnica BioGenex, al numero 925-275-0550, o al proprio distributore locale. Raccolta e preparazione dei campioni I tessuti fissati in formalina al 10% (v/v) sono idonei all'uso prima dell'inclusione in paraffina. Consultare i riferimenti bibliografici (Kiernan, 1981: Sheehan & Hrapchak, 1980) per ulteriori dettagli sull'allestimento dei campioni. Trattamento dei tessuti prima della colorazione L'eventuale pretrattamento dei tessuti deve essere effettuato secondo quanto indicato nella sezione relativa alla procedura di colorazione. Precauzioni Questo anticorpo contiene materiale non pericoloso in concentrazione notificabile, ai sensi del U.S. 29 CFR 1910.1200, OSHA Hazard Communication Standard e della Direttiva CE 91/155/CEE. Tuttavia, questo prodotto contiene sodio azide in concentrazione inferiore allo 0,1%. La sodio azide non è classificata come sostanza chimica pericolosa, al grado di concentrazione presente nel prodotto. Peraltro, i dati di tossicità relativi alla sodio azide, al grado di concentrazione presente nel prodotto, non sono stati verificati. La sodio azide può reagire con tubature in piombo o rame, formando azidi metalliche altamente esplosive. Per prevenire la formazione di azidi metalliche nelle tubature, si deve fare scorrere acqua in abbondanza durante l'eliminazione di queste sostanze. Per maggiori informazioni, è disponibile a richiesta una Scheda informativa sulla sicurezza dei materiali, riguardante la sodio azide in forma pura. Non pipettare i reagenti con la bocca ed evitare il contatto di reagenti e campioni con la pelle e con le membrane mucose. Se reagenti o campioni entrano in contatto con un'area sensibile, lavare quest'ultima con abbondante acqua. Potrebbe verificarsi una minima contaminazione microbica dei reagenti o un incremento nella colorazione non specifica. Consultare i relativi foglietti illustrativi per le istruzioni d'uso e le norme di sicurezza relative ai reagenti di rivelazione e ad altri materiali, che potrebbero essere impiegati con l'anticorpo. Procedura di colorazione Consultare la seguente tabella per conoscere le condizioni specificamente raccomandate per questo anticorpo. Consultare il foglietto illustrativo del sistema di rivelazione per istruzioni sugli specifici protocolli di colorazione o per altri requisiti. Parametro Raccomandazioni BioGenex Tessuto per controllo TIMO Tipo di tessuto Fissato in formalina, incluso in paraffina Diluizione concentrata 10-20 Pretrattamento AR Citra Tempo e temperatura di incubazione 2 ore di RT Controllo qualità Il tessuto per controllo positivo raccomandato per questo anticorpo è TIMO. I tessuti per No/ sono disponibili presso Biogenex per il controllo della qualità. Consultare il foglietto illustrativo del sistema di rivelazione per istruzioni sulle procedure generali di controllo della qualità. Risoluzione dei problemi Consultare la sezione "Risoluzione dei problemi" del foglietto illustrativo dei BioGenex Super Sensitive Sistemi di Rivelazione (o di sistemi di rivelazione equivalenti) per azioni correttive su questioni relative ai sistemi di rivelazione, oppure rivolgersi all'assistenza tecnica BioGenex, al numero 925-275-0550, per riferire casi di colorazione inconsueta. Risultati attesi Questo anticorpo colora in prevalenza la TdT nucleare delle cellule normali e neoplastiche, in sezioni di tessuto fissate in formalina, incluse in paraffina. L'interpretazione dei risultati è di esclusiva responsabilità dell'utilizzatore. Qualsiasi risultato sperimentale deve essere confermato da un prodotto o da una procedura diagnostica consolidata nella pratica medica. Limiti della procedura L'immunoistochimica (IHC) è una tecnica complessa, che si avvale sia del metodo di rivelazione istologico sia del metodo immunologico. Il trattamento e la manipolazione del tessuto prima della colorazione può anche comportare risultati inattendibili. Le variazioni nella fissazione e nell'inclusione o la natura intrinseca del tessuto possono indurre alterazioni nei risultati (Nadji e Morales, 1983). L'attività della perossidasi endogena o della pseudoperossidasi negli eritrociti e la biotina endogena possono causare una colorazione aspecifica, in funzione del sistema di rivelazione utilizzato. I tessuti contenenti l'antigene superficiale dell'epatite B (HBsAg) possono dare risultati falsi positivi con sistemi a base di perossidasi di rafano (Omata et al, 1980). Una colorazione di contrasto e un montaggio impropri possono compromettere l'interpretazione dei risultati. Caratteristiche di funzionamento BioGenex ha condotto svariati studi per valutare l'efficacia dell'anticorpo coi sistemi di rivelazione e gli accessori BioGenex. Si è riscontrato che gli anticorpi sono sensibili e mostrano un legame specifico con l'antigene di interesse caratterizzato da un vincolo minimo o inesistente, nei confronti dei tessuti o delle cellule aspecifiche. Gli anticorpi Biogenex hanno dimostrato risultati riproducibili e coerenti, quando sono stati utilizzati nell'ambito di un singolo ciclo, tra più cicli e tra più lotti, nonché quando sono risultati applicabili tra cicli automatici e cicli manuali. Si è potuto determinare che tali prodotti rimangono stabili per i periodi indicati sulle relative etichette, sia secondo il tempo reale standard sia in base a metodi di prova accelerati. BioGenex assicura la qualità del prodotto grazie ad un controllo qualità al 100% su tutti i prodotti forniti e grazie a programmi di sorveglianza. DEUTSCH, GERMAN Spezifikationen: Anti-Human Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) Katalognr. Immunogen: Peptidhaltige spezifische Sequenz für das N-Ende von humanem TdTProtein TdT88 AM373-5M 6 ml gebrauchsfertiger Antikörper zur Verwendung mit BioGenex Super Sensitive Detection Systems. MU373-UC 1 ml konzentrierter Antikörper zur Verwendung mit BioGenex Super Sensitive Detection Systems oder anderen gleichwertigen Nachweissystemen. Klon: Spezies: Immunglobulin Klasse: Protein Konz: Maus IgG 10 – 15 mg/ml* Beschreibung Empfohlenes Nachweissysteme: LINK-LABEL *Chargen-spezifische Ig-Konzentration auf Anfrage erhältlich. Verwendungszweck Dieser Antikörper ist gegenwärtig für die In-vitro-Diagnostik erhältlich. Dieser monoklonale Antikörper dient zur spezifischen Lokalisation von TdT in Formalin-fixierten, Paraffineingebetteten Gewebeschnitten. Zusammenfassung und Erklärung Terminale Deoxynukleotidyl-Transferase (TdT) ist ein einzigartiges Enzym, das die Fähigkeit besitzt, Deoxynukleoside-Triphosphate ohne Verwendung von Matrizeninstruktionen zu DNA hinzuzufügen. In normalem Gewebe findet sich TdT in einer Subpopulation kortikaler Thymozyten und Knochenmarklymphozyten. TdT ist für gewöhnlich in normalen, reifenT- und B-Lymphozyten nicht vorhanden. Dieser Antikörper identifiziert ein 58 kD Peptid, das normalerweise in kortikalen Thymozyten und unreifen Knochenmarklymphozyten zu finden ist. Es wurde berichtet, dass eine TdT-Expression bei über 90 % der Fälle von akuter lymphatischer Leukämie (ALL) auftritt. TdT-Färbung wird bei allen Unterarten von ALL mit Ausnahme von prä-B-Zell-ALL gefunden. Bei den meisten TdT-positiven Fällen liegt eine Kernfärbung bei mehr als 40 % der Knochenmark-Blasten vor. Untersuchungen von akuter myeloischer Leukämie zeigen, dass 5 bis 46 % dieser Fälle TdT-positive Zellen enthalten können. Eine TdTpositive Reaktion wurde auch bei ungefähr einem Drittel aller chronischen myeloischen Leukämien beobachtet. In diesen Fällen kann eine TdT-Färbung mit einem besseren Ansprechen auf Chemotherapie und verbesserter Prognose in Verbindung gebracht werden. Prinzipien des Verfahrens Der Nachweis von Antigenen durch Immunohistochemie ist ein zweistufiges Verfahren, zu dem erstens die Bindung eines primären Antikörpers an das in Frage kommende Antigen und zweitens der Nachweis des gebundenen Antikörpers durch ein Chromogen gehören. Der primäre Antikörper kann in der Immunohistochemie entweder mit manuellen Techniken oder mit dem BioGenex Automated Staining System (Automatisiertes Färbesystem) verwendet werden. BioGenex bietet eine Reihe von Super Sensitive Detection Systems, darunter Technologien auf Link-Label- und Polymer-Basis, zum Nachweis des chromogenen Signals von angefärbten Geweben und Zellen. Mitgelieferte Reagenzien Monoklonaler Maus-Antikörper aus Aszites-Flüssigkeit, verdünnt in Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung, pH 7,6, enthält 1 % BSA und 0,09 % Natriumazid. Verdünnung des primären Antikörpers Dieser Ready-to-Use Antikörper wurde für die Verwendung mit den oben genannten Nachweissystemen optimiert und sollte nicht weiter verdünnt werden. Zusätzliche Verdünnung kann zu einem Verlust der Empfindlichkeit führen. Der Anwender muss jede solche Änderung bestätigen. BioGenex konzentrierte Antikörper müssen bei der Verwendung mit BioGenex Super Sensitive Detection Systems entsprechend dem Färbeverfahren verdünnt werden. Die Verwendung anderer als der empfohlenen Systeme und Protokolle, die nicht von BioGenex stammen, erfordert eine Bestätigung durch den Anwender. Antikörper-Verdünnungen sollten entsprechend dem verwendeten Nachweissystem korrekt eingestellt und überprüft werden. Benötigte Materialien (nicht im Lieferumfang) Alle für die Immunohistochemie benötigten Reagenzien und Materialien werden nicht mitgeliefert. Reagenzien zur Vorbehandlung, Super Sensitive Detection Systems, KontrollObjektträger, Kontrollreagenzien und weiteres Zubehör sind von BioGenex erhältlich. Bitte die Produktbeilage(n) der BioGenex Super Sensitive Immunohistochemistry Detection Systems nachlesen, in denen detaillierte Protokolle und Anweisungen für die Reagenzien enthalten sind. Für die Immunohistochemie können weitere Laborgeräte erforderlich sein, die nicht mitgeliefert werden, darunter Ofen oder Inkubator (geeignet für Temperaturen von 56–60 °C), BioGenex Automated Staining System (Automatisiertes Färbesystem), Feuchtigkeitskammer, Mikrowellenherd, Färbegefäße oder -bäder, Zeituhr (mit 3–20 Minuten-Intervallen), Waschflaschen, saugfähige Tücher, Mikroskop-Objektträger (vorbehandelt mit Poly-L-Lysin), Deckplättchen, Objektivpapier und ein Lichtmikroskop mit Vergrößerungsfaktor 200. Lagerung und Handhabung Antikörper sollten ohne zusätzliche Verdünnung bei 2–8 °C gelagert werden. Frische Verdünnungen sollten, falls benötigt, unmittelbar vor der Verwendung hergestellt werden und sind bei Zimmertemperatur (20–26 °C) bis zu einem Tag lang stabil. Nicht verwendete Anteile von Antikörper-Zubereitungen sollten nach einem Tag entsorgt werden. Dieser Antikörper kann bei Lagerung bei 2–8 °C bis zum Verfallsdatum verwendet werden. Produkt nach Ablauf des aufgedruckten Verfallsdatums nicht mehr verwenden. Wenn Reagenzien unter anderen als den in der Packungsbeilage angegebenen Bedingungen aufbewahrt werden, müssen sie vom Anwender überprüft werden (U.S. Congress, 1992). Das Vorliegen eines Präzipitats oder ein ungewöhnlicher Geruch zeigen an, dass der Antikörper verfällt und nicht verwendet werden sollte. Positive und negative Kontrollen sollten gleichzeitig mit allen Patientenproben durch den Test laufen. Wenn eine unerwartete Anfärbung beobachtet wird, die nicht durch Abweichungen bei den Laborverfahren erklärt werden kann, und ein Problem mit dem Antikörper vermutet wird, bitte den Technischen Kundendienst von BioGenex unter 925-275-0550 oder den örtlichen Lieferanten verständigen. Probenentnahme und Vorbereitung In 10 % (v/v) Formalin fixierte Gewebe sind für die Verwendung vor der Paraffineinbettung geeignet. Weitere Einzelheiten zur Probenvorbereitung siehe Literaturangaben (Kiernan, 1981; Sheehan & Hrapchak, 1980). Behandlung von Geweben vor dem Anfärben Eine Vorbehandlung von Geweben sollte ggf. wie im Abschnitt Färbeverfahren empfohlen durchgeführt werden. Vorsichtsmaßnahmen Dieser Antikörper ist enthält kein gefährliches Material in nachweisbarer Konzentration gemäß U.S. 29 CFR 1910.1200, OSHA Hazard Communication Standard und EU-Richtlinie 91/155/EG. Dieses Produkt enthält jedoch Natriumazid, in Konzentrationen von weniger als 0,1 %. Natriumazid wird in den Produktkonzentrationen nicht als gefährliche Chemikalie eingestuft. Daten zur Toxizität von Natriumazid in Produktkonzentrationen sind jedoch bislang nicht gründlich erforscht. Natriumazid kann mit Abflussrohren aus Blei oder Kupfer reagieren und hochexplosive Metallazide bilden. Bei der Entsorgung mit großen Mengen Wasser nachspülen, um die Bildung von Metallaziden in den Abflussrohren zu verhindern (Center for Disease Control, 1976, National Institute for Occupational Safety and Health, 1976). Für weitere Informationen ist auf Anfrage ein Material-Sicherheitsdatenblatt für Natriumazid in reiner Form erhältlich. Reagenzien nicht mit dem Mund pipettieren und Kontakt von Reagenzien und Proben mit Haut und Schleimhäuten vermeiden Wenn Reagenzien oder Proben in Kontakt mit empfindlichen Bereichen kommen, mit reichlich Wasser abwaschen. Die mikrobielle Kontamination von Reagenzien minimieren; andernfalls kann eine Zunahme unspezifischer Anfärbung auftreten. In den entsprechenden Produktbeilagen die Gebrauchsanweisungen und Sicherheitsinformationen für Nachweisreagenzien und andere Materialien nachlesen, die zusammen mit dem Antikörper verwendet werden können. tinción nuclear en más del 40% de los blastos de médula ósea. Los estudios de leucemia mieloide aguda indican que entre un 5% y un 46% de estos casos pueden contener células TdT positivas. La positividad TdT también se ha observado en aproximadamente un tercio de todos los casos de leucemia mieloide crónica. En estos casos, la tinción TdT se puede asociar con una mejor respuesta a la quimioterapia y un mejor pronóstico. Färbeverfahren In der folgenden Tabelle werden die speziell für diesen Antikörper empfohlenen Bedingungen aufgeführt. In der Packungsbeilage des Nachweissystems sind Anweisungen für spezifische Färbeprotokolle oder andere Anforderungen aufgeführt. Parameter BioGenex Empfehlungen Kontrollgewebe THYMUS Gewebetyp Formalin-fixiert, Paraffin-eingebettet Konzentrierte Verdünnung 10-20 Vorbehandlung AR Citra Inkubationszeit und Temperatur 2 Std. @ RT Principios del procedimiento La demostración de los antígenos mediante inmunohistoquímica es un proceso de dos pasos en el que ocurre, en primer lugar, la unión de un anticuerpo primario al antígeno de interés y, en segundo lugar, la detección del anticuerpo unido mediante un cromógeno. El anticuerpo primario se puede usar en la inmunohistoquímica empleando técnicas manuales o los BioGenex Automated Staining Systems (Sistemas de Tinción Automatizados de BioGenex). BioGenex ofrece varios Super Sensitive detection systems que incluyen tecnologías que utilizan link-label y polímeros para detectar la señal cromogénica de tejidos y células teñidos. Qualitätskontrolle Das für diesen Antikörper empfohlene positive Kontrollgewebe ist THYMUS. No/ Gewebe sind von BioGenex zur QK erhältlich. Richtlinien für allgemeine Verfahren zur Qualitätskontrolle in den entsprechenden Packungsbeilagen des Nachweissystems nachlesen. Fehlerbehebung Im Abschnitt Fehlerbehebung in den Packungsbeilagen der BioGenex Super Sensitive Detection Systems (oder anderer gleichwertiger Nachweissysteme) mögliche Abhilfemaßnahmen bei Problemen mit dem Nachweissystem nachlesen oder den Technischen Kundendienst von BioGenex unter 925-275-0550 oder den örtlichen Lieferanten verständigen, um ungewöhnliche Anfärbungen zu melden. Erwartete Ergebnisse Dieser Antikörper färbt vorwiegend nukleare TdT in normalen und neoplastischen Zellen in Formalin-fixierten, Paraffin-eingebetteten Gewebeschnitten. Die Interpretation des Färbungsresultats obliegt der alleinigen Verantwortung des Anwenders. Jedes experimentelle Resultat sollte durch ein etabliertes medizinisches Diagnostikprodukt oder -verfahren bestätigt werden. Grenzen des Verfahrens Immunohistochemie (IHC) ist eine komplexe Technik, an der sowohl histologische als auch immunologische Nachweismethoden beteiligt sind. Eine Verarbeitung und Handhabung von Gewebe vor der Immunofärbung kann ebenfalls inkonsistente Ergebnisse verursachen. Abweichungen bei der Fixierung und Einbettung oder die inhärente Gewebebeschaffenheit können zu Abweichungen bei den Ergebnissen führen (Nadji and Morales, 1983). Endogene Peroxidase-Aktivität oder Pseudoperoxidase-Aktivität in Erythrozyten und endogenes Biotin können abhängig vom verwendeten Nachweissystem unspezifische Anfärbung verursachen. Gewebe, die Hepatitis B Oberflächen-Antigen (HBsAg) enthalten, können mit Meerrettich-Peroxidasesystemen falsch positive Ergebnisse geben (Omata et al, 1980). Unsachgemäße Gegenfärbung und Fixierung kann die Interpretation der Resultate beeinträchtigen. Leistungsmerkmale BioGenex hat Untersuchungen zur Beurteilung der Leistungsfähigkeit des Antikörpers mit BioGenex Nachweissystemen und Zubehör durchgeführt. Es hat sich gezeigt, dass die Antikörper für das in Frage kommende Antigen empfindlich sind und sich spezifisch an dieses binden, bei minimaler bis völlig fehlender Bindung an nicht-spezifische Gewebe oder Zellen. BioGenex Antikörper haben reproduzierbare und konsistente Ergebnisse gezeigt, bei Verwendung innerhalb eines einzigen Durchlaufs, bei verschiedenen Durchläufen, mit verschiedenen Chargen und, falls zutreffend, auch beim Vergleich zwischen manuellen und automatisierten Durchläufen. Die Produkte wurden für die auf den Etiketten angegebenen Zeiträume als stabil bestimmt, entweder mit Standard-Echtzeit- oder beschleunigten Methoden. BioGenex sichert die Produktqualität durch 100%ige Qualitätskontrolle für alle freigegebenen Produkte und durch Überwachungsprogramme. ESPANOL, SPANISH Especificaciones: Inmunógeno: Clon: Especie: Clase de inmunoglobulina: Conc. de proteínas: Anti- Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) humana Péptido que contiene la secuencia específica del Nterminal de la proteína TdT humana TdT88 Nº de ref. AM373-5M MU373-UC Descripción 6 ml del anticuerpo listo para uso con BioGenex Super Sensitive Detection Systems. 1 ml del anticuerpo concentrado para uso con BioGenex Super Sensitive Detection Systems u otros sistemas de detección equivalentes. Ratón IgG Sistema de Detección Recomendada: LINK-LABEL 10 – 15 mg/ml* *Se puede solicitar la concentración de Ig específica para el lote. Uso previsto Este anticuerpo se puede utilizar actualmente para el diagnóstico in vitro . Este anticuerpo monoclonal ha sido diseñado para la localización específica de TdT en cortes de tejido fijados con formol y embebidos en parafina. Resumen y explicación La transferasa desoxinucleotidilo terminal (TdT) es una enzima exclusiva que posee la capacidad de añadir trifosfatos desoxinucleósidos al ADN sin usar las instrucciones de una plantilla. En el tejido normal, la TdT se encuentra en una subpoblación de timocitos corticales y linfocitos de la médula ósea. La TdT no se encuentra habitualmente en los linfocitos T y B maduros. Este anticuerpo identifica un péptido de 58 kD que se encuentra normalmente en los timocitos corticales y linfocitos inmaduros de médula ósea. También se ha descrito la expresión TdT en más del 90% de los casos de leucemia linfocítica aguda (LLA). La tinción TdT se encuentra en todos los subtipos de LLA, excepto en la LLA de células pre-B. En la mayoría de los casos TdT positivos se encuentra una Reactivos suministrados Anticuerpo monoclonal de ratón procedente de ascitis, diluido en solución salina tamponada con fosfato, pH 7,6, con un 1% de BSA y un 0,09% de azida sódica. Dilución del anticuerpo primario Este Ready-to-Use anticuerpo se ha optimizado para usarse con los sistemas de detección de la forma antes indicada y no necesitan diluirse. Una dilución posterior puede provocar la pérdida de sensibilidad. El usuario debe validar cualquier cambio que se realice. Los BioGenex Concentrated antibodies (anticuerpos BioGenex concentrados) deben diluirse de acuerdo con el procedimiento de tinción cuando se usen con los BioGenex Super Sensitive Detection Systems (Sistemas de Detección Super Sensitive de BioGenex). El usuario debe validar el uso de sistemas y protocolos que no sean de BioGenex y que no estén recomendados por el mismo. Las diluciones del anticuerpo deben ajustarse y verificarse adecuadamente de acuerdo con el sistema de detección usado. Materiales necesarios pero no suministrados No se proporcionan todos los reactivos y materiales necesarios para el procedimiento inmunohistoquímico. Se pueden adquirir en BioGenex los reactivos de pretratamiento, los sistemas de detección Super Sensitive, los portaobjetos de control, los reactivos de control y otros reactivos auxiliares. Consultar los prospectos de los productos de BioGenex Super Sensitive Immunohistochemistry detection systems (Sistemas de detección inmunohistoquímica Super Sensitive de BioGenex) para ver los protocolos e instrucciones detallados. El procedimiento inmunohistoquímico puede necesitar otro material de laboratorio que no se suministra, como es el horno o la incubadora (capaz de mantener 56-60 ºC), el BioGenex Automated Staining System (Sistema Automatizado de Tinción de BioGenex), la cámara de humedad, el horno microondas, las jarras o baños de tinción, el cronómetro (capaz de medir intervalos de 3-20 minutos), los frascos de lavado, las toallitas absorbentes, los portaobjetos para el microscopio (pretratados con poli-L-Lisina), los cubreobjetos y objetivos, y el microscopio de luz con un aumento de 200X. Almacenamiento y manipulación Los anticuerpos se deben almacenar a 2-8 °C sin diluirse de nuevo. Si se necesitan diluciones frescas, se deben hacer antes de su uso y son estables hasta un día a temperatura ambiente (20-26 °C). Las porciones no usadas de los anticuerpos deben desecharse después de un día. El uso de este anticuerpo es adecuado hasta la fecha de caducidad cuando se almacena a 2-8 °C. No usar el producto después de la fecha de caducidad que figura en la etiqueta. El usuario debe inspeccionar los reactivos cuando se almacenan en condiciones distintas a las estipuladas en el prospecto (U.S. Congress, 1992). La presencia de un precipitado o un olor fuera de lo común indica que el anticuerpo se está deteriorando y no se debe utilizar. Los controles positivo y negativo deben analizarse simultáneamente con todas las muestras de pacientes. Si se observa una tinción inesperada que no se puede explicar por las variaciones del procedimiento de laboratorio y se sospecha un problema con el anticuerpo, contactar con el Departamento de Soporte Técnico de BioGenex, al número 925-275-0550, o con su distribuidor local. Obtención y preparación de la muestra Los tejidos fijados en formol al 10% (v/v) son adecuados para su uso antes de embeberlos en parafina. Consultar en la bibliografía (Kiernan, 1981: Sheehan y Hrapchak, 1980) más detalles sobre la preparación de la muestra. Parámetro Recomendaciones de BioGenex Tejido de control TIMO Tipo de tejido Fijado con formol, embebido en parafina Dilución del concentrado 10-20 Pretratamiento AR Citra Tiempo y temperatura de incubación 2 hrs a TA Control de calidad El tejido de control positivo recomendado para este anticuerpo es TIMO. BioGenex proporciona los tejidos de No/ para control de calidad. Consultar las normas sobre los procedimientos generales de control de calidad en los prospectos apropiados del sistema de detección. Resolución de problemas Consultar en la sección Resolución de problemas, en los prospectos de los BioGenex Super Sensitive Detection Systems (Sistemas de Detección Super Sensitive de BioGenex) (u otros sistemas de detección equivalentes), las acciones a emprender sobre aspectos relacionados con el sistema de detección, o contactar con el Departamento de Soporte Técnico de BioGenex, al teléfono 925-275-0550, para comunicar una tinción fuera de lo común. Resultados esperados Este anticuerpo tiñe predominantemente la proteína TdT nuclear de las células normales y neoplásicas en cortes de tejido fijados con formol y embebidos en parafina. La interpretación del resultado de la tinción es únicamente responsabilidad del usuario. Cualquier resultado experimental se debe confirmar con un producto o procedimiento diagnóstico médicamente establecido. Limitaciones del procedimiento La inmunohistoquímica (IHC) es una técnica compleja que implica el uso de métodos de detección histológicos e inmunológicos. El procesado y manipulación de los tejidos antes de la tinción inmune también puede dar resultados incoherentes. Los cambios en el proceso de fijación y embebido, o la propia naturaleza del tejido, pueden provocar variaciones en los resultados (Nadji y Morales, 1983). La actividad de la peroxidasa endógena o de la pseudoperoxidasa en los hematíes y de la biotina endógena puede provocar una tinción inespecífica, según el sistema de detección usado. Los tejidos que contienen el antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg) pueden dar resultados falsos positivos con sistemas de peroxidasa de rábano (Omata y cols, 1980). Una contratinción y preparación inadecuadas pueden comprometer la interpretación de los resultados. Características de funcionamiento BioGenex ha realizado estudios para evaluar el funcionamiento del anticuerpo con los sistemas de detección de BioGenex y sus accesorios. Se ha encontrado que los anticuerpos son sensibles y muestran una unión específica al antígeno de interés, con una unión mínima o ninguna a tejidos o células inespecíficos. Los anticuerpos de BioGenex han mostrado resultados reproductibles y coherentes cuando se usan en un solo procedimiento, entre procedimientos, entre lotes, y siempre que proceda entre los procedimientos manuales y automatizados. Se ha determinado que los productos son estables durante los periodos especificados en las etiquetas, ya sea con métodos en tiempo real o de aceleración. BioGenex garantiza la calidad del producto a través de un control de calidad al 100% de todos los productos comercializados y a través de programas de vigilancia. Bibliography /Bibliografia /Bibliografie /Bibliografía Bollum FJ. Blood 54:1203, 1979. Srivasta B, et al. Leuk Res 7:331, 1983. Stass S, et al. Am J Clin Pathol 72:898,1979. Srivasta B. Leuk Res 4:209, 1980. Lanham GR, et al. Am J Clin Pathol 83:366, 1985. Marks SM, et al. N Eng J Med 298:812, 1978. Brusamolino E, et al. J Clin Oncol 2:871, 1984. Elias JM. In Immunohistopathology: A Practical Approach to Diagnosis. ASCP Press, Chicago, 1990, pp 312-316. Orazi A, et al. Mod Pathol 7(5): 582-586, 1994. Center for Disease Control. Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts. Center for Disease Control Manual Guide--Safety Management,No. CDC-22, Atlanta, Georgia. April 30, 1976. Kiernan JA. Histological and Histochemical Methods: Theory and Practice. New York: Pergamon Press 1981. Nadji M, Morales AR. Immunoperoxidase, part 1: the techniques and its pitfall. Lab Med 1983; 14:767-770. Omata M, Liew CT, Ashcavai M, Peters Rl. Nonimmunologic binding of horseradish peroxidase to hepatitis B surface antigen. A possible source of error in immunohistochemistry. Am J Clin Pathol. May, 1980;73(5):626-632. Sheehan DC and Hrapchak BB. Theory and Practice of Histotechnology. St. Louis: C.V. Mosby Co. 1980. U.S. Congress. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988: Final Rule, 57 FR 7163, February 28, 1992. National Institute for Occupational Safety and Health, (NIOSH), Rockville, MD. Explosive azide hazard, Publication No. 78-127, 1976. Tratamiento de los tejidos antes de la tinción El pretratamiento de los tejidos, si es necesario, debe hacerse según se sugiere en la sección correspondiente al procedimiento de tinción. Precauciones Este anticuerpo contiene ningún material peligroso en una concentración comunicable de acuerdo con las normativas U.S. 29 CFR 1910.1200, OSHA Hazard Communication Standard y EC Directive 91/155/EC. Sin embargo, este producto contiene azida sódica en concentraciones menores al 0,1%. La azida sódica no se clasifica como producto químico peligroso en las concentraciones de este producto. No obstante, la toxicidad de la azida sódica en dichas concentraciones no se ha investigado con detalle. La azida sódica puede reaccionar con las tuberías de plomo o cobre para formar azidas metálicas altamente explosivas. Cuando se deseche, verter grandes cantidades de agua para prevenir la acumulación de azida en las cañerías (Center for Disease Control, 1976, National Institute for Occupational Safety and Health, 1976). Para más información se puede solicitar una Hoja de Datos de Seguridad para azida sódica en su forma pura. No pipetear los reactivos con la boca y evitar el contacto de los reactivos y las muestras con la piel y las mucosas. Si se produce un contacto con áreas sensibles, lavar con agua abundante. Puede producirse una contaminación microbiana mínima de los reactivos o un aumento de la tinción inespecífica. Consultar en los prospectos apropiados las instrucciones de uso y la información de seguridad sobre detección de reactivos y otros materiales que se pueden usar con el anticuerpo. Procedimiento de tinción Consultar en la tabla siguiente las condiciones recomendadas específicamente para este anticuerpo. Consultar en el prospecto del sistema de detección las normas de los protocolos específicos de tinción u otros requisitos. Representative in the European Community Mandatario nella Comunità Europea Bevollmächtigter in der Europäischen Gemeinschaft Representante autorizado en la Comunidad Europea In Vitro Diagnostic Medical Device Dispositivo medico-diagnostico in vitro In Vitro Diagnostikum Producto sani tario para diagnóstico in vitro Consult Instructions for use Consultare le istruzioni per l'uso Gebrauchsanweisung beachten Consulte las instrucciones de uso Temperature Limitation Limiti di temperatura Zulässiger Temperaturbereich Limite de temperatura Manufacturer Fabbricante Hersteller Fabricante
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