Anti-HER-2/neu

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Anti-HER-2/neu (c-erbB-2) [CB11]
AM134-5ME
AM134-10ME
MU134-UCE
Doc. No. 932-134ME-4 Rev. D
Release Date: October 11, 2011
ENGLISH
Specifications:
Anti-Human cerbB-2 (HER-2/neu)
Catalog No.
Description
Immunogen:
AM134-5ME
Clone:
Synthetic peptide
corresponding to a
site on the internal
domain of the cerbB-2 Protein
(HER-2/neu).
CB11
Species:
Mouse
Immunoglobulin
Class:
IgG1
10 ml of Ready-to-Use Antibody
for Use with BioGenex Super
Sensitive Detection Systems and
BioGenex Automated Staining
Systems.
MU134-UCE
1 ml of Concentrated Antibody for
Use with BioGenex Super Sensitive
Detection Systems or Other
Equivalent Detection Systems.
Recommended Detection System: LINK-LABEL
Protein Conc.:
10 – 15 mg/ml*
*Lot specific Ig concentration available upon request.
6 ml of Ready-to-Use Antibody for
Use with BioGenex Super Sensitive
Detection Systems.
AM134-10ME
Intended Use
This antibody is currently available for in vitro diagnostic use. This monoclonal antibody is
designed for the specific localization of Her-2 in cell membrane of formalin-fixed, paraffinembedded
tissue sections.
Summary and Explanation
Her-2/neu (c-erb-B2) gene product is a 185 KD transmembrane glycoprotein associated with
tyrosine kinase activity. The antibody CB11 is directed against the internal domain of this
oncoprotein. Approximately 20-30% cases of breast cancer show an amplification and/or
overexpression of Her-2 in tumor cells. Since the availability of therapy to Her-2 target, the lab
testing of Her-2/neu in breast carcinoma has become very important in patient care. 15-30%
cases of invasive ductal cancers, 90% of ductal carcinoma in situ and almost all cases of Paget's
disease were found to be Her-2 positive by different researchers.
Principles of the Procedure
The demonstration of antigens by immunohistochemistry is a two-step process involving first,
the binding of a primary antibody to the antigen of interest, and second, the detection of bound
antibody by a chromogen. The primary antibody may be used in immunohistochemistry using
manual techniques or using BioGenex Automated Staining System. BioGenex offers a variety
of Super Sensitive detection systems including link-label and polymer based technologies to
detect the chromogenic signal from the stained tissues and cells.
Reagents Provided
Mouse monoclonal antibody from tissue culture supernatant diluted in PBS, pH 7.6, containing
1% BSA and 0.09% sodium azide.
Dilution of Primary Antibody
This Ready-to-Use antibody has been optimized for use with detection system as indicated
above and should not require further dilution. Further dilution may result in loss of sensitivity.
The user must validate any such change. BioGenex Concentrated antibodies must be diluted in
accordance with the staining procedure when used with BioGenex Super Sensitive Detection
Systems. Use of non-BioGenex systems other than recommended systems and protocols require
validation by the user. Antibody dilutions should be appropriately adjusted and verified
according to the detection system used.
Materials Required But Not Provided
All the reagents and materials required for immunohistochemistry are not provided. Pretreatment reagents, Super Sensitive detection systems, control slides, control reagents and other
ancillary reagents are available from BioGenex. Please refer to the product insert(s) of the
BioGenex Super Sensitive Immunohistochemistry detection systems for detailed protocols and
instructions. The immunohistochemistry procedure may need other lab equipment that are not
provided including oven or incubator (capable of maintaining 56-60oC), BioGenex Automated
Staining System, Humidity Chamber, Microwave oven, Staining Jars or baths, Timer (capable
of 3-20 minute intervals), Wash Bottles, Absorbent Wipes, Microscope slides (pre-treated with
poly-L-Lysine), Coverslips, Lens paper and Light microscope with magnification of 200X.
Storage and Handling
Antibodies should be stored at 2-8°C without further dilution. Fresh dilutions, if required,
should be made prior to use and are stable for up to one day at room temperature (20-26°C).
Unused portions of antibody preparations should be discarded after one day.
This antibody is suitable for use until expiry date when stored at 2-8°C. Do not use product after
the expiration date printed on vial. If reagents are stored under a condition other than those
specified in the package insert, they must be verified by the user (U.S. Congress, 1992).
The presence of precipitate or an unusual odor indicates that the antibody is deteriorating and
should not be used. Positive and negative controls should be run simultaneously with all patient
specimens. If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in
laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected, contact BioGenex Technical
Support at 925-275-0550 or your local distributor.
Specimen Collection and Preparation
Tissues fixed in 10% (v/v) formalin are suitable for use prior to paraffin embedding. Consult
references (Kiernan, 1981: Sheehan & Hrapchak, 1980) for further details on specimen preparation.
Treatment of Tissues Prior to Staining
Pretreatment of tissues if any, should be done as suggested in the staining procedure section.
Precautions
This antibody contains no hazardous material at a reportable concentration according to U.S. 29 CFR
1910.1200, OSHA Hazard Communication Standard and EC Directive 91/155/EC. However, this
product contains sodium azide, at concentrations of less than 0.1%. Sodium azide is not classified as
a hazardous chemical at the product concentrations. However, toxicity information regarding sodium
azide at product concentrations has not been thoroughly investigated. Sodium azide may react with
lead or copper plumbing to form highly explosive metal azides. Upon disposal, flush with large
volumes of water to prevent azide build-up in plumbing (Center for Disease Control, 1976, National
Institute for Occupational Safety and Health, 1976). For more information, a Material Safety Data
Sheet for sodium azide in pure form is available upon request. Do not pipette reagents by mouth,
and avoid contact of reagents and specimens with skin and mucous membranes. If reagents or
specimens come in contact with sensitive area, wash with copious amounts of water. Minimize
microbial contamination of reagents or increase in nonspecific staining may occur. Refer to
appropriate product inserts for instructions of use and safety information on detection reagents and
other materials, which may be used with the antibody.
Staining Procedure
Refer to the following table for conditions specifically recommended for this antibody. Refer to the
detection system package insert for guidance on specific staining protocols or other requirements.
Parameter
BioGenex Recommendations
Control Tissue
BREAST CARCINOMA
Tissue Type
Formalin-fixed, Paraffin-embedded
Concentrated Dilution
10-20
Pretreatment
None
Incubation Time and Temperature
30 min. @ RT
Quality Control
The recommended positive control tissue for this antibody is BREAST CARCINOMA. FB-134M/
FG-134M tissues are available from BioGenex for QC. Refer to the appropriate detection system
package inserts for guidance on general quality control procedures.
Troubleshooting
Refer to the troubleshooting section in the package inserts of BioGenex Super Sensitive Detection
Systems (or other equivalent detection systems) for remedial actions on detection system related
issues, or contact BioGenex Technical Support Department at 925-275-0550 to report unusual
staining.
Expected Results
This antibody stains Her-2/ neu gene product on membrane in positive cells in formalin fixed
paraffin embedded tissues. Interpretation of the staining result is solely the responsibility of the user.
Any experimental result should be confirmed by a medically established diagnostic product or
procedure.
Limitations of the Procedure
Immunohistochemistry (IHC) is a complex technique involving both histological and immunological
detection methods. Tissue processing and handling prior to immunostaining can also cause
inconsistent results. Variations in fixation and embedding or the inherent nature of the tissue may
cause variations in results (Nadji and Morales, 1983). Endogenous peroxidase activity or
pseudoperoxidase activity in erythrocytes and endogenous biotin may cause non-specific staining
depending on detection system used. Tissues containing Hepatitis B Surface Antigen (HBsAg) may
give false positive with horseradish peroxidase systems (Omata et al, 1980). Improper
counterstaining and mounting may compromise the interpretation of results.
Performance Characteristics
BioGenex has conducted studies to evaluate the performance of the antibody with BioGenex
detection systems and accessories. The antibodies have been found to be sensitive and show specific
binding to the antigen of interest with minimal to no binding to non-specific tissues or cells.
BioGenex antibodies have shown reproducible and consistent results when used within a single run,
between runs, between lots and wherever applicable between manual and automated runs. The
products have been determined to be stable for the periods specified on the labels either by standard
real time or accelerated methods. BioGenex ensures product quality through 100% quality control
for all products released and through surveillance programs.
ITALIANO, ITALIAN
Specifiche
tecniche:
c-erbB-2 (HER2/neu) anti-umano
N. di catalogo
Immunogeno:
Peptide sintetico
corrispondente a un
sito sul dominio
interno della proteina
c-erbB-2 (HER2/neu)
CB11
AM134-5ME
Descrizione
6 ml di anticorpo pronto per l'uso con i
diversi BioGenex Super Sensitive
Detection Systems.
Specie:
Topo
Classe immunoglobulina:
IgG1
10 ml di anticorpo pronto per l'uso con i
diversi BioGenex Super Sensitive
Detection Systems e BioGenex
Automated Staining Systems.
MU134-UCE
1 ml di anticorpo concentrato per l'uso
con i diversi BioGenex Super Sensitive
Detection Systems o altri sistemi di
rilevamento equivalenti.
Raccomandate Sistema di Rivelazione: LINK-LABEL
Conc. proteine:
10 – 15 mg/ml*
*Concentrazione delle Ig specifica per il lotto disponibile su
richiesta.
Clone:
AM134-10ME
Uso previsto
Questo anticorpo è attualmente disponibile per uso diagnostico in vitro. Questo anticorpo
monoclonale è studiato per la localizzazione specifica del gene Her-2 nella membrana cellulare di
sezioni di tessuto fissate in formalina, incluse in paraffina.
abbondante acqua. Potrebbe verificarsi una minima contaminazione microbica dei reagenti o un
incremento nella colorazione non specifica. Consultare i relativi foglietti illustrativi per le
istruzioni d'uso e le norme di sicurezza relative ai reagenti di rivelazione e ad altri materiali, che
potrebbero essere impiegati con l'anticorpo.
Riassunto e spiegazione
Il prodotto dell'oncogene Her-2/neu (c-erb-B2) è una glicoproteina transmembrana di 185 kD,
associata all'attività della tiroxina ciinasi. L'anticorpo CB11 è diretto contro il dominio interno di
questa oncoproteina. Circa il 20-30% dei casi di cancro al seno mostrano un'amplificazione e/o
sovraespressione di Her-2 nelle cellule tumorali. Da quando è disponibile una terapia relativa
all'Her-2, i test di laboratorio dell'Her-2/neu nel carcinoma mammario sono divenuti molto
importanti nella cura della paziente. Il 15-30% dei casi di cancro duttale invasivo, il 90% dei casi
di carcinoma duttale in situ e quasi tutti i casi di morbo di Paget sono risultati Her-2 positivi a
diversi ricercatori.
Procedura di colorazione
Consultare la seguente tabella per conoscere le condizioni specificamente raccomandate per
questo anticorpo. Consultare il foglietto illustrativo del sistema di rivelazione per istruzioni sugli
specifici protocolli di colorazione o per altri requisiti.
Parametro
Raccomandazioni BioGenex
Tessuto per controllo
CARCINOMA MAMMARIO
Tipo di tessuto
Fissato in formalina, incluso in paraffina
Diluizione concentrata
10-20
Pretrattamento
Nessuno
Tempo e temperatura di incubazione
30 min. di RT
Principi della procedura
La dimostrazione degli antigeni mediante tecnica immunoistochimica è un processo in due fasi: la
prima è il legame tra un anticorpo primario e l'antigene d'interesse e la seconda è il rilevamento
dell'antigene legato ad opera di un cromogeno. L'anticorpo primario può essere utilizzato in
immunoistochimica mediante tecniche manuali o mediante il BioGenex Automated Staining
System (sistema automatico di colorazione BioGenex). BioGenex offre un'ampia gamma di
sistemi di rivelazione Super Sensitive, comprendenti le tecnologie basate su streptavidina/biotina e
su polimeri alternativi alla biotina, per rilevare il segnale cromogenico dai tessuti e dalle cellule
colorate.
Reagenti forniti
Anticorpo monoclonale murino, ottenuto da supernatante di coltura di tessuti, diluito in PBS, pH
7,6, contenente BSA 1% e sodio azide 0,09%.
Diluizione dell'anticorpo primario
Questo Ready-to-Use anticorpo è stato ottimizzato per l’uso con il sistema di rilevamento come
sopra indicato, e non dovrebbe richiedere un’ulteriore diluizione. L'ulteriore diluizione può
comportare una perdita di sensibilità. Variazioni di questo tipo devono essere convalidate
dall'utilizzatore. Gli anticorpi BioGenex Concentrated devono essere diluiti secondo la procedura
di colorazione, quando sono utilizzati coi BioGenex Super Sensitive Detection Systems. L'uso di
sistemi e protocolli diversi da quelli raccomandati da BioGenex richiede la convalida da parte
dell'utilizzatore. Le diluizioni degli anticorpi devono essere opportunamente adattate e verificate
in funzione del sistema di rivelazione utilizzato.
Materiali necessari, ma non forniti
Tutti i reagenti e i materiali richiesti per l'immunoistochimica non sono forniti. I reagenti di
pretrattamento, i sistemi di rivelazione Super Sensitive, i vetrini di controllo, i reagenti di
controllo ed altri reagenti accessori sono disponibili presso BioGenex. Per conoscere nel dettaglio
i protocolli e le istruzioni, consultare i foglietti illustrativi dei BioGenex Super Sensitive
Immunohistochemistry Sistemi di Rivelazione.
La procedura di immunoistochimica potrebbe richiedere altre attrezzature di laboratorio non
fornite, come un forno o un'incubatrice (capace di mantenere una temperatura di 56-60°C), il
BioGenex Automated Staining Systems (sistema automatico di colorazione BioGenex), una
camera umidostatica, un forno a microonde, vaschette o bagni per colorazione, un timer (capace di
calcolare intervalli di 3-20 minuti), flaconi di lavaggio, salviette assorbenti, vetrini (pretrattati con
poli-L-lisina), vetrini coprioggetti, cartine per lenti e un microscopio luminoso con un
ingrandimento da 200X.
Conservazione e manipolazione
Gli anticorpi devono essere conservati alla temperatura di 2-8°C, senza ulteriore diluizione. Le
nuove diluizioni, se necessarie, devono essere effettuate prima dell'uso; esse rimangono stabili
fino ad un giorno a temperatura ambiente (20-26°C). Le parti non utilizzate dei preparati di
anticorpi devono essere gettate dopo un giorno.
Questo anticorpo può essere utilizzato fino alla data di scadenza, se conservato alla temperatura di
2-8°C. Non utilizzare il prodotto oltre la data di scadenza impressa sulla fiala. Se i reagenti sono
conservati in condizioni diverse da quelle specificate nel foglietto illustrativo del prodotto, devono
essere verificati dall'utilizzatore (U.S. Congress, 1992).
La presenza di precipitato o di un odore inconsueto indica che l'anticorpo si sta deteriorando e non
deve essere utilizzato.
I controlli positivo e negativo devono essere eseguiti contemporaneamente su tutti i campioni
tratti dai pazienti. Se si osserva una colorazione inaspettata, che non può essere spiegata con
variazioni apportate alle procedure di laboratorio, e si sospetta un problema con l'anticorpo,
rivolgersi all'assistenza tecnica BioGenex, al numero 925-275-0550, o al proprio distributore
locale.
Raccolta e preparazione dei campioni
I tessuti fissati in formalina al 10% (v/v) sono idonei all'uso prima dell'inclusione in paraffina.
Consultare i riferimenti bibliografici (Kiernan, 1981: Sheehan & Hrapchak, 1980) per ulteriori
dettagli sull'allestimento dei campioni.
Controllo qualità
Il tessuto per controllo positivo raccomandato per questo anticorpo è CARCINOMA
MAMMARIO. I tessuti per FB-134M/FG-134M sono disponibili presso Biogenex per il
controllo della qualità. Consultare il foglietto illustrativo del sistema di rivelazione per istruzioni
sulle procedure generali di controllo della qualità.
Risoluzione dei problemi
Consultare la sezione "Risoluzione dei problemi" del foglietto illustrativo dei BioGenex Super
Sensitive Sistemi di Rivelazione (o di sistemi di rivelazione equivalenti) per azioni correttive su
questioni relative ai sistemi di rivelazione, oppure rivolgersi all'assistenza tecnica BioGenex, al
numero 925-275-0550, per riferire casi di colorazione inconsueta.
Risultati attesi
Questo anticorpo colora il prodotto dell'oncogene Her-2/neu sulla membrana delle cellule
positive, in sezioni di tessuto fissate in formalina, incluse in paraffina. L'interpretazione dei
risultati è di esclusiva responsabilità dell'utilizzatore. Qualsiasi risultato sperimentale deve essere
confermato da un prodotto o da una procedura diagnostica consolidata nella pratica medica.
Limiti della procedura
L'immunoistochimica (IHC) è una tecnica complessa, che si avvale sia del metodo di rivelazione
istologico sia del metodo immunologico. Il trattamento e la manipolazione del tessuto prima
della colorazione può anche comportare risultati inattendibili. Le variazioni nella fissazione e
nell'inclusione o la natura intrinseca del tessuto possono indurre alterazioni nei risultati (Nadji e
Morales, 1983). L'attività della perossidasi endogena o della pseudoperossidasi negli eritrociti e
la biotina endogena possono causare una colorazione aspecifica, in funzione del sistema di
rivelazione utilizzato. I tessuti contenenti l'antigene superficiale dell'epatite B (HBsAg) possono
dare risultati falsi positivi con sistemi a base di perossidasi di rafano (Omata et al, 1980). Una
colorazione di contrasto e un montaggio impropri possono compromettere l'interpretazione dei
risultati.
Caratteristiche di funzionamento
BioGenex ha condotto svariati studi per valutare l'efficacia dell'anticorpo coi sistemi di
rivelazione e gli accessori BioGenex. Si è riscontrato che gli anticorpi sono sensibili e mostrano
un legame specifico con l'antigene di interesse caratterizzato da un vincolo minimo o inesistente,
nei confronti dei tessuti o delle cellule aspecifiche. Gli anticorpi Biogenex hanno dimostrato
risultati riproducibili e coerenti, quando sono stati utilizzati nell'ambito di un singolo ciclo, tra
più cicli e tra più lotti, nonché quando sono risultati applicabili tra cicli automatici e cicli
manuali. Si è potuto determinare che tali prodotti rimangono stabili per i periodi indicati sulle
relative etichette, sia secondo il tempo reale standard sia in base a metodi di prova accelerati.
BioGenex assicura la qualità del prodotto grazie ad un controllo qualità al 100% su tutti i
prodotti forniti e grazie a programmi di sorveglianza.
DEUTSCH, GERMAN
Spezifikationen:
Anti-Human c-erbB-2
(HER-2/neu)
Katalognr.
Immunogen:
AM134-5ME
Klon:
Synthetisches Peptid,
korrespondierend zu einer
Stelle an der internen
Domäne des c-erbB-2
Proteins (HER-2/neu).
CB11
Spezies:
Maus
Immunglobulin
Klasse:
IgG1
Protein Konz:
10 – 15 mg/ml*
Trattamento dei tessuti prima della colorazione
L'eventuale pretrattamento dei tessuti deve essere effettuato secondo quanto indicato nella sezione
relativa alla procedura di colorazione.
Precauzioni
Questo anticorpo contiene materiale non pericoloso in concentrazione notificabile, ai sensi del
U.S. 29 CFR 1910.1200, OSHA Hazard Communication Standard e della Direttiva CE
91/155/CEE. Tuttavia, questo prodotto contiene sodio azide in concentrazione inferiore allo 0,1%.
La sodio azide non è classificata come sostanza chimica pericolosa, al grado di concentrazione
presente nel prodotto. Peraltro, i dati di tossicità relativi alla sodio azide, al grado di
concentrazione presente nel prodotto, non sono stati verificati. La sodio azide può reagire con
tubature in piombo o rame, formando azidi metalliche altamente esplosive. Per prevenire la
formazione di azidi metalliche nelle tubature, si deve fare scorrere acqua in abbondanza durante
l'eliminazione di queste sostanze. Per maggiori informazioni, è disponibile a richiesta una Scheda
informativa sulla sicurezza dei materiali, riguardante la sodio azide in forma pura. Non pipettare i
reagenti con la bocca ed evitare il contatto di reagenti e campioni con la pelle e con le membrane
mucose. Se reagenti o campioni entrano in contatto con un'area sensibile, lavare quest'ultima con
Beschreibung
6 ml gebrauchsfertiger
Antikörper zur Verwendung
mit BioGenex Super Sensitive
Detection Systems.
AM13410ME
10 ml gebrauchsfertiger
Antikörper zur Verwendung
mit BioGenex Super Sensitive
Detection Systems und
BioGenex Automated Staining
Systems (Automatisierten
Färbesystemen).
MU134-UCE
1 ml konzentrierter Antikörper
zur Verwendung mit
BioGenex Super Sensitive
Detection Systems oder
anderen gleichwertigen
Nachweissystemen.
Empfohlenes Nachweissysteme: LINKLABEL
*Chargen-spezifische Ig-Konzentration auf
Anfrage erhältlich.
Verwendungszweck
Dieser Antikörper ist gegenwärtig für die In-vitro-Diagnostik erhältlich. Dieser monoklonale
Antikörper dient zur spezifischen Lokalisation von Her-2 in der Zellmembran von Formalinfixierten, Paraffin-eingebetteten Gewebeschnitten.
Zusammenfassung und Erklärung
Das Her-2/neu (c-erb-B2) Genprodukt ist ein 185 KD Transmembran-Glykoprotein, verbunden
mit Tyrosin-Kinase-Aktivität. Der Antikörper CB11 ist gegen die interne Domäne dieses
Onkoproteins gerichtet. Ungefähr 20-30 % der Brustkrebsfälle zeigen eine Verstärkung
und/oder Überexpression von Her-2 in Tumorzellen. Aufgrund der Verfügbarkeit der Therapie
gegen Her-2-Ziel ist die Labortestung von Her-2/neu bei Brustkarzinom sehr wichtig für die
Patientenversorgung geworden. 15-30 % der Fälle von invasiven duktalen Krebsarten, 90 %
von duktalem Karzinom in situ und fast alle Fälle von M. Paget zeigten sich in verschiedenen
Forschungsarbeiten Her-2-positiv.
Prinzipien des Verfahrens
Der Nachweis von Antigenen durch Immunohistochemie ist ein zweistufiges Verfahren, zu dem
erstens die Bindung eines primären Antikörpers an das in Frage kommende Antigen und
zweitens der Nachweis des gebundenen Antikörpers durch ein Chromogen gehören. Der
primäre Antikörper kann in der Immunohistochemie entweder mit manuellen Techniken oder
mit dem BioGenex Automated Staining System (Automatisiertes Färbesystem) verwendet
werden. BioGenex bietet eine Reihe von Super Sensitive Detection Systems, darunter
Technologien auf Link-Label- und Polymer-Basis, zum Nachweis des chromogenen Signals
von angefärbten Geweben und Zellen.
Mitgelieferte Reagenzien
Monoklonaler Maus-Antikörper aus Gewebskultur-Überstand, verdünnt in PBS, pH 7,6, enthält
1 % BSA und 0,09 % Natriumazid.
Verdünnung des primären Antikörpers
Dieser Ready-to-Use Antikörper wurde für die Verwendung mit den oben genannten
Nachweissystemen optimiert und sollte nicht weiter verdünnt werden. Zusätzliche Verdünnung
kann zu einem Verlust der Empfindlichkeit führen. Der Anwender muss jede solche Änderung
bestätigen. BioGenex konzentrierte Antikörper müssen bei der Verwendung mit BioGenex
Super Sensitive Detection Systems entsprechend dem Färbeverfahren verdünnt werden. Die
Verwendung anderer als der empfohlenen Systeme und Protokolle, die nicht von BioGenex
stammen, erfordert eine Bestätigung durch den Anwender. Antikörper-Verdünnungen sollten
entsprechend dem verwendeten Nachweissystem korrekt eingestellt und überprüft werden.
Benötigte Materialien (nicht im Lieferumfang)
Alle für die Immunohistochemie benötigten Reagenzien und Materialien werden nicht
mitgeliefert. Reagenzien zur Vorbehandlung, Super Sensitive Detection Systems, KontrollObjektträger, Kontrollreagenzien und weiteres Zubehör sind von BioGenex erhältlich. Bitte die
Produktbeilage(n) der BioGenex Super Sensitive Immunohistochemistry Detection Systems
nachlesen, in denen detaillierte Protokolle und Anweisungen für die Reagenzien enthalten sind.
Für die Immunohistochemie können weitere Laborgeräte erforderlich sein, die nicht mitgeliefert
werden, darunter Ofen oder Inkubator (geeignet für Temperaturen von 56–60 °C), BioGenex
Automated Staining System (Automatisiertes Färbesystem), Feuchtigkeitskammer,
Mikrowellenherd, Färbegefäße oder -bäder, Zeituhr (mit 3–20 Minuten-Intervallen),
Waschflaschen, saugfähige Tücher, Mikroskop-Objektträger (vorbehandelt mit Poly-L-Lysin),
Deckplättchen, Objektivpapier und ein Lichtmikroskop mit Vergrößerungsfaktor 200.
Lagerung und Handhabung
Antikörper sollten ohne zusätzliche Verdünnung bei 2–8 °C gelagert werden. Frische
Verdünnungen sollten, falls benötigt, unmittelbar vor der Verwendung hergestellt werden und
sind bei Zimmertemperatur (20–26 °C) bis zu einem Tag lang stabil. Nicht verwendete Anteile
von Antikörper-Zubereitungen sollten nach einem Tag entsorgt werden.
Dieser Antikörper kann bei Lagerung bei 2–8 °C bis zum Verfallsdatum verwendet werden.
Produkt nach Ablauf des aufgedruckten Verfallsdatums nicht mehr verwenden. Wenn
Reagenzien unter anderen als den in der Packungsbeilage angegebenen Bedingungen
aufbewahrt werden, müssen sie vom Anwender überprüft werden (U.S. Congress, 1992).
Das Vorliegen eines Präzipitats oder ein ungewöhnlicher Geruch zeigen an, dass der Antikörper
verfällt und nicht verwendet werden sollte.
Positive und negative Kontrollen sollten gleichzeitig mit allen Patientenproben durch den Test
laufen. Wenn eine unerwartete Anfärbung beobachtet wird, die nicht durch Abweichungen bei
den Laborverfahren erklärt werden kann, und ein Problem mit dem Antikörper vermutet wird,
bitte den Technischen Kundendienst von BioGenex unter 925-275-0550 oder den örtlichen
Lieferanten verständigen.
Probenentnahme und Vorbereitung
In 10 % (v/v) Formalin fixierte Gewebe sind für die Verwendung vor der Paraffineinbettung
geeignet. Weitere Einzelheiten zur Probenvorbereitung siehe Literaturangaben (Kiernan, 1981;
Sheehan & Hrapchak, 1980).
Behandlung von Geweben vor dem Anfärben
Eine Vorbehandlung von Geweben sollte ggf. wie im Abschnitt Färbeverfahren empfohlen
durchgeführt werden.
Vorsichtsmaßnahmen
Dieser Antikörper ist enthält kein gefährliches Material in nachweisbarer Konzentration gemäß
U.S. 29 CFR 1910.1200, OSHA Hazard Communication Standard und EU-Richtlinie
91/155/EG. Dieses Produkt enthält jedoch Natriumazid, in Konzentrationen von weniger als 0,1
%. Natriumazid wird in den Produktkonzentrationen nicht als gefährliche Chemikalie
eingestuft. Daten zur Toxizität von Natriumazid in Produktkonzentrationen sind jedoch bislang
nicht gründlich erforscht. Natriumazid kann mit Abflussrohren aus Blei oder Kupfer reagieren
und hochexplosive Metallazide bilden. Bei der Entsorgung mit großen Mengen Wasser
nachspülen, um die Bildung von Metallaziden in den Abflussrohren zu verhindern (Center for
Disease Control, 1976, National Institute for Occupational Safety and Health, 1976). Für
weitere Informationen ist auf Anfrage ein Material-Sicherheitsdatenblatt für Natriumazid in
reiner Form erhältlich. Reagenzien nicht mit dem Mund pipettieren und Kontakt von
Reagenzien und Proben mit Haut und Schleimhäuten vermeiden Wenn Reagenzien oder Proben
in Kontakt mit empfindlichen Bereichen kommen, mit reichlich Wasser abwaschen. Die
mikrobielle Kontamination von Reagenzien minimieren; andernfalls kann eine Zunahme
unspezifischer Anfärbung auftreten. In den entsprechenden Produktbeilagen die
Gebrauchsanweisungen und Sicherheitsinformationen für Nachweisreagenzien und andere
Materialien nachlesen, die zusammen mit dem Antikörper verwendet werden können.
Färbeverfahren
In der folgenden Tabelle werden die speziell für diesen Antikörper empfohlenen Bedingungen
aufgeführt. In der Packungsbeilage des Nachweissystems sind Anweisungen für spezifische
Färbeprotokolle oder andere Anforderungen aufgeführt.
Parameter
BioGenex Empfehlungen
Kontrollgewebe
BRUSTKARZINOM
Gewebetyp
Formalin-fixiert, Paraffin-eingebettet
Konzentrierte Verdünnung
10-20
Vorbehandlung
Keine
Inkubationszeit und Temperatur
30 Min. @ RT
Qualitätskontrolle
Das für diesen Antikörper empfohlene positive Kontrollgewebe ist BRUSTKARZINOM. FB134M/FG-134M Gewebe sind von BioGenex zur QK erhältlich. Richtlinien für allgemeine
Verfahren zur Qualitätskontrolle in den entsprechenden Packungsbeilagen des Nachweissystems
nachlesen.
Fehlerbehebung
Im Abschnitt Fehlerbehebung in den Packungsbeilagen der BioGenex Super Sensitive Detection
Systems (oder anderer gleichwertiger Nachweissysteme) mögliche Abhilfemaßnahmen bei
Problemen mit dem Nachweissystem nachlesen oder den Technischen Kundendienst von BioGenex
unter 925-275-0550 oder den örtlichen Lieferanten verständigen, um ungewöhnliche Anfärbungen
zu melden.
Erwartete Ergebnisse
Dieser Antikörper färbt Her-2/neu Genprodukt auf der Membran von positiven Zellen in Formalinfixierten, Paraffin-eingebetteten Geweben. Die Interpretation des Färbungsresultats obliegt der
alleinigen Verantwortung des Anwenders. Jedes experimentelle Resultat sollte durch ein etabliertes
medizinisches Diagnostikprodukt oder -verfahren bestätigt werden.
Grenzen des Verfahrens
Immunohistochemie (IHC) ist eine komplexe Technik, an der sowohl histologische als auch
immunologische Nachweismethoden beteiligt sind. Eine Verarbeitung und Handhabung von Gewebe
vor der Immunofärbung kann ebenfalls inkonsistente Ergebnisse verursachen. Abweichungen bei der
Fixierung und Einbettung oder die inhärente Gewebebeschaffenheit können zu Abweichungen bei
den Ergebnissen führen (Nadji and Morales, 1983). Endogene Peroxidase-Aktivität oder
Pseudoperoxidase-Aktivität in Erythrozyten und endogenes Biotin können abhängig vom
verwendeten Nachweissystem unspezifische Anfärbung verursachen. Gewebe, die Hepatitis B
Oberflächen-Antigen (HBsAg) enthalten, können mit Meerrettich-Peroxidasesystemen falsch
positive Ergebnisse geben (Omata et al, 1980). Unsachgemäße Gegenfärbung und Fixierung kann
die Interpretation der Resultate beeinträchtigen.
Leistungsmerkmale
BioGenex hat Untersuchungen zur Beurteilung der Leistungsfähigkeit des Antikörpers mit
BioGenex Nachweissystemen und Zubehör durchgeführt. Es hat sich gezeigt, dass die Antikörper für
das in Frage kommende Antigen empfindlich sind und sich spezifisch an dieses binden, bei
minimaler bis völlig fehlender Bindung an nicht-spezifische Gewebe oder Zellen. BioGenex
Antikörper haben reproduzierbare und konsistente Ergebnisse gezeigt, bei Verwendung innerhalb
eines einzigen Durchlaufs, bei verschiedenen Durchläufen, mit verschiedenen Chargen und, falls
zutreffend, auch beim Vergleich zwischen manuellen und automatisierten Durchläufen. Die
Produkte wurden für die auf den Etiketten angegebenen Zeiträume als stabil bestimmt, entweder mit
Standard-Echtzeit- oder beschleunigten Methoden. BioGenex sichert die Produktqualität durch
100%ige Qualitätskontrolle für alle freigegebenen Produkte und durch Überwachungsprogramme.
ESPANOL, SPANISH
Especificaciones:
Anti-c-erbB-2
(HER-2/neu)
humana
Nº de ref.
Descripción
Inmunógeno:
AM134-5ME
Clon:
Péptido sintético
correspondiente al
lugar del dominio
interno de la proteína
c-erbB-2 (HER2/neu).
CB11
Especie:
Ratón
Clase de
inmunoglobulina:
IgG1
10 ml del anticuerpo listo para uso con
BioGenex Super Sensitive Detection
Systems y BioGenex Automated
Staining Systems.
MU134-UCE
1 ml del anticuerpo concentrado para
uso con BioGenex Super Sensitive
Detection Systems u otros sistemas de
detección equivalentes.
Sistema de Detección Recomendada: LINK-LABEL
Conc. de proteínas:
10 – 15 mg/ml*
*Se puede solicitar la concentración de Ig específica para el
lote.
6 ml del anticuerpo listo para uso con
BioGenex Super Sensitive Detection
Systems.
AM134-10ME
Uso previsto
Este anticuerpo se puede utilizar actualmente para el diagnóstico in vitro. Este anticuerpo
monoclonal ha sido diseñado para la localización específica de Her-2 en la membrana celular en
cortes de tejido fijados con formol y embebidos en parafina.
Resumen y explicación
El producto del gen Her-2/neu (c-erb-B2) es una glucoproteína transmembrana de 185 kD que se
asocia con la actividad tirosina cinasa. El anticuerpo CB11 se dirige frente al dominio interno de esta
oncoproteína. Aproximadamente el 20%-30% de los casos de cáncer de mama demuestra una
amplificación o sobreexpresión de Her-2 en las células tumorales. Como existe un tratamiento
dirigido frente a la diana Her-2, el estudio de laboratorio de Her-2/neu en el carcinoma de mama ha
adquirido una gran importancia en la asistencia de estas pacientes. Distintos investigadores han
encontrado que el 15%-30% de los casos de cáncer ductal invasivo, en el 90% de los carcinomas
ductales in situ y en casi todos los casos de enfermedad de Paget, son Her-2 positivos.
Principios del procedimiento
La demostración de los antígenos mediante inmunohistoquímica es un proceso de dos pasos en el
que ocurre, en primer lugar, la unión de un anticuerpo primario al antígeno de interés y, en
segundo lugar, la detección del anticuerpo unido mediante un cromógeno. El anticuerpo primario
se puede usar en la inmunohistoquímica empleando técnicas manuales o los BioGenex Automated
Staining Systems (Sistemas de Tinción Automatizados de BioGenex). BioGenex ofrece varios
Super Sensitive detection systems que incluyen tecnologías que utilizan link-label y polímeros
para detectar la señal cromogénica de tejidos y células teñidos.
Reactivos suministrados
Anticuerpo monoclonal de ratón procedente del sobrenadante de un cultivo de tejidos, diluido en
PBS, pH 7,6, con un 1% de BSA y un 0,09% de azida sódica.
Dilución del anticuerpo primario
Este Ready-to-Use anticuerpo se ha optimizado para usarse con los sistemas de detección de la
forma antes indicada y no necesitan diluirse. Una dilución posterior puede provocar la pérdida de
sensibilidad. El usuario debe validar cualquier cambio que se realice. Los BioGenex Concentrated
antibodies (anticuerpos BioGenex concentrados) deben diluirse de acuerdo con el procedimiento
de tinción cuando se usen con los BioGenex Super Sensitive Detection Systems (Sistemas de
Detección Super Sensitive de BioGenex). El usuario debe validar el uso de sistemas y protocolos
que no sean de BioGenex y que no estén recomendados por el mismo. Las diluciones del
anticuerpo deben ajustarse y verificarse adecuadamente de acuerdo con el sistema de detección
usado.
Materiales necesarios pero no suministrados
No se proporcionan todos los reactivos y materiales necesarios para el procedimiento
inmunohistoquímico. Se pueden adquirir en BioGenex los reactivos de pretratamiento, los
sistemas de detección Super Sensitive, los portaobjetos de control, los reactivos de control y otros
reactivos auxiliares. Consultar los prospectos de los productos de BioGenex Super Sensitive
Immunohistochemistry detection systems (Sistemas de detección inmunohistoquímica Super
Sensitive de BioGenex) para ver los protocolos e instrucciones detallados.
El procedimiento inmunohistoquímico puede necesitar otro material de laboratorio que no se
suministra, como es el horno o la incubadora (capaz de mantener 56-60 ºC), el BioGenex
Automated Staining System (Sistema Automatizado de Tinción de BioGenex), la cámara de
humedad, el horno microondas, las jarras o baños de tinción, el cronómetro (capaz de medir
intervalos de 3-20 minutos), los frascos de lavado, las toallitas absorbentes, los portaobjetos para
el microscopio (pretratados con poli-L-Lisina), los cubreobjetos y objetivos, y el microscopio de
luz con un aumento de 200X.
Almacenamiento y manipulación
Los anticuerpos se deben almacenar a 2-8 °C sin diluirse de nuevo. Si se necesitan diluciones
frescas, se deben hacer antes de su uso y son estables hasta un día a temperatura ambiente (20-26
°C). Las porciones no usadas de los anticuerpos deben desecharse después de un día.
El uso de este anticuerpo es adecuado hasta la fecha de caducidad cuando se almacena a 2-8 °C. No usar
el producto después de la fecha de caducidad que figura en la etiqueta. El usuario debe
inspeccionar los reactivos cuando se almacenan en condiciones distintas a las estipuladas en el
prospecto (U.S. Congress, 1992).
La presencia de un precipitado o un olor fuera de lo común indica que el anticuerpo se está
deteriorando y no se debe utilizar.
Los controles positivo y negativo deben analizarse simultáneamente con todas las muestras de
pacientes. Si se observa una tinción inesperada que no se puede explicar por las variaciones del
procedimiento de laboratorio y se sospecha un problema con el anticuerpo, contactar con el
Departamento de Soporte Técnico de BioGenex, al número 925-275-0550, o con su distribuidor
local.
Obtención y preparación de la muestra
Los tejidos fijados en formol al 10% (v/v) son adecuados para su uso antes de embeberlos en
parafina. Consultar en la bibliografía (Kiernan, 1981: Sheehan y Hrapchak, 1980) más detalles
sobre la preparación de la muestra.
Tratamiento de los tejidos antes de la tinción
El pretratamiento de los tejidos, si es necesario, debe hacerse según se sugiere en la sección
correspondiente al procedimiento de tinción.
Precauciones
Este anticuerpo contiene ningún material peligroso en una concentración comunicable de acuerdo
con las normativas U.S. 29 CFR 1910.1200, OSHA Hazard Communication Standard y EC
Directive 91/155/EC. Sin embargo, este producto contiene azida sódica en concentraciones
menores al 0,1%. La azida sódica no se clasifica como producto químico peligroso en las
concentraciones de este producto. No obstante, la toxicidad de la azida sódica en dichas
concentraciones no se ha investigado con detalle. La azida sódica puede reaccionar con las
tuberías de plomo o cobre para formar azidas metálicas altamente explosivas. Cuando se deseche,
verter grandes cantidades de agua para prevenir la acumulación de azida en las cañerías (Center
for Disease Control, 1976, National Institute for Occupational Safety and Health, 1976). Para más
información se puede solicitar una Hoja de Datos de Seguridad para azida sódica en su forma
pura. No pipetear los reactivos con la boca y evitar el contacto de los reactivos y las muestras con
la piel y las mucosas. Si se produce un contacto con áreas sensibles, lavar con agua abundante.
Puede producirse una contaminación microbiana mínima de los reactivos o un aumento de la
tinción inespecífica. Consultar en los prospectos apropiados las instrucciones de uso y la
información de seguridad sobre detección de reactivos y otros materiales que se pueden usar con
el anticuerpo.
Procedimiento de tinción
Consultar en la tabla siguiente las condiciones recomendadas específicamente para este
anticuerpo. Consultar en el prospecto del sistema de detección las normas de los protocolos
específicos de tinción u otros requisitos.
Parámetro
Recomendaciones de BioGenex
Tejido de control
CARCINOMA DE MAMA
Tipo de tejido
Fijado con formol, embebido en parafina
Dilución del concentrado
10-20
Pretratamiento
Ninguno
Tiempo y temperatura de incubación
30 min. a TA
Control de calidad
El tejido de control positivo recomendado para este anticuerpo es CARCINOMA DE MAMA.
BioGenex proporciona los tejidos de FB-134M/ FG-134M para control de calidad. Consultar las
normas sobre los procedimientos generales de control de calidad en los prospectos apropiados
del sistema de detección.
Resolución de problemas
Consultar en la sección Resolución de problemas, en los prospectos de los BioGenex Super
Sensitive Detection Systems (Sistemas de Detección Super Sensitive de BioGenex) (u otros
sistemas de detección equivalentes), las acciones a emprender sobre aspectos relacionados con el
sistema de detección, o contactar con el Departamento de Soporte Técnico de BioGenex, al
teléfono 925-275-0550, para comunicar una tinción fuera de lo común.
Resultados esperados
Este anticuerpo tiñe el producto del gen Her-2/neu en la membrana de células positivas en
tejidos fijados con formol y embebidos en parafina. La interpretación del resultado de la tinción
es únicamente responsabilidad del usuario. Cualquier resultado experimental se debe confirmar
con un producto o procedimiento diagnóstico médicamente establecido.
Limitaciones del procedimiento
La inmunohistoquímica (IHC) es una técnica compleja que implica el uso de métodos de
detección histológicos e inmunológicos. El procesado y manipulación de los tejidos antes de la
tinción inmune también puede dar resultados incoherentes. Los cambios en el proceso de fijación
y embebido, o la propia naturaleza del tejido, pueden provocar variaciones en los resultados
(Nadji y Morales, 1983). La actividad de la peroxidasa endógena o de la pseudoperoxidasa en
los hematíes y de la biotina endógena puede provocar una tinción inespecífica, según el sistema
de detección usado. Los tejidos que contienen el antígeno de superficie de la hepatitis B
(HBsAg) pueden dar resultados falsos positivos con sistemas de peroxidasa de rábano (Omata y
cols, 1980). Una contratinción y preparación inadecuadas pueden comprometer la interpretación
de los resultados.
Características de funcionamiento
BioGenex ha realizado estudios para evaluar el funcionamiento del anticuerpo con los sistemas
de detección de BioGenex y sus accesorios. Se ha encontrado que los anticuerpos son sensibles y
muestran una unión específica al antígeno de interés, con una unión mínima o ninguna a tejidos
o células inespecíficos. Los anticuerpos de BioGenex han mostrado resultados reproductibles y
coherentes cuando se usan en un solo procedimiento, entre procedimientos, entre lotes, y
siempre que proceda entre los procedimientos manuales y automatizados. Se ha determinado que
los productos son estables durante los periodos especificados en las etiquetas, ya sea con
métodos en tiempo real o de aceleración. BioGenex garantiza la calidad del producto a través de
un control de calidad al 100% de todos los productos comercializados y a través de programas de
vigilancia.
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Kiernan JA. Histological and Histochemical Methods: Theory and Practice. New York: Pergamon Press 1981.
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National Institute for Occupational Safety and Health, (NIOSH), Rockville, MD. Explosive azide hazard, Publication No. 78-127,
1976.
Representative in the European Community
Mandatario nella Comunità Europea
Bevollmächtigter in der Europäischen Gemeinschaft
Representante autorizado en la Comunidad Europea
In Vitro Diagnostic Medical Device
Dispositivo medico-diagnostico in vitro
In Vitro Diagnostikum
Producto sanitario para diagnóstico in vitro
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