Scheda Tecnica - Biolife Italiana

Biolife
Italiana S.r.l.
Scheda Tecnica
N°401669 B I-0 6/2003 Pagina 1 di 2
MAC CONKEY
SORBITOL MUG AGAR
Terreno selettivo in polvere e pronto in piastre
per l’isolamento di E. coli O157.
FORMULA TIPICA (g/l)
Peptone
17.000
Peptocomplex
3.000
D-sorbitolo
10.000
Sali biliari n.3
1.500
Sodio cloruro
5.000
Rosso neutro
0.030
Violetto cristallo
0.001
MUG
0.100
Agar
14.500
PREPARAZIONE DEL TERRENO IN POLVERE
Sospendere 51 g in 1000 mi di acqua distillata fredda. Portare ad ebollizione sotto agitazione,
autoclavare a 121°C per 15 minuti.
pH finale 7.1 ± 0.2
DESCRIZIONE
Mac Conkey Sorbitol MUG Agar, preparato secondo una modificazione della formula descritta da
Farmer e Davis, è impiegato per l’isolamento e l’identificazione presuntiva di Escherichia coli O157. Il
terreno Mac Conkey Sorbitol MUG Agar differisce dal Mac Conkey Agar per avere quale carboidrato
fermentabile il sorbitolo al posto del lattosio e per incorporare il metilumbelliferil glucuronide per
evidenziare l’attività beta glucuronidasica di E.coli. I ceppi di E.coli O157:H7 non fermentano il sorbitolo
e coltivano con colonie incolori ed inoltre non idrolizzano il MUG; sul terreno è possibile determinare
l’attività beta glucuronidasica osservando le piastre sotto lampada di Wood con emissione a 366 nm: la
presenza di fluorescenza azzurra attorno alle colonie indica l’avvenuta idrolisi del MUG e quindi la
presenza dell’enzima beta glucuronidasi.
IMPIEGO
Per l’isolamento di E.coli O157 procedere come segue:
•
Seminare il materiale in esame, sulla superficie del terreno ben asciutto strisciando in modo da
avere colonie ben isolate.
•
Incubare a 37°C per 18-24 ore. Attenersi ai tempi ed alle temperature consigliate poiché E. coli
O157:H7 non coltiva a 44-45°C e poiché l’osservazione ritardata delle colonie può indurre ad errori di
interpretazione. Le colonie incolori (sorbitolo negative) senza emissione di fluorescenza sotto lampada
di Wood (glucuronidasi negative), possono essere presuntivamente identificate come E.coli O157.
•
Selezionare da ciascuna piastra 5 colonie tipiche e trapiantarle su Nutrient Agar a becco di clarino
ed incubare a 37°C per 18-24 ore.
•
Con la crescita su Nutrient Agar eseguire l’identificazione sierologica dell’antigene O157 con il test
al latice appropriato (Utilizzando il kit Prolex E.coli O 157 Latex Test cat. n° 17PL070 è possibile
eseguire il test d’agglutinazione direttamente sulle colonie coltivate su SMAC-MUG).
•
Inviare i ceppi identificati come O157 ad un Laboratorio di Riferimento per la dimostrazione della
produzione di verocitotossina e/o della presenza dei geni codificanti per i fattori di virulenza (VT, eae)
CONTROLLO QUALITÀ DELL’UTILIZZATORE
Controllo produttività:
E.coli O 157 NCTC 12900: crescita con colonie incolori non fluorescenti alla lampada di Wood
Controllo specificità
E.coli ATCC 25922: crescita con colonie rosse fluorescenti alla lampada di Wood
Controllo selettività
S.aureus ATCC 25923 : inibito
Incubazione: 24 h a 37°C
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CONSERVAZIONE
Terreno in polvere: conservare a 10-30°C al riparo della luce, in luogo asciutto. In queste condizioni Mac
Conkey Sorbitol MUG Agar è valido fino alla data di scadenza indicata in etichetta. Non utilizzare oltre questa
data. Una volta aperto, conservare il prodotto mantenendo il tappo del contenitore ben chiuso. Eliminare se vi
sono segni evidenti di deterioramento della polvere (modifiche del colore, indurimento della polvere ecc.)
Conservare le piastre preparate in laboratorio per un massimo di 15 giorni a 2-8°C
Piastre pronte: conservare a 2-8°C al riparo della luce. In queste condizioni il prodotto è valido fino alla data di
scadenza indicata in etichetta. Non utilizzare oltre questa data. Eliminare se vi sono segni evidenti di
deterioramento.
PRECAUZIONI E SICUREZZA DEGLI OPERATORI
Terreno in polvere: Mac Conkey Sorbitol MUG Agar non è classificabile come pericoloso ai sensi della
legislazione vigente ma contiene sali biliari (classificabili come Xi irritanti) ad una concentrazioni >1% e come
tale richiede la scheda di sicurezza, che deve essere consultata prima dell’uso. Come per tutti i terreni in polvere
anche la manipolazione del Mac Conkey Sorbitol MUG Agar deve essere effettuata con una adeguata
protezione delle vie respiratorie.
Piastre pronte: il preparato qui descritto non è classificato come pericoloso ai sensi della legislazione vigente
né contiene sostanze pericolose in concentrazioni 1%.
I preparati qui descritti sono solo per uso diagnostico in vitro e devono essere usato in laboratorio, da operatori
adeguatamente addestrati, con metodi approvati di asepsi e di sicurezza nei confronti degli agenti patogeni.
Sterilizzare le piastre dopo il loro uso e prima dell’eliminazione come rifiuto.
BIBLIOGRAFIA
• Centers for Disease Control (1982) Isolation of E.coli O157:H7 from sporadic cases of hemorrhagic colitis.
United States Morb. Mortal. Weekly Rep. 31, 584.
• Doyle, M.P., Schoeni, J. L. (1984) Survival growth characteristics of Escherichia coli associated with
hemorrhagic colitis. J. App. Environ. Microbiol., 48, 855.
• Farmer lll, J.J., Davis, B.R. (1985) H7 antiserum-sorbitol fermentation medium: a single tube screening medium
for detecting Escherichia coli O157:H7 associated with hemorrhagic colitis. J. Clin. Microbiol., 22, 620.
• Remis, R.S., Mac Donald, K.L., Riley, L.W., Puhr, N.D., Wells, J.C., Davis, B.R., Blake, P.A., Cohen, M.L.
(1984) Sporadic cases of hemorrhagic colitis associated with Escherichia coli O157:H7. Ann. lntern. Med. l01,
624.
• Trepeta, R,W., Edberg, S.C. (1984) MUG-based media for, isolation and identification of Escherichia coli. J.
Clin. Microbiol., 19, 172.
• Johnson, W.M., Lior, H., Bezanson, G.S. (1983) Cytotoxin Escherichia coli O157:H7 associated with
hemorrhagic colitis in Canada. Lancet, i, 76.
CONFEZIONI
Terreno in polvere
4016692 Mac Conkey Sorbitol MUG Agar,
500 g (9.8 l)
Terreno pronto all’uso
541669 Mac Conkey Sorbitol MUG Agar,
20 piastre
CODICE CND: W0104010101
CODICE CND W0104010405
IVD
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