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III-XX_Romane 18-02-2008 11:11 Pagina VII Indice ECOLOGIA MICROBICA 1 - Ruolo dei microrganismi nei cicli biogeochimici degli elementi (Marco Bosco, Luciana Giovannetti, Manuela Giovannetti, Carlo Viti) 1.1 Generalità 1.1.1 Degradazione di residui vegetali, 4 1.2 Ciclo del carbonio 1.2.1 Glucidi semplici, 7 1.2.2 Polimeri semplici, 7 1.2.3 Polimeri ad alto peso molecolare, 9 1.2.4 Sostanza organica del suolo (humus), 16 1.3 Ciclo dell’azoto 1.3.1 Ammonizzazione e assimilazione dell’ammonio, 21 1.3.2 Nitrificazione, 23 1.3.3 Riduzione del nitrato e denitrificazione, 27 1.3.4 Alterazioni antropiche del ciclo dell’azoto, 31 1.4 Cicli dello zolfo e del fosforo 1.4.1 Ciclo dello zolfo, 33 1.4.2 Ciclo del fosforo, 36 Bibliografia 2 - Le associazioni tra microrganismi (Giancarlo Moschetti, Mario Chiurazzi) 2.1 Associazioni positive 2.1.1 Neutralismo, 41 2.1.2 Commensalismo, 41 2.1.3 Protocoperazione, 42 2.1.4 Mutualismo, 43 1 1 5 19 33 37 39 41 III-XX_Romane 18-02-2008 11:11 Pagina VIII VIII ISBN 978-88-408-1383-7 2.2 Associazioni negative 2.2.1 Competizione, 45 2.2.2 Amensalismo, 46 2.2.3 Parassitismo, 47 2.2.4 Predazione, 49 Bibliografia 3 - Microbiologia degli ambienti estremi 45 50 (Francesco Canganella) 3.1 Caratteristiche degli ambienti estremi 3.1.1 I microrganismi negli ambienti estremi, 55 3.1.2 Ambienti termali, 56 3.1.3 Ambienti ipersalini, 57 3.1.4 Ambienti abissali, 57 3.2 Microrganismi estremofili rappresentativi 3.2.1 I microrganismi degli ambienti termali, 61 3.2.2 Caratteristiche dei termofili, 62 3.2.3 Studio dei microrganismi termofili e loro applicazioni, 64 3.2.4 Applicazioni e prospettive biotecnologiche, 66 3.3 I microrganismi degli ambienti ipersalini 3.3.1 Applicazioni biotecnologiche dei microrganismi alofili, 71 3.3.2 Batteri alcalofili, 75 3.3.3 Batteri acidofili, 76 3.4 I microrganismi degli ambienti abissali 3.4.1 Isolamento e caratteristiche fisiologiche dei batteri abissali, 77 3.4.2 La microflora delle sorgenti idrotermali abissali, 78 3.4.3 Endosimbiosi batteriche in ambienti estremi, 80 3.4.4 Grotte e cavità sottomarine anossiche, 82 3.5 Esobiologia, microrganismi e ambienti spaziali Bibliografia 4 - Biofilm microbici 53 52 61 70 77 84 87 (Elena Di Mattia) 4.1 Cenni generali sui biofilm 4.1.1 Resistenza dei biofilm ad antibiotici e disinfettanti, 91 La formazione dei biofilm, 93 4.2 I biofilm agroambientali 4.2.1 Biofilm ambientali: pianta, suolo e rizosfera, 100 Box 4.1 I biofilm e la fitodepurazione, 103 4.2.2 Biotecnologie avanzate per il controllo della formazione dei biofilm, 104 Bibliografia 91 99 106 5 - Ecologia microbica dell’apparato digerente 107 Aspetti di ecologia microbica del tratto digerente (Bruno Biavati) 5.1 L’apparato digerente 5.1.1 Anatomia del tratto gastrointestinale, 108 5.1.2 Distribuzione del microbiota nell’uomo, 111 107 108 III-XX_Romane 18-02-2008 11:11 Pagina IX ISBN 978-88-408-1383-7 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 Gli animali gnotobiotici, 114 5.1.5 I ruminanti, 118 5.1.6 Il pollame, 121 Le comunità microbiche 5.2.1 Aspetti strutturali delle comunità microbiche, 126 5.2.2 Comunicazione tra i membri delle comunità microbiche, 127 Determinanti ambientali condizionanti la distribuzione e composizione del microbiota 5.3.1 Rapporti microrganismo-ospite, 128 5.3.2 Fattori ambientali selettivi, 128 5.3.3 Interazioni tra i microrganismi, 131 Difficoltà nel caratterizzare la composizione del microbiota gastrointestinale L’epitelio quale sito delle interazioni microrganismi-ospite 5.5.1 Antibiotico resistenza, 136 5.5.2 I patogeni, 137 La risposta immunitaria 5.6.1 Difese dell’organismo, 139 5.6.2 Le difese acquisite, 144 5.6.3 Memoria immunologica, 146 Probiotici e prebiotici per il mantenimento dello stato di salute dell’ospite (Loredana Baffoni, Bruno Biavati) 5.7 I probiotici 5.7.1 Ma che cos’è un organismo probiotico?, 147 Box 5.1 I probiotici negli alimenti, 148 5.7.2 Probiotici: sicurezza d’impiego, 152 5.7.3 Specie probiotiche, 155 5.8 I prebiotici 5.9 I simbiotici 5.10 Probiotici per animali d’allevamento 5.10.1 Prodotti attualmente disponibili, 157 5.10.2 Uso attuale, 160 Effetti dei probiotici, 160 Bibliografia IX 126 128 134 136 139 147 147 157 159 159 162 MICROBIOLOGIA DEL SUOLO 6 - La biodiversità microbica del suolo 163 Comunità microbiche del suolo (Marco Nuti, Monica Agnolucci, Annita Toffanin, Stefania Degl’Innocenti) 6.1 Definizioni e aspetti generali 6.2 Metodi per lo studio delle comunità microbiche del suolo 6.3 Teorie ecologiche sui microrganismi del suolo e sulle fluttuazioni della biodiversità 163 I centri di risorse biologiche per la conservazione della biodiversità microbica (Ann Vaughan) 6.4 L’importanza strategica dei centri di risorse biologiche 6.5 Le collezioni come strutture di servizio Bibliografia 189 163 174 184 189 191 192 III-XX_Romane 18-02-2008 11:11 Pagina X X ISBN 978-88-408-1383-7 7 - La rizosfera e le associazioni microrganismi-piante 195 (Marco Bosco, Luciana Giovannetti, Manuela Giovannetti, Carlo Viti) 7.1 La rizosfera 195 7.1.1 Ecologia microbica della rizosfera, 196 Box 7.1 Quorum sensing, 198 7.1.2 Metodi per lo studio dei microrganismi nella rizosfera, 202 Box 7.2 Protocolli per la separazione delle differenti parti che compongono la rizosfera, 203 7.2 Le simbiosi micorriziche 209 7.2.1 La biodiversità delle micorrize, 210 7.2.2 Le micorrize arbuscolari, 212 7.2.3 Biodiversità morfologica e molecolare dei funghi MA, 214 7.2.4 Biodiversità funzionale dei funghi MA, 215 7.2.5 Conservazione della biodiverstà, 217 7.3 Le simbiosi attinorriziche 218 7.3.1 Caratteristiche morfologiche, fisiologiche e tassonomiche dei microsimbionti attinorrizici, 219 7.3.2 Caratteristiche delle simbiosi attinorriziche, 220 7.3.3 Piante attinorriziche: ecologia e applicazioni, 224 Bibliografia 227 8 - Azotofissazione (Sergio Casella, Marco Nuti, Andrea Squartini) 8.1 8.2 8.3 Note introduttive Origini e storia evolutiva della fissazione biologica dell’azoto Gli autotrofi per l’azoto 8.3.1 Gli azotofissatori liberi e cenobionti, 234 8.3.2 Gli azotofissatori simbionti, 237 8.4 Il fattore comune: la nitrogenasi 8.4.1 Nitrogenasi e ossigeno: come renderli compatibili?, 261 8.4.2 Valutazione dell’attività nitrogenasica, 266 8.5 Selezione e uso in agricoltura di batteri azotofissatori simbionti 8.5.1 Caratteristiche degli inoculanti, 270 8.5.2 Caratteristiche del processo produttivo e controllo della qualità del prodotto, 271 8.6 Stima degli effetti agronomici dell’inoculazione 8.7 Prospettive Bibliografia 9 - I batteri simbionti che promuovono la crescita delle piante, PGPR (Marina Basaglia, Daniele Daffonchio, Christine Picard) 9.1 9.2 9.3 229 229 232 233 258 267 274 275 276 277 Definizioni dei batteri PGPR 277 Interazione con gli essudati radicali e colonizzazione radicale 278 Meccanismi diretti di promozione della crescita vegetale 282 9.3.1 Solubilizzazione dei nutrienti (fosforo), 282 9.3.2 Produzione di ormoni da parte dei microrganismi rizosferici e interferenze con il metabolismo vegetale, 283 9.3.3 Produzione di altri composti volatili, 290 9.4 Meccanismi indiretti di promozione della crescita vegetale 291 III-XX_Romane 18-02-2008 11:11 Pagina XI XI ISBN 978-88-408-1383-7 9.4.1 9.4.2 9.4.3 Produzione di siderofori, 292 Antibiosi, 293 Regolazione della produzione di siderofori e antibiotici, 296 Box 9.1 Cell-to-Cell signaling, 296 9.4.4 Resistenza indotta, 298 9.4.5 Altri meccanismi di antagonismo, 300 9.5 Diversità dei batteri PGPR 9.5.1 PGPR del genere Pseudomonas, 303 9.5.2 PGPR del genere Bacillus, 307 9.5.3 Altri PGPR, 310 9.6 Produzione di inoculanti e il loro utilizzo in pieno campo 9.7 Microrganismi PGPR geneticamente modificati Bibliografia 303 312 315 317 MICROBIOLOGIA PER LA PRODUZIONE VEGETALE 10 - La microflora della fillosfera (Gino Ciafardini) 319 10.1 Le comunità microbiche della fillosfera 320 10.1.1 La superficie aerea delle piante coltivate, 322 10.2 Modificazioni della fillosfera 324 10.2.1 Alterazione della superficie aerea delle piante, 324 10.2.2 Modificazioni legate alla densità delle cellule microbiche, 325 10.2.3 Interazione tra i microrganismi epifiti e la pianta, 326 10.3 La diffusione dei microrganismi epifiti nei sistemi agro-forestali 326 10.3.1 Interazione tra i microrganismi epifiti nella fillossera, 327 10.4 Importanza dei microrganismi epifiti nella produzione degli alimenti vegetali fermentati 329 10.4.1 Impiego dei microrganismi epifiti nell’industria enologica, 330 10.4.2 Il ruolo dei batteri lattici epifiti nella preparazione dei crauti, 333 Box 10.1 La produzione dei crauti, 333 10.4.3 I microrganismi epifiti nella produzione dei cetrioli fermentati, 334 Box 10.2 La produzione dei cetrioli, 334 10.5 Importanza dei microrganismi epifiti dell’industria elaiotecnica 334 10.5.1 I microrganismi epifiti nella produzione delle olive da mensa, 335 10.5.2 Il ruolo dei microrganismi epifiti nella strutturazione dell’olio extravergine di oliva, 342 10.5.3 I microrganismi epifiti presenti negli oli di oliva aromatizzati, 347 10.6 Il ruolo dei batteri lattici epifiti nella produzione di alimenti fermentati minori 348 10.7 Il futuro ruolo della filossera nella ricerca scientifica 350 Bibliografia 350 11 - Gli insilati 11.1 11.2 11.3 11.4 (Sandra Torriani, Franca Rossi) Processi biochimici legati all’attività delle cellule vegetali Ecologia microbica degli insilati Batteri lattici negli insilati Tecniche di insilamento 11.4.1 Tipi di insilato, 367 11.4.2 Composizione dei raccolti, 369 11.4.3 Utilizzo degli insilati, 372 351 352 353 359 365 III-XX_Romane 18-02-2008 11:11 Pagina XII XII ISBN 978-88-408-1383-7 11.4.4 Perdite all’insilamento, 374 11.5 Uso di additivi e di inoculanti batterici 11.6 Valutazione dello stato di conservazione degli insilati Bibliografia 12 - I microrganismi nella lotta biologica (Daniele Daffonchio, Sergio Casella) 12.1 Definizione di lotta biologica 12.2 Lotta biologica per il controllo di batteri, funghi e nematodi fitopatogeni 12.2.1 Il controllo dei batteri: Agrobacterium radiobacter, 390 12.2.2 Il controllo dei funghi fitopatogeni: Tricoderma sp., 392 12.2.3 Il controllo dei nematodi: Pasteuria penetrans e i funghi trappola, 395 12.3 Lotta biologica per il controllo delle erbe infestanti 12.4 Lotta biologica agli insetti e artropodi 12.4.1 Photorhabdus e la simbiosi con nematodi, 398 12.4.2 Bacillus sphaericus e Bacillus popilliae, 402 12.4.3 Baculovirus, 403 12.5 Bacillus thuringiensis 12.5.1 Tassonomia, genomica ed ecologia, 406 12.5.2 Espressione delle tossine Cry, 408 12.5.3 Le tossine Cry e Cyt: struttura e meccanismo d’azione, 411 12.5.4 Le tossine Vip, 416 12.5.5 Altri fattori di virulenza, 419 12.5.6 Biosicurezza di Bacillus thuringiensis, 419 12.6 Endosimbionti e controllo simbiontico degli insetti 12.6.1 Interazioni trofiche e metaboliche tra insetti e microrganismi, 420 12.6.2 Interferenze con la riproduzione degli insetti, 422 12.6.3 Esempi di controllo simbiotico, 423 12.7 Costruzione di organismi transgenici per la lotta agli insetti 12.7.1 Geni per la costruzione di organismi transgenici per la lotta agli insetti, 425 12.7.2 Problematiche di utilizzo di geni insetticidi eterologhi in ospiti microbici, 428 12.7.3 Strategie di utilizzo dei bioinsetticidi microbici ricombinanti, 429 12.7.4 Piante transgeniche Bt, 430 Bibliografia 13 - Il compostaggio (Vincenzina Andreoni, Claudia Sorlini) 13.1 Il Processo di compostaggio 13.1.1 Fattori di controllo del compostaggio, 436 13.2 Microflora del processo di compostaggio 13.3 Criteri di valutazione della maturazione del compost 13.4 Effetto soppressivo del compost Bibliografia 375 383 386 387 388 390 398 398 406 420 425 432 433 434 442 443 446 448 MICROBIOLOGIA AMBIENTALE 14 - La produzione di energia sotto forma di metano (Bruno Biavati) 449 III-XX_Romane 18-02-2008 11:11 Pagina XIII ISBN 978-88-408-1383-7 Un po’ di storia 14.1 Tassonomia Box 14.1 Chiave tassonomica dei metanogeni, 453 14.2 Citologia 14.3 Fisiologia 14.3.1 I substrati per la metanogenesi, 459 14.3.2 Adattamento ad ambienti salini, 461 14.3.3 Adattamento ad ambienti con elevate temperature , 461 14.3.4 Adattamento al pH, 462 14.3.5 Adattamento all’ossigeno, 463 14.3.6 Regolazione genetica e metabolica , 463 14.3.7 Motilità e vescicole gassose, 464 14.4 Ecologia 14.4.1 Habitat colonizzati dai metanogeni, 464 14.4.2 Tratti gastrointestinali degli animali, 465 14.4.3 Digestori anaerobi, 466 14.4.4 Sedimenti di acque dolci e suolo, 467 14.4.5 Habitat, 468 14.4.6 Habitat geotermali, 469 14.4.7 Altri habitat, 469 14.4.8 Competizione per H2, 471 14.4.9 Competizione per acetato, 471 14.4.10 Trasferimento interspecie di H2/formiato, 472 14.5 Biochimica 14.5.1 Metanogenesi da CO2 e H2, 476 14.5.2 Metanogenesi da acetato, 478 14.5.3 Metanogenesi da metanolo e metilamine, 479 14.6 Genetica dei metanogeni 14.6.1 Struttura e organizzazione dei geni, 482 14.6.2 DNA e cromatina, 483 14.6.3 Riparazione del DNA, trascrizione e struttura dei geni, 484 14.6.4 Siti di legame al ribosoma, 485 14.6.5 Strutture macromolecolari di superficie, 486 14.6.6 Fissazione dell’azoto, 486 14.6.7 Genomi di metanogeni sequenziati, 486 14.7 Applicazioni dei metanogeni Box 14.2 Definizioni relative alle variazioni di energia, 496 Bibliografia 15 - La produzione di energia sotto forma di idrogeno Idrogeno dalla fermentazione delle biomasse (Claudia Sorlini) 15.1 La produzione di idrogeno per via fermentativa al buio 15.1.1 La fermentazione acido-mista, 499 15.1.2 La fermentazione butirrica, 501 15.2 Rese di idrogeno di diversi sistemi biologici in batch 15.3 La produzione di idrogeno negli impianti 15.3.1 I fattori che influenzano la resa in idrogeno XIII 449 451 454 459 464 473 482 488 496 497 498 499 503 504 III-XX_Romane 18-02-2008 11:11 Pagina XIV XIV ISBN 978-88-408-1383-7 15.4 I bioreattori 15.5 Le prospettive per il futuro 15.5.1 Manipolazione genetica dei batteri fermentati, 509 15.5.2 Gli interventi sugli impianti di biogas esistenti (511) 507 509 Idrogeno da microrganismi fotosintetici (Massimo Vincenzini) 15.6 I microrganismi produttori di H2 alla luce 15.7 H2 da microrganismi a fotosintesi ossigenica 15.8 H2 da microrganismi a fotosintesi anossigenica 15.9 Processi fotobiologici di produzione di H2 a confronto Bibliografia 512 512 515 518 519 521 16 - Produzione di bioetanolo (Matilde Manzoni, Francesco Molinari) 16.1 Substrati 16.2 Aspetti fisiologici e biochimici 16.3 Processi 16.3.1 Coltura batch, 534 16.3.2 Coltura fed-batch, 534 16.3.3 Coltura continua, 536 Bibliografia 523 529 533 538 17 - Depurazione biologica delle acque 539 (Giancarlo Ranalli, Elisabetta Zanardini, Francesca Cappitelli) 17.1 Strutture di un impianto di depurazione 17.1.1 Generalità, 539 17.1.2 Gli inquinanti: aspetti fisico-chimici , 540 17.1.3 Aspetti normativi delle acque reflue, 541 17.1.4 Indice di inquinamento di un refluo, 543 17.1.5 Depurazione biologica delle acque reflue, 544 17.2 Trattamenti primari (o meccanici) 17.3 Trattamenti secondari (o biologico) 17.3.1 Fattori che influenzano la depurazione biologica, 548 Box 17.1 Le tecniche di fitodepurazione, 556 17.4 Trattamenti terziari (o chimico-fisici) 17.5 Ecologia microbica dei fanghi attivi 17.5.1 Microfauna e macrofauna del fango attivo, 562 17.5.2 Dinamica dei fanghi attivi, 564 17.5.3 Formazione dei fiocchi di fango attivo, 567 17.5.4 Disfunzioni e cause del processo a fanghi attivi, 568 17.6 Rimozione microbiologica dell’azoto: a) nitrificazione 17.7 Rimozione microbiologica dell’azoto: b) denitrificazione 17.8 Rimozione microbiolgica dei fosfati 17.8.1 Aspetti microbiologici e biochimici, 577 17.8.2 Soluzioni impiantistiche, 579 Bibliografia 18 - Biorisanamento di suoli contaminati 18.1 Siti contaminati e risanamento 523 (Vincenzina Andreoni) 539 545 546 558 560 573 575 577 580 581 582 III-XX_Romane 18-02-2008 11:11 Pagina XV ISBN 978-88-408-1383-7 18.2 Applicabilità del biorisanamento 18.3 Ruolo dei microrganismi nei processi di degradazione degli inquinanti nel suolo 18.3.1 Struttura sterica ed elettronica degli inquinanti , 587 18.3.2 Biodisponibilità degli inquinanti, 587 18.3.3 Concentrazione e tossicità degli inquinanti, 588 18.3.4 Biodegradabilità degli inquinanti organici, 588 18.3.5 Potenziale genetico dei microrganismi, 594 18.3.6 Distribuzione dei contaminanti nel suolo, 596 18.4 Influenza dei fattori ambientali sul biorisanamento 18.5 Biorisanamento in situ 18.5.1 Bioattenuazione, 599 18.5.2 Biorisanamento accelerato, 600 18.5.3 Miglioramento del trasferimento degli inquinanti, 601 18.5.4 Inoculazione o bioaumento (bioaugmentation), 603 18.6 Tecnologie di biorisanamento 18.6.1 Bioventilazione e biospargimento, 605 18.6.2 Barriere attive o microbiologiche, 606 18.6.3 Landfarming e biopile, 607 18.6.4 Fitorisanamento e phytoremediation, 607 18.6.5 Tecnologie di bioremediation di falde inquinate, 609 18.7 Casi di studio 18.7.1 Sito contaminato da grezzo di petrolio in Minnesota – Risanamento per bioattenuazione, 610 18.7.2. Sito contaminato da BTEX in provincia di Milano – Trattamento mediante soil vapor extraction (SVE) e bioventilazione, 611 18.7.3 Acquifero dell’Arizona contaminato da benzina – Trattamento di air sparging e allestimento di biobarriere, 611 18.7.4 Sito industriale contaminato da miscele di inquinanti diversi – Uso di trattamenti ingegnerizzati e bioattenuazione, 612 18.8 Cenni di analisi del rischio Biobliografia 19 - Microrganismi e beni culturali: tra deterioramento e biorisanamento XV 583 584 597 598 604 610 613 614 615 (Francesca Cappitelli, Giancarlo Ranalli, Elisabetta Zanardini) Deterioramento dei beni culturali 19.1 Biodeterioramento Box 19.1 Il biodeterioramento dei prodotti sintetici, 616 19.1.1 Meccanismi del biodeterioramento, 617 19.2 I biodeteriogeni 19.2.1 Microrganismi chemiolitotrofi, 620 19.2.2 Organismi fototrofi, 620 19.2.3 Microrganismi eterotrofi, 621 19.3 Metodi di prevenzione e controllo del biodeterioramento 615 615 Biorisanamento dei beni culturali 19.4 Utilizzo di enzimi nella conservazione dei beni culturali 19.5 Utilizzo di microrganismi nella conservazione dei beni culturali 625 625 626 619 623 III-XX_Romane 18-02-2008 11:11 Pagina XVI XVI ISBN 978-88-408-1383-7 19.5.1 Le alterazioni che i microrganismi possono rimuovere, 626 19.5.2 Materiali veicolanti (o immobilizzanti) i batteri, 628 19.5.3 Modalità di applicazione del bioformulato, 629 Bibliografia 20 - Bioattività dei microrganismi fotosintetici (Natascia Biondi, Liliana Rodolfi, Mario R. Tredici) Box 20.1 Microrganismi fotosintetici, 636 Box 20.2 Definizioni, 636 20.1 Molecole ad attività inibitoria 20.1.1 Antimicrobici e antivirali, 637 20.1.2 Insetticidi, nematocidi e antimalarici, 638 20.1.3 Antialgali ed erbicidi, 639 20.1.4 Antitumorali e inibitori enzimatici, 639 20.2 Tossine Box 20.3 Cianobatteri e BMAA, 641 20.2.1 Aspetti ambientali, 641 20.2.2 Aspetti sanitari, 643 Box 20.4 Cianobatteri come integratori alimentari, 643 20.3 Molecole ad attività stimolante 20.3.1 Fito-ormoni, 644 20.3.2 Antiossidanti e antinfiammatori, 645 20.4 Significato ecologico delle molecole bioattive 20.5 Metodi di indagine della bioattività 20.6 Coltura massiva di microrganismi fotosintetici bioattivi 20.7 Ruolo dei fattori ambientali e colturali nella sintesi delle molecole bioattive 20.8 Potenzialità e limiti applicativi della bioattività 20.9 Esempi di sfruttamento della bioattività 20.9.1 Le terme, 654 20.9.2 Probiotici in acquacoltura, 654 Bibliografia 21 - Produzione industriale di biomasse microbiche (Matilde Manzoni) 21.1 La produzione su larga scala 21.2 Formulazione del terreno colturale 21.2.1 Fonti di carbonio, 660 Fonti di azoto, 662 21.3 Il fermentatore 21.3.1 Agitazione, 665 21.3.2 Aerazione, 666 21.3.3 Sistemi di controllo, 668 21.4 Aspetti tecnologici di processo 21.5 Aspetti economici e prospettive Bibliografia 673 Indice analitico 633 635 636 639 644 645 649 651 652 653 654 656 657 658 659 664 670 672 675