APOLIPOPROTEINA B-Turbidimetrico - intermedical

APO B - TURBI
APOLIPOPROTEINA B-Turbidimetrico
Determinazione quantitativa dell’ Apolipoproteina B (APO B)
IVD
-Spettrofotometro o fotometro termostatabile a 37°C con filtro a 340
nm.
Conservare a 2-8°C
CAMPIONI
Siero fresco o plasma EDTA o eparinizzato. Stabile 2 settimane a 28°C o 3 mesi a –20°C.
I campioni con presenza di fibrina devono essere centrifugati prima
dell’uso.Non usare campioni fortemente emolizzati o lipemici
PRINCIPIO DEL METODO
Il kit Apolipoproteina B è un test quantitativo turbidimetrico per la misura
della APO B nel siero o plasma umano.
Anticorpi anti-APO B mescolati con campioni contenenti APO B formano
dei complessi insolubili, i quali causano una variazione di
assorbanza,che dipende dalla concentrazione di APO B presente nel
campione del paziente,che può essere quantificata se comparata con un
calibratore a concentrazione nota di APO B.
PROCEDIMENTO
1.Portare il reagente di lavoro e il fotometro (portacuvette) a 37°C.
2. Condizioni del dosaggio:
Lungh.d’onda: 340 nm
Temperatura: 37ºC
Cammino ottico: 1 cm
3. Azzerare lo strumento con acqua distillata.
4. Pipettare in cuvetta:
SIGNIFICATO CLINICO
L’ APO B è la principale apolipoproteina strutturale associata con le
proteine VLDL, LDL e chilomicroni.La sua funzione principale è il
trasporto delle lipoproteine ricche di trigliceridi dal fegato, dall’intestino e
da altri tessuti. L’ APO B esiste in due forme: APO B-100 e APO B-48.
APO B-100, il più importante componente delle LDL, è sintetizzato nel
fegato e secreto nel plasma come parte delle VLDL.
APO B-48 , il più importante componente dei chilomicroni, è sintetizzato
nell’intestino.
Diversi studi hanno dimostrato che, in persone con malattie coronariche
(CHD), cambiano le concentrazioni seriche di Apo A1 e Apo B in
maniera similare con quelle rispettivamente di HDL e LDL, cosi che le
concentrazioni di Apo B e Apo A1, sono indicatori migliori della CHD che
le concentrazioni di colesterolo HDL e LDL. La iperbetalipoproteinemia è
caratterizzata da un incremento della concentrazione della Apo B-100,
con normale o moderato incremento di concentrazione di LDL
colesterolo.Il rapporto di LDL colesterolo e Apo B-100 è comunque
ridotto in questi pazienti.Un difetto nella struttura della Apo B o nelle
lipoproteine contenenti Apo B, ostacola la secrezione di lipoproteine
epatiche e intestinali ricche di trigliceridi, questo disordine si ha nelle
abetalipoproteinemie o in ipobetalipoproteinemie omozigoti.
R1 ( µL)
Calibr. o Campione (µL)
800
7
5. Mescolare e leggere le assorbanze (A1) doppo l’aggiunta del
campione.
6. Immediatamente pipettare nella cuvetta:
R2 ( µL)
200
N.B. Sono disponibili su richiesta le applicazioni per i più comuni
analizzatori automatici
REAGENTI
Diluente (R1)
Tampone Tris 20 mmol/L, pH 8.3,. Sodio azide 0.95 g/L.
Antisiero (R2)
Siero di capra,anticorpi anti-APO B umane, tris 50 mmol/L,
pH 7.5. Sodio azide 0.95 g/L.
Optional
APO cal. Ref: TU-19
CALCOLO
Calcolare la differenze di assorbanze di ciascun punto della curva di
calibrazione e riportare su una curva i valori ottenuti contro le
concentrazioni di ciascuna diluizione del cal. La concentrazione di
APO A1 nel campione si ottiene interpolando i valori delle assorbanze
sulla curva.
CALIBRAZIONE
Il dosaggio e il valore del calibratore sono stati standardizzati contro il
Certfied Reference Material WHO/IFCC SP1-01 (CDC,USA).Si consiglia
l’uso del calibratore APO cal. per la calibrazione.I reagenti dovrebbero
essere ricalibrati ogni tre settimane, quando si cambiano lotto sullo
strumento
CONTROLLO QUALITA’
Si consiglia di utilizzare Sieri di Controllo per monitorare le
performance dei procedimenti dei dosaggi manuali e automatici.E’
disponibile il siero di controllo per APO A1/APO B (Ref.: TU-20).
Ogni laboratorio deve stabilire il proprio schema di Controllo Qualità e
adottare azioni correttive nel caso che i controlli non danno risultati
accettabili.
PREPARAZIONE
Reagenti: pronti all’uso.
Curva di calibrazione : Preparare le seguenti diluizioni dell’APO cal. In
soluzione fisiologica. Moltiplicare la conc. Del calibratore per il
corrispondente fattore come nella tabella seguente per ottenere la
concentrazione di ciascuna diluizione.
Diluizione calibratore
Calibratore (µL)
NaCl 9 g/L (µL)
Fattore
1
-100
0
2
10
90
0.1
3
25
75
0.25
4
50
50
0.5
5
75
25
0.75
VALORI DI RIFERIMENTO
Valori normali : 69 – 105 mg/dL.
E’ opportuno che ogni laboratorio stabilisca il proprio range di
normalità.
6
100
-1.0
CARATTERISTICHE DEL METODO
1.
Limite di linearità: fino a 200 mg/dL,alle condizioni descritte nel
procedimento.Campioni con conc. più elevate devono essere
diluiti 1/5 con NaCl 9 g/L e ridosati.Il limite di linearità dipende dal
rapporto campione/reagente,e dallo strumento usato. Tale limite
sarà più alto diminuendo il volume del campione,anche se la
sensibilità del test diminuirà proporzionalmente.
2. Limite di detenzione:valori inferiori a 3.02 mg/dL danno risultati
non-riproducibili.
CONSERVAZIONE E STABILITA’
Tutti i componenti del kit sono stabili fino alla data di scadenza indicata
sull’etichetta se conservati ben chiusi a 2-8°C e se si evitano
contaminazioni durante l’uso.Non utilizzare i reagenti oltre la data di
scadenza.
Deterioramento dei reagenti: presenza di particelle e torbidità.
3.
MATERIALE ADDIZIONALE
-Bagno termostatico a 37°c.
Precisione:
Il reagente è stato testato per 20 giorni, usando tre livelli di siero
in stubi basati su EP5 (NCCLS).
1
Rev 0 Ed. 2010/04
Intermedical srl. Via A:Genovesi,13– 80010 Villaricca (NA)
Tel. +39 081 3302705 Fax +39 081 3301453
E-Mail: [email protected] Sito: www.intermedical-italy.it
EP5
Totale
Within Run
Between Run
Between Day
23.92 mg/dl
7.4%
2.0%
3.7%
6.1%
CV (%)
59.08 mg/dl
4.3%
1.4%
2.2%
3.4%
119.07 mg/dl
3.6%
1.0%
1.8%
3.0%
4. Accuratezza
I risultati ottenuti usando questo reagente (y)sono stati comparati con
quelli ottenuti un metodo immunoturbidimetrico Daiichi. 48 campioni con
livelli di APO B compresi tra 50 e 200 µg/dL sono stati testati. Il
coefficiente di correlazione (r) è 0.982 e la retta di correlazione è y=
0.996x +5.112. Le caratteristiche del metodo dipendono dall’analizzatore
usato.
INTERFERENZE
Bilirubina ( fino a 40 mg/dL), emoglobina (fino a 20 g/L), e lipemia (fino a
5 g/L),fattore reumatoide (800 IU/ml) non danno interferenze. Altre
sostanze possono interferire.
NOTE
La diagnosi clinica non deve essere fatta con i risultati di un unico
esame,ma devono integrarsi entrambi i dati clinici e quelli di laboratorio.
BIBLIOGRAFIA
1. Clin.Guide to Lab.Tests,Edited by NW Tietz w b Saunders
Co.,Philadelphia,483,1983.
2. Mahley RW et al. J Lipids Res 1984;25:1277-1294.
3. Brown MS et al. Science 1986 ;232 ; 34-47.
4. Freedman DS et al. N Engl J Med 1986; 315:721-726.
5. Sakurabayashi I et al Clinica Chimica Acta 2001; 312:87-95.
6. Young DS.Effects of disease on clinical laboratory test, 3th ed. AACC
Press,1997.
6. Friedman and Young.Effects of disease on clinical laboratory tests,3rd
ed.AACC Press,1997.
CONFEZIONE APOLIPOPROTEINA B Turbidimetrico
Ref.:
TU-18
Cont
: 1 x 40 mL
R1 Diluente
: 1 x 10 mL
R2 Antisiero
SIMBOLI GRAFICI ADOTTATI
Numero di catalogo
Consultare le istruzioni dell’uso
Numero di lotto
Conservare a 2-8°C
Cont
Contenuto
Fabbricante
Utilizzare entro
CAL
Dispositivo medico-diagnostico in vitro
Calibratore
2
Rev 0 Ed. 2010/04
Intermedical srl. Via A:Genovesi,13– 80010 Villaricca (NA)
Tel. +39 081 3302705 Fax +39 081 3301453
E-Mail: [email protected] Sito: www.intermedical-italy.it