BD Brilliant Green Agar

ISTRUZIONI PER L'USO
TERRENI SU PIASTRA
PRONTI ALL'USO
PA-212097.07
Rev.: Oct 2013
BD Brilliant Green Agar
USO PREVISTO
BD Brilliant Green Agar (Agar verde brillante) è un terreno altamente selettivo utilizzato per
l’isolamento di salmonelle diverse da S. typhi da feci e altri campioni clinici.
PRINCIPI E SPIEGAZIONE DELLA PROCEDURA
Metodo microbiologico.
L'impiego di Brilliant Green Agar per l'isolamento della Salmonella è stato descritto per la prima
volta da Kristensen et al. 1 Successivamente, Kauffmann ha modificato il terreno,2 permettendo
l'inoculazione di inoculi pesanti sia in ambienti clinici che non clinici. Il terreno è inserito nella
farmacopea statunitense (United States Pharmacopoeia, USP) per le procedure microbiologiche
che confermano l’assenza di microrganismi specifici negli integratori alimentari e nutrizionali
(Microbiological procedures for absence of specified microorganisms—nutritional and dietary
supplements) e viene utilizzato nell’esame dei prodotti caseari e nei manuali di microbiologia
clinica.3-8
I nutrienti del BD Brilliant Green Agar sono l'estratto di lievito e due peptoni; il lattosio e il
saccarosio con il rosso fenolo costituiscono un sistema di differenziazione che esclude i
fermentatori del lattosio e/o del saccarosio (ad es. l'E. coli), mentre le salmonelle non producono
acido a partire da questi zuccheri. Il verde brillante è l'agente d'elezione per inibire la flora
ancillare.
REAGENTI
Formula* per litro di acqua purificata
BD Brilliant Green Agar
Estratto di lievito
3,0 g
Peptone proteosico Bacto
10,0
Lattosio
10,0
Saccarosio
10,0
Cloruro di sodio
5,0
Rosso fenolo
0,08
Agar
20,0
Verde brillante
12,5 mg
pH 6,9 +/- 0,2
*Compensata e/o corretta per soddisfare i criteri di rendimento.
PRECAUZIONI
. Solo per uso professionale.
Non usare le piastre se presentano tracce di contaminazione microbica, alterazione di colore,
essiccamento, incrinature o altri segni di deterioramento.
Per maneggiare i prodotti in condizioni asettiche, riconoscere i rischi biologici e smaltire i
prodotti usati, consultare le ISTRUZIONI GENERALI PER L'USO.
CONSERVAZIONE E VITA UTILE
Alla consegna, conservare le piastre al buio a 2 – 8 °C nella confezione originaria fino a
immediatamente prima dell'uso. Evitare congelamento e surriscaldamento. Le piastre possono
essere inoculate sino alla data di scadenza (v. l'etichetta sulla confezione) e incubate per i
tempi di incubazione raccomandati.
Le piastre prelevate dalle confezioni da 10 già aperte possono essere usate per una settimana
se conservate in luogo pulito a 2 – 8 °C.
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CONTROLLO DI QUALITÀ A CURA DELL’UTENTE
Inoculare i campioni rappresentativi con i seguenti ceppi (per ulteriori informazioni, v.
INFORMAZIONI GENERALI PER L'USO). Incubare le piastre in ambiente aerobico a
35 – 37 °C per 18 – 48 h.
Ceppi
Escherichia coli
ATCC 25922
Enterococcus faecalis
ATCC 29212
Salmonella Abony DSM 4224
Salmonella Typhimurium
ATCC 14028
Non inoculate
Risultati della crescita
Crescita assente o normale; colonie gialle o gialloverdastre, con alone giallo.
Crescita assente o lieve; colonie giallastre con o senza
alone giallo.
10 – 100 colonie; colonie biancastre con alone rosso.
Crescita da buona a eccellente; colonie biancastre con
alone rosso.
Da brunastro a verde oliva
PROCEDURA
Materiali forniti
BD Brilliant Green Agar (piastre impilate Stacker da 90 mm). Microbiologicamente controllate.
Materiali non forniti
Terreni di coltura accessori, reagenti e apparecchiature di laboratorio necessarie.
Tipi di campioni
Tamponi fecali o rettali di pazienti con sospetta infezione da specie di Salmonella diverse da S.
typhi (v. anche CARATTERISTICHE PRESTAZIONALI E LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA).
Il terreno è utilizzato anche per materiali di origine animale o alimenti.
Procedura del test
Strisciare direttamente il campione o inoculare il terreno con un piccolo quantitativo di coltura
prelevato da un terreno liquido arricchito, come il brodo tetrationato. Inoculare anche uno o due
terreni meno selettivi, in particolare se la popolazione del materiale è ridotta. Effettuare lo
striscio per diluire e incubare le piastre in ambiente aerobico a 35 – 37 °C per 42 – 48 h.
Leggere le piastre a distanza di 18 – 24 h e 42 – 48 h.
Risultati
Sul BD Brilliant Green Agar gli organismi appaiono nel modo seguente:
Organismi
Risultati
Salmonella (a parte S. Typhi e S. Colonie da bianche a rosse circondate da zone rosse
Paratyphi)
S. Typhi e S. Paratyphi
Da nessuna crescita a tracce di crescita
Shigella
Da nessuna crescita a tracce di crescita
Escherichia coli, Klebsiella e
Colonie da giallo a verdastro circondate da zone gialloEnterobacter
verdastre
Pseudomonas
Da nessuna crescita a tracce di crescita
Batteri Gram-positivi
Da nessuna crescita a tracce di crescita
PRESTAZIONI METODOLOGICHE E LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA
BD Brilliant Green Agar è un terreno altamente selettivo per l'isolamento della Salmonella che
consente di isolare tali organismi anche in materiali fortemente contaminati, come le feci.4-8
Inoculare con il campione o il materiale anche un terreno meno selettivo per l'isolamento della
Salmonella e una piastra agar MacConkey II. Il Proteus può risultare simile a patogeni enterici
poiché produce colonie da bianche a rosse circondate da zone rosse.
Benché possano svilupparsi alcuni ceppi, BD Brilliant Green Agar non è idoneo per
l'isolamento di Salmonella Typhi e S. Paratyphi.
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Pur essendo possibile effettuare alcuni test diagnostici direttamente su questo terreno, per
completare l'identificazione è necessario ricorrere a test biochimici e sierologici usando colture
pure.
BIBLIOGRAFIA
1. Kristensen, M., V. Lester, and A Jurgens. 1925. On the use of trypsinized casein, brom
thymol blue, brom cresol purple, phenol red and brilliant green for bacteriological nutrient
media. Brit. J. Exp. Pathol. 6: 291.
2. Kauffmann, F. 1935. Weitere Erfahrungen mit den kombinierten Anreicherungsverfahren für
Salmonellabacillen. Z. Hyg. Infektionskr. 117: 26.
3. The United States Pharmacopeial Convention. The United States Pharmacopeia-National
formulary, current edition. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, Md.
4. Flowers, R.S., W. Andrews, C.W. Donelly, and E. Koenig. 1993. Pathogens in milk and milk
products, p. 103-212. In: R.T. Marshall (ed.). Standard methods for the examination of dairy
5. products, 16th ed. American Public Health Association, Washington DC, USA.
6. Osborn, W.W., and J.L. Stokes. 1955. The determination of Salmonellae in foods. Food and
Drug Laboratories, Ottawa, Canada.
7. MacFaddin, J. 1985. Media for the isolation-cultivation- identification-maintenance of medical
bacteria. Williams and Wilkins, Baltimore, USA.
8. Bopp, C. A., F. W. Brenner, P. I. Fields, J. G. Wells, and N. A. Stockbrine. 2003.
Escherichia, Shigella, and Salmonella. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A.
Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for
Microbiology, Washington, D.C.
CONFEZIONE/DISPONIBILITÀ
BD Brilliant Green Agar
N. di cat. 212097
Terreni su piastra pronti all'uso, in confezioni da 20
ULTERIORI INFORMAZIONI
Per ulteriori informazioni, rivolgersi al rappresentante BD di zona.
Becton Dickinson GmbH
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
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