TRYPTONE SOY AGAR (Blood Agar Base)

TRYPTONE SOY AGAR (Blood Agar Base)
INDICAZIONI
Questo terreno, utilizzato come terreno di base per la preparazione dei terreni al sangue, è preparato con materie prime
selezionate che non causano il viraggio del terreno al marrone durante la preparazione e la successiva conservazione. E’
stato specificamente formulato per evidenziare le reazioni beta-emolitiche degli streptococchi appartenenti ai gruppi A e
B di Lancefield, e per favorire la crescita di batteri aerobi e anaerobi particolarmente esigenti. E’ anche utilizzato nel
CAMP test.
PRINCIPI
- L’associazione del prodotto della digestione della caseina con il prodotto della digestione papainica della soia consente
una crescita ottimale dei microrganismi, grazie alla sinergia tra l’apporto proteico della caseina e l’apporto in
carboidrati della soia.
- Il cloruro di sodio preserva l’equilibrio osmotico.
- Il sangue sterile defibrinato di montone, utilizzato per arricchire il terreno, evidenzia le caratteristiche beta-emolitiche
di Streptococcus pyogenes e Streptococcus agalactiae.
- L’aggiunta del 5% di sangue di cavallo apporta i fattori X e V, necessari per la crescita di Haemophilus influenzae.
- Addizionando al terreno contenente sangue di montone, 2,5 mg/mL di gentamicina (un antibiotico aminoglicosidico),
si ottiene un terreno che facilita la ricerca di Streptococcus pneumoniae nei campioni clinici, con la contemporanea
inibizione dei batteri contaminanti quali stafilococchi e bacilli Gram-negativi.
PREPARAZIONE
-
Sospendere 40,0 g di terreno disidratato in 1 litro di acqua distillata o deionizzata.
Portare lentamente a ebollizione, agitando fino a completa soluzione.
Distribuire in provette o flaconi.
Sterilizzare in autoclave a 121°C per 15 minuti.
ISTRUZIONI PER L’USO
- Fondere il terreno (se preparato anticipatamente).
- Raffreddare e mantenere il terreno a 47°C.
- Aggiungere asetticamente i supplementi richiesti per la crescita dei batteri da identificare (sangue defibrinato sterile di
cavallo o montone, fattori di crescita, agenti selettivi).
- Versare in piastre Petri sterili.
- Lasciare solidificare su una superficie fredda.
- Asciugare la superficie dell’agar, ponendo le piastre in termostato con i coperchi parzialmente aperti per il tempo
strettamente necessario.
- Seminare.
- Incubare a 37°C per 24-48 ore in aerobiosi o in atmosfera arricchita di CO2 per Brucella e Neisseria.
RISULTATI
Gli streptococchi emolitici di gruppo A formano piccole colonie grigie, traslucide o opache, circondante da una zona di
emolisi di tipo beta. Ma anche altri batteri possono evidenziare lo stesso tipo di emolisi: Listeria, stafilococchi emolitici,
Escherichia coli e Pseudomonas. E’ quindi necessaria una colorazione di Gram per confermare i risultati.
Gli streptococchi presentano le seguenti caratteristiche: i batteri bacitracina-negativi, CAMP-positivi e beta-emolitici sono
considerati appartenere presuntivamente al gruppo B.
Esecuzione del CAMP test in terreno addizionato con il 5% di sangue defibrinato di montone:
- Seminare una coltura di 10 ore di Staphylococcus aureus ATCC® 33862 beta-emolitico con una singola strisciata
mediana.
- Seminare una coltura dello streptococco da identificare, perpendicolarmente alla strisciata iniziale ed avvicinandosi il
più possibile, senza però toccarla.
Gli streptococchi del gruppo B producono una sostanza extracellulare termoresistente (fattore CAMP) che induce un
triangolo di emolisi totale nella zona di emolisi incompleta degli stafilococchi, alla giunzione delle due colture. Questo
test andrebbe eseguito saggiando, in parallelo con i ceppi da identificare, ceppi noti di collezione. Gli streptococchi del
gruppo B presentano solitamente zone di emolisi più piccole rispetto a quelle osservate con Streptococcus pyogenes.
I pneumococchi formano colonie piatte, lisce, grigiastre e talvolta mucose, circondate da una stretta zona di emolisi di
tipo alfa, di colore verdastro.
Gli stafilococchi formano colonie opache di colore giallo oro o bianco, con o senza emolisi di tipo beta.
I ceppi di Listeria formano piccole zone di beta-emolisi.
Questo terreno non selettivo consente anche la crescita di altri batteri non patogeni.
COMPOSIZIONE TIPICA (rettificabile per ottenere un rendimento ottimale)
Per 1 litro di terreno:
- Triptone ................................................................................................. 15,0 g
- Digerito papainico di soia................................................................................ 5,0 g
- Sodio cloruro.............................................................................................. 5,0 g
- Agar batteriologico..................................................................................... 15,0 g
pH del terreno pronto per l’uso a 25°C: 7,3 ± 0,2.
500 g di polvere consentono la preparazione di 12,5 litri di terreno.
CONTROLLO DI QUALITA’
- Terreno disidratato: polvere di colore bianco crema, omogenea e priva di grumi.
- Terreno preparato (addizionato con il 5% di sangue defibrinato di montone): agar di colore rosso opaco.
- Tipica risposta della coltura dopo 48 ore di incubazione a 37°C:
Microrganismi
Streptococcus pyogenes
Streptococcus pneumoniae
Escherichia coli
Enterococcus faecalis
ATCC ®
ATCC ®
ATCC ®
ATCC ®
19615
Crescita
Buona
Tipo di emolisi
Beta
6303
Buona
Alfa
25922
Buona
Beta
29212
Buona
CONSERVAZIONE/STABILITA'
- Terreno disidratato:
2-30°C.
La data di scadenza è indicata sull’etichetta.
- Base del terreno preparato (valore indicativo):
- Flaconi: 6 mesi a 2-8°C.
- Piastre: 1 mese a 2-8°C.
BIBLIOGRAFIA
- Facklam, R.R., and Carey, R.B. 1985. Streptococci and Aerococci in Lennette, E.H., Balows, A., Hausler, Jr., W.J., and Shadomy, H.J. (ed). Manual of Clinical
Microbiology
4th Ed., ASM Washington DC, 154-175.
- MacFaddin, J.F. 1985. Media for Isolation-Cultivation-Identification-Maintenance of Medical Bacteria. Vol 1. Williams, and Wilkins, Baltimore, 794-806.
PRESENTAZIONE
TRYPTONE SOY AGAR (BLOOD AGAR BASE)
Confezione
Codice
500 g (12,5 litri di terreno finale)
M028-17-K
Le informazioni e le specifiche contenute in questa scheda tecnica, datate 29.09.1999, sono suscettibili di modifica in qualsiasi momento, senza preavviso.
Le informazioni trascritte sull'etichetta del prodotto sono prioritarie rispetto alle formulazioni o is truzioni descritte in questo documento.