32. RAVASINI - Bollettino Emilia

“WOMEN IN CHANGE”
Donne che cambiano
Modena, 25/26/ 27 marzo 2010
Nuovi test di
diagnostica
molecolare
Francesca Ravasini,
Rossana Bellucci
http://www.laboratoriotest.it/
Tappe storiche
1869
Avery propone il DNA
come materiale genetico
Holley sequenza il tRNA di lievito
1944
1953
1965
1970
METODO SANGER
(terminazione di catena)
METODO MAXAM-GILBERT
(degradazione chimica)
Vengono sviluppate le tecniche
per la sintesi degli oligonucleotidi e per
la degradazione chimica del DNA. Viene
introdotta l’elettroforesi su gel per la
Il DNA genomico viene clonato nel fago M13
o in vettori plasmidici, nascono i primi programmi
informatici di analisi dei dati, vengono sviluppate
nuove tecnologie per il sequenziamento
1986
1989
QF-PCR
per la diagnosi prenatale di aneuploidie
Watson e Crick determinano
la struttura della doppia elica
Separazione di frammenti di DNA
1977
1980
Kary Mullis Introduce la PCR
Miescher osserva per la prima volta il DNA
AUTOMAZIONE PARZIALE
Vengono sviluppate le prime apparecchiature
per il sequenziamento che impiegano sistemi
per la rilevazione della fluorescenza.
1993 / 1997
2000
Automazione completa
Sequenziamento completo
del genoma umano
Diagnostica molecolare: applicazioni
può essere utilizzata per due tipi di indagini:
• Analisi di frammenti Es. STRs Short Tandem Repeats
(QF-PCR)
• Caratterizzazione completa di una regione di DNA per
la ricerca di mutazioni (SEQUENZIAMENTO)
Quali test oggi……..
QF-PCR
SEQUENZIAMENTO
“The PCR method
a copying machine for DNA molecules”
La PCR è una tecnica che
prevede l’amplificazione di
una sequenza di DNA di cui
si conoscono gli estremi.
La PCR avviene in una serie
di cicli composti da tre fasi:
- nella prima abbiamo la
denaturazione dei
frammenti, fase che avviene
ad alte temperature
- una fase di Annealing,
appaiamento, in cui i primer
si appaiono ai filamenti
- una fase in cui la TAQ
polimerasi sfruttando l’oh
libero fornito dai primer,
polimerizza usando come
stampo la sequenza
(replicazione)
Nella porzione terminale del
capillare, i frammenti di terminazione
sono colpiti dal raggio laser che
eccita le molecole fluorescenti ad
essi legate
Le emissioni fluorescenti sono
separate in base alla lunghezza
d’onda dalla camera CCD (Charge
Coupled Device)
Il segnale risultante produce un
pattern di bande che correla con una
sequenza di DNA, detto
Elettroferogramma
Due modalità di marcatura fluorescente
•Marcatura dei ddNTPs
•Marcatura dei primers
Analisi della sequenza nucleotidica di
brevi tratti di DNA per:
•
•
•
tipizzazione di microrganismi patogeni e virus (Es: identificazione di
ceppi di HPV )
identificare mutazioni in geni responsabili di malattie genetiche
identificazione di polimorfismi
PROCEDURA ANALITICA
• Estrazione DNA
• Amplificazione: PCR con primers specifici
•Gel di Agarosio
•Cycle Sequencing (PCR con primers specifici
e ddNTPs marcati).
• Elettroforesi capillare (Sequenziatore
Automatico) ed elaborazione dei dati con un
programma dedicato
Il metodo Sanger
(o metodo a terminazione di catena)
DNA stampo a
singola elica
3’-GGCTAAC
5’
3’
Il sequenziamento a terminazione di catena
si basa sulla sintesi di nuovi filamenti di DNA,
complementari ad uno stampo a singolo
filamento
Ibridazione con
Il primer
3’-GGCTAAC
+
[35S]dATP+dCTP,dGTP,dTTP(dNTP)+Polimerasi
ddATP, dNTP
-CCG ddA
-CCGATT ddG
-CCGAT ddT
-CCGA ddT
-CCG ddA
-CC ddG
-C ddC
-ddC
ddCTP, dNTP
-ddC
-C ddC
ddGTP, dNTP
-CC ddG
-CCGATT ddG
A C G T
G
T
T
A
G
C
C
Sequenza: 5’-CCGATTG
ddTTP, dNTP
-CCGA ddT
-CCGAT ddT
Direzione di
lettura
Sequenziamento automatico
con marcatori fluorescenti
Unica reazione ed unica corsa
Ad ogni nucleotide è associata
una diversa colorazione:
ddATP
ddTTP
ddGTP
ddCTP
Questo sistema aumenta la
produttività
ed elimina la variabilità di corsa
Coniugando a
ciascun ddNTP
un diverso
marcatore
fluorescente, è
possibile
effettuare le
quattro reazioni di
sequenziamento
in un unico tubo
da saggio
e caricare il tutto
in un solo
pozzetto in un gel
di poliacrilamide
Sequenziatori Capillari
• l’intervento dell’operatore
è minimo
• il sistema carica
automaticamente il
capillare con il polimero
di corsa
• esegue la separazione
elettroforetica
• i frammenti marcati di
DNA vengono rilevati
man mano che
attraversano il capillare
Dal cycle sequencing
all’elettroforetogramma...
•
•
•
Le emissioni fluorescenti vengono captate da un rilevatore
Le informazioni vengono trasformate in picchi di colore diverso,
con aree proporzionali all’intensità di emissione.
Tipizzazione HPV
BLAST contro la banca dati
Mutazioni in geni responsabili di malattie genetiche
(Es. CX26 o GJB2)
Banca dati di riferimento
La sordità può essere isolata e sporadica o far parte di un quadro
clinico più complesso, associata ad altre varie patologie. Le forme
genetiche più comuni sono bilaterali, di tipo percettivo. Tutte le
frequenze possono essere colpite ed alcune forme ereditarie
presentano danni per i toni alti, medi e bassi.
L'esordio può avvenire alla nascita o in epoca successiva,
l'evoluzione è variabile, progressiva o stazionaria. La sordità
profonda alla nascita causa il mancato sviluppo della parola.
La maggior parte delle sordità congenite è di natura ereditaria con
trasmissione recessiva del carattere o sporadica.
In entrambi i casi è stata accertata la responsabilità di un gene, che
regola la sintesi di una serie di proteine necessarie per l'integrità
dell'organo dell'udito: le connexine.
QF-PCR
Quantitative Fluorescence Polymerase Chain Reaction (QF-PCR) è una tecnica
semplice e rapida che consente la diagnosi molecolare delle aneuploidie più comuni
(trisomia 21, 13, 18 e aneuploidie dei cromosomi sessuali).
“Le aneuploidie rappresentano oltre il 90% delle anomalie
cromosomiche con difetti congeniti”
Questo tipo di approccio non richiede colture cellulari: la diagnosi può essere
completata in 2-3 giorni
PROCEDURA ANALITICA
• Estrazione DNA
• Amplificazione: 2 multiplex con almeno 15 STR
(tetra e pentanucleotidi repeats) marcati in 5’
• Elettroforesi capillare (Sequenziatore Automatico) ed elaborazione
dei dati con un programma dedicato
QF-PCR
Il metodo si basa sull'amplificazione di brevi
sequenze del DNA che contengono blocchi
ripetuti di 2-6 basi (marcatori STRs). Queste
sequenze sono specifiche per il cromosoma che
si intende analizzare.
AATG
Materno
Eterozigote 1:1
Omozigote
Non informativo
Trisomico
Triallelico 1:1:1
Trisomico
Diallelico 2:1 o
(1:2)
Paterno
Eterozigote o diallelico = Due alleli di lunghezza differente
Omozigote o monoallelico = Due alleli della stessa lunghezza
Trisomico = triallelico o diallelico (2:1- 1:1:1)
Trisomia del cromosoma 18
1:1:1
1:2
I marcatori diallelici si considerano trisomici quando il rapporto
fra le aree dei due picchi è <0.7 o >1.4
Triploidia
1:1:1
1:2
Criticità del metodo
Interpretazione della
monosomia X e diagnosi della
Sindrome di Turner
Contaminazione con DNA materno
Criticità del metodo
Assenza del segnale dell’Y
Cr. X
AM
XY
Cr. 13
Cr. 13
Cr. 7
Cr. X
Cr. X
Cr. X
Cr. X
Sindrome di Turner ?
Turner
2:1
Cr. 7
1:1
Cr. X
Cr. 7
XX
Cr. X
Contaminazione con DNA materno
Accuratezza della QF-PCR per trisomie 13, 18, 21 e aneuploidie dei cromosomi sessuali
Verma et al. 1998
2.139
2139
/
/
/
21: 2-3
32/33
Pertl et al. 1999
247
/
247
/
/
21: 4
13: 2
18: 3
15/15
1/1
4/5
Levett et al. 2001
5.000
5.000
/
/
/
21: 6
13: 6
18: 6
X:5-Y:2
57/57
8/8
17/17
20/20
Voglino et al. 2000
1.563
1.302
61
10
280
21:
13:
18:
XY:
110/110
15/15
40/40
25/25
Curcio et al 2004
1.277
996
281
/
/
21: 4
13: 3
18: 3
XY: 5
26/26
2/2
8/8
6/6
Cirigliano et al. 2004
18.000
16.746
625
123
/
21: 6
13: 4
18: 5
XY: 8
344/344
61/61
162/162
224/224
Ogilvie et al. 2005
9.080
7.327
1.753
/
/
21: 2-4
13: 2-4
18: 2-4
XY: 10
333/333
54/54
130/130
36/36
Choueri et al. 2006
420
420
/
/
/
21: 8
13: 5
18: 5
20/20
1/1
3/3
Modificato da: Lisa G.Shaffer and TheThe-Hung Bui, A.J.M.G. 145C:87145C:87-98 (2007)
Linee guida
External quality assessment of rapid prenatal detection of numerical chromosomal aberrations using
molecular genetic techniques: 3 years experience.
Prenat Diagn. 2007 May;27(5):404-8.
National Genetics Reference Laboratory (Manchester),UK ,
EQA (external quality assessment)
Monitorare la qualità
del test eseguito
Migliorare la qualità
del test eseguito
UKNEQAS: Schema pilota di EQA per la diagnosi rapida di aneuploidie,
inizialmente per i laboratori del Regno Unito e successivamente esteso a
tutta Europa
•5 campioni inviati ai partecipanti per anno, costituiti da DNA estratto da amniociti non coltivati e da villo
coriale
•I partecipanti devono genotipizzare i campioni con i metodi utilizzati di routine e inviare i risultati con i form di
risposta utilizzaticon l’iterpretazione completa del risultato
•Tutti i report di risposta sono anonimi
•EQA valuta sia gli errori di genotipizzazione che la qualità d’interpretazione del dato clinico
•Nel 2004 è stata valutata l’accuratezza della genotipizzazione, nel 2005 e 2006 la valutazione dei risultati è
stata fatta in base alla linee guida :
CONCLUSIONI
21 Idrossilasi - Sindrome Adreno Genitale (gene CYP21) - Ricerca delle principali mutazioni del gene della 21 Idrossilasi (CYP 21B) mediante sequenziamento automatico.
aciduria metilmalonica e omocistinuria, tipo cbIC (MMACHC) ACIDURIA MEVALONICA - HYPER-IgD SYNDROME (MVK) Acondroplasia (gene FGFR3) - Ricerca delle principali mutazioni del gene dell'acondroplasia (FGFR3) mediante sequenziamento automatico
Actin myopathy (ACTA1) adenosine deaminase, deficienza di (ADA) Adrenoleucodistrofia (ALD)- gene ABCD1 - Analisi di mutazione del gene ABCD1 mediante sequenziamento automatico
AGAMMAGLOBULINEMIA, AUTOSOMAL RECESSIVE (IGHM) Alagille, sindrome di (JAG1) Albinismo oculocutaneo tipo 1 (TYR) Alfa-1-Antitripsina (gene PI) - Analisi di mutazione del gene dell'alfa-1-Antitripsina mediante sequenziamento automatico
Alzheimer - Test predittivo pro-infiammatorio Alzheimer ad esordio precoce - gene PSEN1 - Analisi di mutazione dei geni PSEN1(Alzheimer ad esordio precoce) e determinazione del genotipo APOE (Alzheimer sporadico) mediante sequenziamento automatico.
Alzheimer ad esordio precoce - gene PSEN2 - Analisi di mutazione dei geni PSEN 2 (Alzheimer ad esordio precoce) e determinazione del genotipo APOE (Alzheimer sporadico) mediante sequenziamento automatico.
Alzheimer tipo 1 ad insorgenza precoce (APP) Amyloidosis (TTR) –
Anemia Falciforme o Drepanocitosi - Analisi di mutazione del gene Beta globina per la ricerca della mutazione Cod 6 A/T associata ad anemia falciforme
anemia FANCONI gruppo C Aneuploidie Molecolari - 13-18-21-X-Y - Analisi delle alterazioni cromosomiche numeriche relative ai cromosomi 13-18-21--X-Y, mediante QF-PCR (Quantitative-Fluorescent-Polymerase Chain Reaction
Aneuploidie Molecolari - 21-X-Y - Analisi delle alterazioni cromosomiche numeriche relative ai cromosomi 21--X-Y, mediante QF-PCR (Quantitative-Fluorescent-Polymerase Chain Reaction
ANIRIDIA (PAX6) Apolipoproteina E (ApoE): Genotipizzazione alleli E2, E3, E4 - Determinazione del genotipo APOE (Alzheimer sporadico) mediante sequenziamento automatico.
AROMATASI - deficit (p450) Atassia di Friedreich (FRDA) - Valutazione dell'espansione patologica di triplette nucleotidiche associata alla atassia di Friedreich.
Atassia Spinocerebellari (SCA) tipo 1 (ATXN1) Atassia Spinocerebellari (SCA) tipo 2 (ATXN2) Atassia Spinocerebellari (SCA) tipo 3 (ATXN3) Atassia Spinocerebellari (SCA) tipo 6 (CACNA1A) Atassia Spinocerebellari (SCA) tipo 7 (ATXN7) ATROFIA MUSCOLARE SPINALE E BULBARE - SBMA o Kennedy disease (AR) - Valutazione dell'espansione patologica di triplette nucleotidiche del Recettore Androgenico (AR) mediante Amplificazione genica fluorescente (F-PCR)
ATROFIA MUSCOLARE SPINALE TIPO I,II,III (SMA) - Valutazione semiquantitativa della delezione degli esoni 7 ed 8 del gene SMN 1 medianteamplificazione genica (PCR) e sequenziamento automatico SNaPShot
Bartter, sindrome di, tipo 1 (KCNJ1) Beckwith-Wiedemann, sindrome di (CDKN1C) blepharophimosis - ptosis - epicanthus inversus sindrome (BEPS): FOXL2 gene BLOOM SINDROME (BLM) Bruton tyrosine kinase (gene BTK) CANAVAN , malattia di (ASPA) –
Ceroid-lipofuscinosis, neuronal, tipo 6 (CLN6) CEROIDO LIPOFUSCINOSI NEURONALE (PPT1) CHARCOT-MARIE-TOOTH type 1A (PMP22) - analisi di linkage Charcot-Marie-Tooth X-Linked Congenital disorder of glycosylation, type 1A (PMM2) Crigler-Najjar syndrome (UGT1A1) Diamond Blackfan Anemia ( gene RPS19) - Analisi di mutazione mediante sequenziamento automatico del gene RPS19, associato all'Anemia congenita ipoplastica, tipo Diamond-Blackfan
DISAUTONOMIA FAMILIARE (FD) Disomia Uniparentale - Studio di marcatori genetici STR mediante PCR Fluorescente e genotipizzazione in sequenziatore automatico per la valutazione di disomia uniparentale. Sindromi di Prader-Willi, Angelman, Beckwith-Wiedeman, Russell-Silver
Displasia Diastrofica SLC26A2) - Analisi di mutazione del gene SLC26A2 mediante amplificazione genica (PCR) e sequenziamento automatico
Distonia primaria - gene DYT1 (dystonia muscolorum deformans) Distrofia dei Cingoli - 1C (LGMD - 1C) - CPKemia elevata - Gene CAV3 - Analisi di mutazione del gene CAV3 mediante amplificazione genica (PCR) e sequenziamento automatico
Distrofia dei Cingoli - 2C (LGMD - 2C) - Gene SGCG - Analisi di mutazione del gene SGCG mediante amplificazione genica (PCR) e sequenziamento automatico
Distrofia Facioscapulomerale (FSHD) –
Distrofia Miotonica (Malattia di Steinert) - (DMPK) - Analisi della regione 19 q13.3 per la ricerca dell'espansione patologica delle triplette CTG nella porzione 3' del gene MT-PK (Protein-chinasi-miotonina).
Distrofia Miotonica 2 (DM2) - (ZNF9) Distrofia Muscolare di Becker (DMB) - Valutazione delle principali delezioni del gene della distrofina mediante PCR fluorescente e corsa elettroforetica in sequenziatore automatico
Distrofia Muscolare di Duchenne (DMD) - Valutazione delle principali delezioni del gene della distrofina mediante PCR fluorescente e corsa elettroforetica in sequenziatore automatico
Distrofia Muscolare di Duchenne Becker (DMD/DMB) - analisi di linkage - Valutazione delle principali delezioni del gene della distrofina mediante PCR fluorescente e corsa elettroforetica in sequenziatore automatico
Duane-radial ray sindrome (SALL4) Ectodermal displasia 1 (EDA) ECTRODATTILIA DISPLASIA ECTODERMICA (tp63) Emocromatosi ereditaria tipo 4 (gene Ferroportina ) 2 mutazioni - Ricerca delle mutazioni del gene Ferroportina associate all'emocromatosi,mediante sequenziamento automatico
Emocromatosi ereditaria classica (gene HFE ) 12 mutazioni - Ricerca delle principali mutazioni (12) del gene HFE associate all'emocromatosi mediante sequenziamento automatico
Emocromatosi ereditaria classica (gene HFE) 3 mutazioni - Ricerca delle principali mutazioni (3 )del gene HFE associate alla emocromatosi mediante Sequenziamento automatico.
Emocromatosi ereditaria screening 18 mutazioni - Ricerca delle principali mutazioni (18) dei geni HFE,TFR2,Ferroportina, associate all'emocromatosi,mediante sequenziamento automatico.
Emocromatosi ereditaria tipo 3 (gene TFR2) 4 mutazioni - Ricerca delle mutazioni del gene TFR2 associate all'emocromatosi,mediante sequenziamento automatico
Emofilia A (gene FVIII) - Analisi di mutazione del gene del Fattore VIII della coagulazione mediante sequenziamento automatico diretto.
Emofilia B (gene FIX) - Analisi di mutazione del gene del Fattore IX della coagulazione mediante sequenziamento automatico diretto.
Epidermolisi Bollosa Simplex - Dowling-Meara - geni KRT5 e KRT14 - Ricerca delle principali mutazioni del gene della EB mediante Sequenziamento automatico.
EPIDERMOLISI BULLOSA Simplex - Mottled-Hyperpigmentation - KRT5 gene EPIDERMOLISI BULLOSA Simplex - Weber-Cockayne - gene KRT5 Esoostosi multipla tipo 1 (EXT1) Esostosi multipla tipo 1 (EXT1) Esostosi multipla tipo 2 (EXT2) Faciogenital displasia (FGD1) –
Emocromatosi ereditaria classica (gene HFE) 3 mutazioni - Ricerca delle principali mutazioni (3 )del gene HFE associate alla emocromatosi mediante Sequenziamento automatico.
Emocromatosi ereditaria screening 18 mutazioni - Ricerca delle principali mutazioni (18) dei geni HFE,TFR2,Ferroportina, associate all'emocromatosi,mediante sequenziamento automatico.
Emocromatosi ereditaria tipo 3 (gene TFR2) 4 mutazioni - Ricerca delle mutazioni del gene TFR2 associate all'emocromatosi,mediante sequenziamento automatico
Emofilia A (gene FVIII) - Analisi di mutazione del gene del Fattore VIII della coagulazione mediante sequenziamento automatico diretto.
Emofilia B (gene FIX) - Analisi di mutazione del gene del Fattore IX della coagulazione mediante sequenziamento automatico diretto.
Epidermolisi Bollosa Simplex - Dowling-Meara - geni KRT5 e KRT14 - Ricerca delle principali mutazioni del gene della EB mediante Sequenziamento automatico.
EPIDERMOLISI BULLOSA Simplex - Mottled-Hyperpigmentation - KRT5 gene EPIDERMOLISI BULLOSA Simplex - Weber-Cockayne - gene KRT5 -
Esoostosi multipla tipo 1 (EXT1) Esostosi multipla tipo 1 (EXT1) Esostosi multipla tipo 2 (EXT2) Faciogenital displasia (FGD1) Fattore VII - deficit (F7) Febbre Mediterranea Familiare (FMF) - Principali mutazioni gene MEFV Febbre Mediterranea Familiare (FMF) - Screening interno gene MEFV Fenilchetonuria (gene PAH) - Analisi di mutazione del gene Phenylalanine Hydroxilase (PAH) mediante sequenziamento automatico diretto.
Fibrosi Cistica - analisi 200 mutazioni (CFTR) - Ricerca delle principali mutazioni della Fibrosi Cistica (200) condotta mediante l'impiego contemporaneo di due metodiche: analisi di sequenza automatizzata e Oligonucleotide Ligation Assay (OLA)
Fibrosi Cistica - analisi 33 mutazioni + Polimorfismo 5T (CFTR) - Ricerca delle principali mutazioni della Fibrosi Cistica (33 + Polimorfismo 5T) condotta mediante l'impiego contemporaneo di due metodiche: analisi di sequenza automatizzata e Oligonucleotide Ligation Assay (OLA)
Fibrosi Cistica - analisi 70 mutazioni (CFTR) - Ricerca delle principali mutazioni della Fibrosi Cistica (100) condotta mediante l'impiego contemporaneo di due metodiche: analisi di sequenza automatizzata e Oligonucleotide Ligation Assay (OLA)
Fibrosi Cistica - intero gene (CFTR) - Analisi di mutazione del gene CFTR condotta mediante analisi di sequenza automatizzata.
GALACTOSIDASE-BETA -1 DEFICIENCY (GLB1) galattosemia, tipo I (GALT) Gangliosidosi (GLB1) Gaucher sindrome - principali mutazioni - Ricerca delle principali mutazioni del gene GBA per la glucocerebrosidasi mediante sequenziamento automatico
GAUCHER, malattia di - (GBA) - Intero gene GILBERT SINDROME (UGT1A1) –
Glutarico Aciduria tipo I (gene GCDH) - Analisi di mutazione del gene GCDH mediante amplificazione genica (PCR) e sequenziamento automatico
Glycogen storage disease type 1a (GSD1a) Glycogen storage disease type I, von Gierke disease (G6PC) GRANULOMATOUS DISEASE, CHRONIC, X-LINKED (CYBB) Gucosio 6-fosfato deidrogenasi (gene G6PD) (favismo) - Analisi di mutazione del gene G6PD mediante amplificazione genica (PCR) e sequenziamento automatico
HOLT-ORAM (gene TBX5) Huntington - Corea di Huntington (HD) - Valutazione dell'espansione patologica della tripletta nucleotidica associata alla malattia di Huntington. Mediante PCR fluorescente.
Ictiosi lamellare (TGM1) Immunodysregulation, polyendocrinopathy, enteropathy (FOXP3) Insensibilità agli androgeni - sindrome da - (AR) interleuchina 3, recettore alfa (IL3RA) Iper-IgD sindrome (MVK) Ipocondroplasia (gene FGFR3) - Ricerca delle principali mutazioni del gene dell'Ipocondroplasia (FGFR3) mediante sequenziamento automatico.
Ipofosfatasia tipo 1 (ALPL) IPOMAGNESEMIA, PRIMARIA (CLDN16) IPOPLASIA ADRENALE CONGENITA - AHC (DAX1) Keratitis (PAX6) KRABBE Disease (gene GALC) Leri-Weill dyschondrosteosis (SHOX) Lesch-Nyhan (gene HPRT1) Leucodistrofia metacromatica (ARSA) linfoistiocitosi emofagocitica (PFR1) linfoproliferativa, sindrome - X-linked - (SH2D1A) LOWE - SINDROME OCULOCEREBRORENALE (OCRL1) MANO-PIEDE-UTERO SINDROME (HOXA13) Maple syrup urine disease (MSUD) Medium Chain Acyl-CoA dehydrogenase (MCAD) deficit - Analisi di mutazione del gene ACADM mediante amplificazione genica (PCR) e sequenziamento automatico
Melas Syndrome - Analisi di mutazione del gene MTTL1 mediante sequenziamento automatico per la ricerca della mutazione 3243A-G dell' mtDNA
Mucolipidosi tipo IV (MLIV) Mucopolisaccaridosi Tipo IIIA - SINDROME DI SANFILIPPO (GENE SGSH) MUCOPOLISACCARIDOSI TIPO IIIB (NAGLU) MUCOPOLISACCARIDOSI TIPO IVB (GLB1) Mucopolisaccaridosi Tipo VI (Arilsulfatasi B - ARSB) Mucopolisaccaridosi, type I (IDUA) NEFROTICA SINDROME - STEROIDO RESISTENTE (NPHS2) Nemaline myopathy (CFL2) Neutropenia severe congenital tipo 1 (ELA2) Niemann-Pick - malattia di - tipo A (SMPD1) Niemann-Pick - malattia di - tipo B (SMPD1) Omenn syndrome (RAG1) Pancreatite Ereditaria (PRSS1-TYR) PANTOTHENATE KINASE-neurodegenerazione associata a - (PANK2) PARAPLEGIA SPASTICA tipo 3 - malattia di Strumpell (SPG3A) Peutz-Jeghers syndrome (STK11) Propionic acidemia B (PCCB) Pycnodysostosis (CTSK) RENE POLICISTICO Autosomico dominante (PKD1) - analisi di linkage RENE POLICISTICO Autosomico Recessivo (PKHD1) - analisi di linkage RETINITE PIGMENTOSA (gene RHO) - Analisi di mutazione del gene della Rodopsina (RHO) mediante sequenziamento automatico diretto.
RETT - Sindrome di RETT - gene MECP2 - Ricerca delle principali mutazioni del gene MECP2 mediante amplificazione genica (PCR) e sequenziamento automatico
sclerosi laterale Amiotrofica (SOD1) SCLEROSI TUBEROSA ( TSC1) Shwachman-Bodian-Diamond sindrome (SBDS) SINPOLIDATTILIA (HOXD13) Smith-Lemli-Opitz syndrome (DHCR7) Sordità ereditaria - intera regione codificante gene CX26 - Analisi di mutazione del gene della Connessina 26 (CX26) mediante sequenziamento automatico.
Sordità ereditaria - intera regione codificante gene CX30 Sordità ereditaria - principali mutazioni gene CX26 - Screening delle principali mutazioni del gene della Connessina 26 (CX26) mediante sequenziamento automatico.
SRY - Sex Determining region Y Superossido dismutasi 1 (SOD1) Talassemia Beta - Intero gene beta globina - Analisi di mutazione del gene della beta-globina mediante sequenziamento automatico.
Talassemia Beta - Screening 23 mutazioni italiane - Ricerca diretta delle principali mutazioni italiane (23) del gene della beta-globina mediante sequenziamento automatico.
TAY SACHS (HEXA) Tirosinemia tipo I (FAH) Van der Woude syndrome (IRF6) Wiskott-Aldrich Syndrome (gene WAS) - Analisi di mutazione del gene WAS mediante amplificazione genica (PCR) e sequenziamento automatico
X fragile o Sindrome di Martin-Bell o Sindrome da ritardo Mentale (FRAXA) - Valutazione dell'espansione patologica di triplette nucleotidiche associate alla sindrome di Martin-Bell. Amplificazione genica fluorescente (F-PCR)
X fragile o Sindrome di Martin-Bell o Sindrome da ritardo Mentale (FRAXE) - Valutazione dell'espansione patologica di triplette nucleotidiche associate alla sindrome di Martin-Bell. Amplificazione genica fluorescente (F-PCR)