DDK G17 Scheda Tecnica

DDK/G17
Cod. 04-44A
REGIONI AMPLIFICATE: esoni 3, 4, 6, 8, 13, 17, 19,
43, 44, 45, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 60.
AMPLIFICAZIONE: PCR MULTIPLEX.
DNA DI RIFERIMENTO: incluso.
Kit per l’identificazione di delezioni
negli esoni 3, 4, 6, 8, 13, 17, 19, 43, 44,
45, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 60 del gene
della distrofia muscolare di Duchenne
e Becker
RIVELAZIONE: elettroforesi su gel di agarosio.
PRODOTTI CORRELATI:
MICROGENO DNA cod. 05-42 kit per l’estrazione e la
purificazione del DNA da sangue fresco o congelato.
PROCEDURA
INTRODUZIONE
DNA ESTRATTO
Le distrofie muscolari di Duchenne e Becker (DMD,
BMD) sono due forme alleliche della stessa patologia
legata all’X che comportano una degenerazione
progressiva e irreversibile delle fibre muscolari.
Le frequenze di tali malattie sono rispettivamente
1,5/10.000 e 1,5/100.000 nati vivi. Entrambe sono il
risultato di mutazioni nel gene che codifica per la
distrofina, una proteina fondamentale per la funzionalità
delle fibre muscolari.
A causa dell’enorme dimensione del gene della
distrofina (più di 2,5 Mb e 82 esoni), circa il 65% delle
mutazioni identificate sono delezioni intrageniche che
coinvolgono uno o più esoni, o duplicazioni per il 5-8%
dei casi.
Questo kit permette di analizzare le delezioni negli
esoni 3, 4, 6, 8, 13, 17, 19, 43, 44, 45, 47, 48, 49, 50,
51, 52, 60 del gene della distrofia, mediante tre reazioni
di “PCR multiplex”.
Il metodo tradizionale di studio delle delezioni e
duplicazioni del gene della distrofina è sempre stato il
Southern blot mediante l’utilizzo di sonde a cDNA; tali
studi richiedono però campioni clinici in grande quantità
e ottima qualità.
L’approccio molecolare (PCR multiplex) è un metodo
rapido (1-2 giorni) di analisi anche di materiale in
piccola quantità e non necessariamente di buona
qualità. Permette inoltre, di confermare la diagnosi negli
individui affetti, e di effettuare diagnosi prenatale e
rappresenta quindi un importante ausilio nella
consulenza genetica alle famiglie.
CARATTERISTICHE TECNICHE
AMPLIFICAZIONE
MULTIPLEX
MX 1
1
MX 2
2
3
MX 3
4
gel di agarosio
VISUALIZZAZIONE
Fig. 1: Elettroforesi in gel di agarosio
al 4% delle tre PCR Multiplex.
Lane 1: molecular weight marker
Lane 2: I multiplex PCR
Lane 3: II multiplex PCR
Lane 4: III multiplex PCR
REFERENZE
Muntoni F. et al., Lancet Neurol. 2003 Dec;2(12):73140.
Navarro-Fdez Balbuena C. et al., Rev Neurol. 2003 Oct
16-31;37(8):766-9
NUMERO DI TEST: 8, 25 o 50 test.
STABILITA’: 6 mesi.
MATERIALE DI PARTENZA: sangue periferico intero.
SCH TEC DDK G17 R 010604
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