BIOSCOT® Linea cellulare Anti-A: BIRMA-1 Codice

BIOSCOT®
Linea cellulare Anti-A: BIRMA-1
Codice prodotto: TL
Linea cellulare Anti-B: LB-2
Codice prodotto: TN
Linee cellulari Anti-A,B: ES-4/ES-15
Codice prodotto: TM
IgM murine monoclonali
Reagenti per la determinazione del gruppo sanguigno
Per tecnica su vetrino, provetta e micropiastra
C
IVD
0123
USO PREVISTO
I reagenti per la determinazione del gruppo sanguigno mediante IgM
murine monoclonali BIOSCOT permettono di rilevare i seguenti antigeni:
Anti-A (linea cellulare BIRMA-1) rileva l'antigene A.
Anti-B (linea cellulare LB-2) rileva l'antigene B.
Anti-A,B (linee cellulari ES-4/ES-15) rileva gli antigeni A, Ax o B.
I reagenti sono idonei per l’uso nella tecnica su vetrino, provetta e
micropiastra, e devono essere utilizzati da operatori addestrati alle
tecniche sierologiche.
INTRODUZIONE
Il sistema di gruppi sanguigni AB0:
Nel 1900, Landsteiner scoprì che il siero di alcuni individui agglutinava gli
eritrociti di altri individui, e che questo fenomeno poteva essere utilizzato
per classificare gli individui in gruppi sanguigni con diversi fenotipi. Si
conoscono quattro fenotipi comuni: 0, A, B, e AB. Finora sono stati
identificati antigeni dei sottogruppi A e B.
Il fenotipo AB0 di un soggetto viene solitamente determinato mediante
reazioni di agglutinazione degli eritrociti con antisieri Anti-A, Anti-B e
Anti-A,B (determinazione diretta del gruppo sanguigno). Durante i test
su campioni ematici di adulti, la conferma del gruppo sanguigno AB0 può
avvenire in base alle reazioni del siero del soggetto con sospensioni di
eritrociti A e B standard (determinazione indiretta del gruppo sanguigno).
PRECAUZIONI
1. Le linee cellulari utilizzate per produrre questi reagenti sono di origine
murina e sono state testate risultando negative per i virus identificabili
mediante produzione di anticorpi murini (MAP). È necessario fare
attenzione nell’uso e nello smaltimento di ogni contenitore e relativo
contenuto.
2. I reagenti contengono lo 0,1% (p/v) di sodio azide. Il sodio azide può
essere tossico se ingerito e può reagire con le tubature in piombo o
rame formando sali altamente esplosivi. Per lo smaltimento, si deve
sciacquare con abbondante acqua.
3. I prodotti devono essere limpidi. La presenza di torbidità può essere
indice di contaminazione batterica. I reagenti non devono essere
utilizzati in presenza di precipitato, gel di fibrina o particelle.
4. I reagenti sono esclusivamente per uso professionale diagnostico in
vitro.
5. Il materiale bovino e suino proviene da fonti approvate dalla USDA
o da fonti per le quali sono disponibili informazioni sull’origine. Gli
animali donatori per il materiale bovino sono stati ispezionati e
certificati come esenti da malattie, e sono ritenuti a basso rischio di
encefalopatia spongiforme trasmissibile (EST).
6. I prodotti devono essere smaltiti immergendoli per una notte in
disinfettanti alla concentrazione appropriata o inserendoli in autoclave.
CONSIGLI PER L’USO
Si raccomanda di analizzare un controllo positivo e un controllo negativo
in parallelo con ogni lotto dei test. Se i controlli non mostrano le reazioni
attese, i test devono essere considerati non validi.
Con questo reagente non è necessario utilizzare un controllo del
reagente in parallelo con tutti i test. Solo in caso di tipizzazione degli
eritrociti di pazienti per i quali è nota la presenza di autoanticorpi o
di alterazioni delle proteine si raccomanda l’uso di un controllo del
reagente, ad esempio il controllo monoclonale BIOSCOT (codice
prodotto: TT). In questi casi il test deve essere effettuato in parallelo con
il reagente.
I reagenti sono stati caratterizzati seguendo le procedure raccomandate
nelle istruzioni per l’uso; per l’utilizzo di tecniche diverse, spetta all’utente
accertare l’idoneità dei reagenti.
In caso di alterazioni nelle prestazioni analitiche del dispositivo o di
confezione danneggiata, rivolgersi all’Ufficio per l’assicurazione di
qualità di Millipore (UK) Ltd.
CONSERVAZIONE
PRINCIPIO DEL REAGENTE
Conservare i prodotti aperti/sigillati a temperature comprese fra +2 °C
e +8 °C fino alla data di scadenza specificata sull’etichetta del prodotto.
Se utilizzati secondo le tecniche raccomandate, questi reagenti causano
l’agglutinazione (aggregazione) degli eritrociti che portano l’antigene
specifico (test positivo). La mancata agglutinazione degli eritrociti
dimostra l’assenza dell’antigene specifico (test negativo).
Il mancato rispetto della corretta temperatura di conservazione dei
prodotti, ad esempio la conservazione a temperatura più elevata o
fasi ripetute di congelamento e scongelamento, potrebbe accelerare la
perdita di attività dei reagenti.
L’uso ottimale di questi reagenti è con le tecniche raccomandate, senza
ulteriori diluizioni o aggiunte.
PRELIEVO DEL CAMPIONE
I prodotti sono forniti, filtrati a 0,22 μm.
MATERIALI
Anti-A, codice prodotto TL, contiene anticorpi dalla linea cellulare
BIRMA-1. Anti-B, codice prodotto TN, contiene anticorpi dalla linea
cellulare LB-2. Anti-A,B, codice prodotto TM, contiene anticorpi dalle
linee cellulari ES-15 ed ES-4. I reagenti sono costituiti da anticorpi IgM
murini monoclonali in una soluzione tampone contenente potenziatori
chimici macromolecolari. I reagenti contengono lo 0,1% (p/v) di sodio
azide, più materiale di origine bovina e suina. Ogni flaconcino (10 ml)
contiene materiale sufficiente per circa 250 test.
I reagenti contengono i seguenti coloranti:
Anti-A
Blu
Blu Patentato V
Anti-B
Giallo
Giallo di chinolina C.I. 47005
Anti-A,B
Nessuno
Prima del prelievo del campione non è necessaria alcuna preparazione
particolare del paziente. Il sangue deve essere prelevato con una
tecnica flebotomica approvata. I campioni possono essere prelevati
in provette contenenti gli anticoagulanti EDTA o CPDA, oppure come
campioni coagulati. Dopo il prelievo, il campione deve essere analizzato
quanto prima. In caso di ritardi nei test, conservare il campione a
temperature comprese fra +2 °C e +8 °C. Non analizzare con questo
reagente campioni che presentino segni macroscopici di emolisi o di
contaminazione microbica. Il mancato rispetto della corretta temperatura
di conservazione dei campioni potrebbe dare luogo a risultati falsi positivi
o falsi negativi.
MATERIALI NECESSARI MA NON FORNITI
Tecnica su vetrino:
• Vetrino per microscopio
• Soluzione salina isotonica o plasma/siero compatibile
• Contaminuti
Tecnica in provetta:
•Provetta
• Soluzione salina isotonica
• Contaminuti
• Centrifuga (1000 fcr)
Gli eritrociti positivi al test di Coombs diretto (DAT) potrebbero produrre
risultati falsi positivi. Si raccomanda l’uso del reagente di controllo
monoclonale BIOSCOT (codice prodotto: TT) per la rilevazione di tali
risultati falsi positivi.
Tecnica in micropiastra:
• Micropiastra pozzetto a U
• Soluzione salina isotonica
•Contaminuti
• Centrifuga (100 fcr)
• Agitatore per micropiastre
• Lettore per micropiastra (su richiesta)
L’eventuale contaminazione del materiale del test o deviazioni dalla
tecnica raccomandata potrebbero produrre risultati falsi positivi o falsi
negativi.
TECNICHE RACCOMANDATE
1. TECNICA SU VETRINO
1.1 Preparare una sospensione al 35-50% di eritrociti per il test in
plasma/siero autologo (o compatibile), oppure in soluzione salina
isotonica.
1.2 Aggiungere 1 goccia (40 μl) di reagente Anti-A, Anti-B o Anti-A,B su
un vetrino per microscopio pulito ed etichettato.
1.3 Aggiungere 1 goccia (40 μl) della sospensione di eritrociti per il test.
1.4 Miscelare l'antisiero e le cellule su una superficie di circa 2 cm di
diametro, facendo oscillare il vetrino in modo delicato e costante.
Leggere a livello macroscopico dopo 2 minuti. Non confondere
l’eventuale essiccazione della miscela con l’agglutinazione.
2. TECNICA IN PROVETTA
2.1 Preparare una sospensione al 3-5% degli eritrociti per il test in
soluzione salina isotonica.
2.2 Aggiungere 1 goccia (40 μl) di reagente Anti-A, Anti-B o Anti-A,B in
una provetta adeguatamente etichettata.
2.3 Aggiungere 1 goccia (40 μl) della sospensione di eritrociti per il test.
2.4 Mescolare e centrifugare a 1000 fcr per 20 secondi.
2.5 Agitare delicatamente la provetta per smuovere gli eritrociti e
verificare l’eventuale presenza di segni macroscopici di
agglutinazione.
2.6 Incubare le reazioni più deboli del previsto per 1 minuto a
temperatura ambiente, quindi centrifugare nuovamente.
CARATTERISTICHE PRESTAZIONALI
Anti-A (linea cellulare BIRMA-1) reagente monoclonale per la
determinazione del gruppo sanguigno, codice prodotto TL, Anti-B (linea
cellulare LB-2) reagente monoclonale per la determinazione del gruppo
sanguigno, codice prodotto TN, e Anti-A,B (linee cellulari ES-4/ES-15)
reagente monoclonale per la determinazione del gruppo sanguigno,
codice prodotto TM, sono stati testati con ognuna delle tecniche
consigliate con campioni da donatore, clinici e neonatali prelevati in
EDTA, citrato, CPDA o come campione coagulato. La popolazione
campione rappresentava tutti i fenotipi AB0 maggiori. Per ogni tecnica
sono stati calcolati, come riportato qui sotto, il numero totale dei test (n),
la sensibilità e la specificità:
Anti-A, codice prodotto TL
TECNICA
Sensibilità
n
%
n
%
Provetta
634
99,8
731
100
Micropiastra
4204
99,9
5845
100
Vetrino
623
99,2
636
100
Anti-B, codice prodotto TN
TECNICA
Sensibilità
LIMITAZIONI
Il risultato della determinazione del gruppo degli eritrociti deve essere
confermato mediante determinazione indiretta del gruppo sanguigno su
siero del soggetto con eritrociti A1 e B noti. Non somministrare sangue
AB ad alcuno finché le cellule del ricevente non sono chiaramente Anti-A
e Anti-B positive, e il siero del destinatario mostra di fornire reazioni
negative con le cellule A1 e B (a meno che il destinatario non abbia
mostrato di essere un sottogruppo di AB con Anti-A1 nel siero).
Il reagente per la determinazione del gruppo sanguigno Anti-A, codice
prodotto TL, non rileva tutti i campioni delle cellule Ax. Per il rilevamento
dei campioni deboli di Ax, può essere necessaria una lettura microscopica
e/o un periodo di incubazione superiore a 15 minuti.
Le micropiastre in polistirene rigido sono generalmente più adatte di
quelle in PVC. Ogni lotto di micropiastre deve essere valutato nel sistema
dell'utente prima dell'accettazione come idoneo per l'uso di routine.
Specificità
n
%
n
%
Provetta
239
100
1121
100
Micropiastra
1209
100
8838
100
Vetrino
405
100
855
100
3. TECNICA IN MICROPIASTRA
3.1 Preparare una sospensione al 3-5% degli eritrociti per il test in
soluzione salina isotonica.
3.2 Aggiungere 1 goccia (40 μl) di reagente Anti-A, Anti-B o Anti-A,B nei
pozzetti appropriati di una micropiastra.
3.3 Aggiungere pari volume (40 μl) della sospensione cellulare nei
pozzetti appropriati.
3.4 Mescolare il contenuto di ogni pozzetto utilizzando mezzi manuali o
un agitatore per micropiastre.
3.5 Incubare le micropiastre a temperatura ambiente per 15-20 minuti.
3.6 Centrifugare le micropiastre a 100 fcr per 40 secondi.
3.7 Rimettere in sospensione gli eritrociti usando l’agitatore per
micropiastre.
3.8 Leggere i test a livello macroscopico o con un lettore automatico.
L’uso di un lettore automatico per micropiastre deve essere
convalidato dall’utente.
Specificità
Anti-A,B, codice prodotto TM
TECNICA
Sensibilità
Specificità
n
%
n
%
Provetta
783
100
577
100
Micropiastra
5112
100
4935
100
Vetrino
865
99,9
392
100
Definizioni dalle Specifiche tecniche comuni (STC):
Sensibilità diagnostica: probabilità che il dispositivo fornisca un risultato
positivo in presenza del marcatore bersaglio.
Specificità diagnostica: probabilità che il dispositivo fornisca un risultato
negativo in assenza del marcatore bersaglio.
BIBLIOGRAFIA
1. Moore, S. et al. Vox Sang 47: 427-434 (1984). A Mouse Monoclonal
Antibody with Anti-A,(B) Specificity which Agglutinates Ax Cells.
2. McDonald, D.F. and Thompson, J.M. Vox Sang 1991;61:53-58.
A New Monoclonal Anti-A Antibody BIRMA-1.
3. Issitt, P.D. and Anstee, D.J. Applied Blood Group Serology,
4th Edition, Montgomery Scientific Publications, 1998.
4. Race, R.R. and Sanger, R. Blood Groups in Man 6th Edition,
Oxford: Blackwell Scientific Publications, 1975.
5. Guidelines for the Blood Transfusion Services in the United
Kingdom. 5th Edition. The Stationary Office, 2001.
Millipore (UK) Ltd
Fleming Road
Kirkton Campus
Livingston, EH54 7BN
Regno Unito
Tel: +44 (0)1506 404000 Fax: +44 (0)1506 404001
PI238
2015-03