Case report - Blood Transfusion

Case report
A description of two rare D phenotypes
Adelina Ornella Perrone, Giovanna Ferrari, Ilda Ghiglione, Clemente Mazzei
Servizio di Immunoematologia e Medicina Trasfusionale, ASL 1 Imperiese, Imperia
Introduction
Introduzione
For some time now our Immunotransfusion Service has
been systematically investigating discrepant or weak results
found during Rhesus factor determinations1. Here we report
two interesting cases detected in 2002 among 12,000 tests
to determine blood group.
Da tempo il nostro SIT approfondisce
sistematicamente i risultati discrepanti o deboli nella
determinazione del fattore Rh1.
Comunichiamo due casi interessanti rilevati nel 2002,
su 12.000 determinazioni di gruppo sanguigno.
Case 1 (discrepant reaction)
I caso (reazione discrepante)
SL, a 29-year old parturient of Columbian origin. Blood
group O. Direct and indirect antiglobulin tests, negative.
Determination of RhD factor:
- direct reaction on glass slide, with monoclonal IgM
anti-D sera (Laboratoires Eurobio, Les Ulis Cedex,
France), cell lines derived from the fusion of an EBV
line and a human-murine heteromyeloma line (clone
CAZ): result equivocal (±) after 2 minutes;
- direct reaction on glass slide, with incomplete human
polyclonal anti-D sera (Ditta DiaMed Italia Srl, Vedano
al Lambro, Milan, Italy): result positive (1+) after 2
minutes;
- direct reaction in DiaMed gel-test, with monoclonal antiD sera, cell lines LHM59/20 (LDM3), 175-2; and with
polyclonal anti-D sera: result positive (4+);
- partial RhD typing, with ID Partial RhD Typing – DiaMed
sera (Figure 1) and with D-Screen sera (Laboratori
Diagast, EuraSante, Loos Cedex, France) (Figures 2
and 3): pattern corresponding to RhDVa.
SL, anni 29, partoriente, di origine colombiana, gruppo
sanguigno O, test diretto ed indiretto all'antiglobulina,
negativi.
Determinazione del fattore RhD:
- reazione diretta su vetrino, con sieri anti-D monoclonali
di classe IgM (Laboratoires Eurobio, Les Ulis Cedex,
France), linee cellulari derivanti dalla fusione della linea
EBV con un eteromieloma umano- murino (clone CAZ):
risultato dubbio (±) dopo 2 minuti,
- reazione diretta su vetrino, con sieri anti-D policlonali
umani incompleti (Ditta DiaMed italiana Srl, Vedano al
Lambro, Milano): risultato positivo (1+) dopo 2 minuti
- reazione diretta in gel-test DiaMed, con sieri anti-D
monoclonali, linee cellulari LHM59/20 (LDM3), 175-2; e
con sieri anti-D policlonali: risultato positivo (4+),
- tipizzazione RhD parziale, con i sieri ID Partial RhD
Typing-DiaMed (Figura 1) e con i sieri D-SCREEN
(Laboratori Diagast, EuraSante, Loos Cedex, France)
(Figure 2 e 3): pattern corrispondente a RhDVa.
Conclusione: fenotipo: CcDVaee
Il caso è stato inviato, tramite i laboratori DiaMed di
Cressier sur Morat (Svizzera), all'International Blood Group
Reference Laboratory di Bristol, diretto dal prof. Anstee,
dove il campione è stato analizzato con un pannello
Received: 7 April 2003 - Accepted: 20 June 2003
Correspondence:
Dott.ssa Ornella Perrone
Via Doria 3
18017 San Lorenzo al Mare (IM)
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Blood Transf 2003; 3: 284-88
Two rare D phenotypes
Figure 1 - Partial RhD typing with ID Partial Typing-Patient SL
Figure 3 - Partial RhD typing with D-Screen-IgM class sera-Patient SL
Conclusion: Rh phenotype: CcDVaee.
The case was sent, via DiaMed's laboratories in
Cressier-sur-Morat (Switzerland), to the International
Blood Group Reference Laboratory in Bristol, directed
by Prof. Anstee, where the sample was analysed with an
extensive panel of anti-D sera and was confirmed to
belong to the DVa category, with a probable genotype of
Cdes/cDwe.
The red blood cells were positive for the low frequency
w
D antigen (D Wiel or Rh23), VS+ ( es or Rh20), and had
abnormal expression of C antigen.
Specific molecular investigations were not carried out
on the sample since the molecular bases of the DVa
phenotype are already known2-7. Molecular analyses are
reserved for samples which cannot be classified by other
methods or whose classification remains uncertain. The
RHD category Va haplotype originates from a hybrid RH(DBlood Transf 2003; 3: 284-88
Figure 2 - Partial RhD typing with D-Screen-IgG class sera- Patient SL
estensivo di sieri anti-D e confermato come appartenente
alla categoria DVa , probabile genotipo: Cdes/cDwe.
Le emazie sono risultate positive per l'antigene Dw a
bassa frequenza (D Wiel o Rh23), VS+ ( es o Rh20), e
presentavano un'espressione anomala dell'antigene C.
Il campione non è stato sottoposto ad indagine
molecolare specifica, in quanto le basi molecolari del
fenotipo DVa sono note2-7. L'analisi molecolare è riservata ai
campioni che non possono essere classificati con altri
metodi o di incerta classificazione. L'aplotipo RHD di
categoria Va origina da un ibrido RH(D-CE-D) formatosi
durante la meiosi tra i geni RHD ed RHCE. L'esone
5'dell'RHD è sostituito, del tutto o in parte, dall'esone 5 del
gene RHCE. Di norma gli epitopi D1 e D5 sono assenti e
sui globuli rossi sono presenti circa 9.400 siti antigenici per
cellula.
Alla nostra proposita abbiamo consegnato un referto
di gruppo sanguigno in cui il fattore Rh è stato definito:
"Variante RhD positivo di categoria Va , per la quale si
consiglia la profilassi anti-D post partum o postamniocentesi e la somministrazione di sangue Rh negativo
in caso di terapia trasfusionale. Da considerare Rh positivo
come donatore".
II caso (reazione debole)
MC, anni 36, gravida al VI mese, gruppo sanguigno A,
test diretto e indiretto all'antiglobulina, negativi.
Determinazione del fattore RhD:
- reazione diretta su vetrino, con sieri anti-D monoclonali
Eurobio e con sieri policlonali DiaMed: negativa,
- reazione diretta in gel-test DiaMed, con sieri anti-D
mono e policlonali: negativa ,
285
O Perrone et al.
Figure 4 - Partial RhD typing with ID Partial Typing-Patient MC
Figure 5 - Partial RhD typing with D-Screen-IgG class sera-Patient MC
CE-D) formed during meiosis between the RHD and RHCE
genes. Exon 5' of the RHD is substituted, completely or in
part, by exon 5 of the RHCE gene. The D1 and D5 epitopes
are normally absent and there are about 9,400 antigenic
sites on each red cell.
We issued a blood group report in which the Rh factor
was defined: "RhD variant positive, category Va. Anti-D
prophylaxis is advised post-partum or post-amniocentesis.
Administer Rh negative blood if transfusion therapy is
needed. To be considered Rh positive as a donor".
Case 2 (weak reaction)
MC, a 36-year women in her 6th month of pregnancy.
Blood group A. Direct and indirect antiglobulin tests,
negative.
Determination of RhD factor:
- direct reaction on glass slide, with Eurobio monoclonal
anti-D sera and with DiaMed polyclonal sera: negative;
- direct reaction in DiaMed gel-test, with monoclonal and
polyclonal anti-D sera: negative;
- search for Du in gel-test with polyclonal sera: positive,
reaction classified as 2+;
- partial RhD typing, with ID Partial RhD Typing, DiaMed
(Figure 4) and with DIAGAST D-screen (Figures 5 and
6): pattern with weak positivity, corresponding to weak
RhD with very low expression.
Conclusions: Rh phenotype: ccDu*Ee
* Du expression very low
The case was sent to the DiaMed laboratories at
Cressier-sur-Morat, where the typing was repeated with
286
Figure 6 - Partial RhD typing with D-Screen-IgM class sera- Patient MC
ricerca Du in gel-test con sieri policlonali: positiva,
reazione classificata con 2+,
- tipizzazione RhD parziale, con ID Partial RhD Typing,
DiaMed (Figura 4) e con D-Screen Diagast (Figure 5 e
6): pattern con positività deboli, corrispondente a RhD
debole a bassissima espressività.
Conclusioni: fenotipo Rh: ccDu*Ee * Du a bassissima
espressività.
Il caso è stato inviato ai laboratori DiaMed di Cressier
sur Morat, dove è stata ripetuta la tipizzazione con i sieri ID
Partial e D-Screen. Il campione è stato inoltre testato con
numerosi sieri anti-D ed è stato definito come "very very
weak D".
Si tratta del secondo caso da noi descritto, dato che nel
2001 avevamo già riscontrato1 in un'altra paziente un "Rh
D debole di tipo 11".
I fenotipi RhD deboli sono generalmente considerati
-
Blood Transf 2003; 3: 284-88
Two rare D phenotypes
ID Partial and D-Screen sera. The sample was also tested
with numerous other anti-D sera and was defined as "very
very weak D".
This is the second case that we have described, having
already found1 another patient in 2001 with "Rh D weak,
type 11".
Individuals with the weak RhD phenotypes are normally
considered positive as both donors and recipients and no
cases of immunisation involving the more common types
(Dweak 1, 2, 3) have been reported. The situation is not,
however, so clear for some of the less frequent types, and
particularly for those with very low expression. Reports of
immunisation, together with molecular structure analyses,
have demonstrated that some subjects with weak RhD are
not exempt from immunisation and that some, besides have
quantitative differences from normal RhD samples, also
have mutations in the structure of the gene (qualitative
differences)8, 9.
It is, therefore, advisable to transfuse carriers of altered
proteins with Rh negative products because these patients
are potentially at risk of developing antibodies.
Since our patient was a young woman and her blood
sample contained a very low number of antigenic sites, our
blood group report defined the Rh factor as "very very
weak Du, to be considered as Rh negative as a recipient
and positive as a blood donor".
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positivi sia come donatori che come riceventi e per i tipi più
comuni (Dweak 1, 2, 3) non sono stati segnalati casi di
immunizzazione.
La situazione non è altrettanto chiara con alcuni tipi
meno frequenti e, in particolare, con i tipi a bassissima
espressività. Segnalazioni di eventi immunizzanti,
unitamente all'analisi delle strutture molecolari, hanno
dimostrato che anche per alcuni soggetti RhD deboli non è
da escludere la possibilità di immunizzarsi e che alcuni,
oltre a presentare differenze quantitative rispetto ai
campioni RhD normali, hanno mutazioni nella struttura del
gene (differenze qualitative)8, 9.
È, quindi, opportuno indirizzare verso trasfusioni Rh
negative i portatori di proteine alterate perché
potenzialmente a rischio di sviluppare anticorpi.
Nel nostro caso, poiché il campione presentava un
numero di siti antigenici molto basso e si trattava di una
giovane donna, le abbiamo consegnato un referto di gruppo
sanguigno definendo il fattore Rh " Du a bassissima
espressività, da considerarsi Rh negativo come ricevente e
positivo come donatore di sangue".
287
O Perrone et al.
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