profiling leukemia - Instrumentation Laboratory SpA

DMK02-06 V08 Juillet 2008
Prodotto validato dal programma
Europe Against Cancer
BCR-ABL Mbcr e BCR-ABL mbcr FusionQuant ® Kit
PROFILING LEUKEMIA
Kit molecolari unici sviluppati per standardizzare e quantificare in maniera accurata
i trascritti di fusione BCR-ABL nella leucemia.
BCR-ABL
Il gene di fusione BCR-ABL è associato alla
formazione del cromosoma Philadelphia (Ph) ed è
una delle più comuni anomalie genetiche rilevate
nelle leucemie. Il cromosoma Ph si ritrova nel 95%
delle Leucemie Mieloidi Croniche (CML) e ne è il
marchio caratteristico. Inoltre nella Leucemia
Linfoblastica Acuta (ALL) il cromosoma Ph è stato
riscontrato nel 20-40% degli adulti e nel 2-5% dei
bambini. A livello molecolare il cromosoma Ph o
t(9;22) deriva dalla giustapposizione della porzione
5’ del gene BCR (cromosoma 22) alla porzione 3’
del gene ABL (cromosoma 9).
Nella grande maggioranza dei pazienti i punti di
rottura (breakpoint) del gene BCR sono raggruppati
in tre regioni ben definite:
- minor breakpoint cluster region (m-bcr):
corrispondente al gene BCR (e1) giustapposto al
secondo esone del gene ABL (a2), il trascritto di
fusione (e1-a2) codifica per una proteina di 190
KDa (p190).
- major breakpoint cluster region (M-bcr):
corrispondente all’esone (b3) o (b2) del gene BCR
giustapposto al secondo esone del gene ABL (a2),
i trascritti di fusione (b3-a2) e (b2-a2) rispettivamente
codificano per una proteina chimerica di 210 KDa
(p210).
- micro breakpoint cluster region (µ-bcr): molto rara.
Tecnologia standardizzata e normalizzata
La tecnologia FusionQuant® utilizza la Real Time
PCR quantitativa (RQ-PCR) che combina in
un’unica provetta l’amplificazione del DNA con
l’analisi dell’espressione genica e mediante una
tecnologia con plasmidi validati consente di
normalizzare i risultati di RQ-PCR. La tecnologia
FusionQuant® di Ipsogen consente di quantificare il
numero di copie del gene di controllo ABL e dei
trascritti del gene di interesse nei pazienti, utilizzando
curve standard con diluizioni seriali di plasmidi di
entrambi i geni.
Di rilievo è che il calcolo del rapporto fra la
concentrazione del trascritto dello specifico gene
di fusione rispetto alla concentrazione del trascritto
endogeno ABL, fornisce una quantificazione
normalizzata dello specifico gene di fusione in
ciascun campione analizzato nel saggio.
I FusionQuant® standard sono plasmidi a DNA
estremamente stabili. La tecnologia standardizzata
Ipsogen FusionQuant® si è dimostrata altamente
riproducibile negli studi multicentrici e costituisce
un sistema per normalizzare e standardizzare le
analisi di RQ-PCR inter e intralaboratorio.
La terapia dei pazienti Ph+ è stata rivoluzionata
in seguito all’introduzione degli inibitori delle tirosin
chinasi. Poichè la frequenza della risposta
citogenetica è ora molto alta, è necessario misurare
i livelli dei trascritti BCR-ABL per determinare la
malattia minima residua (MRD)1.
I FusionQuant® Kit permettono la quantificazione
accurata dei trascritti BCR-ABL. Questi kit sono stati
validati dallo studio “Europe Against Cancer” 2,3 e
sono conformi e aggiornati alle direttive
internazionali 1,4,5. Sono disponibili due saggi
separati, uno per la determinazione del major
breakpoint M-BCR, per le CML e uno per il minor
breakpoint m-bcr, per le ALL.
Sono prodotti intesi per uso diagnostico in vitro.
Trascritti genici di fusione di
BCR-ABL riportanti il set di primer
e probe per la RQ-PCR
Trascritto genico di ABL riportante il
set di primer e probe per la RQ-PCR
Informazioni per gli ordini:
FusionQuant®
Kit
Numero di campioni
testati in duplicato
Numero d’ordine
BCR-ABL mbcr
24-30*
504FQPP09CE
BCR-ABL Mbcr
24-30*
504FQPP10CE
BCR-ABL Mbcr
Mega Kit
55-64*
504FQPP10MCE
* Dipende dallo strumento di Real Time PCR utilizzato
• Sistema di estrazione, retrotrascrizione e Taq polimerasi non sono
inclusi nel kit
Ciascun Kit contiene:
• 1 provetta di mix con primer e probe specifici
per il gene di fusione di interesse
• 1 provetta di mix con primer e probe specifici
per il gene di controllo ABL
• 1 set di standard specifici per il gene di fusione
(5 provette contenenti le diverse diluizioni:
10, 102, 103, 105, 106)
• 1 set di standard specifici per il gene di
controllo ABL (3 provette contenenti le diverse
diluizioni: 103, 104, 105)
Bibliografia
1. M. Baccarani et al. Blood (2006) 108(6): 1809 - 1820.
2. J. Gabert et al. Leukemia (2003) 17: 2318 - 2357.
3. E. Beillard et al. Leukemia (2003) 17: 2474 - 2486.
4. S. Branford et al. Leukemia (2006) 20(11): 1925 - 1930.
5. T. Hughes et al. Blood (2006) 108(1): 28 - 37.
Prodotti Associati:
Ipsogen ha selezionato una serie di controlli
costituiti da linee cellulari da utilizzare come
controlli qualitativi nelle fasi di estrazione e
retrotrascrizione nell’ambito del saggio di rilevamento di BCR-ABL mediante Real Time PCR.
Descrizione
Numero d’ordine
High, Low and Negative BCR-ABL
Mbcr (p210) Controls
504CLCK01
High, Low and Negative BCR-ABL
mbcr (p190) Controls
504CLCK02
High BCR-ABL Mbcr (p210) Control
504PCCL01
Low BCR-ABL Mbcr (p210) Control
504PCCL03
High BCR-ABL mbcr (p190) Control
504PCCL02
Low BCR-ABL mbcr (p190) Control
504PCCL04
Negative Control for BCR-ABL
mbcr (p190) & Mbcr (p210)
504PCCL05
Copyright 2009, Ipsogen MutaQuant è un marchio registrato Ipsogen.
I nostri prodotti e le nostre tecnologie sono coperti da brevetti.
Per maggiori informazioni visitare la pagina web:
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p/n 98089-55 Rev. 5 - 07/09 - © Copyright 2008, Ipsogen. FusionQuant® is a registered trademark of Ipsogen
Perchè scegliere i kit FusionQuant ®?
• Misurazione sensibile e quantitativa dei trascritti
di fusione
• Compatibilità su molti strumenti
• Reagenti conformi all’ISO 13485:2003
• Soluzioni prediluite pronte all’uso
• Ridotti rischi di contaminazione
• Standard validati per i trascritti di fusione e
per il gene di controllo
• Procedure standardizzate di RQ-PCR dalla
“Europe Against Cancer”
• Conformità alle linee guida internazionali