REALQUALITY RQ-BCR-ABL p210 STANDARD

REALQUALITY
REALQUALITY RQ-BCR-ABL p210 STANDARD
Cod. RQ-54-ST
Standard a singolo plasmide per la quantificazione dei trascritti
BCR-ABL p210 (M-bcr), ABL e GUSB
Calibrato con IRMM ERM-AD623 BCR-ABL1 (materiale di riferimento plasmidico certificato)
Conforme alle Linee Guida Europe Against Cancer (EAC)
INTRODUZIONE
Il riarrangiamento cromosomico noto come cromosoma Philadelphia (Ph) deriva dalla traslocazione
t(9;22)(q34;q11) ed è un marker presente in più del 95% dei casi di Leucemia Mieloide Cronica e
riscontrabile anche nel 10-25% dei pazienti affetti da Leucemia Linfoblastica Acuta in cui rappresenta un
fattore prognostico negativo, sia nell’adulto che nel bambino.
A livello molecolare la traslocazione giustappone il protoncogene c-ABL (cromosoma 9), ad una regione
specifica del gene bcr denominata major breakpoint cluster region (M-bcr) (cromosoma 22).
Il gene di fusione BCR-ABL viene trascritto in un mRNA ibrido che viene tradotto in una proteina di fusione
BCR-ABL
(p210
) di 210 kDa che acquisisce attività trasformante stimolando l’incontrollata proliferazione
cellulare.
L’amplificazione parallela di una regione del gene housekeeping ABL o in alternativa con GUSB
(glucuronidase beta gene) costituisce un controllo di integrità del campione di partenza e di avvenuta
retrotrascrizione. La costruzione di una curva standard per BCR-ABL p210 e, parallelamente, per ABL o
GUSB consente la quantificazione assoluta del numero di trascritti BCR-ABL p210 presenti nel campione in
esame, normalizzato rispetto al numero di trascritti del gene housekeeping.
Questa determinazione fornisce utili informazioni per la diagnosi, la prognosi ed il monitoraggio della Malattia
minima Residua in pazienti affetti da Leucemia Mieloide Cronica o Leucemia Linfoblastica Acuta.
DESCRIZIONE DEL PRODOTTO
Nel kit REALQUALITY RQ-BCR-ABL p210 STANDARD, viene fornito un unico standard plasmidico per la
quantificazione dei trascritti:
- BCR-ABL p210 b2a2 o b3a2 (M-bcr),
- ABL,
- GUSB (glucuronidase beta gene).
La costruzione di una curva standard per BCR-ABL p210 e per il gene housekeeping ABL, o in alternativa
per GUSB, consente la quantificazione assoluta del numero di trascritti M-bcr presenti nel campione in
esame.
Lo standard è costituito da 5 punti di calibrazione di un unico DNA plasmidico a doppio filamento contenente
3 specifici frammenti di cDNA provenienti dal trascritto BCR-ABL p210, ABL e GUSB. Il DNA plasmidico
contenuto nello standard non costituisce nessun pericolo per l’operatore.
Ciascun punto dello standard, accuratamente quantificato, viene fornito in una soluzione pronta all’uso.
La corretta quantificazione del kit REALQUALITY RQ-BCR-ABL p210 STANDARD è stata verificata
mediante l’utilizzo di ERM-AD623 (IRMM), materiale di riferimento costituito da 6 soluzioni di plasmidi a titolo
noto e certificato per il numero di copie per specifico frammento di DNA.
Il kit REALQUALITY RQ-BCR-ABL p210 STANDARD è da utilizzarsi in associazione al dispositivo
REALQUALITY RQ-BCR-ABL p210 One-Step (fare riferimento alla sezione INFORMAZIONI PER GLI
ORDINI).
RQ-BCR-ABL_p210_STD_techleaf_i20160405.doc
AB ANALITICA srl
Via Svizzera 16 – 35127 PADOVA (ITALY) tel. +39 049 761698 - Fax +39 049 8709510
e-mail: [email protected]
www. abanalitica.it
REALQUALITY
CARATTERISTICHE TECNICHE
Numero di test: il volume fornito è sufficiente per effettuare fino a 10 curve standard. Si suggerisce di
amplificare in duplicato ciascun punto dello standard.
Stabilità: 12 mesi a -30°C/-20°C
Curva Standard BCR-ABL p210/ABL/GUSB: Da 100 a 1.000.000 copie/reazione*
*L’utilizzo dello standard REALQUALITY RQ-BCR-ABL p210 STANDARD consente direttamente la quantificazione dei
campioni a cDNA senza ulteriori elaborazioni del dato (EUTOS – European Treatment and Outcome Study for CML –
Version 4 August 2014)
CONTENUTO DEL KIT
ETICHETTA
COLORE
TAPPO
CONCENTRAZIONE
VOLUME
STANDARD 5
5
10 copie/µL
BLU
1.000.000 copie/rx
2 x 55 µL
STANDARD 4
4
10 copie/µL
ROSSO
100.000 copie/rx
2 x 55 µL
STANDARD 3
3
10 copie/µL
VIOLA
10.000 copie/rx
2 x 55 µL
10 copie/µL
BCR-ABL p210/ABL/GUSB
STANDARD 2
2
10 copie/µL
VERDE
1.000 copie/rx
2 x 55 µL
10 copie/µL
BCR-ABL p210/ABL/GUSB
STANDARD 1
10 copie/µL
GIALLO
100 copie/rx
2 x 55 µL
DESCRIZIONE
5
10 copie/µL
BCR-ABL p210/ABL/GUSB
4
10 copie/µL
BCR-ABL p210/ABL/GUSB
3
10 copie/µL
BCR-ABL p210/ABL/GUSB
2
MODALITA’ DI UTILIZZO
Per ottenere una curva standard nel range 100-1.000.000 copie/reazione per BCR-ABL p210 e per il gene di
controllo (ABL o GUSB), utilizzare 5 µL a reazione di ciascun punto dello standard.
Si raccomanda di vortexare e centrifugare ciascuna vial prima dell’uso.
Ciascuna aliquota dello standard può subire un numero massimo di 3 cicli di congelamento e
scongelamento: ulteriori cicli compromettono la stabilità del prodotto e ne possono alterare la
concentrazione.
Si raccomanda di congelare lo standard dopo ciascun utilizzo.
INFORMAZIONI PER GLI ORDINI
Cod
Prodotto
Formato
REALQUALITY RQ-BCR-ABL p210 STANDARD
RQ-54-ST
Standard a singolo plasmide per la quantificazione dei trascritti
BCR-ABL p210 (M-bcr), ABL e GUSB
5 × 110 µL
Abbinato al kit:
Cod
Prodotto
Formato
RQ-105-48
REALQUALITY RQ-BCR-ABL p210 One-Step
48 test
RQ-105-96
Kit per l’identificazione e la quantificazione della traslocazione
t(9;22)(q34;q11), nella variante p210, mediante one-step RT-PCR Real time
96 test
BCR-ABL p210 REFERENCE
05-64-06
RNA di riferimento per saggi molecolari di identificazione e/o quantificazione
del trascritto BCR-ABL p210
4 × 15 µL
RQ-BCR-ABL_p210_STD_techleaf_i20160405.doc
AB ANALITICA srl
Via Svizzera 16 – 35127 PADOVA (ITALY) tel. +39 049 761698 - Fax +39 049 8709510
e-mail: [email protected]
www. abanalitica.it