APOLIPOPROTEINA B-Turbidimetrico - intermedical
Transcript
APOLIPOPROTEINA B-Turbidimetrico - intermedical
APO B - TURBI APOLIPOPROTEINA B-Turbidimetrico Determinazione quantitativa dell’ Apolipoproteina B (APO B) IVD -Spettrofotometro o fotometro termostatabile a 37°C con filtro a 340 nm. Conservare a 2-8°C CAMPIONI Siero fresco o plasma EDTA o eparinizzato. Stabile 2 settimane a 28°C o 3 mesi a –20°C. I campioni con presenza di fibrina devono essere centrifugati prima dell’uso.Non usare campioni fortemente emolizzati o lipemici PRINCIPIO DEL METODO Il kit Apolipoproteina B è un test quantitativo turbidimetrico per la misura della APO B nel siero o plasma umano. Anticorpi anti-APO B mescolati con campioni contenenti APO B formano dei complessi insolubili, i quali causano una variazione di assorbanza,che dipende dalla concentrazione di APO B presente nel campione del paziente,che può essere quantificata se comparata con un calibratore a concentrazione nota di APO B. PROCEDIMENTO 1.Portare il reagente di lavoro e il fotometro (portacuvette) a 37°C. 2. Condizioni del dosaggio: Lungh.d’onda: 340 nm Temperatura: 37ºC Cammino ottico: 1 cm 3. Azzerare lo strumento con acqua distillata. 4. Pipettare in cuvetta: SIGNIFICATO CLINICO L’ APO B è la principale apolipoproteina strutturale associata con le proteine VLDL, LDL e chilomicroni.La sua funzione principale è il trasporto delle lipoproteine ricche di trigliceridi dal fegato, dall’intestino e da altri tessuti. L’ APO B esiste in due forme: APO B-100 e APO B-48. APO B-100, il più importante componente delle LDL, è sintetizzato nel fegato e secreto nel plasma come parte delle VLDL. APO B-48 , il più importante componente dei chilomicroni, è sintetizzato nell’intestino. Diversi studi hanno dimostrato che, in persone con malattie coronariche (CHD), cambiano le concentrazioni seriche di Apo A1 e Apo B in maniera similare con quelle rispettivamente di HDL e LDL, cosi che le concentrazioni di Apo B e Apo A1, sono indicatori migliori della CHD che le concentrazioni di colesterolo HDL e LDL. La iperbetalipoproteinemia è caratterizzata da un incremento della concentrazione della Apo B-100, con normale o moderato incremento di concentrazione di LDL colesterolo.Il rapporto di LDL colesterolo e Apo B-100 è comunque ridotto in questi pazienti.Un difetto nella struttura della Apo B o nelle lipoproteine contenenti Apo B, ostacola la secrezione di lipoproteine epatiche e intestinali ricche di trigliceridi, questo disordine si ha nelle abetalipoproteinemie o in ipobetalipoproteinemie omozigoti. R1 ( µL) Calibr. o Campione (µL) 800 7 5. Mescolare e leggere le assorbanze (A1) doppo l’aggiunta del campione. 6. Immediatamente pipettare nella cuvetta: R2 ( µL) 200 N.B. Sono disponibili su richiesta le applicazioni per i più comuni analizzatori automatici REAGENTI Diluente (R1) Tampone Tris 20 mmol/L, pH 8.3,. Sodio azide 0.95 g/L. Antisiero (R2) Siero di capra,anticorpi anti-APO B umane, tris 50 mmol/L, pH 7.5. Sodio azide 0.95 g/L. Optional APO cal. Ref: TU-19 CALCOLO Calcolare la differenze di assorbanze di ciascun punto della curva di calibrazione e riportare su una curva i valori ottenuti contro le concentrazioni di ciascuna diluizione del cal. La concentrazione di APO A1 nel campione si ottiene interpolando i valori delle assorbanze sulla curva. CALIBRAZIONE Il dosaggio e il valore del calibratore sono stati standardizzati contro il Certfied Reference Material WHO/IFCC SP1-01 (CDC,USA).Si consiglia l’uso del calibratore APO cal. per la calibrazione.I reagenti dovrebbero essere ricalibrati ogni tre settimane, quando si cambiano lotto sullo strumento CONTROLLO QUALITA’ Si consiglia di utilizzare Sieri di Controllo per monitorare le performance dei procedimenti dei dosaggi manuali e automatici.E’ disponibile il siero di controllo per APO A1/APO B (Ref.: TU-20). Ogni laboratorio deve stabilire il proprio schema di Controllo Qualità e adottare azioni correttive nel caso che i controlli non danno risultati accettabili. PREPARAZIONE Reagenti: pronti all’uso. Curva di calibrazione : Preparare le seguenti diluizioni dell’APO cal. In soluzione fisiologica. Moltiplicare la conc. Del calibratore per il corrispondente fattore come nella tabella seguente per ottenere la concentrazione di ciascuna diluizione. Diluizione calibratore Calibratore (µL) NaCl 9 g/L (µL) Fattore 1 -100 0 2 10 90 0.1 3 25 75 0.25 4 50 50 0.5 5 75 25 0.75 VALORI DI RIFERIMENTO Valori normali : 69 – 105 mg/dL. E’ opportuno che ogni laboratorio stabilisca il proprio range di normalità. 6 100 -1.0 CARATTERISTICHE DEL METODO 1. Limite di linearità: fino a 200 mg/dL,alle condizioni descritte nel procedimento.Campioni con conc. più elevate devono essere diluiti 1/5 con NaCl 9 g/L e ridosati.Il limite di linearità dipende dal rapporto campione/reagente,e dallo strumento usato. Tale limite sarà più alto diminuendo il volume del campione,anche se la sensibilità del test diminuirà proporzionalmente. 2. Limite di detenzione:valori inferiori a 3.02 mg/dL danno risultati non-riproducibili. CONSERVAZIONE E STABILITA’ Tutti i componenti del kit sono stabili fino alla data di scadenza indicata sull’etichetta se conservati ben chiusi a 2-8°C e se si evitano contaminazioni durante l’uso.Non utilizzare i reagenti oltre la data di scadenza. Deterioramento dei reagenti: presenza di particelle e torbidità. 3. MATERIALE ADDIZIONALE -Bagno termostatico a 37°c. Precisione: Il reagente è stato testato per 20 giorni, usando tre livelli di siero in stubi basati su EP5 (NCCLS). 1 Rev 0 Ed. 2010/04 Intermedical srl. Via A:Genovesi,13– 80010 Villaricca (NA) Tel. +39 081 3302705 Fax +39 081 3301453 E-Mail: [email protected] Sito: www.intermedical-italy.it EP5 Totale Within Run Between Run Between Day 23.92 mg/dl 7.4% 2.0% 3.7% 6.1% CV (%) 59.08 mg/dl 4.3% 1.4% 2.2% 3.4% 119.07 mg/dl 3.6% 1.0% 1.8% 3.0% 4. Accuratezza I risultati ottenuti usando questo reagente (y)sono stati comparati con quelli ottenuti un metodo immunoturbidimetrico Daiichi. 48 campioni con livelli di APO B compresi tra 50 e 200 µg/dL sono stati testati. Il coefficiente di correlazione (r) è 0.982 e la retta di correlazione è y= 0.996x +5.112. Le caratteristiche del metodo dipendono dall’analizzatore usato. INTERFERENZE Bilirubina ( fino a 40 mg/dL), emoglobina (fino a 20 g/L), e lipemia (fino a 5 g/L),fattore reumatoide (800 IU/ml) non danno interferenze. Altre sostanze possono interferire. NOTE La diagnosi clinica non deve essere fatta con i risultati di un unico esame,ma devono integrarsi entrambi i dati clinici e quelli di laboratorio. BIBLIOGRAFIA 1. Clin.Guide to Lab.Tests,Edited by NW Tietz w b Saunders Co.,Philadelphia,483,1983. 2. Mahley RW et al. J Lipids Res 1984;25:1277-1294. 3. Brown MS et al. Science 1986 ;232 ; 34-47. 4. Freedman DS et al. N Engl J Med 1986; 315:721-726. 5. Sakurabayashi I et al Clinica Chimica Acta 2001; 312:87-95. 6. Young DS.Effects of disease on clinical laboratory test, 3th ed. AACC Press,1997. 6. Friedman and Young.Effects of disease on clinical laboratory tests,3rd ed.AACC Press,1997. CONFEZIONE APOLIPOPROTEINA B Turbidimetrico Ref.: TU-18 Cont : 1 x 40 mL R1 Diluente : 1 x 10 mL R2 Antisiero SIMBOLI GRAFICI ADOTTATI Numero di catalogo Consultare le istruzioni dell’uso Numero di lotto Conservare a 2-8°C Cont Contenuto Fabbricante Utilizzare entro CAL Dispositivo medico-diagnostico in vitro Calibratore 2 Rev 0 Ed. 2010/04 Intermedical srl. Via A:Genovesi,13– 80010 Villaricca (NA) Tel. +39 081 3302705 Fax +39 081 3301453 E-Mail: [email protected] Sito: www.intermedical-italy.it