Software Analyst® 1.6 con Componenti per Strumenti Serie

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Software Analyst® 1.6 con Componenti per
Strumenti Serie 6500
Tecnologia SelexION™ Guida utente
Data di Pubblicazione: Luglio 2012
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Sommario
Capitolo 1 Introduzione alla Tecnologia DMS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
La Tecnologia DMS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .5
Benefici della Tecnologia DMS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .6
Ruolo dei Modificatori nella Tecnologia DMS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .6
Regolazione dello Strumento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .7
Modalità di Funzionamento DMS Off . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .7
Capitolo 2 Utilizzo del Dispositivo SelexION™ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9
Installazione del Dispositivo SelexION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .11
Rimozione del Dispositivo SelexION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .14
Pulire e Allineare gli Elettrodi della Cella di Mobilità Ionica . . . . . . . . . . . . . . . . .16
Pulire le Superfici della Tecnologia SelexION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .18
Capitolo 3 Ottimizzazione dei Parametri DMS. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19
Obiettivi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .19
Ottimizzazione dei Parametri DMS in Manual Tuning . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .19
Obiettivi della sezione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .19
Creazione di un Metodo di Acquisizione e Ottimizzazione dei
Parametri DMS senza Modificatore . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20
Creazione di un Metodo di Acquisizione con un Modificatore e
Ottimizzazione dei Parametri DMS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .24
Controllo Parametri del Modificatore in Tempo Reale . . . . . . . . . . . . . . . . . . .28
Eliminare il Modificatore . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .28
Stato Modifer Purge . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .32
Ottimizzazione dei Parametri DMS attraverso Compound Optimization . . . . . . .32
Obiettivi della sezione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .33
Ottimizzazione dei Parametri DMS esclusivamente con Ottimizzazione di
Tipo Infusione-T . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .33
Ottimizzazione Parametri Composto e DMS con il Tipo di Ottimizzazione
Infusione-T . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37
Ottimizzazione COV attraverso Iniezione Flusso (FIA) . . . . . . . . . . . . . . . . . .39
Ottimizzazione dello Strumento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .41
Capitolo 4 Creare Metodi di Acquisizione con Parametri DMS . . . . . . . . . . . . . 43
Obiettivi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .43
Creare un Metodo di Acquisizione con Parametri DMS Fissati nella
Modalità Acquire . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .43
Separare Composti Isobarici Utilizzando la Tecnologia SelexION™ . . . . . . . . .45
Differenziare i Composti Isobarici nei Metodi di Acquisizione con Algoritmo
MRM e Scheduled MRM™ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .46
Utilizzo di Parametri DMS in un Metodo di Acquisizione con Algoritmo
Scheduled MRM™ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .46
Creare un Metodo di Acquisizione per l'Incremento Graduale di COV nella
Modalità di Acquisizione Batch . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .48
Creazione e Invio di Batch per l'Acquisizione dei Dati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .50
Calcolo del Consumo di Modificatore . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .50
Software Analyst® 1.6 con Componenti per Strumenti Serie 6500
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Sommario
Capitolo 5 Analisi ed Elaborazione dei Dati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 53
Obiettivi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .53
Analisi Quantitativa dei Dati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .53
Visualizzare i Parametri DMS Utilizzati per l'Acquisizione in File Information
mentre si Visualizzano i File Dati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .53
Creare Metodi Quantitativi e Generare Tabelle dei Risultati . . . . . . . . . . . . . .54
Quantificare i Composti Isobarici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .54
Riportare dati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .54
Analisi Qualitativa dei Dati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .54
Riesame di un File Dati Acquisito con il Parametro COV Incrementato
Gradualmente . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .54
Visualizzare un Contour Plot per i Dati Acquisiti con il Parametro COV
Incrementato Gradualmente . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .56
Visualizzare i Parametri DMS Incrementati Gradualmente in File Information
mentre si Visualizzano i File Dati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .58
Capitolo 6 Utilizzo dei Parametri DMS in IDA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 61
Obiettivi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .61
Creazione di un Metodo di Acquisizione IDA per incrementare gradualmente
COV durante l'Acquisizione Batch . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .61
Creazione e Invio di Batch per l'Acquisizione dei Dati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .64
Visualizzazione Dati IDA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .64
Appendice A Informazioni supplementari . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .67
Descrizione dei Parametri DMS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .67
Stato dei Parametri DMS nella Modalità DMS Off . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .69
Valori dei Parametri DMS e della Sorgente Utilizzati Durante l'Eliminazione
del Modificatore . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .70
Valori dei Parametri DMS e della Sorgente quando l'Eliminazione
del Modificatore viene Terminata o Interrotta . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .70
Campione Infusione-T nel flusso LC . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .71
Riempimento del Contenitore del Modificatore . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .71
Appendice B Risoluzione dei problemi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .73
Problema 1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .73
Soluzione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .73
Problema 2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .73
Soluzione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .73
Problema 3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .73
Soluzione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .74
Indice. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 75
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1
Introduzione alla Tecnologia DMS
Questa sezione descrive la tecnologia di Spettrometria a Mobilità Differenziale (DMS) e i suoi
benefici e il ruolo dei modificatori. Viene discussa anche la modalità di funzionamento DMS Off.
La Tecnologia DMS
DMS è un metodo per separare gli ioni basato sulla differenza di mobilità degli ioni e campi a
bassa elettricità in gas a pressione atmosferica o prossima a questa. DMS è una variante di IMS
(spettrometria di mobilità ionica).
Nella tecnologia DMS, le Tensioni di Separazione (SV) vengono applicate al canale di trasporto
ionico, perpendicolarmente al flusso del gas di trasporto, come mostrato in Figura 1-1. A causa
della differenza tra i coefficienti ionici di mobilità ad alto/basso campo elettrico, gli ioni migrano
verso le pareti lasciando la traiettoria iniziale. La loro traiettoria viene corretta da una tensione
CC di contro-bilanciamento, chiamata Tensione di Compensazione (COV).
Figura 1-1
Tecnologia DMS
Invece di registrare la durata del passaggio nel canale di trasporto ionico per uno ione, viene
registrata la COV necessaria per correggere la traiettoria di un preciso ione per un intervallo di
ampiezze SV. La COV può essere scansionata per far passare ioni in serie secondo la loro
mobilità differenziale, o impostata a un valore fissato per far passare esclusivamente le specie
ioniche con una precisa mobilità differenziale.
Alcune combinazioni dei campi SV e COV permettono allo ione bersaglio di passare attraverso la
zona analitica del dispositivo SelexION™ senza entrare in collisione con gli elettrodi. Quindi,
scansionando o fissando SV e COV, il dispositivo SelexION può funzionare nelle seguenti
modalità:
5 di 76
•
È possibile selezionare una precisa combinazione di SV e COV che produce il
filtraggio continuo di particolari specie ioniche.
•
Fissando SV e scansionando COV, si può registrare uno spettro DMS lineare.
Benefici della Tecnologia DMS
•
Aumenta la qualità dell'analisi di massa e l'accuratezza quantitativa riducendo il
rumore chimico e separando anticipatamente gli ioni di massa simile.
•
Fornisce tempi rapidi di passaggio degli ioni e propone un funzionamento
trasparente (simile a quando il dispositivo SelexION™ non sia installato nel sistema)
che permette la trasmissione di tutti gli ioni, senza discriminazione, quando SV e
COV sono impostate a zero.
•
Supporta trasmissioni contemporanee di ioni di entrambe le polarità e separa ogni
ione in base alla sua costante di mobilità differenziale.
Ruolo dei Modificatori nella Tecnologia DMS
I modificatori possono essere aggiunti al gas di trasporto degli ioni attraverso il dispositivo
SelexION™ per aumentare la capacità di picco e la potenza di separazione di questo dispositivo.
La presenza di questi modificatori, solitamente comuni solventi cromatografici (per esempio, 2propanolo, acetonitrile o metanolo), influenza la mobilità degli ioni in questo dispositivo. Gli ioni
che entrano nella cella di mobilità formano dei complessi con le molecole di modificatore che ne
alterano le caratteristiche di mobilità. I complessi possono formarsi in condizioni di basso campo
elettrico ma si disgregano nuovamente con campi ad alta elettricità, in base al modello dinamico
cluster-decluster. L'effetto netto della formazione di complessi è nel fatto che vengono
amplificate le differenze tra le mobilità alto/basso campo elettrico, producendo una potenza di
separazione superiore e una aumentata capacità di picco. Inoltre, dal momento che la
formazione di complessi dipende dall'interazione specifica tra uno ione analita e un modificatore
selezionato dall'utente, l'utilizzo dei modificatori fornisce una dimensione ulteriore di separazione
agli approcci tradizionali della cromatografia e della spettrometria di massa. Ulteriori informazioni
sugli effetti dei modificatori sono disponibili nel seguente articolo: B.B. Schneider, T.R. Covey,
S.L. Coy, E.V. Krylov, and E.G. Nazarov, Anal. Chem. 2010, 82, 1867-1880.
Dal momento che il modificatore coinvolge chimica ionica a fase gassosa, alcuni comportamenti
generali possono essere previsti. Nella modalità ione positivo , se il modificatore ha una
maggiore affinità protonica rispetto allo ione analita, la carica può essere strappata dall'analita
producendo un segnale più basso ma non necessariamente un segnale-rumore più basso. In
alternativa, se il modificatore ha una acidità di fase gassosa maggiore rispetto all'analita, la
corrente dello ione negativo verrà ridotta. Se si conoscono le caratteristiche dell'analita e del
modificatore può favorire la scelta del modificatore adeguato. Utilizzare il 2-propanolo come
modificatore è un buon punto di inizio per studiare gli effetti dei modificatori su una separazione
DMS dal momento che si osserva un aumento del potere di separazione per una ampia quantità
di composti.
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Regolazione dello Strumento
Prima di installare il dispositivo SelexION™ sullo spettrometro di massa, assicurarsi che sia
messo a punto e calibrato.
Modalità di Funzionamento DMS Off
Quando si installa il dispositivo SelexION™ sullo strumento, in alcune situazioni, gli utenti
possono avere la necessità di acquisire dati di spettro senza utilizzare il dispositivo SelexION.
Invece di disinstallare il dispositivo SelexION dal sistema, gli utenti possono utilizzare la modalità
di funzionamento DMS Off per acquisire dati. Il software Analyst® fornisce una modalità di
funzionamento DMS Off che consente all'utente di lavorare in un ambiente simile a quello
precedente all'installazione del dispositivo SelexION sullo strumento. Tuttavia, nella modalità
DMS Off, le intensità del segnale saranno notevolmente inferiori se paragonate a quelle dei dati
acquisiti rimuovendo il dispositivo SelexION dallo strumento.
Per lavorare in modalità di funzionamento DMS Off, selezionare la casella di controllo DMS Off
disponibile nella scheda MS nella finestra del metodo Acquire o sulla scheda MSnella finestra
dell'Editor Tune Method.
Figura 1-2
Casella di controllo DMS Off nell'Editor Tune Method
Nella modalità di funzionamento DMS Off, avvengono le seguenti modifiche:
•
La maggior parte dei parametri DMS non sono più disponibili. Fare riferimento a
Tabella A-2 a pagina 69. Solamente il parametro DMS Temperature (DT) è visibile
nella modalità DMS Off e lo si può ottimizzare in questa modalità al fine di ottenere la
massima sensibilità.
•
I parametri DMS (SV, COV e DMO) vengono rimossi dall'elenco dei parametri nella
finestra Ramp Parameter Settings.
7 di 76
•
Il periodo di pausa tra gli intervalli di massa è di 5 ms.
8 di 76
2
Utilizzo del Dispositivo SelexION™
Uno strumento della serie 5500 o 6500 con tecnologia SelexION™ comprende un modulo di
controllo DSE installato e elettronica associata, insieme a un dispositivo interfaccia cliente
installato.
1
2
Figura 2-1
Sistema AB SCIEX QTRAP® 6500 con tecnologia SelexION
Elemento Descrizione
Commenti
1
Modulo di controllo con
vassoio laterale
Aggiornamento FSE
2
Sorgente Ionica IonDrive™
Turbo V
Collegata al dispositivo cliente SelexION installato
Nota: La sorgente ionica NanoSpray® può essere installata su uno strumento della
serie 5500 o 6500 dotato di tecnologia SelexION, tuttavia non sarà possibile utilizzare
modificatori. Si potranno creare metodi di acquisizione che comprendono i flussi e le
informazioni del modificatore, ma quando verranno eseguiti la pompa del modificatore
sarà disattivata.
9 di 76
Il dispositivo SelexION comprende le seguenti componenti cliente sostituibili:
•
Cella mobilità ionica
•
Anello adattatore
•
Piastra Curtain SelexION.
1
3
4
5
6
2
Figura 2-2
Tecnologia SelexION
Commenti
1
Alloggiamento
dell'interfaccia di vuoto
Aggiornamento FSE
2
Gruppo scarico duplice
Aggiornamento FSE
3
Separatore di vuoto
ceramico
Aggiornamento FSE
4
Installabile dal cliente
5
Anello adattatore
6
Piastra Curtain
SelexION
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Installazione del Dispositivo SelexION
Il dispositivo SelexION può essere facilmente installato sullo spettrometro di massa.
Materiali richiesti
• Guanti senza polvere
ATTENZIONE!Pericolo - Superfici Calde: Alcune superfici dell'interfaccia di vuoto
e della sorgente ionica diventano molto calde durante il funzionamento e
dovrebbero raffreddarsi per almeno 10 minuti prima di una qualsiasi attività di
manutenzione. Con la sorgente ionica IonDrive™ si deve lasciar raffreddare la
sorgente ionica per almeno 90 minuti prima di iniziare qualsiasi attività di
manutenzione.
Attenzione:Rischio di Danni Allo Strumento: Assicurarsi che le componenti
dell'interfaccia di vuoto siano tenute pulite e non abbiano contaminazione chimica né
polvere. Indossare sempre guanti senza polvere per evitare contaminazioni quando si
maneggiano componenti dell'interfaccia di vuoto.
1. Completare le scansioni in corso o fare clic su Acquire > Abort Sample per
interromperle.
2. Arrestare il flusso del campione verso lo spettrometro di massa.
3. Nel software Analyst®, disattivare il profilo hardware attivo.
Attenzione:Rischio di infortunio dell'operatore: Con la sorgente ionica
IonDrive Turbo V, toccare esclusivamente la copertura di plastica blu. Non la
toccare torretta né lo scarico nella parte inferiore della sorgente.
4. Ruotare i due fermi della sorgente ionica versi l'alto in posizione aperta (ore 12),
spingere delicatamente la sorgente ionica fuori dall'anello adattatore SelexION.
5. Rimuovere il separatore di interfaccia estraendolo direttamente dall'interfaccia di
vuoto. La piastra è mantenuta da tre cricchetti di ritegno montati sul separatore di
vuoto.
Attenzione:Rischio di Danni Allo Strumento: Maneggiare con cura le
componenti dell'interfaccia di vuoto. Sono molto fragili e costosi.
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6. Posizionare la cella di mobilità ionica SelexION sul separatore di vuoto SelexION,
assicurandosi che i collegamenti sulla cella di mobilità ionica siano allineati con il
separatore di vuoto, quindi serrare le viti.
1
2
3
2
Figura 2-3
Cella mobilità ionica SelexION
1
2
Vite
3
Elettrodi
Nota: Il sigillo ceramico sulla cella di mobilità ionica deve essere tenuto
lontano da contaminazione e graffi.
7. Posizionare l'anello adattatore SelexION nell'alloggiamento dell'interfaccia di vuoto.
Assicurarsi che le due viti sull'anello adattatore siano allineate negli alloggiamenti
dell'interfaccia di vuoto, quindi serrare le viti.
Nota: L'anello adattatore ha un perno di posizionamento sul fondo che
preme su una piastra caricata a molla nell'alloggiamento dello scarico
duplice. Potrebbe rendersi necessario posizionare il perno di
posizionamento nell'alloggiamento dello scarico duplice, inclinare l'anello
adattatore verso di sé, quindi inclinare la parte superiore dell'anello verso lo
strumento.
12 di 76
1
2
3
2
3
4
5
7
6
Figura 2-4
Elemento
Anello adattatore SelexION e alloggiamento dello scarico duplice
Descrizione
1
Anello adattatore
2
Vite
3
Alloggiamenti (per i perni guida della
sorgente ionica)
4
Connettore dell'interfaccia
5
Perno di centraggio
6
Scarico duplice
7
Piastra caricata a molla
8. Allineare i perni della piastra curtain SelexION con i fori nella cella di mobilità ionica
e poi premere la piastra curtain SelexION sulla cella di mobilità ionica.
9. Assicurarsi che i due fermi della sorgente sulla sorgente ionica siano diretti verso
l'alto in posizione aperta (ore 12).
10. Posizionare la sorgente ionica sull'anello adattatore SelexION. Assicurarsi che i
perni guida sulla sorgente ionica siano allineati con gli alloggiamenti nell'anello
adattatore, ruotare quindi i fermi della sorgente verso il basso nella posizione di
blocco (ore 6:30) per fissare la sorgente ionica al suo posto. Fare riferimento a
Figura 2-4.
11. Accendere la tecnologia SelexION.
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L'interruttore è situato sulla parte posteriore del modulo di controllo SelexION.
Nota: La mancata disattivazione del profilo hardware attivo prima di
accendere o spegnere il modulo di controllo SelexION (per aggiungere o
rimuovere temporaneamente la tecnologia SelexION dal sistema), può
provocare uno stato di instabilità dello spettrometro di massa e la
conseguente perdita di controllo nel software Analyst. Qualora il profilo
hardware non fosse disattivato e lo spettrometro di massa divenisse in
questo modo instabile, il controllo può essere recuperato rimuovendo e
riposizionando la sorgente ionica, o spegnendo e riaccendendo lo
spettrometro di massa e il modulo di controllo e riattivando il profilo
hardware.
12. Svuotare la pompa del modificatore SelexION prima di eseguire qualsiasi
esperimento SelexION che faccia uso di modificatori. Fare riferimento a Eliminare il
Modificatore a pagina 28.
ATTENZIONE!Pericolo di Esposizione ad Agenti Chimici Tossici: Porre attenzione
durante il riempimento dei contenitori del modificatore con prodotti chimici
caustici pericolosi o tossici.
.
Attenzione:Non riempire il contenitore del modificatore quando si trova nel vassoio
laterale. Scollegare la linea del liquido dal contenitore, riempire il contenitore in un luogo
sicuro e reinstallare il contenitore e la linea del liquido nel vassoio laterale.
Rimozione del Dispositivo SelexION
Rimuovere il dispositivo SelexION e installare la piastra curtain standard per ripristinare il
funzionamento standard degli strumenti serie 5500 o 6500.
Materiali richiesti
• Guanti senza polvere
manutenzione.
1. Completare le scansioni in corso o fare clic su Acquire > Abort Sample per
interromperle.
2. Arrestare il flusso del campione verso lo spettrometro di massa.
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3. Nel software Analyst, disattivare il profilo hardware attivo.
4. Spegnere la tecnologia SelexION.
L'interruttore è situato sulla parte posteriore del modulo di controllo SelexION.
Nota: La mancata disattivazione del profilo hardware attivo prima di
accendere o spegnere il modulo di controllo SelexION (per aggiungere o
rimuovere temporaneamente la tecnologia SelexION dal sistema), può
provocare uno stato di instabilità dello spettrometro di massa e la
conseguente perdita di controllo nel software Analyst. Qualora il profilo
hardware non fosse disattivato e lo spettrometro di massa divenisse in
questo modo instabile, il controllo può essere recuperato rimuovendo e
riposizionando la sorgente ionica, o spegnendo e riaccendendo lo
spettrometro di massa e il modulo di controllo e riattivando il profilo
hardware.
5. Rimuovere l'anello adattatore allentando le viti e spingendo l'anello adattatore fuori
dall'interfaccia di vuoto.
Nota: L'anello adattatore ha un perno di posizionamento sul fondo che
preme su una piastra caricata a molla nell'alloggiamento dello scarico
duplice. Potrebbe rendersi necessario inclinare la parte superiore dell'anello
adattatore verso l'alto per rimuoverlo dall'interfaccia di vuoto. Fare
riferimento a Figura 2-4.
6. Rimuovere la piastra curtain SelexION estraendola direttamente dalla cella di
mobilità ionica.
Attenzione:Rischio di Danni Allo Strumento: I componenti dell'interfaccia di
vuoto sono molto fragili e costosi. Maneggiarli con cura.
7. Rimuovere la cella di mobilità ionica allentando le viti e spingendo la cella di mobilità
ionica fuori dal separatore di vuoto. Fare riferimento a Figura 2-3.
8. Installare la piastra curtain standard.
Nota: Non è necessario rimuovere il separatore di vuoto SelexION o il
gruppo di scarico duplice. La sorgente ionica IonDrive Turbo V funziona con
il separatore di vuoto SelexION e utilizza il foro di scarico del gruppo di
scarico duplice più prossimo all'alloggiamento dell'interfaccia.
9. Assicurarsi che i due fermi della sorgente sull'alloggiamento della sorgente ionica
siano diretti verso l'alto in posizione aperta (ore 12).
10. Posizionare la sorgente ionica sull'interfaccia di vuoto. Assicurarsi che i perni guida
sulla sorgente ionica siano allineati con gli alloggiamenti nell'interfaccia di vuoto,
ruotare quindi i fermi della sorgente verso il basso nella posizione di blocco (ore
6:30) per fissare la sorgente ionica al suo posto.
15 di 76
Pulire e Allineare gli Elettrodi della Cella di
Mobilità Ionica
Pulire e allineare gli elettrodi della cella di mobilità ionica quando si osserva contaminazione sulle
superfici, o quando si verificano ripetutamente errori di scariche ad alta tensione.
Materiali richiesti
• Guanto senza polvere
• Cacciavite a taglio piccolo
• Carta vetrata numero 600
• Soluzione metanolo-acqua 50:50
• Distanziale
manutenzione.
1. Rimuovere la cella di mobilità ionica. Eseguire i passi da 1 a 8 in Rimozione del
Dispositivo SelexION a pagina 14.
16 di 76
2. Utilizzando un cacciavite a taglio piccolo, allentare le viti di regolazione finché gli
elettrodi si muovano liberamente nella cella di mobilità ionica, rimuovere quindi gli
elettrodi dalla cella di mobilità ionica.
2
3
1
4
Figura 2-5
Elemento
Cella mobilità ionica SelexION
Descrizione
Commento
1
–
2
Distanziale
Utilizzato per allineare gli elettrodi
3
Elettrodo
–
4
Regolazione della vite
–
Nota: Se si rimuovono completamente le viti di regolazione dalla cella di
mobilità ionica, assicurarsi che le rondelle curve siano riposizionate nel
verso originale.
3. Utilizzando la carta vetrata numero 600, strofinare leggermente la superficie piatta di
ciascun elettrodo, lavare quindi gli elettrodi con una soluzione metanolo-acqua
50:50.
4. Attendere che gli elettrodi si asciughino, quindi inserirli nella cella di mobilità ionica.
5. Far scorrere il distanziale nello spazio davanti gli elettrodi, utilizzare quindi il
cacciavite a taglio piccolo, allineare gli elettrodi nella cella di mobilità ionica in modo
che il distanziale risulti centrato nella cella di mobilità ionica.
Assicurarsi che il distanziale sia alloggiato tra gli elettrodi, quindi regolare le viti su
ciascun lato della cella di mobilità ionica per centrare gli elettrodi.
6. Posizionare la cella di mobilità ionica SelexION sul separatore di vuoto SelexION e
poi serrare le viti. Fare riferimento a Installazione del Dispositivo SelexION a pagina
11.
17 di 76
Pulire le Superfici della Tecnologia SelexION
Pulire le superfici esterne della tecnologia SelexION dopo un eventuale fuoriuscita di liquido, o
quando divengono sporche.
•
Strofinare le superfici esterne con acqua calda, sapone e un panno morbido.
18 di 76
3
Ottimizzazione dei Parametri DMS
Per ottenere il segnale migliore e la separazione dei composti di interesse bisogna ottimizzare i
parametri DMS. Per maggiori informazioni sui parametri DMS, fare riferimento a Descrizione dei
Parametri DMS a pagina 67.
I parametri DMS possono essere ottimizzati in due modi nella modalità Tune and Calibrate:
•
È possibile iniziare da un metodo di acquisizione esistente che sia stato creato per i
composti da analizzare, con i parametri composto, parametri della sorgente e
velocità di flusso LC già ottimizzati e ottimizzare quindi i parametri DMS.
Oppure
•
È possibile creare un nuovo metodo di acquisizione, ottimizzare i parametri
composto, i parametri della sorgente e la velocità di flusso LC e quindi ottimizzare i
parametri DMS.
Questo capitolo descrive il secondo metodo per l'ottimizzazione dei parametri DMS. Il
primo metodo è un sottoinsieme del secondo metodo descritto in questa sezione.
Obiettivi
In questo capitolo sarà illustrato come:
•
Ottimizzare i parametri DMS con e senza modificatore nella modalità Manual
Tuning.
•
Ottimizzare i parametri DMS attraverso l'ottimizzazione composto.
Ottimizzazione dei Parametri DMS in Manual
Tuning
Obiettivi della sezione
In questa sezione sarà illustrato come:
•
Creare un metodo di acquisizione in modalità Manual Tuning e ottimizzare i
parametri DMS senza modificatore.
•
Eliminare il modificatore.
•
Creare un metodo di acquisizione e ottimizzare i parametri DMS nella modalità
Manual Tuning, con un modificatore selezionato.
19 di 76
Nota: Se si desidera acquisire dati utilizzando un modificatore è necessario creare il
metodo di acquisizione e ottimizzare i parametri DMS con il modificatore selezionato nel
metodo. I parametri DMS Separation Voltage (SV), Compensation Voltage (COV) e
DMS Offset (DMO) sono influenzati dalla scelta di un modificatore; quindi, l'aggiunta o la
modifica del modificatore o della concentrazione del modificatore successiva
all'ottimizzazione dei parametri SV, COV e DMO richiederà una nuova ottimizzazione di
questi parametri.
Prerequisiti
•
Assicurarsi che la tecnologia SelexION™ sia installata sullo spettrometro di massa e
che il modulo di controllo sia acceso.
Nota: Prima che il modulo di controllo SelexION venga acceso o spento (per
aggiungere o rimuovere temporaneamente dal sistema la tecnologia SelexION),
disabilitare il profilo hardware attivo nel software Analyst. Una procedura differente da
quella appena descritta può provocare uno stato di instabilità dello spettrometro di
massa e la conseguente perdita di controllo nel software Analyst. Qualora il profilo
hardware non fosse disattivato e lo spettrometro di massa divenisse in questo modo
instabile, il controllo può essere recuperato rimuovendo e riposizionando la sorgente
ionica, o spegnendo e riaccendendo lo spettrometro di massa e il modulo di controllo e
riattivando il profilo hardware.
Creazione di un Metodo di Acquisizione e Ottimizzazione dei
Parametri DMS senza Modificatore
È possibile ottimizzare i parametri DMS per un composto nella modalità Manual Tuning e salvarli
in un nuovo metodo di acquisizione.
Creare un metodo di acquisizione e ottimizzazione dei parametri DMS senza
modificatore
Con questa procedura si potrà creare un nuovo metodo di acquisizione e ottimizzare i parametri
DMS. In questo scenario non viene utilizzato alcun modificatore.
1. Attivare un profilo hardware che contenga una pompa a siringa. Fare riferimento a
Creazione di Profili Hardware e Progetti nella Guida Introduttiva e nella Guida per
l'Utente - Strumenti Serie 6500.
2. Infusione-T (o infusione separata) del campione nel flusso LC. Fare riferimento a
Campione Infusione-T nel flusso LC a pagina 71.
3. Nella Barra di Navigazione, alla voce Tune and Calibrate, fare doppio clic su Manual
Tuning.
4. Selezionare un tipo di scansione, immettere intervalli di massa, transizioni, velocità
di scansione e le altre informazioni richieste. Ottimizzare i parametri del composto e
della sorgente ionica. Ottimizzare quindi la velocità di flusso LC secondo la
configurazione del metodo cromatografico. Fare riferimento a Esercitazione di
Ottimizzazione Manuale.
5. Fare clic sulla scheda DMS.
20 di 76
Figura 3-1
Impostazioni predefinite dei parametri DMS in uno strumento
della serie 6500
Tutti i parametri DMS hanno dei valori predefiniti. Per Separation Voltage (SV) e
Compensation Voltage (COV) il valore predefinito è zero.
Ottimizzare i parametri DMS per ottenere una migliore separazione e una maggiore
sensibilità. I seguenti parametri devono essere ottimizzati nell'ordine specificato:
•
Temperatura DMS (DT): Fare clic su Start per verificare questo parametro con il
valore predefinito Low. Per la verifica, utilizzare i valori predefiniti per altri parametri
DMS (SV = 0; COV = 0; Modifier = None) o passare alla modalità DMS Off
selezionando la casella di controllo DMS Off nella scheda MS.
Figura 3-2
Editor di Tune Method con impostazioni predefinite dei parametri
DMS in uno strumento della serie 6500
I dati compaiono nel riquadro sotto l'Editor di Tune Method. Se non si reputa
soddisfacente il segnale ottenuto per il picco di interesse, modificare il valore di DT
21 di 76
con Medium o High ed effettuare una nuova misurazione del segnale, fino a ottenere
un segnale migliore.
Nota: Per ogni modifica del valore DT, lasciare che il sistema raggiunga
l'equilibrio per almeno 10-15 minuti prima di ottimizzare i parametri DMS.
•
Modifier (MD): Assicurarsi che il valore di questo parametro sia None.
•
Separation Voltage (SV) e Compensation Voltage (COV): SV e COV vengono verificati
insieme ripetutamente al fine di trovare la combinazione SV e COV che restituisca
miglior segnale e separazione. È necessario aumentare SV da 0 all'intervallo SV
massimo consentito mentre si incrementa gradualmente COV nell'intervallo
completo.
Nota: L'intervallo completo di COV va da –100 a 100 volt; comunque, la
maggior parte dei composti si ottimizzano nell'intervallo tra –20 e 30 volt in
assenza di modificatore. Alcuni composti possono ottimizzare anche oltre i
30 volt. Qualora sia presente un modificatore, si consiglia di utilizzare un
intervallo COV che sia almeno da –60 a 20 volt poiché gli spostamenti COV
negativi per alcuni composti possono essere drammatici. Il valore massimo
di SV è legato ai parametri DT e TEM.
•
Iniziare con un valore SV uguale a 0.
•
Fare clic su Edit Ramp.
Si aprirà la finestra di dialogo Ramp Parameter Settings.
•
Selezionare Compensation Voltage nel campo Parameter.
•
Digitare –20 nel campo Start.
•
Digitare 30 nel campo Stop.
•
Lasciare il valore predefinito nel campo Step o immettere la dimensione
dell'intervallo desiderata e fare clic su OK.
Viene selezionata la casella di controllo Ramp Parameter.
•
Fare clic su Start.
I dati compaiono nel riquadro sotto l'Editor di Tune Method. Controllare l'intensità
massima del segnale e annotarla. Il valore COV al quale viene raggiunta questa
sensibilità massima deve essere zero.
•
Modificare il valore SV con un numero tra 0 e l'intervallo SV massimo
consentito, per esempio 2000. È possibile incrementare SV di 500 o più
poiché l'intervallo SV ammesso è ampio.
•
Utilizzare lo stesso intervallo COV per l'incremento graduale e fare clic su
Start per effettuare una nuova misurazione del segnale.
I dati compaiono nel riquadro sotto l'Editor di Tune Method. Controllare l'intensità
massima del segnale e il valore COV al quale viene raggiunto il segnale massimo e
annotarli.
22 di 76
•
Ripetere la procedura di SV stepping e COV ramping e annotare il valore SV
che restituisce la migliore intensità del segnale. Quando l'intensità del segnale
inizia a diminuire, interrompere il processo. È possibile regolare ulteriormente
il valore SV ripetendo la suddetta procedura con intervalli SV inferiori rispetto
agli intervalli da 100 a 200 volt utilizzati sopra e incrementando gradualmente
COV.
Successivamente all'identificazione della coppia SV e COV ottimale, impostare
questi valori per i parametri SV e COV nel metodo.
•
DMS Offset (DMO): Incremento graduale DMO per la combinazione SV e COV
ottimizzata. Per esempio:
•
Fare clic su Edit Ramp.
Si aprirà la finestra di dialogo Ramp Parameter Settings.
•
Selezionare DMS Offset nel campo Parameter.
•
Digitare -30 nel campo Start.
•
Digitare 30 nel campo Stop.
•
Lasciare il valore predefinito nel campo Step o immettere il numero desiderato
e fare clic su OK.
•
Fare clic su Start.
I dati compaiono nel riquadro sotto l'Editor di Tune Method. L'intervallo consentito
per DMO va da –100 a 100 volt.
•
DMS Resolution Enhancement (DR): (Negli strumenti della serie 6500) Per un
singolo composto, dovrebbe essere utilizzato il valore DR Open (senza aggiunta di
gas acceleratore). Quando è necessario migliorare la separazione dei composti,
vengono utilizzati altri valori di DR: Off, Low, Medium o High. Per esempio, quando
due composti hanno COV simili e devono essere separati a livello basale, è
possibile provare DR con i valori Off, Low, Medium o High, per ottenere una
separazione migliore. Selezionare il valore desiderato (Off, Low, Medium o High)
per il parametro DR e fare clic su Start per incrementare gradualmente COV a un
valore SV particolare per misurare il segnale e la separazione dei composti. Provare
diversi valori DR fino a ottenere una separazione dei composti soddisfacente.
(Negli strumenti della serie 5500) Per un singolo composto, DR dovrebbe essere
impostato al valore Off (senza aggiunta di gas acceleratore). Quando è necessario
migliorare la separazione dei composti, vengono utilizzati altri valori di DR: Low,
Medium o High.
Nota: Per gli strumenti della serie 6500, quando il valore di DR è impostato
a Off, Low, Medium o High, il flusso del gas è attivo tra l'uscita del
dispositivo SelexION e l'Orifizio di entrata nello spettrometro di massa, che
aumenta la risoluzione del dispositivo SelexION. Per gli strumenti della
serie 5500, i valori Low, Medium o High di DR attivano il flusso del gas tra
l'uscita del dispositivo SelexION e l'Orifizio di entrata nello spettrometro di
massa.
L'utilizzo del parametro DR fa aumentare il tempo di residenza degli ioni nella cella di
mobilità ionica SelexION™, con conseguente riduzione della sensibilità dovuta alla
consistente perdita di segnale diffusionale. Modificando il valore di DR, verranno
aggiornate la durata della pausa tra gli intervalli di massa e la durata totale della
23 di 76
scansione per tenere conto del trasporto di ioni attraverso la cella di mobilità ionica
SelexION. Durante le scansioni RF/DC (scansioni quadripolari), verranno aggiornate
la durata della pausa tra gli intervalli di massa e la durata totale della scansione.
Tabella 3-1 mostra i diversi valori di DR e la Pausa corrispondente tra i tempi degli
intervalli di massa.
Tabella 3-1 Valori DR e Pausa Corrispondente Tra i Tempi degli Intervalli di
Massa
Valori DR
Pausa tra i valori degli intervalli di massa
Open (predefinito) (Disponibile
esclusivamente per gli
strumenti della serie 6500)
20 ms (predefinito)
—
Off (predefinito per gli
strumenti della serie 5500)
20 ms
20 ms
Low
30 ms
30 ms
Medio
40 ms
40 ms
Alto
50 ms
50 ms
Suggerimento!Le letture di ritorno di DR mostrano la pressione attuale
nella finestra di dialogo Mass Spec Detailed Status. Per aprire questa
finestra di dialogo, fare doppio clic sull'icona Mass Spec nella barra di stato.
6. Successivamente a una corretta ottimizzazione di tutti i parametri DMS, salvare il
metodo di acquisizione.
Creazione di un Metodo di Acquisizione con un Modificatore e
Nota: Gli utenti non possono utilizzare modificatori con la sorgente ionica
NanoSpray®. Gli utenti potranno creare metodi di acquisizione che comprendono i flussi
e le informazioni del modificatore, ma quando verranno eseguiti la pompa del
modificatore sarà disattivata.
Se il composto di interesse non venisse separato adeguatamente nella modalità DMS, si
potrebbe introdurre un modificatore per coadiuvare la separazione dei composti. Un modificatore
è un prodotto chimico che viene aggiunto nel flusso di Curtain Gas™ per aumentare la
separazione dei composti.
È possibile selezionare un modificatore e ottimizzare i parametri DMS nella modalità Manual
Tuning e creare un metodo di acquisizione per salvare le impostazioni ottimizzate dei parametri.
Prima di selezionare un modificatore per la prima volta o quando si cambia il modificatore,
svuotare la linea del modificatore. Fare riferimento a Eliminare il Modificatore a pagina 28.
24 di 76
Prerequisito
•
Assicurarsi che nel contenitore del modificatore ci sia un quantitativo di modificatore
sufficiente per l'acquisizione. Per maggiori informazioni sul calcolo del consumo del
modificatore, fare riferimento a Per calcolare il consumo adeguato del modificatore
per un batch a pagina 52.
Se fosse necessario riempire il contenitore del modificatore, fare riferimento a
Riempimento del Contenitore del Modificatore a pagina 71.
Creazione di un metodo di acquisizione con un modificatore selezionato e
ottimizzazione dei parametri DMS
1. Infusione-T del campione nel flusso LC. Fare riferimento a Campione Infusione-T nel
flusso LC a pagina 71.
2. Nella Barra di Navigazione, alla voce Tune and Calibrate, fare doppio clic su Manual
Tuning.
3. Selezionare un tipo di scansione, immettere intervalli di massa, transizioni, velocità
di scansione e le altre informazioni richieste. Ottimizzare i parametri del composto e
della sorgente. Ottimizzare quindi la velocità di flusso LC secondo la configurazione
del metodo cromatografico. Fare riferimento a Esercitazione di Ottimizzazione
Manuale.
Nota: Invece di creare un nuovo metodo di acquisizione, si può utilizzare,
come punto di inizio, un metodo di acquisizione esistente che sia stato
creato per il composto da analizzare in assenza di modificatori o in
presenza di un modificatore differente da quello attualmente utilizzato. Il
metodo di acquisizione deve contenere parametri DMS, composto,
sorgente e velocità di flusso ottimizzati. Sarà comunque necessario
ottimizzare nuovamente i parametri DMS per il metodo con l'utilizzo del
modificatore.
4. Fare clic sulla scheda DMS.
5. Ottimizzare il parametro DT come descritto in Creare un metodo di acquisizione e
ottimizzazione dei parametri DMS senza modificatore a pagina 20.
25 di 76
6. Nel parametro Modifier (MD), selezionare un modificatore dall'elenco. È possibile
selezionare un modificatore tra quelli predefiniti, ma qualora si volesse utilizzare un
modificatore non presente tra questi, scegliere Custom. Per informazioni sul valore
Custom del modificatore, fare riferimento a passo 8 a pagina27.
Figura 3-3
Impostazioni dei parametri DMS in uno strumento della serie
6500
Il parametro Modifier Composition (MDC) compare con il suo valore predefinito,
impostato a Low.
Figura 3-4
Impostazioni dei parametri DMS in uno strumento della serie
6500
26 di 76
7. Nel parametro MDC, se necessario, selezionare High per provare la concentrazione
del modificatore che dovrebbe fornire la separazione ottimale. Low è 1.5% o più,
mentre High è 3.0% della concentrazione del modificatore.
Il software Analyst® utilizza il flusso di Gas Curtain e la densità e peso molecolare
del modificatore selezionato per calcolare la velocità di flusso del modificatore e
applicare automaticamente quella velocità di flusso.
8. Se selezionato Custom nel parametro Modifier (MD) in passo 6 a pagina26, è
necessario fornire la densità e il peso molecolare del modificatore come mostrato
nella figura seguente, in modo che il software Analyst possa calcolare la velocità di
flusso del modificatore per l'impostazione specificata (Low o High) e applicarla.
Figura 3-5
Impostazione del parametro DMS in uno strumento della serie
6500
•
Modifier Density (g/mL) (MDD): Specificare la densità del modificatore
personalizzato. Il software Analyst utilizza questa densità in aggiunta al peso
molecolare del Modificatore e al valore del flusso di Curtain Gas per
determinare la velocità di flusso del modificatore personalizzato.
•
Modifier MW (MDW): Specificare il peso molecolare del modificatore
personalizzato in g/mol. Il software Analyst utilizza il valore di questo
parametro in aggiunta alla densità del Modificatore e al valore del flusso di
Curtain Gas per determinare la velocità di flusso del modificatore
personalizzato.
Suggerimento!È possibile visualizzare la velocità di flusso della pompa del
modificatore nella finestra di dialogo Mass Spec Detailed Status. Per
visualizzare questa finestra di dialogo, fare doppio clic sull'icona Mass Spec
nella barra di stato.
27 di 76
9. Per il modificatore selezionato e per il valore MDC, regolare i parametri SV, COV e
DMO come descritto in Creare un metodo di acquisizione e ottimizzazione dei
parametri DMS senza modificatore a pagina 20, finché non si ottenga un segnale e
una separazione soddisfacente.
Se si desidera provare una concentrazione differente del modificatore (High o Low)
dello stesso modificatore (selezionato in passo 6 a pagina26), selezionare un
diverso valore MDC (Low o High) e ottimizzare nuovamente i parametri SV, COV e
DMO come descritto in Creare un metodo di acquisizione e ottimizzazione dei
parametri DMS senza modificatore a pagina 20.
Se si desidera utilizzare un modificatore differente, svuotare prima la linea del
modificatore, selezionare un altro modificatore nel metodo di acquisizione,
specificare il valore MDC per il nuovo modificatore e quindi ottimizzare nuovamente i
parametri SV, COV e DMO come descritto in Creare un metodo di acquisizione e
ottimizzazione dei parametri DMS senza modificatore a pagina 20.
10. Se necessario, ottimizzare il parametro DR come descritto in Creare un metodo di
acquisizione e ottimizzazione dei parametri DMS senza modificatore a pagina 20.
11. Salvare il metodo di acquisizione.
Controllo Parametri del Modificatore in Tempo Reale
Se si inizia ad acquisire dati da Manual Tuning utilizzando il metodo di acquisizione creato
nell'argomento precedente e si cambia poi il valore MDC da Low a High o viceversa durante
l'acquisizione, Il software Analyst® ricalcola immediatamente la velocità necessaria del flusso
della pompa del modificatore e regola la pompa del modificatore di conseguenza.
In modo analogo, se durante l'acquisizione viene modificato il peso molecolare o la densità
molecolare del modificatore personalizzato specificato nel metodo di acquisizione, il software
Analyst ricalcola immediatamente la velocità di flusso della pompa del modificatore e regola la
pompa del modificatore di conseguenza.
Eliminare il Modificatore
Prima di utilizzare un nuovo modificatore, eliminare il modificatore attualmente in uso dalla
pompa del modificatore. La pulizia del modificatore richiederà circa quattro minuti durante i quali
lo spettrometro di massa non sarà utilizzabile.
Un modificatore può essere pulito o eliminato dalla pompa del modificatore dalla modalità
Manual Tuning o Acquire quando il dispositivo SelexION™ è acceso.
Eliminare il modificatore nella modalità Manual Tuning o Acquire quando il
dispositivo SelexION è acceso
1. Assicurarsi che il modulo di controllo SelexION sia acceso e attivare un profilo
hardware. Fare riferimento a Creazione di Profili Hardware e Progetti nella Guida
Introduttiva.
2. Collegare alla pompa del modificatore il contenitore contenente l'altro modificatore
che si vuole utilizzare.
3. Se si è già in modalità Manual Tuning o Acquire, andare al passo 4. Se si è in
modalità Acquire con campioni nella coda di acquisizione, fare riferimento a Pulizia
Modificatori dalla Modalità di Acquisizione con Campioni nella Coda di Acquisizione
28 di 76
a pagina 31. Se non si è nella modalità Manual Tuning né in quella Acquire, fare clic
su Acquire o Tune and Calibrate sulla Barra di Navigazione.
Figura 3-6
Icona di Elimina Modificatore
4. Fare clic sull'icona Pulisci Modificatore nella barra degli strumenti.
Figura 3-7
Finestra di dialogo Purge Modifier
Si aprirà la finestra di dialogo Purge Modifier. Lo Stato diventerà Ready, a indicare
che il sistema è pronto a iniziare la procedura di Pulizia.
5. Fare clic sul pulsante Purge.
Inizia il processo di pulizia. Se la pulizia del modificatore è stata avviata dalla
modalità Manual Tuning, il sistema entra automaticamente in una modalità nonTuning e viene deselezionata sulla barra degli strumenti l'icona Riserva lo Strumento
per la Regolazione.
29 di 76
La procedura di pulizia accede alla modalità Initializing/Equilibrating. Durante la
modalità Initializing, vengono creati in background un metodo di acquisizione e un
file batch. Durante la modalità Equilibrating, il sistema si sta equilibrando.
Nella finestra di dialogo Purge Modifier lo stato cambia quindi da Initializing/
Equilibrating a Purging, a indicare che si sta eliminando il modificatore dalla pompa
del modificatore. Durante la pulizia del modificatore, lo strumento effettua una
scansione e vengono raccolti dati nella cartella API Instrument\Data. Al termine della
pulizia, il metodo di acquisizione, il file batch e i dati vengono automaticamente
rimossi.
Durante la Pulizia, il pulsante Purge cambia in Abort. Vengono visualizzati il tempo
stimato per la pulizia (quattro minuti) e il tempo trascorso nel ciclo Purge. Il software
Analyst® imposta automaticamente i parametri DMS e sorgente a nuovi valori per
quattro minuti (tempo stimato per la pulizia). Per visualizzare questi valori, fare
riferimento a Valori dei Parametri DMS e della Sorgente Utilizzati Durante
l'Eliminazione del Modificatore a pagina 70.
Suggerimento!È possibile visualizzare l'avanzamento della procedura di
pulizia nella finestra di dialogo Mass Spec Detailed Status. Per visualizzare
questa finestra di dialogo, fare doppio clic sull'icona Mass Spec nella barra
di stato.
30 di 76
L'eliminazione del modificatore dalla pompa del modificatore richiede circa quattro
minuti. Al termine della procedura di Pulizia, nella finestra di dialogo Purge Modifier
lo stato cambia in Complete. Il pulsante Abort cambia nuovamente in Purge. Il
sistema automaticamente accede di nuovo alla modalità Manual Tuning se la pulizia
del modificatore era stata avviata dalla modalità Manual Tuning. Vengono
reimpostati i valori di alcuni parametri DMS e sorgente. Per visualizzare i valori
reimpostati, fare riferimento a Valori dei Parametri DMS e della Sorgente quando
l'Eliminazione del Modificatore viene Terminata o Interrotta a pagina 70.
6. Fare clic su X per chiudere la finestra di dialogo Purge Modifier.
Al termine della pulizia del modificatore, lasciare che il sistema torni in equilibrio per circa 10
minuti con le condizioni sorgente desiderate e il nuovo modificatore pronto prima
dell'acquisizione di nuovi campioni.
Per interrompere il processo Purge
1. Nella finestra di dialogo Purge Modifier, fare clic su Abort.
Il ciclo di pulizia viene interrotto e vengono reimpostati i valori di alcuni parametri
DMS e sorgente. Per visualizzare i valori reimpostati, fare riferimento a Valori dei
Parametri DMS e della Sorgente quando l'Eliminazione del Modificatore viene
Terminata o Interrotta a pagina 70.
Lo stato cambia in Aborted, il pulsante Abort cambia in Purge.
Se la pulizia del modificatore era stata avviata dalla modalità Manual Tuning,
successivamente all'interruzione, il sistema torna alla modalità Manual Tuning.
Dopo l'interruzione della pulizia del modificatore, lasciare che il sistema torni in equilibrio per
circa 10 minuti con le condizioni sorgente desiderate e il nuovo modificatore pronto prima
dell'acquisizione di nuovi campioni.
Pulizia Modificatori dalla Modalità di Acquisizione con Campioni nella Coda di
Acquisizione
Se si è in modalità Acquire con campioni nella coda di acquisizione e si seleziona l'icona Pulisci
Modificatore, viene visualizzato un messaggio Queue Busy nella finestra di dialogo Purge
Modifier.
31 di 76
Figura 3-8
Messaggio Queue Busy
Facendo clic sul pulsante Purge nella finestra di dialogo, viene visualizzato un messaggio per
indicare che è in esecuzione l'acquisizione. Per continuare la pulizia, completare o annullare il
processo di acquisizione e assicurarsi che non ci siano altri campioni in attesa nella coda.
Stato Modifer Purge
Tabella 3-2 Stato Modifer Purge
Stato Purge
Descrizione
Ready
Il sistema è pronto ad avviare il processo Purge.
Initializing/Equilibrating
Creazione del metodo e dei file batch/Il sistema si sta
equilibrando.
Purging
La pulizia del modificatore è in esecuzione.
Aborted
Il ciclo di pulizia è terminato.
Queue Busy
L'acquisizione è in esecuzione; Purge non è consentito.
Completato
Il processo di pulizia è terminato.
Ottimizzazione dei Parametri DMS attraverso
Compound Optimization
Il tipo di ottimizzazione infusione-T nella modalità Compound Optimization permette di
ottimizzare automaticamente quanto segue:
•
Parametri DMS (SV, COV e DMO)
•
Parametri Composto e DMS (SV, COV e DMO)
Il tipo di ottimizzazione FIA permette di ottimizzare solo il parametro COV per un preciso SV per
la tecnologia SelexION™. Può essere utilizzato anche per utilizzare parametri dipendenti dalla
sorgente e dal composto.
32 di 76
Nota: Quando si utilizza un Sistema Shimadzu LC durante una Ottimizzazione
Composto FIA, si deve tenere conto del fatto che la durata predefinita per i metodi
Shimadzu LC è di 90 minuti. Questo dovrebbe essere modificato utilizzando il Time
Program per il Sistema Shimadzu LC nell'Editor Acquisition Method. Altrimenti, quando
si regola la durata di una scansione dello spettrometro di massa, che è inferiore alla
durata del programma Shimadzu, non si può interrompere l'esecuzione della
regolazione attraverso il software Analyst una volta che lo spettrometro di massa abbia
completato la scansione. Se si verifica questa situazione, per interrompere l'esecuzione,
premere Run sul CBM Shimatuzu.
Obiettivi della sezione
In questa sezione sarà illustrato come:
•
Ottimizzare i parametri DMS con Infusione-T.
•
Ottimizzare i parametri DMS e del composto con Infusione-T.
•
Ottimizzare COV con FIA.
Prerequisito
•
Prima di avviare l'ottimizzazione Infusione-T, bisogna creare un metodo di
acquisizione che sarà utilizzato come inizializzatore del metodo di acquisizione per
l'ottimizzazione Infusione-T. Questo metodo dovrebbe avere quanto segue:
•
Un metodo LC isocratico (opzionale se viene utilizzato una pompa LC
isocratca esterna).
•
Una pompa a siringa (opzionale se viene utilizzata una pompa a siringa
esterna).
•
Tipo di scansione MRM o Q1 MI.
•
Parametri sorgente ottimizzati.
•
Parametro temperatura DMS ottimizzato con valori predefiniti SV, COV e
DMO.
•
Tipo di modificatore e flusso possono essere o meno specificati.
•
Se viene utilizzata una guida AAO o una guida Shimadzu integrata come
pompa LC, si deve impostare una durata LC lunga a sufficienza per
l'acquisizione. Il software Analyst® non può modificare la durata LC.
•
Massimo numero di composti = 20.
Ottimizzazione dei Parametri DMS esclusivamente con
Ottimizzazione di Tipo Infusione-T
Per ottimizzare automaticamente i parametri DMS SV, COV e DMO in Infusione-T, utilizzare
questa procedura:
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Per ottimizzare solamente i parametri DMS con il tipo di ottimizzazione Infusione-T
1. Assicurarsi che sia attivo un profilo hardware. Se il metodo inizializzatore contiene
un metodo pompa a siringa o un metodo pompa LC, il profilo hardware deve
contenere anche una pompa a siringa o pompa LC, rispettivamente. Fare riferimento
a Creazione di Profili Hardware e Progetti nella Guida Introduttiva.
2. Infusione-T del campione nel flusso LC. Fare riferimento a Campione Infusione-T nel
flusso LC a pagina 71.
3. Nella Barra di Navigazione, alla voce Tune and Calibrate, fare doppio clic su
Compound Optimization.
Figura 3-9
Finestra di dialogo Instrument Settings in uno strumento della
serie 6500
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4. Nella pagina Instruments Settings, nel gruppo Inlet, fare clic su T-Infusion.
Figura 3-10 Finestra di dialogo Instrument Settings in uno strumento della
serie 6500
5. Nel campo Default Acq. Method, selezionare dall'elenco un metodo di acquisizione
che verrà utilizzato come metodo inizializzatore.
6. Assicurarsi che sia selezionato DMS Only.
L'opzione Mass Spectrometer (MS Analysis or MS/MS Analysis) è impostata in base
al tipo di scansione del metodo di scansione inizializzatore.
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7. Fare clic su Next.
Si aprirà la finestra di dialogo DMS Options. Nella finestra di dialogo vengono
visualizzati i valori predefiniti Start, Stop e Step per i parametri SV, COV e DMO.
8. Nella finestra di dialogo DMS Options, specificare i valori da utilizzare per ottimizzare
i parametri DMS SV, COV e DMO. È possibile utilizzare i valori predefiniti o un
intervallo minore che può ridurre il tempo necessario per il processo di
ottimizzazione. L'ampiezza predefinita dell'intervallo verrà utilizzata a meno che non
venga specificata una ampiezza differente per SV, COV e DMO. Gli intervalli
consentiti per SV, COV e DMO sono elencati in Tabella 3-3.
Tabella 3-3 Intervalli consentiti per SV, COV e DMO
Nome del parametro
Inizio
Fine
Separation Voltage (SV)
0
Verrà visualizzato in questo campo Il
massimo SV consentito in base ai
valori DT e TM specificati nel metodo
di acquisizione inizializzatore.
Compensation Voltage
(COV)
-100
100
DMS Offset (DMO)
-100
100
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COV verrà incrementato gradualmente per ciascun livello di SV. Dopo l'incremento
graduale di COV, verrà incrementato gradualmente DMO.
Nota: La maggior parte dei composti ottimizzano in intervalli da –20 a 30
volt in assenza di modificatore. Alcuni composti possono ottimizzare anche
oltre i 30 volt. Qualora sia presente un modificatore, si consiglia di utilizzare
un intervallo COV che sia almeno da –60 a 20 volt poiché gli spostamenti
COV negativi per alcuni composti possono essere drammatici.
9. Fare clic su Finish per iniziare la procedura di ottimizzazione.
Inizia la procedura di ottimizzazione. Lo schermo visualizza due finestre, una
finestra file di testo e una finestra di acquisizione. Può rendersi necessario
minimizzare una finestra per vedere l'altra. L'asse x mostra il parametro che si sta
ottimizzando, in volt, per esempio, COV. L'asse y mostra l'intensità in conteggi al
secondo (cps). La finestra file di testo viene aggiornata quando si generano risultati.
Al termine del processo di ottimizzazione, viene salvata la combinazione dei
parametri che forniscono la maggiore intensità del segnale. Se l'intensità è inferiore
al valore minimo (100 cps), viene visualizzato un messaggio di errore nella finestra
file di testo.
Quando la procedura di ottimizzazione viene conclusa correttamente, i parametri
ottimizzati vengono aggiunti in una copia del metodo inizializzatore e il nuovo
metodo viene salvato con il nome: “[nomeMetodoInizializzatore]_DMS.dam”, nella
cartella C:\Analyst Data\Projects\[Cartella_Progetto]\Acquisition Methods. Il file di
testo viene salvato nella cartella C:\Analyst Data\Projects\[Cartella_Progetto]\Log.
Tutti i file .wiff generati durante la procedura di ottimizzazione vengono salvati nella
cartella C:\Analyst Data\Projects\[Cartella_Progetto]\Data.
Ottimizzazione Parametri Composto e DMS con il Tipo di
Ottimizzazione Infusione-T
Il software Analyst® fornisce un opzione per ottimizzare insieme i parametri composto e DMS
nella modalità Compound Optimization. Quando viene utilizzata questa opzione, vengono prima
ottimizzati i parametri composto in infusione-T utilizzando un flusso di lavoro simile
all'ottimizzazione infusione, alla fine vengono ottimizzati i parametri DMS in modo simile
all'opzione DMS Only.
Ottimizzare entrambi i parametri DMS e composto con il tipo di ottimizzazione Infusione-T
2. Nella pagina Instruments Settings, nella sezione Inlet, fare clic su T-Infusion.
3. Nel campo Default Acq. Method, selezionare dall'elenco un metodo di acquisizione
che verrà utilizzato come metodo inizializzatore.
4. Fare clic su Compound and DMS.
Le opzioni Mass Spectrometer sono attive.
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5. Fare clic su MS Analysis o MS/MS Analysis in base al tipo di scansione selezionata
nel metodo di acquisizione predefinito.
Si aprirà la finestra di dialogo The Ions to use in MS/MS Analysis.
7. Nella finestra di dialogo Ions to use in MS/MS Analysis, digitare i valori per tutti i
campi. Fare riferimento a Esercitazione di Ottimizzazione Automatica.
8. Fare clic su Criteria vicino all'opzione Auto Select.
9. Nella finestra di dialogo Product Ion Auto Selection Criteria, digitare i valori per tutti i
campi. Fare riferimento a Esercitazione di Ottimizzazione Automatica.
10. Fare clic su OK per salvare le modifiche ai criteri di selezione.
12. Nella finestra di dialogo Target Components, immettere i nomi dei composti e le loro
masse Q1 e Q3. Fare riferimento a Esercitazione di Ottimizzazione Automatica.
Si aprirà la finestra di dialogo DMS Options. Nella finestra di dialogo vengono
visualizzati i valori predefiniti Start, Stop e Step per i parametri SV, COV e DMO.
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14. Nella finestra di dialogo DMS Options, specificare i valori da utilizzare per ottimizzare
i parametri SV, COV e DMO. È possibile utilizzare i valori predefiniti o un intervallo
minore che può ridurre il tempo necessario per il processo di ottimizzazione.
L'ampiezza predefinita dell'intervallo verrà utilizzata a meno che non venga
specificata una ampiezza differente per SV, COV e DMO. Gli intervalli consentiti per
SV, COV e DMO sono elencati in Tabella 3-4.
Tabella 3-4 Intervalli consentiti per SV, COV e DMO
Nome del parametro
Inizio
Fine
0
Verrà visualizzato in questo campo Il
massimo SV consentito in base ai
valori DT e TM specificati nel metodo di
acquisizione inizializzatore.
(COV)
-100
100
DMS Offset (DMO)
-100
100
COV verrà incrementato gradualmente per ciascun livello di SV. Dopo l'incremento
graduale di COV, verrà incrementato gradualmente DMO.
Inizia la procedura di ottimizzazione. Lo schermo visualizza due finestre, una
finestra file di testo e una finestra di acquisizione. Può rendersi necessario
minimizzare una finestra per vedere l'altra. L'asse x mostra il parametro che si sta
ottimizzando, in volt, per esempio, COV. L'asse y mostra l'intensità in conteggi al
secondo (cps). La finestra file di testo viene aggiornata quando si generano risultati.
Al termine del processo di ottimizzazione, viene salvata la combinazione dei
parametri che forniscono la maggiore intensità del segnale. Se l'intensità è inferiore
al valore minimo (100 cps), viene visualizzato un messaggio di errore nella finestra
file di testo.
Quando la procedura di ottimizzazione viene conclusa correttamente, i parametri
ottimizzati vengono aggiunti in una copia del metodo inizializzatore e il nuovo
metodo viene salvato con il nome: “[nomeMetodoInizializzatore]_DMS.dam”, nella
cartella C:\Analyst Data\Projects\[Cartella_Progetto]\Acquisition Methods. Il file di
testo viene salvato nella cartella C:\Analyst Data\Projects\[Cartella_Progetto]\Log.
Tutti i file .wiff generati durante la procedura di ottimizzazione vengono salvati nella
cartella C:\Analyst Data\Projects\[Cartella_Progetto]\Data.
Ottimizzazione COV attraverso Iniezione Flusso (FIA)
COV è l'unico parametro DMS che può essere ottimizzato attraverso il metodo FIA. Il metodo FIA
viene utilizzato anche per la regolazione fine dei parametri dipendenti dalla sorgente e dal
composto.
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Prima di avviare l'ottimizzazione FIA, bisognerebbe aver già creato un metodo di acquisizione
con sorgente, composto e parametri DMS ottimizzati attraverso il metodo Infusione-T descritto in
Ottimizzazione Parametri Composto e DMS con il Tipo di Ottimizzazione Infusione-T a pagina
37. Inoltre, l'ottimizzazione FIA richiede un autocampionatore; quindi, si deve aggiungere questo
dispositivo al metodo di acquisizione. Questo metodo sarà utilizzato come metodo inizializzatore
per FIA.
Per ottimizzare il parametro COV attraverso FIA
2. Nella pagina Instrument Settings, a seconda dello scarico utilizzato, digitare quanto
segue:
Tabella 3-5 Pagina Instrument Settings
Field
Valore
Inlet
FIA
Default Acq. Metodo
Metodo di acquisizione inizializzatore
Rack Code
Specifico dell'autocampionatore
Rack Position
Specifico dell'autocampionatore
Injection Volume
Quantità di campione da iniettare in µL
Mass Spectrometer
Analisi MS/MS
4. Nella pagina FIA Target Compounds, non selezionare la casella di controllo Int. Std.
perché qualsiasi transizione contrassegnata come Internal Standard non verrà
ottimizzata.
5. Nella sezione Resolution, selezionare Unit in entrambi i campi Q1 Resolution e Q3
Resolution.
7. Nella pagina FIA Source Parameters, se necessario, per ciascun parametro si
desideri ottimizzare, immettere almeno due valori da ottimizzare e selezionare quindi
la casella di controllo nella colonna Optimize. Fare riferimento a Esercitazione di
Ottimizzazione Automatica.
9. Nella pagina FIA Compound Parameters, se necessario, per ciascun composto,
immettere i valori da utilizzare per ottimizzare per Declustering Potential, Collision
Energy e Collision Cell Exit Potential. Fare riferimento a Esercitazione di
Ottimizzazione Automatica.
10. Sulla stessa pagina, per ciascun composto, immettere i valori da ottimizzare per il
parametro COV nella colonna Values for Optimization separata da punto e virgola (;).
Per esempio, 2.1;2.2;2.3;.
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11. Selezionare la casella di controllo nella colonna Optimize per COV.
I campi Total # of Injections e Total Sample Volume si aggiornano automaticamente.
Il campo Mass Spec. Duration visualizza la durata dal metodo inizializzatore
selezionato al passaggio 2.
Il software Analyst® esegue i valori specificati dei parametri dipendenti dalla
sorgente e dal composto, compreso COV, e seleziona il valore con la risposta
maggiore per ottenere il miglior segnale per i composti di interesse. Mentre il
software procede con l'ottimizzazione, viene creato un report di ottimizzazione FIA. Il
report di ottimizzazione FIA riporterà il valore COV ottimale per SV specificato nel
metodo inizializzatore per ciascun composto.
13. Il software genera un metodo finale di acquisizione FIA ottimizzato, chiamato
“*_DMS.dam”. È possibile aprire questo metodo e salvarlo utilizzando un nome più
semplice.
Se si desidera ottimizzare COV per un valore SV differente, modificare il metodo
inizializzatore e avviare nuovamente l'ottimizzazione FIA.
Ottimizzazione dello Strumento
L'ottimizzazione dello strumento con il dispositivo SelexION™ installato dovrebbe essere
utilizzata esclusivamente per la risoluzione di problemi o per correggere piccoli problemi di
risoluzione o calibrazione. Per l'ottimizzazione completa dello strumento, si consiglia di
rimuovere la cella di mobilità ionica SelexION dalla sorgente prima di effettuare l'ottimizzazione
dello strumento.
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4
Creare Metodi di Acquisizione con Parametri
DMS
Obiettivi
•
Creare un metodo di acquisizione con parametri DMS fissati nella modalità Acquire.
•
Ulteriori informazioni sulla capacità della tecnologia SelexION™ di separare
composti isobarici.
•
Differenziare i composti isobarici nei metodi di acquisizione con algoritmo MRM e
Scheduled MRM™.
•
Creare un metodo di acquisizione con algoritmo Scheduled MRM con parametri
DMS.
•
Creare un metodo di acquisizione per l'incremento graduale di COV nella modalità di
acquisizione batch.
•
Ulteriori informazioni sul calcolo del consumo di modificatore.
Prerequisiti
•
Assicurarsi che la tecnologia SelexION™ sia installata sullo strumento e che il
modulo di controllo sia acceso.
Creare un Metodo di Acquisizione con Parametri
DMS Fissati nella Modalità Acquire
È possibile utilizzare questa procedura se si dispone già dei valori ottimizzati per tutti i parametri
DMS e si ha necessità di creare un nuovo metodo di acquisizione utilizzando questi valori.
Creare un nuovo metodo di acquisizione e aggiungere nella modalità acquisizione
valori fissi dei parametri DMS ottimizzati
1. Attivare un profilo hardware. Fare riferimento a Creazione di Profili Hardware e
Progetti nella Guida Introduttiva e nella Guida per l'Utente - Strumenti Serie 6500.
2. Nella Barra di Navigazione, alla voce Acquire, fare doppio clic su Build Acquisition
Method.
Si aprirà la finestra Acquisition Method.
3. Fare clic su Mass Spec nel riquadro del metodo Acquisition.
4. Notare che la casella di controllo Ramp COV sulla scheda MS sia deselezionata.
Questo per permettere l'uso di un valore COV fisso e non il parametro COV di
incremento graduale.
5. Selezionare un tipo di scansione e immettere, se disponibili, intervallo di massa,
transizioni MRM, tempo di diffusione, velocità di scansione e altre informazioni
necessarie. Fare riferimento a Esercitazione di Ottimizzazione Manuale.
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Creare Metodi di Acquisizione con Parametri DMS
6. Fare clic col tasto destro sulla tabella degli intervalli di massa e selezionare
Separation Voltage SV.
Alla tabella degli intervalli di massa vene aggiunta una nuova colonna chiamata SV
(volt).
7. Digitare il valore SV ottimizzato nella prima riga della colonna SV (volt).
8. Fare clic col tasto destro sulla tabella degli intervalli di massa e selezionare
Compensation Voltage COV.
Alla tabella degli intervalli di massa vene aggiunta una nuova colonna chiamata
COV (volt).
9. Digitare il valore COV ottimizzato nella prima riga della colonna COV (volt).
10. Fare clic col tasto destro sulla tabella degli intervalli di massa e selezionare DMS
Offset DMO.
DMO (volt).
11. Digitare il valore DMO ottimizzato nella prima riga della colonna DMO (volt).
12. Immettere le masse e altre informazioni, compresi i valori SV, COV e DMO per tutti
gli altri composti nella tabella degli intervalli di massa.
13. Fare clic sul pulsante Edit Parameters.
Si aprirà la finestra di dialogo Period 1 Experiment 1 parameter Table.
14. Immettere i valori ottimizzati dei parametri composto nella scheda Compound.
Immettere i valori ottimizzati dei parametri della sorgente ionica e del gas nella
scheda Source/Gas. Assicurarsi che la temperatura della sorgente specificata qui sia
la stessa utilizzata per l'ottimizzazione dei parametri DMS. Fare riferimento a
Esercitazione di Ottimizzazione Manuale.
15. Selezionare la scheda DMS e quindi selezionare i valori desiderati per i parametri
DMS Temperature (DT), Modifier (MD) e DMS Resolution Enhancement (DR) .
Assicurarsi che la temperatura DMS specificata qui sia la stessa utilizzata per
l'ottimizzazione dei parametri DMS.
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16. Fare clic su OK.
17. Se necessario, fornire i valori dei parametri delle periferiche incluse nel profilo
hardware.
18. Salvare il metodo di acquisizione.
La durata della pausa tra gli intervalli di massa è legato al valore DMS Resolution Enhancement
(DR), ma gli utenti possono utilizzare il loro valore predefinito. Tuttavia, l'utilizzo di una durata
della pausa tra gli intervalli di massa inferiore al valore predefinito (20 ms) impostato dal software
Analyst® può produrre una perdita di segnale.
Nota: Se si desidera ottimizzare valori differenti per i parametri DMS, si può procedere
aprendo il metodo di acquisizione in modalità Manual Tuning e ottimizzando
nuovamente i parametri con valori diversi.
Separare Composti Isobarici Utilizzando la
Tecnologia SelexION™
I composti isobarici hanno la stessa massa nominale e per questo non possono essere distinti
dallo spettrometro di massa. La tecnologia SelexION™ elimina automaticamente
l'interconnessione e separa i composti isobarici.
Quando si crea un metodo di acquisizione MRM per molteplici composti isobarici, si consiglia di
alternare, se possibile, le masse isobariche con gli intervalli di massa degli altri composti e di
evitare masse isobariche in transizioni MRM consecutive. Per esempio, se si hanno due
composti isobarici e due composti non isobarici in un metodo MRM, immettere prima gli intervalli
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di massa di un composto isobarico, poi gli intervalli di massa di uno dei composti non isobarici,
poi il secondo composto isobarico e infine l'altro composto non isobarico. Questa disposizione
non consecutiva dei composti isobarici serve a rimuovere ogni potenziale interconnessione tra
isobarici.
Qualora fosse impossibile evitare isobarici consecutivi in un metodo, il software starà attento ad
evitare l'interconnessione a spese di una durata del ciclo leggermente superiore.
Differenziare i Composti Isobarici nei Metodi di Acquisizione
con Algoritmo MRM e Scheduled MRM™
Quando si salva un metodo di acquisizione MRM, Q1 MI, Q3 MI o un metodo di acquisizione con
algoritmo Scheduled MRM™ che contiene due o più composti isobarici consecutivi con la stessa
massa Q1 e Q3, il software Analyst® visualizzerà un avviso. L'avviso indica che se utilizzato
questo metodo per la quantificazione, i cromatogrammi nella Tabella dei Risultati per i composti
isobarici saranno identici e corrisponderanno a uno solo dei composti isobarici.
Per risolvere questo conflitto, differenziare nel metodo di acquisizione i composti isobarici, con
l'aggiunta di almeno 0.001 Da a una delle masse Q1 o Q3 di uno (o più) composti isobarici. Per
esempio, le masse Q1 di alcuni composti isobarici consecutivi possono essere modificate come
segue: 700.000, 700.001, 700.002 e così via.
Un altro metodo utilizzato per differenziare composti isobarici è quello di immettere il nome dei
composti isobarici nel campo Compound ID nel metodo di acquisizione. In questo modo sarà più
semplice identificare correttamente i composti isobarici mentre si crea il metodo quantificativo
per questi composti.
Se la quantificazione e le analisi dei dati venissero condotte con il software MultiQuant™, masse
identiche sarebbero quantificate separatamente in base al loro Compound ID.
Utilizzo di Parametri DMS in un Metodo di
Acquisizione con Algoritmo Scheduled MRM™
Il software Analyst® supporta l'utilizzo di parametri DMS con l'algoritmo Scheduled MRM™ per
ottenere un segnale migliore e la separazione dei composti di interesse.
È possibile utilizzare questa procedura se si dispone già dei valori ottimizzati per tutti i parametri
DMS e si ha necessità di creare un nuovo metodo di acquisizione con algoritmo Scheduled
MRM.
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Nota: Invece di creare un nuovo metodo di acquisizione con algoritmo Scheduled
MRM, è possibile utilizzare, come punto di partenza, un metodo di acquisizione
esistente che contenga parametri composto, sorgente e DMS ottimizzati e velocità di
flusso LC. Aggiungere a questo metodo di acquisizione le informazioni richieste per la
programmazione MRM. Fare riferimento a Esercitazione Algoritmo MRM Programmato.
Utilizzo di Parametri DMS in un Metodo di Acquisizione con Algoritmo Scheduled
MRM
Method.
4. Creare un metodo di acquisizione con algoritmo Scheduled MRM. Fare riferimento a
Esercitazione Algoritmo MRM Programmato.
5. Aggiungere i valori ottimizzati SV, COV e DMO alla tabella degli intervalli di massa
per la transizione MRM procedendo come illustrato di seguito:
•
Fare clic col tasto destro sulla tabella degli intervalli di massa e selezionare
Separation Voltage SV nel menu contestuale.
Alla tabella degli intervalli di massa vene aggiunta una nuova colonna chiamata SV
(volt). Viene aggiunto anche il valore ottimizzato di SV.
•
Compensation Voltage COV nel menu contestuale.
COV (volt). Viene aggiunto anche il valore ottimizzato di COV.
•
DMS Offset DMO nel menu contestuale.
DMO (volt). Viene aggiunto anche il valore ottimizzato di DMO.
6. Ripetere il passaggio 5 per tutte le transizioni MRM nel metodo di acquisizione.
8. Immettere i valori ottimizzati dei parametri composto nella scheda Compound.
Immettere i valori ottimizzati dei parametri della sorgente ionica e del gas nella
scheda Source/Gas. Assicurarsi che la temperatura della sorgente specificata qui
abbia lo stesso valore di quella utilizzata per l'ottimizzazione dei parametri DMS.
Fare riferimento a Esercitazione di Ottimizzazione Manuale.
9. Selezionare la scheda DMS e quindi selezionare i valori desiderati per i parametri
DMS Temperature (DT), Modifier (MD) e DMS Resolution Enhancement (DR).
Assicurarsi che la temperatura DMS specificata qui abbia lo stesso valore di quella
utilizzata per l'ottimizzazione dei parametri DMS.
47 di 76
10. Fare clic su OK.
hardware e salvare quindi il metodo di acquisizione.
In un metodo di acquisizione con algoritmo Scheduled MRM, la durata della pausa tra gli
intervalli di massa è legato al valore DMS Resolution Enhancement (DR), ma gli utenti possono
utilizzare il loro valore predefinito. Tuttavia, l'utilizzo di una durata della pausa tra gli intervalli di
massa inferiore al valore predefinito (20 ms) impostato dal software Analyst® produrrà una
perdita di segnale.
Creare un Metodo di Acquisizione per
l'Incremento Graduale di COV nella Modalità di
Acquisizione Batch
Il dispositivo SelexION™ può essere utilizzato nell'analisi di campioni per infusione, per esempio
nel metabolismo con l'uso di tecniche di campionamento di superficie, per separare composti al
posto della cromatografia liquida (LC) e la funzione di incremento graduale di Compensation
Voltage (COV) può essere utilizzata per simulare il gradiente LC.
Oltre alla modalità Manual Tuning, il parametro COV può essere incrementato gradualmente
anche durante l'acquisizione batch, selezionando la casella di controllo Ramp COV nel metodo
di acquisizione nell'editor Acquisition Method. Il parametro COV viene trattato come un
parametro dipendente dal ciclo. La funzione di incremento graduale di COV funziona per un
metodo di acquisizione DMS a singolo periodo.
È possibile utilizzare questa procedura quando si disponga di valori ottimizzati o valori predefiniti
accettabili per tutti i parametri DMS ad eccezione di COV.
Creazione di un metodo di acquisizione per l'incremento graduale di COV durante
la modalità di acquisizione batch
Method.
4. Selezionare un tipo di scansione e immettere, se disponibili, intervallo di massa,
transizioni MRM, tempo di diffusione, velocità di scansione e altre informazioni
necessarie per tutti i composti. Fare riferimento a Esercitazione di Ottimizzazione
Manuale.
5. Selezionare la casella di controllo Ramp COV nella scheda MS e fornire i seguenti
valori COV nell'intervallo COV consentito da –100 a 100 volt:
•
Start: Digitare la tensione alla quale iniziare l'incremento graduale.
•
Start: Digitare la tensione alla quale interrompere l'incremento graduale.
•
Step: Impostare l'ampiezza degli intervalli di ogni ciclo.
48 di 76
7. Immettere i valori ottimizzati dei parametri composto nella scheda Compound. Fare
riferimento a Esercitazione di Ottimizzazione Manuale.
8. Immettere i valori ottimizzati dei parametri della sorgente ionica e del gas nella
scheda Source/Gas. Assicurarsi che la temperatura della sorgente (TEM) specificata
qui abbia lo stesso valore di quella utilizzata per l'ottimizzazione dei parametri DMS.
Fare riferimento a Esercitazione di Ottimizzazione Manuale.
9. Selezionare la scheda DMS e procedere come segue:
•
Selezionare i valori desiderati per i parametri DMS Temperature (DT),
Modifier (MD) e DMS Resolution Enhancement (DR) . Assicurarsi che la
temperatura DMS specificata qui sia la stessa utilizzata per l'ottimizzazione
dei parametri DMS.
•
Immettere il valore ottimizzato di SV per tutti i composti nel campo Separation
Voltage (SV).
•
Immettere il valore ottimizzato di DMO per tutti i composti nel campo DMS
Offset (DMO). Fare clic su OK.
49 di 76
6.53631  MMW  MDC  CUR  + 84.185214  MMW  MDC 
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------  MDD
100 – MDC
hardware.
11. Salvare il metodo di acquisizione. Si può utilizzare per acquisire dati e incrementare
gradualmente COV durante l'acquisizione batch dei campioni e l'acquisizione di dati.
Creazione e Invio di Batch per l'Acquisizione dei
Dati
Utilizzando i metodi creati in questa guida, creare e inviare batch per acquisire dati. Fare
riferimento alla Guida Introduttiva e alla Guida per l'Utente - Strumenti Serie 6500.
Calcolo del Consumo di Modificatore
La velocità di flusso della pompa del modificatore per i modificatori predefiniti nel software
Analyst® viene calcolata dal software utilizzando la densità del modificatore e il suo peso
molecolare. La densità e il peso molecolare dei modificatori predefiniti nel software Analyst sono
elencati in Tabella 4-1.
50 di 76
Tabella 4-1 Densità e Peso Molecolare dei Modificatori Predefiniti
Modificatore
Peso molecolare (g/mol)
Densità (g/cm3)
2-Propanol
60,10
0,7860
Acetonitrile
41,05
0,7822
Metanolo
32,04
0,7918
Acetone
58,08
0,7925
Il software Analyst utilizza la formula seguente per calcolare la velocità di flusso in µL/min della
pompa del modificatore:
Velocità di Flusso della Pompa del Modificatore =
Dove:
•
MMW: Peso Molecolare del Modificatore (g/mol)
•
MDC: Composizione del Modificatore
•
MDD: Densità del Modificatore (g/ml)
•
CUR: valore del flusso di Curtain Gas™
Calcolo di Esempio del Consumo di Modificatore
Come esempio viene visualizzato in Tabella 4-2, il consumo approssimativo di modificatore
calcolato per tutti i modificatori predefiniti nel software Analyst con un flusso di Curtain Gas di 20
psi a diverse concentrazioni di modificatore per un batch di 24 ore.
Tabella 4-2 Consumo Approssimativo di Modificatore (in mL) con un Flusso di Curtain
Gas di 20 psi per un Batch di 24 Ore
Modificatore\Concentrazion Low (1.5%) (mL/24ore)
e
High (3.0%) (mL/24ore)
2-Propanol
360
730
Acetonitrile
250
500
Metanolo
190
390
Acetone
340
700
51 di 76
Per calcolare il consumo adeguato del modificatore per un batch
1. Determinare la durata del batch.
2. Determinare la velocità di flusso della pompa del modificatore dalla finestra di
dialogo Mass Spec Detailed Status facendo clic sull'icona Mass Spec nella barra di
stato nell'angolo in basso a destra della finestra del software Analyst mentre si
esegue il metodo dal software Analyst.
3. Moltiplicare la velocità di flusso (µL/min) della pompa del modificatore per la durata
del batch (minuti) per ottenere il volume approssimativo del modificatore necessario
per un batch.
Nota: Si consiglia l'utilizzo di 2 L di modificatore da quando si eseguono batch lunghi a
valori CUR elevati e alta concentrazione di modificatore.
52 di 76
5
Analisi ed Elaborazione dei Dati
Obiettivi
•
Visualizzare i parametri DMS in File Information mentre si visualizzano i file dati.
•
Creare un metodo di quantificazione e generare una Tabella dei Risultati.
•
Quantificare i composti isobarici.
•
Riportare dati.
•
Riesaminare un file dati acquisito con il parametro COV incrementato gradualmente.
•
Visualizzare un contour plot per i dati acquisiti con il parametro COV incrementato
gradualmente.
•
Visualizzare i parametri DMS incrementati gradualmente in File Information mentre
si visualizzano i file dati.
Analisi Quantitativa dei Dati
Visualizzare i Parametri DMS Utilizzati per l'Acquisizione in
File Information mentre si Visualizzano i File Dati
Le condizioni sperimentali usate per raccogliere i dati sono conservate nei file di dati assieme ai
risultati. In File Information del file dati si possono vedere i parametri DMS utilizzati per acquisire
campioni.
Visualizzare i parametri DMS in File Information mentre si visualizzano i file dati
1. Nella Barra di Navigazione, alla voce Explore, fare doppio clic su Open Data File.
Si aprirà la finestra di dialogo Select Sample.
2. Nel riquadro Data Files, selezionare il file .wiff che si desidera visualizzare.
3. Nel riquadro Samples, selezionare il campione che si desidera visualizzare e fare
quindi clic su OK.
Saranno mostrati i dati acquisiti dal campione.
4. Per visualizzare le informazioni del file, fare clic sull'icona Show File Info sulla barra
degli strumenti.
Si aprirà il riquadro File Information sotto al grafico.
5. Estendere il periodo desiderato nel riquadro a sinistra del riquadro File Information e
fare quindi clic sul collegamento esperimento del periodo desiderato.
I valori start, stop e step del parametro COV utilizzati durante l'acquisizione del
campione vengono registrati nella sezione periodo. I valori start e stop di COV di
ogni composto vengono registrati nella sezione periodo esperimento . Tutti i
53 di 76
parametri DMS (eccetto COV) e i parametri del modificatore utilizzati durante
l'acquisizione del campione vengono registrati nella Sezione della tabella parametri
per l'esperimento e il periodo selezionati.
Fare riferimento al modulo Analisi ed Elaborazione dei Dati nella Guida Introduttiva e
nella Guida per l'Utente - Strumenti Serie 6500.
Creare Metodi Quantitativi e Generare Tabelle dei Risultati
Si può creare un metodo quantitativo e generare una Tabella Risultati utilizzando le informazioni
disponibili nel modulo Analisi Quantitativa nella Guida Introduttiva. Si può anche far riferimento
alla Guida per l'Utente - Strumenti della Serie 6500e alla Guida Avanzata.
Quantificare i Composti Isobarici
Quando si crea un metodo quantitativo per i composti isobarici, è molto più semplice identificarli
se il nome del composto è stato inserito nel campo Compound ID nel metodo di acquisizione.
Questo perché il nome di ciascun composto isobarico (o qualsiasi composto presente nel
metodo di acquisizione) viene automaticamente immesso dopo la sua massa Q1/Q3 nella tabella
Analyte durante la costruzione di un metodo quantitativo.
Qualora il nome del composto non fosse fornito nel metodo di acquisizione per i composti
isobarici, durante la creazione del metodo quantitativo sarà necessario identificare correttamente
i composti isobarici e immettere a mano i loro nomi dopo la loro massa Q1/Q3. Per informazioni
correlate, fare riferimento a Differenziare i Composti Isobarici nei Metodi di Acquisizione con
Algoritmo MRM e Scheduled MRM™ a pagina 46.
Per quantificare i composti isobarici e per generare la Tabella dei Risultati di questi, utilizzare le
informazioni disponibili nel modulo Analisi Quantitativa nella Guida Introduttiva.
Riportare dati
È possibile creare report da una Tabella Risultati utilizzando il software Reporter. Fare riferimento
alla Guida Reporter per l'Utente disponibile in Start > Tutti i programmi > AB SCIEX > Guida
Reporter.
Se viene utilizzato il software MultiQuant™ per quantificare i dati, si può usare la sua funzione di
report per creare report utilizzando il software Reporter..
Analisi Qualitativa dei Dati
Riesame di un File Dati Acquisito con il Parametro COV
Incrementato Gradualmente
Utilizzare la seguente procedura per riesaminare un file dati acquisito con il parametro COV
incrementato gradualmente e con un tipo di scansione MRM:
54 di 76
Visualizzare i dati acquisiti con il parametro COV incrementato gradualmente e
con un tipo di scansione MRM1. Assicurarsi di essere nella cartella progetto in cui sono stati salvati i dati acquisiti.
3. Dall'elenco Data Files, selezionare il file .wiff che contiene i dati acquisiti che si
desidera visualizzare.
4. Se necessario, nell'elenco Samplesfare clic sul campione desiderato e fare quindi clic
su OK.
Si aprirà XIC per il file dati selezionato. L'asse x visualizza COV in volt e l'asse y
visualizza l'intensità in cps. XIC viene visualizzato con un colore diverso per ciascun
composto.
5. Selezionare un intervallo COV desiderato in XIC e fare clic col tasto destro e
selezionare Show Spectrum.
55 di 76
Si aprirà sotto XIC lo spettro per l'intervallo COV selezionato, con l'intensità sull'asse
y e le masse Q1/Q3 in Da sull'asse x. Questo visualizza l'intensità di tutti i composti
che compaiono nella cella di mobilità ionica SelexION™ nell'intervallo COV
selezionato. Nel titolo dello spettro aperto verrà visualizzato l'intervallo COV
selezionato.
Visualizzare un Contour Plot per i Dati Acquisiti con il
Parametro COV Incrementato Gradualmente
Il software Analyst® può visualizzare un contour plot per i dati che si stanno acquisendo con un
metodo di acquisizione con il parametro COV incrementato gradualmente e un tipo di scansione
completa. I contour plot forniscono la visualizzazione della separazione dei composti. Per
maggiori informazioni sui contour plot, fare riferimento a Contour Plots nel capitolo Analisi ed
Elaborazione dei Dati nella Guida Introduttiva e Analisi Qualitativa dei Dati nella Guida Utente
Avanzato.
Visualizzare un contour plot per i dati acquisiti con il parametro COV incrementato
gradualmente
2. Nella finestra di dialogo Select Sample, nella casella Data Files, selezionare il file dati
(file .wiff) per il quale si desidera visualizzare il contour plot.
3. Nel riquadro Samples, selezionare il campione per il quale si desidera visualizzare il
contour plot e quindi fare clic su OK.
56 di 76
Si aprirà TIC per il file dati selezionato. L'asse x visualizza COV in volt e l'asse y
visualizza l'intensità in cps.
4. Evidenziare l'intervallo che si desidera visualizzare nel contour plot. Se non si
effettua una selezione verrà visualizzato l'intero intervallo.
5. Fare clic col tasto destro nel TIC e selezionare Show Contour Plot.
Si aprirà Il contour plot per il campione selezionato sotto la finestra TIC. L'asse x
visualizza COV in volt e l'asse y visualizza m/z in Da.
6. Per visualizzare lo spettro, selezionare un'area desiderata nel contour plot, fare clic
col tasto destro e selezionare Show Spectrum.
57 di 76
Si aprirà lo spettro per l'intervallo COV selezionato sotto la finestra del contour plot.
Questo visualizza l'intensità (asse y) di tutti i valori m/z (asse x) nell'intervallo COV
selezionato. Nel titolo dello spettro aperto verrà visualizzato l'intervallo COV
selezionato.
Visualizzare i Parametri DMS Incrementati Gradualmente in
File Information mentre si Visualizzano i File Dati
Le condizioni sperimentali usate per raccogliere i dati sono conservate nei file di dati assieme ai
risultati. In File Information del file dati si possono vedere i parametri DMS incrementati
gradualmente che sono stati utilizzati per acquisire campioni.
Visualizzare i parametri DMS incrementati gradualmente in File Information mentre
si visualizzano i file dati
2. Nel riquadro Data Files, selezionare il file .wiff che si desidera visualizzare.
3. Nel riquadro Samples, selezionare il campione che si desidera visualizzare e fare
quindi clic su OK.
Si aprirà XIC per il file dati selezionato.
4. Per visualizzare le informazioni del file, fare clic sull'icona Show File Info sulla barra
degli strumenti.
Si aprirà il riquadro File Information sotto TIC.
5. Fare clic su Period 1 nel lato sinistro del riquadro File Information.
I valori start, stop e step utilizzati per il parametro COV incrementato gradualmente
vengono visualizzati insieme ad altre informazioni nella parte sinistra del riquadro
File Information.
58 di 76
È possibile selezionare il periodo e l'esperimento desiderato nel riquadro sinistro per
vedere le diverse configurazioni sperimentali utilizzate nel metodo di acquisizione
utilizzato per raccogliere dati. Sono registrati lì anche tutti i parametri DMS utilizzati
durante l'acquisizione del campione.
59 di 76
60 di 76
6
Utilizzo dei Parametri DMS in IDA
Obiettivi
•
Creare un metodo Information Dependent Acquisition (IDA) per incrementare
gradualmente Compensation Voltage (COV) durante la modalità di acquisizione
batch.
•
Visualizzare i dati IDA acquisiti con l'incremento graduale di COV nell'esplora IDA.
Prerequisiti
•
Assicurarsi che la tecnologia SelexION™ sia installata sullo strumento e che il
modulo di controllo sia acceso.
Creazione di un Metodo di Acquisizione IDA per
incrementare gradualmente COV durante
l'Acquisizione Batch
Invece di utilizzare la cromatografia liquida (LC) per analizzare i campioni, il dispositivo
SelexION™ può essere utilizzato con l'infusione per separare i composti di interesse e filtrare
rumore chimico o interferenza. Con il dispositivo SelexION, la funzione di incremento graduale di
COV del software Analyst® può essere utilizzata per simulare il gradiente LC.
Oltre alla modalità Manual Tuning, il parametro COV può essere incrementato gradualmente
anche durante l'acquisizione batch, selezionando la casella di controllo Ramp COV in un metodo
di acquisizione nell'editor Acquisition Method. Il parametro COV viene trattato come un
parametro dipendente dal ciclo. La funzione di incremento graduale di COV funziona per un
metodo di acquisizione DMS a singolo periodo.
I metodi IDA, Dynamic Fill Time (DFT) e con algoritmo Scheduled MRM™ senza incremento
graduale di parametro saranno eseguiti per la durata necessaria al metodo, mentre i metodi IDA
e DFT con incremento graduale di COV saranno eseguiti per il numero di cicli necessari in base
ai valori di incremento graduale start, stop e step di COV. L'esecuzione del metodo si arresterà
con l'acquisizione dell'ultimo intervallo di COV e non quando verrà raggiunta la durata del
metodo. Il valore di COV è calcolato in modo dinamico e viene impostato per ogni ciclo.
I valori COV, SV, DT e DMO delle transizioni MRM nella scansione di verifica (o qualsiasi altra
scansione IDA di verifica supportata) vengono propagati automaticamente alle scansioni
dipendenti in un metodo IDA. Questo si applica anche metodo IDA con algoritmo Scheduled
MRM e alla pre-scansione DFT per un metodo IDA MRM-triggered con scansioni DFT.
Anche il modificatore utilizzato nella scansione di verifica di un metodo MRM IDA viene
automaticamente propagato alle scansioni dipendenti.
È possibile utilizzare questa procedura quando i valori per tutti i parametri DMS ad eccezione di
COV siano stati già ottimizzati.
61 di 76
Creazione di un metodo di acquisizione IDA per l'incremento graduale di COV
durante la modalità di acquisizione batch
2. Creare un metodo IDA con una scansione MRM come scansione di verifica. Fare
riferimento a Esercitazione IDA.
3. Nell'editor del metodo di Acquisizione, nel metodo IDA aperto creato al punto
precedente, fare clic su MRM nel riquadro del metodo di Acquisizione.
4. Selezionare la casella di controllo Ramp COV nella scheda MS e fornire i seguenti
valori COV nell'intervallo COV consentito da –100 a 100 volt:
•
Start: Digitare la tensione alla quale iniziare l'incremento graduale.
•
Start: Digitare la tensione alla quale interrompere l'incremento graduale.
•
Step: Impostare l'ampiezza degli intervalli di ogni ciclo.
62 di 76
6. Immettere i valori ottimizzati dei parametri composto nella scheda Compound. Fare
riferimento a Esercitazione di Ottimizzazione Manuale.
7. Immettere i valori ottimizzati dei parametri della sorgente ionica e del gas nella
scheda Source/Gas. Assicurarsi che la temperatura della sorgente (TEM) specificata
qui sia la stessa utilizzata per l'ottimizzazione dei parametri DMS. Fare riferimento a
Esercitazione di Ottimizzazione Manuale.
8. Selezionare la scheda DMS e procedere come segue:
•
Selezionare i valori desiderati per i parametri DMS Temperature (DT),
Modifier (MD) e DMS Resolution Enhancement (DR) . Assicurarsi che la
temperatura DMS specificata qui sia la stessa utilizzata per l'ottimizzazione
dei parametri DMS.
•
Immettere il valore ottimizzato di SV per tutti i composti nel campo Separation
Voltage (SV).
•
Immettere il valore ottimizzato di DMO per tutti i composti nel campo DMS
Offset (DMO).
63 di 76
9. Fare clic su OK.
hardware.
11. Salvare il metodo di acquisizione. Si può utilizzare per acquisire dati e incrementare
gradualmente COV durante l'acquisizione batch.
Nota: Qualora la scansione dipendente fosse una scansione LIT, è consigliabile
aumentare di 20ms il tempo di configurazione nella scansione di verifica al fine di
evitare che in alcuni casi vengano visualizzati ioni residui nella scansione di verifica.
Creazione e Invio di Batch per l'Acquisizione dei
Dati
Utilizzando il metodo di acquisizione IDA creato in questo capitolo, creare e inviare batch per
acquisire dati. Fare riferimento a Esercitazione IDA, Guida Introduttiva, Guida utente - Strumenti
Serie 6500 e Guida per l'Utente Avanzato.
Visualizzazione Dati IDA
Quando si acquisiscono dati utilizzando un metodo IDA, i dati non saranno aperti nel
visualizzatore IDA finché l'acquisizione non sia terminata, ma durante l'acquisizione
compariranno nella finestra Explore.
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Per rendere più semplice la visualizzazione dei dati IDA si può impostare l'Explorer IDA come
visualizzatore preimpostato. Si può utilizzare la scheda IDA Explorer nella finestra di dialogo
Appearance Options per selezionare quale Explorer IDA verrà utilizzato nella visualizzazione dei
dati IDA. Si può anche selezionare le colonne del riquadro Mass List - List View. L'Explorer IDA è
preimpostato per la visualizzazione di campioni IDA.
Per maggiori informazioni, fare riferimento a Visualizzare dati IDA in Esercitazione IDA.
Visualizzare i dati IDA acquisiti con l'incremento graduale del parametro COV
nell'esplora IDA
1. Assicurarsi di essere nella cartella progetto in cui sono stati salvati i dati IDA
acquisiti.
3. Dall'elenco Data Files, selezionare il file .wiff che contiene i dati IDA acquisiti che si
desidera visualizzare.
4. Nell'elenco Samples, fare clic sul campione desiderato e fare quindi clic su OK.
Si aprirà la finestra IDA Explorer. Nel lato sinistro del riquadro viene mostrato un
elenco di masse inviate alla scansione dipendente con una visualizzazione ad
albero o una visualizzazione elenco. Si può passare da una vista all'altra
selezionando Tree View o List View in fondo al riquadro Mass List.
Nel lato sinistro del riquadro vengono visualizzati graficamente i dati IDA. Notare che
invece del tempo viene visualizzato l'intervallo di incremento graduale di COV
sull'asse x nei grafici TIC e XIC.
5. Utilizzare i due pulsanti sopra al grafico per passare dalla visualizzazione a singolo
grafico a quella a più grafici. Per visualizzare solamente il grafico attivo, fare clic su
Show only active graph. Per tornare alla visualizzazione a più grafici, fare clic su
Show all the graphs. Per visualizzare tutti i grafici in Explorer, fare clic su Export all
the graphs to Explorer.
65 di 76
3
2
1
Figura 6-1
Pulsanti nell'Explorer IDA
Elemento Nome del pulsante
1
Show all the graphs
2
Show only active graph
3
Export all the graphs to Explorer
66 di 76
A
Informazioni supplementari
Descrizione dei Parametri DMS
Tabella A-1 Parametri DMS, Descrizioni e Possibili Impostazioni
Nome del parametro
Descrizione
Possibili valori
DMS Temperature
(DT)
È la temperatura applicata al riscaldatore
ceramico, installato sulla parte posteriore
dello scambiatore termico della piastra
curtain.
• Low (150 °C;
Predefinito)
Per ogni modifica del valore DT, lasciare
che il sistema raggiunga l'equilibrio per
almeno 10-15 minuti prima di ottimizzare
qualsiasi parametro DMS.
• Medo (225 °C)
• Alto (300 °C)
Quando si raggiunge la nuova temperatura,
viene visualizzato “DMS Temperature
reached” sopra al campo DT.
Modifier (MD)
È un prodotto chimico che viene aggiunto
nel flusso di Curtain Gas™ per aumentare
la separazione degli ioni. Se il valore MD è
impostato a None, i parametri MDC, MDD e
MDW non sono disponibili. Se il valore MD
è impostato a un valore diverso da None, il
parametro MDC diventa disponibile. Se si
assegna il valore Custom a MD, i parametri
MDC, MDD e MDW diventano disponibili.
• None (Predefinito)
• 2-Propanol
• Acetonitrile
• Metanolo
• Acetone
• Custom
Modifier Composition
(MDC)
Il parametro MDC controlla la
• Off (0)
concentrazione del modificatore. Il software
• Low (predefiniito; 1,5%
Analyst® utilizzerà la densità e il peso
o più)
molecolare del modificatore selezionato e il
• High (3,0)
valore del flusso del Curtain Gas per
calcolare la velocità di flusso della pompa
del modificatore e applicare questa velocità
in modo automatico.
Modifier Density (g/
mL) (MDD)
È la densità di un modificatore
personalizzato. Il software Analyst utilizza
questa densità in aggiunta al peso
molecolare del Modificatore e al valore del
flusso di Curtain Gas per determinare la
velocità di flusso della pompa del
modificatore.
Indicare la densità del
modificatore in g/mL.
67 di 76
Tabella A-1 Parametri DMS, Descrizioni e Possibili Impostazioni (Continua)
Nome del parametro
Descrizione
Possibili valori
Modifier MW (MDW)
È il peso molecolare in g/mol di un
Indicare il peso
modificatore personalizzato. Il software
molecolare (g/mol) del
Analyst utilizza il valore di questo parametro modificatore.
in aggiunta alla densità del Modificatore e al
valore del flusso di Curtain Gas per
determinare la velocità di flusso della
pompa del modificatore.
Separation Voltage
(SV)
È il picco all'ampiezza di picco della forma
d'onda della tensione di separazione.
• 0.0 (Predefinito)
• Intervallo consentito:
da 0 al massimo valore
SV in base ai parametri
DT e TEM in ciascun
metodo
• Specificare il valore di
Separation Voltage.
Compensation Voltage È un potenziale di offset CC tra i due
• 0.0 (Predefinito)
(COV)
elettrodi del dispositivo di mobilità. Per
• Intervallo consentito:
esempio, se COV misura 5 volt, uno dei due
da –100 a 100
elettrodi ha un potenziale applicato più
• Indicare il valore di
elevato di 5 volt rispetto all'altro elettrodo.
da applicare.
DMS Offset (DMO)
È la tensione applicata ai due elettrodi della • –3.0 volt in polarità
positiva; 3.0 volt in
cella di mobilità SelexION™, relativa al
polarità negativa
potenziale dell'orifizio. Per esempio, se il
(Predefinito)
potenziale offset DMS misura 5 volt e il
potenziale dell'orifizio è a 100 volt, i due
• Intervallo di ingresso:
elettrodi di fronte all'entrata dell'orifizio
da –100 a 100
hanno un potenziale di 105 volt. L'offset
• Indicare il valore di
DMS è un modo per regolare la
DMO.
trasmissione fuori dalla cella di mobilità
ionica SelexION nello spettrometro di
massa.
68 di 76
Tabella A-1 Parametri DMS, Descrizioni e Possibili Impostazioni (Continua)
Nome del parametro
Descrizione
Possibili valori
DMS Resolution
Enhancement (DR)
Questo parametro controlla il flusso del gas
azoto che può essere attivato tra l'uscita del
dispositivo SelexION e l'orifizio di entrata
nello spettrometro di massa. Negli
strumenti della serie 6500, quando il
valore di DR è impostato a Off, Low,
Medium o High, è attivo il flusso del gas,
che aumenta la risoluzione del dispositivo
SelexION.
Per gli strumenti della
serie 6500
• Open (0; predefinito)
• Off (10)
• Low (22)
• Medio (34)
• Alto (43)
Per gli strumenti della serie 5500, i valori
Per gli strumenti della
Low, Medium o High di DR attivano il flusso
serie 5500
del gas che migliora la risoluzione del
• Off (0; default)
dispositivo SelexION.
DR si riferisce anche alla manopola del gas. • Low (10)
• Medium (25)
• High (40)
DR può essere impostato
alla modalità Operator
nell'Editor Parameter
Settings e l'intervallo
consentito va da 0 a 100.
Stato dei Parametri DMS nella Modalità DMS Off
Tabella A-2 Stato dei Parametri DMS nella Modalità DMS Off
Parametri DMS
Stato in modalità DMS Off
DMS Temperature (DT)
Visibile su UI (interfaccia utente); valore = Low
(predefinito)
Modifier (MD)
Nascosto; valore = none
Nascosto; valore = 0
Compensation Voltage (COV)
Nascosto; valore = 0
DMS Offset (DMO)
Nascosto; valore = –3.0 volt in polarità positiva; 3.0 volt in
polarità negativa
DMS Resolution Enhancement (DR) Nascosto; valore = Open (per gli strumenti della serie
6500); valore = Off (per gli strumenti della serie 5500)
69 di 76
Valori dei Parametri DMS e della Sorgente
Utilizzati Durante l'Eliminazione del Modificatore
Tabella A-3 Parametri DMS e della Sorgente Utilizzati Durante l'Eliminazione del
Modificatore
Nome del parametro
Valore impostato durante l'eliminazione del
modificatore
Modifier Pump Flow Rate
1000 (µL/min)
Temperature (TEM)
300
225
DMS Resolution Enhancement (DR)
0
0
0
DMS Offset (DMO)
3
Ion Source Gas 1 (GS1)
50
Ion Source Gas 1 (GS2)
50
Curtain Gas (CUR)
20
IonSpray Voltage (IS)
0
Collision Gas (CAD)
Predefinito del sistema
Valori dei Parametri DMS e della Sorgente
quando l'Eliminazione del Modificatore viene
Terminata o Interrotta
Tabella A-4 Reimpostazione Parametri DMS e della Sorgente quando l'Eliminazione del
Modificatore viene Terminata o Interrotta
Nome del parametro
Valore dopo il termine o l'interruzione dell'eliminazione
modificatore
150
Temperature (TEM)
0
Modifier Pump Flow Rate
0
GS1
20
GS2
0
CUR
30
CAD
6 (per Sistemi AB SCIEX Triple Quad™ 5500 e AB SCIEX Triple
Quad 6500); 9 (medium) per sistemi QTRAP® 5500 e QTRAP
6500
70 di 76
Campione Infusione-T nel flusso LC
ATTENZIONE!Pericolo di Esposizione ad Agenti Chimici Tossici: Assicurarsi che
il dado del tubo di campionamento sia stretto correttamente prima di usare
questa apparecchiatura. Se il dado non è serrato, il campione può fuoriuscire e
sussiste il rischio di esposizione a sostanze chimiche pericolose.
1. Sostituire la giunzione di messa a terra a due vie con una giunzione di messa a terra
a tre vie (PN 018786: Raccordo di giunzione 0.15 mm Bore; PN 018787: Montaggio
anello a T) sulla sorgente ionica.
2. Collegare il tubo in PEEK rosso dalla pompa a siringa fino alla giunzione di messa a
terra posta sulla sorgente ionica.
3. Collegare la giunzione di messa a terra sulla sorgente ionica a una pompa LC.
4. Collegare il dado del tubo di campionamento alla giunzione di messa a terra
attraverso un pezzo di tubo in PEEK rosso. Fare riferimento al tema Collegare tubi e
cavi nella Guida per l'Operatore - Sorgente Ionica Turbo V™.
Suggerimento!Infusione-T (infusione separata) può essere eseguita anche utilizzando
un raccordo a T esterno per collegare le tre linee. I flussi siringa e LC si collegano al
raccordo a T, che a sua volta è collegato alla giunzione di messa a terra a due vie.
ATTENZIONE!Pericolo di Scosse Elettriche: Non bypassare la giunzione di messa
a terra. La giunzione di messa a terra fornisce una protezione di sicurezza tra lo
spettrometro di massa e il sistema di introduzione del campione.
Riempimento del Contenitore del Modificatore
Attenzione:Non riempire il contenitore del modificatore quando si trova nel vassoio
laterale.
1. Scollegare la linea del liquidi dal contenitore del modificatore nel vassoio laterale.
2. Riempire il contenitore del modificatore in un luogo sicuro con la dovuta cautela.
ATTENZIONE!Pericolo di Esposizione ad Agenti Chimici Tossici: Porre
attenzione durante il riempimento dei contenitori del modificatore con
prodotti chimici caustici pericolosi o tossici.
3. Reinstallare il contenitore del modificatore nel vassoio laterale e ricollegare la linea
del liquido.
71 di 76
72 di 76
B
Risoluzione dei problemi
Problema 1
Viene visualizzato un messaggio di errore in merito al rilevamento di una scarica nella cella di
mobilità ionica SelexION™ durante l'acquisizione del campione o la fase di equilibrio.
Soluzione
Abbassare SV di 100 volt e ottimizzare nuovamente i Parametri DMS.
Quando viene rilevata una scarica nella cella di mobilità ionica SelexION durante l'acquisizione
del campione, il software Analyst® interrompe l'acquisizione del campione e registra l'errore nel
file di registro eventi. Facendo doppio clic nella coda sul campione interrotto, viene visualizzato
un messaggio di errore.
Se viene rilevata una scarica nella cella di mobilità ionica SelexION, evitare di ripetere la scarica
utilizzando lo stesso metodo, diminuire i valori Separation Voltage (SV) o DMS Temperature (DT)
nel metodo di acquisizione. I parametri DMS dovranno essere nuovamente ottimizzati per i nuovi
valori SV o DT.
Se si registrano scariche con combinazioni SV e DT che funzionavano in passato, pulire e
allineare gli elettrodi della cella di mobilità ionica SelexION. Fare riferimento alla Pulire e
Allineare gli Elettrodi della Cella di Mobilità Ionica a pagina 16.
Una volta cancellato l'errore, lo strumento va in modalità Standby.
Problema 2
Durante l'esecuzione dell'Ottimizzazione Composto FIA utilizzando il Sistema Shimadzu LC, il
processo di ottimizzazione sembra in stallo.
Soluzione
La durata predefinita dei metodi Shimadzu è di 90 minuti. Quando si regola la durata di una
scansione dello spettrometro di massa a una durata inferiore rispetto a quella del programma
Shimadzu (come nel metodo di regolazione predefinito) non si può interrompere l'esecuzione
della regolazione attraverso il software Analyst® dopo il completamento della scansione da parte
dello spettrometro di massa. Premere Run sul dispositivo di controllo per arrestare l'esecuzione
o modificare la durata predefinita dell'esecuzione Shimadzu per far corrispondere la durata MS
nell'editor del metodo Shimadzu.
Problema 3
Quando il modulo di controllo SelexION viene acceso o spento, l'icona Mass Spectrometer nel
software Analyst diventa rossa e rimane tale.
73 di 76
Risoluzione dei problemi
Soluzione
Prima che il modulo di controllo SelexION venga acceso o spento (per aggiungere o rimuovere
temporaneamente dal sistema la tecnologia SelexION), disabilitare il profilo hardware attivo nel
software Analyst. Una procedura differente da quella appena descritta può provocare uno stato
di instabilità dello spettrometro di massa e la conseguente perdita di controllo nel software
Analyst. Qualora il profilo hardware non fosse disattivato e lo spettrometro di massa divenisse in
questo modo instabile, il controllo può essere recuperato rimuovendo e riposizionando la
sorgente ionica, o spegnendo e riaccendendo lo spettrometro di massa e il modulo di controllo e
riattivando il profilo hardware.
74 di 76
Indice
A
analisi
dati qualitativi 54
dati quantitativi 53
C
calcolo del consumo di modificatore 50
ramping. Vedere Separation Voltage (SV)
22
composti isobarici
differenziamento 46
separazione 45
contour plot 56
I
incremento graduale COV
IDA 61
incremento graduale di COV 48
infusione separata 20
infusione-t 20
interfaccia di vuoto
illustrazione 9, 10
M
Manual Tuning
ottimizzazione con un modificatore 24
ottimizzazione senza modificatore 20
modalità di acquisizione batch 48
Modalità di funzionamento DMS Off 7
modificatore
eliminazione 28
interruzione pulizia 31
FIA 39
Infusione-T 33
ottimizzazione dei parametri DMS
in Manual Tuning 19
utilizzo di Ottimizzazione Composto 32
ottimizzazione dello strumento 41
P
Parametri DMS
Compensation Voltage (COV) 22, 68
DMS Offset (DMO) 23, 68
DMS Resolution Enhancement (DR) 23, 69
Modifier (MD) 22, 67
Modifier Composition (MDC) 26, 67
Modifier Density (MDD) 27, 67
Modifier MW (MDW) 27, 68
Separation Voltage (SV) 22, 68
Temperatura DMS 21, 67
R
regolazione dello strumento 7
S
stepping. Vedere Compensation Voltage
(COV) 22
T
Tecnologia DMS 5
benefici 6
ruolo dei modificatori 6
T-infusion
DMS Only 33
Parametri Composto e DMS 37
O
ottimizzazione composto 32
75 di 76
Indice
76 di 76

Software Analyst® 1.6 con Componenti per Strumenti Serie

Transcript

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