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Determinazione in UPLC-MS/MS di bisfenolo A ed alchilfenoli in
Doeorato di Ricerca in Scienze Veterinarie -‐ XXX Ciclo -‐ AA 2015/2016 -‐ Curriculum Produzioni Animali e Sicurezza Alimentare Tutor: Prof.ssa Teresa Gazzo? Do,orando: Adele Repossi CABA-‐Lab Laboratorio di Chimica AnaliCca Bio-‐Agroalimentare -‐ DIMEVET, Alma Mater Studiorum, Università degli Studi di Bologna, Via Tolara di Sopra, 50 – 40064 Ozzano dell’Emilia (BO), Italia INTRODUZIONE SCOPO DEL LAVORO Gli alchilfenoli (APs) ed il bisfenolo A (BPA) sono distrueori endocrini (EDCs) [1]. Gli APs sono i più importanC surfactanC non ionici usaC in applicazioni industriali, mentre il BPA è sopraeueo uClizzato per la produzione di policarbonato, resine epossidiche e ritardanC di fiamma [2]. La presenza di BPA e APs in matrici ambientali, in parCcolare nell’acqua e negli alimenC, ha suscitato notevole preoccupazione per possibili effem tossici sull’uomo [1]. FonW di BPA e APs Messa a punto di un metodo mulWresiduale mediante cromatografia liquida accoppiata alla speerometria di massa (UPLC-‐MS/MS) in vongola bisfenolo A (BPA) 4-‐n-‐nonilfenolo (4-‐n-‐NP) MATERIALI E METODI 4-‐n-‐ocClfenolo (4-‐n-‐OP) 4-‐tert-‐nonilfenolo (4-‐t-‐NP) 4-‐tert-‐ocClfenolo (4-‐t-‐OP) 1) MESSA A PUNTO METODO IN SPETTROMETRIA DI MASSA 1) SPETTROMETRIA DI MASSA Analita 2) MESSA A PUNTO METODO CROMATOGRAFICO 3) IPOTESI ESTRAZIONE 2) METODO CROMATOGRAFICO Colonna BEH C18 (1,7 μm, 2,1 mm x 50 mm) ACQUITY UPLC Transizioni CE (Ione Precursore > Ione Energia di Prodo,o) collisione BPA 227,2 > 133,2 227,2 > 212,2 25 20 BPA d16 standard marcato 241,3 > 223,3 241,3 > 142,2 20 25 4-‐n-‐NP 219,3 > 106,2 219,3 > 119,2 22 40 4-‐t-‐NP 219,3 > 133,2 219,3 > 177,2 25 55 4-‐n-‐OP 205,3 > 106,2 205,3 > 119,2 20 38 4-‐t-‐OP 205,3 > 133,2 28 3) MESSA A PUNTO ESTRAZIONE -‐ PURIFICAZIONE FASI MOBILI B A H2O MilliQ MeOH Tempo (min) Flusso (mL/min) % A % B Curva 0,0 0,4 90,0 10,0 -‐ 0,5 0,4 90,0 10,0 1 4,0 0,4 0,0 100,0 6 8,0 0,4 0,0 100,0 1 8,1 0,4 70,0 30,0 6 9,0 0,4 70,0 30,0 1 Il sistema strumentale uClizzato per l’analisi UPLC-‐MS/MS è cosCtuito da una pompa binaria Waters Acquity UPLC abbinata ad uno speerometro di massa triplo quadrupolo Waters Quaero Premiere XE. La modalità di ionizzazione uClizzata è l’electrospray negaCva (ESI-‐); l’analisi è stata condoea mediante mulCple reacCon monitoring (MRM), valutando due transizioni per ciascun analita. In figura un cromatogramma di una miscela di standard a 100 ppb in fase mobile. Pesare 2 g vongola in una falcon + 50 ppb standard marcato BPA d16 + 2 mL H2O disCllata, omogenizzare con Ultraturrax e vortexare 30 s Aggiungere 10 mL MeOH, omogenizzare con Ultraturrax 10 min in bagno ad ultrasuoni, centrifugare 5 min a 3000 rpm, raccogliere il surnatante bisfenolo A IPOTESI PURIFICAZIONE 4-‐n-‐nonilfenolo 4-‐n-‐ocClfenolo 4-‐tert-‐nonilfenolo 4-‐tert-‐ocClfenolo Protocollo purificazione 1 – HLB OASIS Protocollo purificazione 2 – HLB OASIS [3] Condizionare con 5 mL MeOH e 5 mL H2O; Caricare il campione; Condizionare con 5 mL CH2Cl2-‐MeOH (9:1), 5 mL MeOH, 5 mL H2O (pH 3-‐3,5); Lavare con 5 mL H2O e 5 mL MeOH-‐H2O (40:60); Caricare il campione; Eluire con 3 mL MeOH Lavare con 5 mL MeOH-‐ H2O (20:80); Desolvatare e risospendere in 1 mL fase mobile COMUNICAZIONI A CONVEGNI Eluire con 5 mL CH2Cl2-‐ MeOH (9:1) Desolvatare e risospendere in 0,5 mL MeOH Repossi A, Farabegoli F, Gazzom T, Zironi E, Pagliuca G. “Bisfenolo A nei prodom imci” XXV Congresso Nazionale AIVI -‐ Sorrento, 28-‐30 Oeobre 2015. PUBBLICAZIONI Repossi A, Farabegoli F, Gazzom T, Zironi E, Pagliuca G, 2016. Bisphenol A in edible part of seafood: a review. Italian Journal of Food Safety. In Press. BIBLIOGRAFIA 1. 2. 3. Gu Y, Yu X, Peng J, Chen S, Zhong Y, Yin D, Hu X, 2014. Simultaneous solid phase extracCon coupled with liquid chromatography tandem mass spectrometry and gas chromatography tandem mass spectrometry for the highly sensiCve determinaCon of endocrine disrupCng chemicals in seafood. J Chromatogr B 965:164–172. Salgueiro-‐González N, Turnes-‐Carou I, Muniategui-‐Lorenzo S, Lopez-‐Mahia P, Prada-‐Rodriguez D, 2012. Fast and selecCve pressurized liquid extracCon with simultaneous in cell clean up for the analysis of alkylphenols and bisphenol A in bivalve molluscs, J. Chromatogr. A 1270:80–87. Jing X, Bing S, Xiaoyan W, Xiaojie S, Yongning W, 2011. A study on Bisphenol A, nonylphenol, and octylphenol in human urine samples detected by SPE-‐UPLC-‐MS. Biomed Environ Sci 24:40–46. > Recupero analiW Mail: [email protected]
