fluorochrome conjugated single reagent

Monoclonal Mouse Anti-Human Myeloperoxidase Clone MPO-7
Codice n. C 7246
Codice n. F 0714
Codice n. R 7209
APC-Conjugated
FITC-Conjugated
RPE-Conjugated
Uso previsto
Per uso diagnostico in vitro.
C 7246, F 0714 e R 7209 sono utilizzati in citometria a flusso. L'interpretazione dei risultati deve essere
effettuata da un patologo qualificato nell'ambito dell'anamnesi del paziente e di altri test diagnostici.
Introduzione
La mieloperossidasi (MPO) umana è un polipeptide tetramerico di 150 kDa costituito da 2 subunità a legame
covalente di circa 59 kDa e da 2 subunità di circa 13 kDa. L'MPO è un enzima lisosomiale abbondantemente
presente nei granuli azzurrofili dei neutrofili e a concentrazioni inferiori nei granuli dei monociti. L'MPO
partecipa all'azione microbicida di queste cellule (1).
Reagente fornito
I coniugati Anti-MPO, C 7246, F 0714 e R 7209, sono stati ricavati da un anticorpo monoclonale murino
purificato. I coniugati sono forniti in forma liquida in tampone contenente 1% di albumina serica bovina (BSA) e
15 mmol/L di NaN3, a pH 7.2. Ogni fiala contiene 100 test (10 L di coniugati per massimo 106 leucociti di
sangue periferico umano normale).
Isotipo: IgG1, kappa. Concentrazione di coniugati in mg/L: vedi etichetta sulla fiala.
Anticorpo
codice n.
Fluorocromo
Controllo negativo
codice n.
F 0714
FITC (isotiocianato di fluoresceina, isomero
1)
X 0927
R 7209
RPE (R-ficoeritrina)
X 0928
C 7246
APC (alloficocianina)
X 0968
Immunogeno
MPO umana isolata da cellule di CML (2).
Specificità
L'Anti-MPO, MPO-7, marca in modo significativo il citoplasma dei granulociti neutrofili nel sangue periferico. I
monociti sono debolmente positivi, mentre i linfociti non evidenziano alcuna reazione. Nel midollo osseo, vengono
marcate le cellule della serie granulocitaria. L'Anti-MPO, MPO-7, marca anche la linea cellulare dei promielociti
umani HL-60, mentre altre linee cellulari mieloidi, come K-562 e KG-1, risultano costantemente non reagenti
(3). L'Anti-MPO, MPO-7, è un reagente utile nella leucemia mieloide acuta (4) perché marca un vasto numero di
casi (3, 5).
Precauzioni
1. Per operatori specializzati.
2. Questo prodotto contiene sodio azide (NaN3), sostanza chimica altamente tossica allo stato puro. Alle
concentrazioni indicate, il prodotto non è classificato come pericoloso, ma la sodio azide potrebbe reagire con
le tubature in piombo e rame formando azidi metalliche altamente esplosive. Per lo smaltimento del prodotto è
consigliabile sciacquare abbondantemente per prevenire la formazione di azidi metalliche nelle tubature.
3. Come per ogni prodotto di derivazione biologica, utilizzare procedure di manipolazione adeguate.
Conservazione
Conservare al buio a 2-8 °C. Non utilizzare dopo la data di scadenza stampata sulla fiala. Se i reagenti sono
custoditi con modalità diverse da quelle previste, verificarne lo stato di conservazione. Non vi sono segni
evidenti che indichino l'instabilità del prodotto. Pertanto, i controlli positivi e negativi devono essere condotti
simultaneamente ai campioni del paziente. Contattare il Servizio Tecnico se si osserva una colorazione
inattesa non imputabile a modifiche delle procedure di laboratorio e si sospetta un problema attribuibile
all'anticorpo.
Procedura di colorazione
1.
Trasferire in provetta 50 L (fino a 106 cellule) della sospensione cellulare da analizzare (sangue intero,
midollo osseo o cellule mononucleate).
2.
Aggiungere 100 L di Dako IntraStain Reagent A (fissazione), codice n. K 2311. Mescolare
delicatamente con un miscelatore per mantenere in sospensione le cellule.
(104045-002)
3.
Incubare a temperatura ambiente per 15 minuti.
4.
Aggiungere 2 mL di PBS e mescolare delicatamente utilizzando un miscelatore.
5.
Centrifugare a 300 x g per 5 minuti, quindi aspirare il surnatante, lasciando circa 50 L di liquido.
6.
Mescolare accuratamente con un miscelatore per mantenere in sospensione le cellule e aggiungere 100
l di Dako IntraStain Reagent B (permeabilizzazione), codice n. K 2311. Aggiungere 10 L del coniugato
anti-MPO. Mescolare delicatamente con un miscelatore per mantenere in sospensione le cellule.
7.
Come controllo negativo (vedi tabella) utilizzare un anticorpo monoclonale non reattivo dello stesso
isotipo, coniugato con lo stesso fluorocromo.
8.
Incubare al buio a temperatura ambiente per 15 minuti.
9.
Ripetere le fasi 4 e 5.
C 7246/F 0714/R 7209/IT/ROP/01.07.02 p. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
10.
Risospendere il precipitato in un liquido appropriato per l'analisi con citometria a flusso, ad es. 0,3 mL di
paraformaldeide all’1% (fissativo) in 0,01 mol/L di PBS, pH 7,4.
11.
Analizzare con citometro a flusso.
Si raccomanda di inserire un valido campione di controllo positivo e negativo in ogni sequenza per il controllo
del reagente e del preparato. I coniugati del fluorocromo sono fotosensibili, pertanto occorre tenere i campioni
al riparo dalla luce durante la procedura di colorazione e fino all'analisi.
Riferimenti bibliografici
1.
Klebanoff SJ. Myeloperoxidase. Proc Assoc Am Physicians 1999;111:383-89.
2.
Olsson I, Olofsson T, Odeberg H. Myeloperoxidase-mediated iodination in granulocytes. Scand J Haemat
1972;9:483-91.
3.
Nakase K, Sartor M, Bradstock K. Detection of myeloperoxidase by flow cytometry in acute leukemia.
Cytometry 1998;34:198-202.
4.
Kappelmayer J, Gratama JW, Karászi É, Menéndez P, Ciudad J, Rivas R, et al. Flow cytometric
detection of intracellular myeloperoxidase, CD3 and CD79a. Interaction between monoclonal antibody
clones, fluorochromes and sample preparation protocols. J Immunol Methods 2000;242:53-65.
5.
Lanza F, Latorraca A, Moretti S, Castagnari B, Ferrari L, Castoldi G. Comparative analysis of different
permeabilization methods for the flow cytometry measurement of cytoplasmic myeloperoxidase and
lysozyme in normal and leukemic cells. Cytometry 1997;30:134-44.
Legenda dei simboli
(104045-002)
Numero di catalogo
Limiti di temperatura
Utilizzare entro
Dispositivo medico
diagnostico in vitro
Conservare al riparo dalla luce
solare
Fabbricante
Consultare le istruzioni per
l’uso
Codice del lotto
C 7246/F 0714/R 7209/IT/ROP/01.07.02 p. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17