BD Yersinia Selective Agar

ISTRUZIONI PER L'USO
TERRENI SU PIASTRA
PRONTI ALL'USO
PA-254056.06
Rev.: April 2013
BD Yersinia Selective Agar (CIN Agar)
BD Aeromonas Yersinia Agar
USO PREVISTO
BD Yersinia Selective Agar (agar selettivo per Yersinia) (= CIN agar, agar cefsulodinairgasan-novobiocina) è un terreno differenziale selettivo per l'isolamento di Yersinia
enterocolitica, mentre BD Aeromonas Yersinia Agar è un terreno differenziale selettivo per
l'isolamento di Yersinia enterocolitica e Aeromonas spp. da diversi campioni clinici e non clinici.
PRINCIPI E SPIEGAZIONE DELLA PROCEDURA
Metodo microbiologico.
BD Yersinia Selective Agar è stato proposto da Schiemann in alternativa all'agar MacConkey
e ad altri terreni convenzionali per l'isolamento di Yersinia enterocolitica, un agente eziologico
della gastroenterite.1 Il terreno si è dimostrato superiore agli agar MacConkey, SS, CAL o Y.2
BD Aeromonas Yersinia Agar è una variazione del BD Yersinia Selective Agar che
favorisce la crescita non solo di Yersinia enterocolitica ma anche di Aeromonas spp. (altro
agente eziologico delle enteriti), avendo un ridotto contenuto di cefsulodina.3,4
In entrambi i terreni, i peptoni sono utilizzati come nutrienti e la fermentazione di mannitolo in
presenza di rosso neutro determina le caratteristiche colonie di Y. enterocolitica a "centro di
bersaglio", incolori e rosse al centro. L'inibizione selettiva di organismi Gram-negativi e Grampositivi si ottiene con cristal violetto, desossicolato di sodio e gli agenti antimicrobici
cefsulodina, Irgasan (triclosan) e novobiocina. Su BD Aeromonas Yersinia Agar, le specie
Aeromonas producono colonie chiare con centro da rosa a rosso, analogamente alla Yersinia.
Entrambi i microrganismi possono essere reciprocamente differenziati ricorrendo alla reazione
dell'ossidasi (positiva solo per gli Aeromonas).3-5
BD Yersinia Selective Agar e BD Aeromonas Yersinia Agar sono utilizzabili anche per
l'isolamento di Yersinia diverse dalla Y. enterocolitica, come la Y. pseudotuberculosis.5
REAGENTI
Formule* per litro di acqua purificata
BD Yersinia Selective Agar
Digerito pancreatico di gelatina
10,0 g Solfato di magnesio
0,001 g
Digerito peptico di tessuto
5,0
Cristal violetto
0,001
animale
Estratto di carne bovina
5,0
Rosso neutro
0,03
Estratto di lievito
2,0
Cefsulodina
0,015
Mannitolo
20,0
Irgasan
0,004
Piruvato di sodio
2,0
Novobiocina
0,0025
Cloruro di sodio
1,0
Agar
12,0
Desossicolato di sodio
0,5
pH 7,4 ± 0,2
A differenza del BD Yersinia Selective Agar, che contiene 0,015 g di cefsulodina, BD
Aeromonas Yersinia Agar contiene solo 0,004 g di cefsulodina per litro di terreno.
*Compensata e/o corretta per soddisfare i criteri di rendimento.
PRECAUZIONI
. Solo per uso professionale.
Non usare le piastre se presentano tracce di contaminazione microbica, alterazioni di colore,
essiccamento, incrinature o altri segni di deterioramento.
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Per maneggiare i prodotti in condizioni asettiche, riconoscere i rischi biologici e smaltire i
prodotti usati, consultare le ISTRUZIONI GENERALI PER L'USO.
CONSERVAZIONE E VITA UTILE
Alla consegna, conservare le piastre al buio a 2 – 8 °C nella confezione originaria fino a
immediatamente prima dell'uso. Evitare congelamento e surriscaldamento. Le piastre possono
essere inoculate sino alla data di scadenza (v. l'etichetta sulla confezione) e incubate per i
tempi di incubazione raccomandati.
Le piastre prelevate dalle confezioni da 10 già aperte possono essere usate per una settimana
se conservate in luogo pulito a 2 – 8 °C.
CONTROLLO DI QUALITÀ A CURA DELL’UTENTE
Inoculare i campioni rappresentativi con i seguenti ceppi (per informazioni più dettagliate, v.
ISTRUZIONI GENERALI PER L'USO). Incubare le piastre in ambiente aerobico a 25 ± 2 °C o
35 ± 2 °C e controllare i risultati dopo 20 – 24 h e 42 – 48 h.
Ceppi
BD Yersinia Selective Agar
(CIN Agar)
Inibizione da parziale a
completa
BD Aeromonas
Yersinia Agar
Aeromonas hydrophila
Crescita da discreta a buona,
ATCC 7966
colonie da incolori a rosa
pallido con centro da rosa a
rosso
Crescita da buona a
Yersinia enterocolitica
Crescita da buona a
ATCC 9610
eccellente, colonie rosa pallido eccellente, colonie rosa pallido
con centro rosso scuro
con centro rosso scuro
(colonie a “centro di
(colonie a “centro di
bersaglio”)*
bersaglio”)*
Escherichia coli ATCC 25922
Inibizione completa
Inibizione completa
Enterococcus faecalis
Inibizione da parziale a
Inibizione da parziale a
ATCC 29212
completa
completa
Proteus mirabilis ATCC 14153 Inibizione da parziale a
Inibizione da parziale a
completa
completa
Pseudomonas aeruginosa
Inibizione da parziale a
Inibizione da parziale a
ATCC 27853
completa
completa, crescita discreta
Staphylococcus aureus
Inibizione da parziale a
Inibizione da parziale a
ATCC 25923
completa
completa
Non inoculate
Rosa chiaro, lievemente opalescenti
* Possono diventare completamente rosa dopo 42 – 48 h di incubazione.
PROCEDURA
Materiali forniti
BD Yersinia Selective Agar (CIN Agar) o BD Aeromonas Yersinia Agar, entrambi su piastre
impilate Stacker da 90 mm. Microbiologicamente controllate.
Materiali non forniti
Terreni di coltura accessori, reagenti e apparecchiature di laboratorio necessarie.
Tipi di campioni
BD Yersinia Selective Agar è un terreno differenziale selettivo per l'isolamento di Yersinia
enterocolitica, mentre BD Aeromonas Yersinia Agar è un terreno differenziale selettivo per
l'isolamento di Aeromonas spp. e Yersinia enterocolitica da campioni di feci umane e tamponi
rettali (v. anche CARATTERISTICHE PRESTAZIONALI E LIMITAZIONI DELLA
PROCEDURA).
Procedura del test
Strisciare il campione non appena viene consegnato in laboratorio. La piastra strisciata è
utilizzata prevalentemente per isolare le colture pure dai campioni contenenti flora mista. In
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alternativa, se il materiale in coltura proviene direttamente da un tampone, rotolare il tampone
su una piccola area del bordo e strisciare da questa zona inoculata.
Aeromonas e Yersinia spp. si sviluppano bene a una temperatura compresa tra 25 e 37 °C. La
temperatura inferiore è ottimale per la Yersinia, in particolare per l'isolamento primario.
Incubare le piastre a 25 – 32 °C per 24 – 48 h.
Inoculare con il campione (incubando a 35 ± 2 °C) un terreno meno selettivo, come BD
MacConkey II Agar, per individuare altri patogeni coinvolti nell'infezione.
A volte, può essere necessario “l'arricchimento a freddo” per isolare la Yersinia enterocolitica
da campioni fecali e altri materiali come gli alimenti: inoculare circa 1 grammo di campione in 8
– 12 mL di soluzione fisiologica tamponata con fosfato (pH 7,2) e tenere a 4 °C per massimo
21 giorni.5,6 Per l'arricchimento di Aeromonas si può utilizzare acqua peptonata alcalina.4,7
Trasferire regolarmente le subcolture dalle rispettive basi di arricchimento alle piastre di
entrambi i terreni e strisciare per ottenere l'isolamento. Incubare le piastre come specificato in
precedenza.
Risultati
Le tipiche colonie di Yersinia enterocolitica hanno il centro rosso scuro circondato da un bordo
trasparente chiaro che le fa apparire come un "centro di bersaglio" su BD Yersinia Selective
Agar e BD Aeromonas Yersinia Agar dopo 24 h di incubazione, ma spesso diventano
completamente rosa dopo 42 – 48 h di incubazione. In genere, la zona trasparente manca
intorno alle colonie di Yersinia pseudotuberculosis. L'Aeromonas produce colonie più chiare,
anch'esse con centro da rosa a rosso, che sono ossidasi-positive. L'Aeromonas può essere
facilmente differenziata da Yersinia e altre Enterobacteriaceae con il tradizionale test
dell'ossidasi (solo Aeromonas spp. danno risultato positivo). Per un'identificazione completa
degli isolati sospetti è necessaria la conferma con test biochimici e sierologici.
PERFORMANCE E LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA
BD Yersinia Selective Agar (CIN) e BD Aeromonas Yersinia Agar sono adatti per
l'isolamento di Yersinia enterocolitica da campioni di feci umane e altri materiali.1,2, 5-8 Inoltre, BD
Aeromonas Yersinia Agar è utilizzato per l'isolamento di Aeromonas.3-5, 7,8
La Yersinia può essere isolata mediante piastratura diretta, ma i campioni che mostrano conte
insufficienti possono richiedere arricchimento a freddo (4 °C) in soluzione fisiologica tamponata
con fosfato.5,7 L'arricchimento a freddo, tuttavia, può risultare poco pratico perché richiede un
lungo tempo di incubazione e seleziona ceppi non patogeni di Y. enterocolitica e altre Yersinia
spp.5
L'arricchimento di Aeromonas in acqua peptonata alcalina può essere utile per l'isolamento da
popolazioni che disseminano un ridotto numero di microrganismi, come portatori o pazienti in
convalescenza.4,7
Su entrambi i terreni crescono anche altre Yersinia spp., come Y. pseudotuberculosis, Y.
frederiksenii e Y. intermedia.5 Benché la patogenicità delle ultime due specie sia tuttora
controversa, i loro isolati non devono essere ignorati.5
Per l'isolamento selettivo di Yersinia pestis si raccomanda BD Aeromonas Yersinia Agar
piuttosto che BD Yersinia Selective Agar.5
Su questi terreni possono svilupparsi Enterobacteriaceae diverse dalla Yersinia, in particolare
le specie Citrobacter. Non sempre Serratia e Citrobacter possono essere differenziate con
sicurezza dalla Yersinia solo in base alla morfologia delle colonie. È necessario quindi eseguire
test biochimici e sierologici per confermare e completare l'identificazione degli isolati.
Alcuni ceppi di Aeromonas potrebbero svilupparsi con difficoltà su BD Aeromonas Yersinia
Agar. Si raccomanda di integrare ulteriori terreni di isolamento per isolare tutta la popolazione
di questi microrganismi.
BIBLIOGRAFIA
1. Schiemann, D.A. 1979. Synthesis of a selective agar medium for Yersinia enterocolitica.
Can. J. Microbiol. 25:1298-1304.
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-3-
2. Head, C.B., D.A. Whitty, and S. Ratnam. 1982. Comparative study of selective media for
recovery of Yersinia enterocolitica. J. Clin. Microbiol. 16:615-621.
3. Altorfer, R., et al. 1985. Growth of Aeromonas spp. on cefsulodin-irgasan-novobiocin agar
selective for Yersinia enterocolitica. J. Clin. Microbiol. 22: 478-480.
4. Abbott, S.L. 2003. Aeromonas. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller,
and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for
Microbiology, Washington, D.C.
5. Bockemühl, J., and J.D. Wong. 2003. Yersinia. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H.
Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed.
American Society for Microbiology, Washington, D.C.
6. Weissfeld, A.S. and A.C. Sonnenwirth. 1982. Rapid isolation of Yersinia spp. from feces. J.
Clin. Microbiol. 15:508-510.
7. Kist, M., et al. 2000. Infektionen des Darmes. In: Mauch, H., Lüttiken, R., and S. Gatermann
(eds.): MiQ - Qualitätsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik, vol. 9.
Urban & Fischer, Munich, Germany.
8. Downes, F.P., and K. Ito. 2001. Compendium of methods for the microbiological examination
of foods. 4th edition. American Public Health Association (APHA). Washington, D.C. USA.
CONFEZIONE/DISPONIBILITÀ
BD Yersinia Selective Agar (CIN)
N. di cat. 254056
Terreni su piastra pronti all'uso, confezioni da 20
N. di cat. 254088
Terreni su piastra pronti all'uso, confezioni da 120
BD Aeromonas Yersinia Agar
N. di cat. 254443
Terreni su piastra pronti all'uso, confezioni da 20
ULTERIORI INFORMAZIONI
Per ulteriori informazioni, rivolgersi al rappresentante BD di zona.
Becton Dickinson GmbH
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
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