ABL1/BCR - Technogenetics

ABL1/BCR
Sonde per Citogenetica Molecolare (FISH)
Descrizione della sonda
La sonda a DNA-FISH ABL1/BCR è disegnata per la rilevazione della traslocazione tra il gene ABL1 sul
cromosoma 9q34.1 e il gene BCR sul cromosoma 22q11.2 mediante fluorescence in situ hybridization (FISH). Questa
traslocazione reciproca comporta come risultato il cromosoma Philadelphia (Ph), il der(22), che è caratteristico della
Leucemia Mieloide Cronica (LMC). Il 90-95% circa di Leucemie Mieloidi Croniche e fino al 5% di Leucemie Linfatiche
Acute (LLA) pediatriche e il 20% di LLA adulte risultano positive al Ph.[1,3] La FISH per ABL1/BCR è usata nella diagnosi,
prognosi e monitoraggio delle t(9;22) nei pazienti con LMC e LLA.[4] Un sottoinsieme di casi di LMC (~10%) e di LLA (~5%)
presentano estese delezioni adiacenti ai punti di rottura (breakpoint) sui cromosomi der(9) e der(22).[4-5]Queste
delezioni submicroscopiche determinano una prognosi infausta [6] e possono essere rilevate con tale sonda.
9q34
centromere
ABL1
ASS
5’
Rappresentazione schematica della sonda ABL1/BCR
3’
~285kb
~390kb
BCR
BCR
ABL1
9
22q11
centromere
22
5’
3’
~350kb
~390kb
telomere Le barre orizzontali rossa e verde indicano le regioni coperte dalle
sonde (approssimate alla scala, Build 36.1/Hg18/2006). Le sonde
ABL1/BCR sono esterne ai breakpoint comuni della traslocazione
(frecce). I breakpoint in ABL1 si trovano in una regione >300 kb,
spesso tra gli esoni 1b e1a, e talvolta prossimali all’esone 1b o distali
rispetto a 1a. Nel BCR la maggior parte dei breakpoint è raggruppata in
una regione di 5.8 kb tra gli esoni 12-16 (M-BCR, prima freccia). In un
telomere
sottogruppo di casi di LMC e LLA i punti di rottura sono raggruppati tra
gli esoni 1 e 2 (m-BCR) Un terzo cluster (u-BCR) si trova in posizione
distale rispetto all’esone 19.
Interpretazione del segnale
Nella metafase normale diploide e nei nuclei in interfase, la sonda genera 2 segnali rossi e 2 verdi corrispondenti
rispettivamente ai 2 cromosomi 9 e 22 normali (Figura 1). Nelle cellule con la traslocazione tra ABL1 e BCR, il pattern
che si osserva più comunemente è un segnale rosso e uno verde, che rappresentano i cromosomi 9 e 22 normali, e 2
segnali di fusione (rosso/verde o giallo) che invece rappresentano i 2 cromosomi traslocati (Figura 2). Le delezioni
adiacenti ai breakpoint sul cromosoma der(9) e der(22) possono dare luogo a delle varianti nel pattern dei segnali, che
nella maggior parte dei casi si manifestano come perdita o riduzionedell’intensità di uno dei segnali di fusione. Sono
state riportate in letteratura traslocazioni varianti, mascherate o a 3 cromosomi. Si raccomanda l’ibridazione di metafasi
tumorali per confermare le varianti anormali del pattern di segnali che includono almeno un segnale di fusione.
Figure 1: Normal diploid metaphase
and interphase nucleus (from normal
peripheral blood specimen) with 2
red (ABL1) and 2 green (BCR) signals.
Referenze
1. Huret, J. L. t(9;22)(q34;q11) in CML, Dec. 1997.
www.AtlasGeneticsOncology.org.
2. Huret, J. L. t(9;22)(q34;q11) in ALL, Sep 1997.
www.AtlasGeneticsOncology.org.
3. Nashed, A. L., et al. J Mol Diagn, 2003. 5:63-72.
4. Landstrom, A.P., Tefferi, A. Leuk Lymphoma, 2006. 47(3): 397-402.
5. Gorusu, M., et al. Cancer Genet Cytogenet, 2007. 173:97-106.
6. Huntly, B.J. et al. Blood, 2003. 120(4): 1160-8.
www.technogenetics.it
Figure 2: Interphase nuclei with 1 red
(ABL1), 1 green (BCR), and 2 fusion
(red/green or yellow) signals.
Filtri Microscopio a Fluorescenza
Fluoroforo
Eccitazione max
Emissione max
Verde
496 nm
520 nm
Rosso
580 nm
603 nm
DAPI
360 nm
460 nm
27