Clinical Chemistry IL Test TM γ-GT - 0018254240

Clinical Chemistry
IL Test TM γ-GT - 0018254240
1 x 370 mL γ-GT Buffer
4 x 90 mL γ-GT R2
ENGLISH - Insert revision 07/2003
Intended Use
Calibration
Reference Range
IL Test™ γ-GT is intended for the quantitative in vitro diagnostic determination of
gamma-glutamyl transferase (γ-GT) in human serum using the ILab Chemistry
Systems.
γ-GT measurements are used in the diagnosis and treatment of liver diseases
such as alcoholic cirrhosis and primary and secondary liver tumors.
Refer to the publication “Effects of Diseases on Clinical Laboratory Tests,”1 for a
summary of causes of increased and decreased γ-GT.
Enzyme activity is measured by the rate of production of a chromophore with well
defined optical properties. The molar absorptivity constant of 5-amino-2-nitrobenzoate at
410 nm is 7.9 x 103 and at 405 nm is 9.5 x 103. Maintenance of optical properties,
fluidics and thermal control is critical to the accuracy of this assay. The ILab
continuously monitors fluidics, thermal control and some optical parameters.
Automatic daily maintenance monitors additional optical properties. Maintenance
procedures are detailed in the ILab Operator’s manual. Any adjustments to the ILab
should be immediately followed by performance of daily maintenance and quality
control procedures. Any failures in the continuous monitoring, daily maintenance
or quality control procedures indicate improper system performance. Reagent
blanking should be performed daily or before patient assays if the reagent is used
less frequently.
Males: 9 to 50 U/L (150 - 840 nKat/L)7
Females: 9 to 30 U/L (150 - 503 nKat/L)7
IL recommends that each laboratory establish its own reference range since ranges
may vary with age, diet, gender and geographical area.
Principle/Test Summary
Rate analysis. This γ-GT method follows the IFCC recommendations.2
γ-GT
L-γ-glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide + glycylglycine
L-γ-glutamylglycylglycine + 5-amino-2-nitrobenzoate
The rate of increase in absorbance due to formation of 5-amino-2-nitrobenzoate is
directly proportional to the γ-GT activity in the sample. Absorbance measurements
are taken at 410 nm (ILab 900/1800) or 405 nm (ILab 600).
Reactive Ingredients of Final Assay Mixture
-
-
-
-
Sodium hydroxide
Glycylglycine
L-γ-glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide
Buffer
60 mmol/L
150 mmol/L
6.0 mmol/L
Precautions
Handle all specimens as potentially infectious for HIV or Hepatitis B.
Avoid contact with skin and eyes (S24/25).
Do not empty into drains (S29).
Wear suitable protective clothing (S36).
This product is For in vitro Diagnostic Use.
Data Analysis
VR ACTsample (U/L) = EF x ∆A EF =
x
VS 1
x
E 1
PL
x
10
6
Where
ACT = activity
∆A = Change in absorbance per minute
EF = Enzyme factor
VR = Total reaction volume (mL)
VS = Total sample volume (mL)
E = Molar absorptivity constant
PL = Pathlength of cuvette (cm)*
* The measurement of the ILab cuvette (0.5 cm for ILab 600 and 0.6 cm for ILab
900/1800) is automatically converted to 1 cm pathlength by the ILab.
For γ-GT in the ILab 900/1800:
0.286 x
1
x
0.026 7.9 x 103
EF =
0.198 x
1
x
0.018 9.5 x 103
1
1
x
106
= 1392
x
106
= 1158
For γ-GT in the ILab 600:
Reagent Preparation
Reconstitute the reagent in the γ-GT R2 container with 90 mL of γ-GT Buffer.
Reseal the container and dissolve contents by gentle swirling or inversion.
Do not shake or allow to foam.
Allow the working reagent to stand for 5-10 minutes before use.
Place into reagent tray (ILab 900/1800: tray #2).
Storage of Unopened Reagents
1
1
Activity is expressed in International Units/Liter (U/L).
To convert U/L to nKat/L multiply by 16.67.4
Quality Control
Use normal and abnormal controls in accordance with good laboratory practices.
Analyze at least once per day. Use at least 2 levels of IL SeraChem® controls, such
as SeraChem® Level 1 (Cat. No. 0018162412) and SeraChem® Level 2 (Cat. No.
0018162512). The target values and expected ranges can be found on the insert
sheets.
For identi­fication and resolu­tion of out-of-control situations, references such as
Westgard et al.5 are recommended.
Refrigerate (2-8 °C) until expired. See expiration date on carton.
Working Reagent Storage and Stability
30 days at 2-8 °C or on board.
Indicators of Reagent Deterioration
Physical appearance: The working reagent should be clear and colorless; although
a slight yellow color is acceptable, a bright yellow color is a sign of contamination.
Control Assay: The proper range should be obtained during a controlled assay.
Absorbance Range: Changes in typical reagent blank absorbances may indicate
reagent deterioration.
Specimens
Serum. Samples may be stored for 7 days at 2-8 °C.3
Samples should be brought to room temperature and mixed before analysis.
The coefficient of variation (3 samples/runs, 20 runs) for a sample with 50 U/L γ-GT
should not be greater than 4% within run and 6% total.
Typical precision results obtained according to NCCLS protocol8:
ILab 600
Within Run
Total
Samples/Runs
3/20
3/20
Mean (U/L)
19
19
CV (%) Mean (U/L)
1.5
123
2.1
123
CV (%)
0.9
1.1
3/20
3/20
21
21
1.9
2.8
0.4
2.5
ILab 900/1800
The ILab calculates γ-GT activity as follows:
EF =
Precision
Within Run
Total
106
106
Method Comparison
Comparison Method (x)
Comparison Instrument
Slope
y intercept
Range (U/L)
Mean x (U/L)
Mean y (U/L)
r
SE
n
ILab 600
Same reagent
ILab 900
1.052
1.20
4 - 497
66
71
0.999
3.84
122
ILab 900/1800
Same reagent
Monarch 37 °C
1.047
0.84
11 - 542
80
85
0.980
1.74
100
Linearity
ILab 600
no rerun
with rerun
ILab 900/1800 no rerun
with rerun
Linearity range (U/L)
1 - 1000
1 - 10000
1 - 1000
1 - 1730
Linearity range (nKat/L)
17 - 16670
17 - 166700
17 - 16670
17 - 28840
Sensitivity
milliAbsorbance change per min per U/L
ILab 600
0.86
ILab 900/1800
0.71
Minimum Detection Limit
All ILab models: 1 U/L (17 nKat/L).
Interferences
ILab 600: No interference from lipemia up to sample absorbance of 4.9/cm at
660 nm (1100 mg/dL triglycerides). No interference up to 125 mg/dL (0.075 mmol/L)
hemoglobin. No interference up to 16 mg/dL (272 µmol/L) bilirubin.
ILab 900/1800: No interference from lipemia up to sample absorbance of 2.0/
cm at 660 nm. No interference up to 250 mg/dL (0.150 mmol/L) hemoglobin. No
interference up to 20 mg/dL (340 µmol/L) bilirubin.
For a comprehensive review of interfering substances, refer to the publication by
Young.6
IL Test TM γ-GT - 0018254240
DEUTSCH - Packungsbeilage Version 07/2003
Verwendung
Kalibration
Referenzbereich
Zur quantitativen in vitro Bestimmung der Aktivität der Gamma-GlutamylTransferase (γ-GT) in Serum mit dem ILab Analysensystem.
Die Bestimmung der γ-GT-Aktivität findet Verwendung in der Diagnose und
Behandlung bestimmter Arten von Lebererkrankungen wie z.B. Leberzirrhose.
Eine Übersicht der klinischen Bedeutung erhöhter bzw. verringerter γ-GT-Aktivitäten
wurde von Friedmann et al.1 zusammengestellt.
Diese Bestimmungsmethode muß nicht kalibriert werden, da im Reaktionsverlauf
ein Chromophor mit definierten optischen Eigenschaften gebildet wird.
Der Molare Extinktionskoeffizient von 5-amino-2-Nitrobenzoat bei 410 nm beträgt
7900 und bei 405 nm beträgt 9500. Es wird empfohlen, täglich oder bei seiten
benutzten Reagenzien unmittelbar vor der Analyse einen Reagenzienleerwert zu
ermitteln.
Männer: 9 - 50 U/L (150 - 840 nkat/L).7
Frauen: 9 - 30 U/L (150 - 503 nkat/L).7
Es wird jedem Labor empfohlen, eigene Referenzbereiche zu ermitteln. Der
γ-GT-Referenzbereich hängt von Alter, Geschlecht, Ernährungsweise und weiteren
Faktoren ab.
Testprinzip
Berechnung
Kinetisches Meßprinzip, IFCC-Empfehlungen2.
Die Ergebnisse werden vom ILab-Analysensystem wie folgt berechnet:
L-γ-Glutamyl-3-Carboxy-4-Nitroanilid + Glycylglycin
γ-GT
L-γ-Glutamylglycylglycin +
5-Amino-52-Nitrobenzoat
Die Absorptionszunahme aufgrund der Bildung von 5-Amino-2-Nitrobenzoat ist
proportional zur γ-GT-Aktivität in der Probe und wird mit Hilfe von
Absorptionsmessungen bei 410 nm quantifiziert (ILab 900/1800) oder bei 405 nm
quantifiziert (ILab 600).
Aktive Bestandteile
Endkonzentrationen im Test
- Natriumhydroxid
- Glycylglycin
- L-γ-Glutamyl-3-Carboxy-4-Nitroanilid
- Puffer
60 mmol/L
150 mmol/L
6,0 mmol/L
Enzymaktivität(Probe) (U/L) = ∆A x EF
EF =
VR x 106
VS x E x d
∆A: gemessene Absorptionsänderung pro Minute
EF: Enzymfaktor
VR: gesamtes Reaktionsvolumen (mL)
VS: eingesetztes Probenvolumen (mL)
E: Spezifischer Molarer Absorptionskoeffizient
d: Schichtdicke der Küvette (cm)*
*Die Ergebnisse werden vom ILab-Analysensystem intern auf die verwendete
Schichtdicke von 0,6 cm (ILab 900/1800) oder 0,5 cm (ILab 600) umgerechnet.
Präzision
Bei Verwendung einer Probe mit einer γ-GT-Aktivität von 50 U/L sollte der durchschnittliche Variations-Koeffizient (VK) in der Serie nicht größer als 4% und der VK
Gesamt nicht größer als 6% sein (3 Proben/Serie, 20 Serien).
Die folgenden typische Präzision Daten wurden nach NCCLS-Protokoll8 ermittelt:
ILab 600
In der Serie
Gesamt
ILab 900/1800
In der Serie
Gesamt
Proben/Serien Mittelwert (U/L)VK (%) Mittelwert (U/L)VK (%)
3/20
19
1,5
123
0,9
3/20
19
2,1
123
1,1
3/20
3/20
21
21
1,9
2,8
Herstellung der Arbeitslösung
Um von U/L auf nkat/L umzurechnen, ist mit Faktor 16,67 zu multiplizieren4.
Den Inhalt eines Reagenzcontainers γ-GT R2 mit 90 mL γ-GT Buffer
rekonstituieren. Vor Gebrauch 5 - 10 Min bei Raumtemperatur inkubieren.
In die Reagenzstation stellen (ILab 900/1800: Reagenzstation 2 stellen).
Qualitätskontrolle
Linearität
Es ist gängige Laborpraxis, die Qualität der Analyse mit Kontrollmaterialien
verschiedender Konzentrationsstufen (normal und pathologisch) zu überprüfen.
Mindestens eimal täglich sollte eine Richtigkeitskontrolle durchgeführt werden.
Es wird empfohlen, als Kontrollmaterial IL SeraChem® Level 1 (Best.- Nr.
0018162412) und SeraChem® Level 2 (Best.- Nr. 0018162512) zu verwenden.
Sollwerte und Bereiche sind der jeweiligen Packungsbeilage zu entnehmen.
Algorithmen zur Beurteilung der Qualitätskontrollergebnisse siehe z. B. Westgard
et al.5
Linearitätbereich (U/L)
ILab 600
bei ausgeschaltetem rerun
1 - 1000
bei eingeschaltetem rerun
1 - 10000
ILab 900/1800
bei ausgeschaltetem rerun
1 - 1000
bei eingeschaltetem rerun 1 - 1730
Störungen
Sensitivität
ILab 600: Keine Störung durch Lipämie bis zu einer Probenabsorption von 4,9 /cm
bei 660 nm (1100 mg/dL Triglyceride). Keine Störung durch Bilirubin bis zu einer
Probenkonzentration von 16 mg/dL (272 µmol/L). Keine Störung durch Hämoglobin
bis zu einer Probenkonzentration von 125 mg/dL (0,075 mmol/L).
ILab 900/1800: Keine Störung durch Lipämie bis zu einer Probenabsorption von
2,0 /cm a 660 nm. Keine Störung durch Bilirubin bis zu einer Probenkonzentration
von 20 mg/dL (340 µmol/L). Keine Störung durch Hämoglobin bis zu einer
Probenkonzentration von 250mg/dL (0,150 mmol/L).
Eine umfassende Übersicht von möglichen Störfaktoren wurde von
Young et al. zusammengestellt.6
∆Abs. pro 1 min pro U/L γ-GT
0,286 x 106
EF = 0,026 x 7900 x 1
Hinweis
Alle Proben wie potentiell infektiöses Material behandeln.
Berührung mit den Augen und der Haut vermeiden (S24/25).
Nicht in die Kanalisation gelangen lassen (S 29).
Bei der Arbeit geeignete Schutzkleidung tragen (S36).
Dieses Produkt ist nur für die in vitro Diagnostik geeignet.
= 1392
ILab 600: für diese Bestimmung der γ-GT-Aktivität gilt:
0,198 x 106
EF = 0,018 x 9500 x 1
Lagerung und Haltbarkeit des ungeöffneten Reagenz
Gekühlt lagern (2-8°C). Bei sachgemäßer Lagerung ist das Reagenz bis zum
aufgedruckten Verfallsdatum haltbar.
Lagerung und Haltbarkeit der Arbeitslösung
Bei 2-15°C: 30 Tage.
Anzeichen des Reagenzienzustandes
Optisches Bild: Das Arbeitsreagenz soll klar und farblos sein, eine leichte gelbliche
Verfärbung kann auftreten.
Qualitätskontrolle: Die Ergebnisse von Qualitätskontrollen müssen im jeweiligen
Sollbereich liegen.
Absorptionsbereich: Änderungen der typischen Absorption des Reagenzienleerwertes geben Hinweis auf einen verschlechterten Reagenzienzustand. Um die
optimale Analysenqualität sicherzustellen, wird empfohlen täglich oder bei selten
benutzten Reagenzien unmittelbar vor jeder Analyse einen Reagenzienleerwert zu
erstellen.
= 1158
0,4
2,5
Methodenvergleich
Vergleichsmethode (x)
Vergleichssystem
Steigung
Ordinatenabschnitt
Bereich (U/L)
Mittelwert x (U/L)
Mittelwert y (U/L)
r
Standardfehler
n
ILab 900/1800: für diese Bestimmung der γ-GT-Aktivität gilt:
106
106
ILab 600
Gleiches Reagenz
ILab 900
1,052
1,20
4 - 497
66
71
0,999
3,84
122
ILab 900/1800
Gleiches Reagenz
Monarch 37 °C
1,047
0,84
11 - 542
80
85
0,980
1,74
100
Linearitätbereich (nKat/L)
17 - 16670
17 - 166700
17 - 16670
17 - 28840
ILab 600
0,86
ILab 900/1800
0,71
Untere Nachweisgrenze
ILab 600/900/1800: 1 U/L (17 nKat/L).
Probenmaterial
Serum.
Die Proben können gekühlt (2-8°C) bis zu 7 Tage aufbewahrt werden.3
Vor Gebrauch müssen die Proben auf Raumtemperatur gebracht und gründlich
durchmischt werden.
IL Test TM γ-GT - 0018254240
ESPAÑOL - Revisión Prospecto 07/2003
Uso Indicado
Calibración
Valores de Referencia
IL Test™ γ−GT es para la determinación diagnóstica cuantitativa in vitro de
gama-glutamil transferasa en suero humano utilizando los analizadores de química
clínica ILab. Las medidas de γ−GT se usan en el diagnóstico y tratamiento de enfermedades hepáticas tales como cirrosis alcohólica y tumores hepáticos primarios
y secundarios.
Referirse al artÌculo "Effects of Diseases on Clinical Laboratory Tests"1 para una
recopilacion de las causas de incremento o disminución de γ−GT.
La actividad enzimática se mide en base a la velocidad de producción de un
cromóforo que posee propiedades ópticas bien definidas. El coeficiente de extinción molar del 5-amino-2-nitrobenzoato a 410 nm es 7,9 x 103 y a 405 nm es 9,5
x103. El control térmico y de flujos, y el mantenimiento de las propiedades ópticas
son críticos para obtener la máxima exactitud en esta determinación.
El ILab monitoriza constantemente los flujos, el control de temperatura y algunos
parámetros ópticos. El mantenimiento automático diario monitoriza propiedades
ópticas adicionales. Las tareas de mantenimiento se describen en el manual del
usuario. Todo ajuste que se realice sobre el ILab debe ser seguido inmediatamente
por las tareas diarias de mantenimiento y control de calidad. Toda falla en los
procedimientos de control de calidad y de mantenimiento diario resultará en el funcionamiento inadecuado del sistema. Se recomienda hacer un blanco de reactivo
cada día de trabajo, o antes de analizar las muestras si el reactivo es usado menos
frecuentemente.
Hombres: 9 a 50 U/L (150 a 840 nKat/L).7
Mujeres: 9 a 30 U/L (150 a 503 nKat/L).7
IL recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia pues
los valores pueden variar de acuerdo al sexo, edad, dieta y área geográfica.
Principio/Resumen
Análisis cinético. Este método sigue las recomendaciones de la IFCC.2
γ−GT
L-γ-glutamil-3-carboxi-4-nitroanilida + glicilglicina
L-γ-glutamilglicilglicina +
5-amino -2- nitrobenzoato
La velocidad de incremento de absorbancia debido a la formación de
5-amino-2-nitrobenzoato es directamente proporcional a la actividad γ−GT en la
muestra. La absorbancia se mide a 410 nm (ILab 900/1800) o a 405 nm (ILab 600).
Componentes Activos de la Mezcla en la Cuveta
Cómputo de los Resultados
La actividad γ−GT se calcula en el ILab como sigue:
ACTmuestra (U/L) = EF x ∆A
- Hidróxido de sodio
- Glicilglicina
- L-γ-glutamil-3-carboxi-4-nitroanilida
- Amortiguador
60 mmol/L
150 mmol/L
6,0 mmol/L
Precauciones
Trate las muestras como material potencialmente infectado por VIH o por
Hepatitis B.
Evítese el contacto con los ojos y la piel (S 24/25).
No tirar los residuos por el desagüe (S 29).
Usen indumentaria protectora adecuada (S 36).
Para uso diagnóstico in vitro.
Preparación de Reactivos
Agregar 90 ml de γ-GT Buffer al contenedor γ-GT R2. Cerrar el contenedor y
disolver el contenido agitando suavemente. No se debe agitar vigorosamente ni
permitir la formación de espuma. Dejar el reactivo en reposo durante 5-10 minutos
antes de usar.
Colocar el contenedor en el plato de reactivos (ILab 900/1800: plato No 2).
Conservación de Reactivos Sellados
EF =
Para γ−GT en el ILab 900/1800:
x
0,026
1
x
7,9 x 103
0,198 x
0,018
1
x
9,5 x 103
1
x 106 = 1392
1
1
x 106 = 1158
La actividad se expresa en Unidades Internacionales /Litro (U/L)
Para convertir U/L a nKat/L, multiplicar por 16,67.4
Conservación y estabilidad de reactivos abiertos
30 días a 2-8°C o en el instrumento.
Control de Calidad
Indicadores de Deterioro del Reactivo
Aspecto físico: El reactivo preparado debe ser límpido e incoloro; aunque un color
amarillo pálido es aceptable, un color amarillo intenso es indicador de contaminación.
Rango del control: El control debe dar un valor dentro del rango establecido.
Rango de absorbancia: Variaciones en los valores típicos de absorbancia del
blanco de reactivo pueden indicar deterioro del reactivo.
Se recomienda el uso de controles normales y anormales en concordancia con las
prácticas aceptadas de laboratorio. Comprobar el control al menos una vez por día.
Usar por lo menos dos niveles de controles IL SeraChem®, tales como SeraChem® Level 1 (Cat. No. 0018162412) y SeraChem® Level 2 (Cat. No.
0018162512). Ver los valores y los rangos esperados en los folletos adjuntos. Para
la identificación y resolución de valores que estén fuera del rango de aceptación,
se recomienda la consulta de la publicación de Westgard et al.5
Muestras
Interferencias
Suero.
Las muestras pueden ser almacenadas durante 7 días a 2-8°C.3
Las muestras deben ser llevadas a temperatura ambiente y homogeneizadas antes
de analizarlas.
ILab 600
Muestras/ensayos Media (U/L) CV (%) Media (U/L) CV (%)
Dentro ensayo
3/20
19
1,5
123
0,9
Total
3/20
19
2,1
123
1,1
ILab 900/1800
Dentro ensayo
3/20
21
1,9
106
0,4
Total
3/20
21
2,8
106
2,5
Método de comparación (x)
Instrumento de comparación
Pendiente
Intersección con y
Rango (U/L)
Media x (U/L)
Media y (U/L)
r
SE
n
ILab 600
Mismo reactivo
ILab 900
1,052
1,20
4 - 497
66
71
0,999
3,84
122
ILab 900/1800
Mismo reactivo
Monarch 37 °C
1,047
0,84
11 - 542
80
85
0,980
1,74
100
Linealidad
1
Para γ−GT en el ILab 600:
EF =
Mantener a 2-8°C hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
0,286
El coeficiente de variación (3 muestras / ensayo, 20 ensayos) para una muestra
con 50 U/L de γ−GT debe ser inferior al 4% dentro de cada ensayo e inferior al 6%
para el total de los ensayos. Los siguientes resultados fueron obtenidos de acuerdo
con el protocolo descrito por el NCCLS.8
Comparación de Métodos
VR x 1 x 1 x 106
VS E PL Donde:
ACT = Actividad
∆ A = Variación de absorbancia por minuto
EF = Factor enzimático
VR = Volumen total de reacción (mL)
VS = Volumen total de muestra (mL)
E = Coeficiente de extinción molar
PL = Paso de la cubeta (cm)*
* La medida realizada en cubeta de 0,5 cm (ILab 600) o de 0,6 cm (ILab 900/1800)
es automáticamente convertida a paso de cubeta de 1,0 cm por el ILab.
EF =
Precisión
Rango de linealidad (U/L) Rango de linealidad(nKat/L)
ILab 600 sin rerun
1 - 1000
17 - 16670
con rerun
1 - 10000
17 - 166700
ILab 900/1800sin rerun
1 - 1000
17 - 16670
con rerun
1 - 1730
17 - 28840
Sensibilidad
cambio de mAbs por minuto por U/L
ILab 600
0,86
ILab 900/1800
0,71
Límite Minimo de Detección
Para todos los sistemas ILab: 1 U/L (17 nkat/L).
ILab 600: No se observa interferencia por lipemia hasta una absorbancia de la
muestra de 4,9 /cm a 660 nm (1100 mg/dL triglicéridos). No se observa interferencia por bilirubina hasta concentraciones de 16 mg/dL (272 µmol/L).
No se observa interferencia por hemoglobina hasta concentraciones de 125 mg/dL
(0,075 mmol/L).
ILab 900/1800: No se observa interferencia por lipemia hasta una absorbancia de
la muestra de 2,0 /cm a 660 nm. No se observa interferencia por bilirubina hasta
concentraciones de 20 mg/dL (340 µmol/L). No se observa interferencia por
hemoglobina hasta concentraciones de 250 mg/dL (0,150 mmol/L).
Para más información acerca de las interferencias, referirse a la publicación de
Young.6
IL Test TM γ-GT - 0018254240
FRANÇAIS - Révision de la notice 07/2003
Utilisation
Calibrage
Interférences
Le coffret IL Test™ γ-GT est utilisé pour la détermination quantitative in vitro de
la gamma-glutamyl transférase (γ-GT) dans le sérum humain, sur l’analyseur
ILab. Les mesures du taux de γ-GT sont utilisées pour le diagnostic et le traitement des dysfonctionnements hépatiques tels que la cirrhose alcoolique et les
lésions primaires et secondaires des tumeurs du foie. Se reporter à la publication
“Effects of Deseases on Clinical Laboratory Tests”1 pour un résumé des causes
d’augmentations ou de diminutions de la γ-GT.
L’activité enzymatique est déterminée par la vitesse de production d’un
chromophore aux propriétés optiques parfaitement définies.
Le coefficient d’extinction molaire de 5 amino-2-nitrobenzoate à 410 nm est de
7,9x103 et à 405 nm est de 9,5x103.
Une maintenance correcte des systèmes optiques, fluidiques et de contrôle
thermique est essentielle pour ce test. Le ILab vérifie en permanence le système
fluidique et de contrôle thermique ainsi qu’un certain nombre de paramètres du
système optique. La maintenance quotidienne automatique permet de vérifier
d’autres paramètres du système optique. Les procédures de maintenance sont
détaillées dans le manuel d’utilisation. Toute intervention sur le Ilab doit être
immédiatement suivie de procédures de maintenance quotidienne et de contrôle de qualité. Toute anomalie survenant au niveau du contrôle continu ou des
procédures de maintenance quotidienne et de contrôle de qualité est l’indication
d’un dysfonctionnement du système. IL recommande de réaliser un blanc réactif
quotidiennement ou avant chaque série de spécimens, si le réactif est peu utilisé.
ILab 600: Pas d’interférence due à la lipémie pour une absorbance du spécimen
jusqu’à 4,9 /cm à 660 nm (1100 mg/dl triglicérides). Pas d’interférence due à la
bilirubine jusqu’à 16 mg/dl (272 µmol/l) de bilirubine. Pas d’interférence due à
l’hémolyse jusqu’à 125 mg/dl (0,075 mmol/l) d’ hémoglobine.
ILab 900/1800: Pas d’interférence due à la lipémie pour une absorbance du
spécimen jusqu’à 2,0 /cm a 660 nm. Pas d’interférence due à la bilirubine jusqu’à
20 mg/dl (340 µmol/l) de bilirubine. Pas d’interférence due à l’hémolyse jusqu’à
250 mg/dl (0,150 mmol/l) d’ hémoglobine.
Pour plus de précisions sur les interférences, se reporter à la publication de Young.6
Analyse des Données
Précision
Principe/Condensé
Mesure en cinétique. Recommandations IFCC.2
L-γ-glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide + glycylglycine
γ-GT
L-γ-glutamylglycylglycine +
5-amino-2-nitrobenzoate
Le taux d’accroissement de l’absorbance, dû à la formation de 5 -amino 2-nitrobenzoate,
est directement proportionnel à l’activité de la γ-GT dans le spécimen.
Les absorbances sont lues à une longueur d’onde primaire de 410 nm (ILab
900/1800) ou 405 nm (ILab 600).
Composition du Mélange Réactionnel
-
-
-
-
Le ILab calcule l’activité γ-GT comme suit:
ACTspécimen (U/L) = FE x ∆A
Hydroxyde de sodium
Glycylglycine
Lγ-glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide
Tampon
60 mmol/l
150 mmol/l
6,0 mmol/l
Précautions
Manipuler les spécimens avec précaution comme s’ils étaient potentiellement
infectieux (HIV ou Hépatite B).
Eviter le contact avec la peau et les yeux (S24/25).
Ne pas jeter les résidus à l’égout (S29).
Porter un vêtement de protection approprié (S36).
Ce produit est à usage diagnostique in vitro.
Préparation du Réactif
Reconstituer le flacon de γ-GT R2 avec 90 ml de γ-GT Buffer. Reboucher le flacon
et dissoudre le contenu par inversion. Ne pas agiter violemment de façon à éviter
toute formation de mousse. Laisser reposer le réactif pendant 5 à 10 minutes avant
utilisation. Placer dans le compartiment réactif (ILab 900/1800: No. 2).
Conservation du Réactif non Ouvert
FE = VR x 1 x 1 x 106
VS E TO
où:
ACT= Activité
FE = Facteur enzymatique
∆A = Variation d’absorbance par minute
VR = Volume réactionnel total (ml) VS = Volume de spécimen (ml)
E = Coefficient d’extinction molaire TO = Trajet optique de la cuvette (cm)*
*Le ILab convert automatiquement à 1,0 cm le trajet optique réel de la cuvette de
0,6 cm (ILab 900/1800) ou de 0,5 cm (ILab 600).
Pour γ-GT sur l'ILab 900/1800:
FE =
1
x
7,9 x 103
1
1
x 106 = 1392
Pour γ-GT sur l'ILab 600:
FE =
Jusqu’à la date de péremption à 2-8°C.
Vérifier la date de péremption sur l’emballage.
0,286 x
0,026
0,198 x
0,018
1
x
9,5 x 103
1
1
x 106 = 1158
L’activité est exprimée en unités internationales /litre (U/l)
Pour convertir les U/l en Kat/l multiplier par 16,67.4
Conservation et Stabilité du Réactif
30 jours à 2-8°C et sur l’analyseur.
Contrôle de Qualité
Signes de Détérioration du Réactif
Aspect physique: le réactif de travail doit être limpide et incolore, mais peut
toutefois prendre une légère coloration jaune. Une coloration jaune vif est un
signe de contamination.
Valeurs des contrôles: elles doivent se trouver dans la fourchette correspondante
au cours d’un test.
Limites d’absorbances: des modifications d’absorbances du blanc réactif peuvent
traduire une détérioration du blanc réactif.
Nous vous recommandons d’utiliser des contrôles normaux et pathologiques,
selon les bonnes pratiques de laboratoire, soit au moins une fois toutes les jours.
Nous vous préconisons l’utilisation des deux niveaux de contrôles IL tels que Sera
Chem® Level 1 (réf 0018162412) et SeraChem® Level 2 (réf 0018162512).
Les limites et les valeurs cibles de ces contrôles sont indiquées sur les notices
correspondantes.
Pour l’identification et le traitement des contrôles hors limites, nous vous
recommandons de vous référer à des règles telles que celles de Westgard et col.5
Spécimens
Sérum.
Les spécimens peuvent être conservés pendant 7 jours à 2-8°C.3
Ils doivent être équilibrés à température ambiante et agités avant analyse.
Instrumentation Laboratory SpA - V.le Monza 338 - 20128 Milano (Italy)
Instrumentation Laboratory Company - Lexington, MA 02421-3125 (USA)
Valeurs Usuelles
Hommes: 9 à 50 U/l (150 - 840 nKat/l).7
Femmes: 9 à 30 U/l (150 - 503 nKat/l).7
Nous vous recommandons d’établir vos propres fourchettes, les valeurs pouvant
varier avec l’âge, l’alimentation, le sexe et la répartition géographique.
Le coefficient de variation (3 spécimens/série, 20 séries) pour un spécimen ayant
une activité de 50 U/l en γ-GT ne doit pas dépasser 4% dans la série et 6% au
total. Résultats du précision obtenus selon le procotole NCCLS8 sont:
ILab 600
Dans la série
Total
ILab 900/1800
Dans la série
Total
Specim./Séries
3/20
3/20
3/20
3/20
Moyenne (U/l) CV (%) Moyenne (U/l)CV (%)
19
1,5
123
0,9
19
2,1
123
1,1
21
21
1,9
2,8
106
106
0,4
2,5
Méthodes de Comparaison
Méthode de comparaison (x)
Instrument de comparaison
Pente
Ordonnée y
Limites (U/l)
Moyenne x (U/l)
Moyenne y (U/l)
r
SE
n
ILab 600
Même réactif
ILab 900
1,052
1,20
4 - 497
66
71
0,999
3,84
122
ILab 900/1800
Même réactif
Monarch 37 °C
1,047
0,84
11 - 542
80
85
0,980
1,74
100
Linéarité
ILab 600 ILab 900/1800
sans rerun
avec rerun
sans rerun
avec rerun
Limite de linéarité (U/l)
Limite de linéarité (nKat/l)
1 - 1000
17 - 16670
1 - 10000
17 - 166700
1 - 1000
17 - 16670
1 - 1730
17 - 28840
Sensibilité
change de mAbs per 1 min per U/l
ILab 600
0,86
ILab 900/1800
0,71
Limite de Détection
Tous les analyseurs ILab : 1 U/l (17 nKat/l).
182542-06 R1 07/2003
Clinical Chemistry
IL Test TM γ-GT - 0018254240
ITALIANO - Revisione dell’inserto 07/2003
Uso
Calibrazione
Interferenze
Il reagente IL Test™ γ-GT viene impiegato per la determinazione diagnostica
quantitativa in vitro della γ-glutamil transferasi (γ-GT ) del siero sui Sistemi per
Chimica Clinica ILab. Le misurazioni di γ-GT vengono utilizzate nella diagnosi e
nel trattamento delle malattie epatiche, come la cirrosi da alcolismo, e nei tumori
primari e secondari del fegato.
Fare riferimento all’articolo pubblicato su Clinical Chemistry, “Effects of Diseases
on Clinical Laboratory Tests,”1 per un riepilogo delle cause che determinano aumenti o diminuzioni della γ-GT .
Non esistono standard primari di calibrazione. L’attività dell’enzima viene misurata in
base alla formazione di un cromoforo con proprieta’ ottiche ben definite. Il
coefficiente di estinzione molare del 5 amino-2-nitrobenzoato é 7,9 x 103 a 410 nm e
9,5 x 103 a 405 nm. Le propietà ottiche, la fluidica e la temperatura sono fattori critici
per l’accuratezza del dosaggio. Il sistema ILab esegue per questo un monitoraggio
continuo della fluidica, della temperatura e di alcuni parametri ottici. La
manutenzione giornaliera automatica comprende un monitoraggio di ulteriori
caratteristiche ottiche. Gli interventi di manutenzione sono descritti in dettaglio nel
manuale d’uso. Ad ogni eventuale modifica apportata al sistema deve far seguito la
messa in atto di procedure di manutenzione giornaliera e di controllo qualità.
Qualsiasi anomalia nel monitoraggio continuo, nella manutenzione giornaliera
o nelle procedure di controllo qualità, è segno di un inadeguato funzionamento
del sistema. Si raccomanda di determinare il bianco del reagente ogni giorno o
comunque prima dell’analisi sul campione se la frequenza di utilizzo del reattivo
fosse più ridotta.
ILab 600: Nessuna interferenza da lipemia fino a valori di assorbanza del
campione di 4,9/cm at 660 nm (1100 mg/dL trigliceridi).
Nessuna interferenza fino a 125 mg/dL (0,075 mmol/L) di emoglobina. Nessuna
interferenza fino a 16 mg/dL (272 µmol/L) bilirubin.
ILab 900/1800: Nessuna interferenza da lipemia fino ad assorbanze del campione
di 2,0/cm a 660 nm. Nessuna interferenza da bilirubina e’ stata rilevata fino a
20 mg/dL (340 µmol/L) di bilirubina. Nessuna interferenza fino a 250 mg/dL
(0,150 mmol/L) di emoglobina.
Per un esame completo delle sostanze che provocano interferenze, fare
riferimento alla pubblicazione di Young et al.6
Principio
Analisi cinetica. Raccomandazioni I.F.C.C.2
L-γ-glutamil-3-carbossi-4-nitroanilide + glicilglicina
γ-GT
L-γ-glutamilglicilglicina +
5-amino-2-nitrobenzoato
L’aumento di assorbanza è direttamente proporzionale all’attività della γ-GT nel
campione. Le assorbanze vengono lette ad una lunghezza d'onda di 410 nm (ILab
900/1800) o di 405 nm (ILab 600).
Componenenti Reattivi della Miscela di Reazione
-
-
-
-
Dati di Analisi
L’attività della γ-GT nel campione viene calcolata dall'ILab come segue:
Attcampione (U/L) = FE x ∆A
Idrossido di sodio
Glicilglicina
L-γ-glutamil-3-carbossi-4-nitroanilide
Tampone
60 mmol/L
150 mmol/L
6,0 mmol/L
Precauzione
Tutti i campioni devono essere trattati come materiale potenzialmente infetto da
HIV o Epatite B.
Evitare il contatto con gli occhi e la pelle (S 24/25).
Non gettare i residui nelle fognature (S 29).
Usare indumenti protettivi adatti (S 36).
Questo prodotto è per uso diagnostico in vitro.
FE =
Valori di Riferimento
Uomini: 9 - 50 U/L (150 - 840 nKat/L)7
Donne: 9 - 30 U/L (150 - 503 nKat/L)7
IL raccomanda che ogni laboratorio definisca i propri valori di riferimento poiche’
questi possono variare in rapporto all’eta’, all’alimentazione, al sesso e all’area
geografica.
Precisione
Il coefficiente di variazione (3 campioni/run, 20 runs) per un campione con una
attività di γ-GT di 50 U/L non dovrebbe essere superiore al 4% nel run ed al 6%
totale. Risultati di precisione ottenuti secondo il protocollo NCCLS8:
VR
1
1
x x x 106
VS E PL Dove:
Att = Attività
∆A = ∆ dell'assorbanza per minuto
FE = Fattore enzimatico
VR = Volume totale della reazione (mL)
VS = Volume totale del campione (mL)
E = Coefficiente di estinzione molare
PL = Cammino ottico della cuvetta (cm)*
*L’ILab converte automaticamente a 1,0 cm il cammino ottico reale della cuvetta
.(ILab 900/1800: 0,6 cm, ILab 600: 0,5 cm)
ILab 600
Nel run
Totale
ILab 900/1800
Nel run
Totale
Campioni/Runs
3/20
3/20
Media (U/L) CV (%) Media (U/L)
19
1,5
123
19
2,1
123
CV (%)
0,9
1,1
3/20
3/20
21
21
0,4
2,5
Conservazione e Stabilità della Soluzione di Lavoro
L’attività è espressa in Unità internazionali/Litro (U/L).
Per convertire U/L in nKat/L moltiplicare per 16,67.4
30 giorni a 2-8 °C e sullo strumento.
Controllo Qualità
Linearità
Indicatori del Deterioramento del Reagente
Effettuare almeno due livelli di controllo, di matrice simile ai campioni che vengono
analizzati. Per una corretta pratica di laboratorio, analizzare i controlli almeno una
volta al giorno.
Per i campioni di siero, utilizzare SeraChem® Level 1 (Codice 0018162412) e
SeraChem® Level 2 (Codice 0018162512). I valori attesi per questi materiali di
controllo sono reperibili sui relativi fogli illustrativi.
Per l’identificazione e la soluzione di situazioni anomale, si raccomanda di fare
riferimento a studi come quello di Westgard et al.5
ILab 600
Per l’ILab 900/1800:
Aggiungere 90 mL di γ-GT Buffer al contenitore γ-GT R2. Richiudere il contenitore e
miscelare delicatamente per evitare la formazione di schiuma.
Attendere 5-10 minuti prima dell'uso. Porre il contenitore sul piatto portareagenti
(ILab 900/1800 piatto n°2).
Conservazione del Reagente Sigillato
FE =
Fare riferimento alla data di scadenza riportata sulla confezione.
Aspetto fisico: la soluzione di lavoro deve essere limpida e incolore, sebbene possa
sviluppare una leggera colorazione gialla. Una colorazione giallo intenso è segno di
contaminazione.
Valore dei controlli: i controlli devono dare un valore all’interno dell’intervallo
stabilito.
Range di assorbanza. Variazioni della tipica assorbanza del bianco reagente
possono indicare un deterioramento del reagente.
1
x
7,9 x 103
1
1
1
x
9,5 x 103
1
x 106 = 1392
Per l’ILab 600:
FE =
Refrigerare a 2-8 °C fino alla scadenza.
0,286
x
0,026
0,198 x
0,018
1
x 106 = 1158
Campione
senza “rerun”
con “rerun”
ILab 900/1800 senza “rerun”
con “rerun”
ILab 600
Stesso reagente
ILab 900
1,052
1,20
4 - 497
66
71
0,999
3,84
122
Range di linearità (U/L)
1 - 1000
1 - 10000
1 - 1000
1 - 1730
ILab 900/1800
Stesso reagente
Monarch 37 °C
1,047
0,84
11 - 542
80
85
0,980
1,74
100
Range di linearità (nKat/L)
17 - 16670
17 - 166700
17 - 16670
17 - 28840
Sensibilità
ILab 600
cambio di milliAbs per minuto per U/L 0,86
ILab 900/1800
0,71
Limite Minimo Rilevabile
Siero.
I campioni possono essere conservati per 7 giorni a 2-8 °C.3 I campioni devono
essere portati a temperatura ambiente e miscelati prima dell’analisi.
IL Test TM γ-GT - 0018254240
106
106
Correlazione
Metodo di correlazione (x)
Strumento di correlazione
Slope
Intercetta (y)
Intervallo di riferimento (U/L)
Media x (U/L)
Media y (U/L)
r
SE
n
Preparazione del Reagente
1,9
2,8
Tutti i sistemi ILab : 1 U/L (17 nKat/L).
References / Literatur / Bibliografía / Bibliographie /
Bibliografia /
07/2003
1. Friedman, R., and Young, D.S., Effects of Disease on Clinical Laboratory Tests,
AACC Press, Washington, D.C., 1989.
2. Shaw L.M. et al.; J Clin. Chem. Clin. Biochem. 21(633-646), 1983. IFCC
Document, Stage 2, Draft 2; IFCC Methods for the Measurement of Catalytic
Concentration of Enzymes. Part 4. IFCC Method for γ-Glutamyltransferase.
3. Kaplan, L.A., and Pesce, A.J., Clinical Chemistry, C.V. Mosby Company, St.
Louis, MO, 1984, p. 1122.
4. Lippert, H., and Lehmann, H.P., SI Units in Medicine, Urban and
Schwarzenberg, Baltimore, MD, 1978, p.86.
5. Westgard, J. and Barry, P., Cost-Effective Quality Control: Managing the Quality
and Productivity of Analytical Processes, AACC Press, Washington, D.C., 1986.
6. Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, AACC Press,
Washington, D.C., 1990.
7. Tietz, N., Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Company,
Philadelphia, PA., 1994, pp 2175-2217.
8. Document EP3-T: “Guidelines for Manufacturers for Establishing Performance
Claims for Clinical Chemical Methods, Replication Experiment,” National
Committee for Clinical Laboratory Standards, Villanova, PA,1982.
IL Test™, Monarch®, SeraChem®, ReferrIL™ are trademarks of Instrumentation
Laboratory Company.
Symbols used / Simboli impiegati / Símbolos utilizados / Symboles utilisés / Verwendete Symbole /
In Vitro Diagnostic Medical
Device
In Vitro Diagnostikum
Producto sanitario para diagnóstico in vitro
Dispositif medical de diagnostique in vitro
Dispositivo medico-diagnostico
in vitro
�
Use by
Verwendbar bis
Fecha de caducidad
Utiliser jusque
Utilizzare entro
Batch code
Chargenbezeichnung
Codigo de lote
Code du lot
Codice del lotto
Temperature limitation
Zulässiger Temperaturebereich
Limite de temperatura
Limites de température
Limite di temperatura
�
Consult instructions for use
Gebrauchsanweisung
beachten
Consulte las instrucciones
de uso
Consulter les instructions
d’utilisation
Consultare le istruzioni per
l’uso
Manufacturer
Hersteller
Fabricante
Fabricant
Fabbricante
in vitro
IL Test TM γ-GT - 0018254240
ILab 600 Test Parameters
Photometric Test Parameters
Test No.
Test Name, Test Code
Sample Type
Reporting Unit, Decimal Points
Reaction Cycle
Twin Analysis
Methodology Type, Measuring Point
Photometric Methodology
Primary/Secondary Wavelength
Sampling Conditions
Sampling 1
Sample Vol.
Sample/Diluent Vol.
Sampling 2
Sample Vol.
Sample/Diluent Vol.
Sampling 3 and Sampling 4
Diluent Code
Diluent Warning Limit
First Run
Below/Above Normal Range
Panic L
Panic H
Noise
Prozone
HIGH!, ABS!
Reagent Volumes
R1
Code
Rgt/Dil. Vol., Stirring
Low Vol. Warning Limit Stability (days)
R2
Code
Rgt/Dil. Vol., Stirring
Low Vol. Warning Limit Stability (days)
Ranges and Evaluation Criteria
Normal Range-Male
Normal Range-Female
Normal Range-Other
Valid Range
Hemolysis/Icterus/Lipemia Limit Reaction Slope
Absorbance Limit
Prozone Limit
Non Linear Limit
Slope/Intercept Correction
Qualitative Report
Calibration Conditions
Calibration
Stability (days)
Calibrator, Concentration
R-Blank Limit (mAbs)
Cal. Reps Range (%)
Min. Cal. Response (mAbs)
Cal. Factor Change (%)
M-Point Curve Fit (%)
Reagent Blank
Auto R-Blank by Bottle
Serum
35
GGT, GGT
Serum
U/L (nKat/L), 0 (0)
Standard
OFF
Rate, 3/10
1 Wavelength
405
18
0/0
18
10/90
***
Water
N/A
Sampling 1
***
***
Sampling 2
Serum
9 - 50 (150 - 840)
9 - 30 (150 - 503)
**
1 - 1000 (17 - 16670)
***
Positive
Above, 3500
N/A
40
1/0
OFF
Factor: 1.158 (19.30), 3 Reps
N/A
N/A
***
N/A
N/A
N/A
N/A
ON
ON
***
N/A
Sampling 2
* Lot dependent - see package insert
** Operator definable
***Optional
N/A Not applicable to this test
01352
145/35, ON
***
30
N/A
N/A
N/A
N/A
IL Test TM γ-GT - 0018254240
ILab 900/1800 Test Parameters
CLIA Classification
Test Name
Bar code
Measuring method
Calibration method
Unit
Measuring points
Photometric method
Wavelength 1,2,3
Sample Vol. N, D, I R1V.-Stir Mode [ ]
R2V.-Stir Mode [Dil.]
No. decimal points
Sample type
Normal range MALE L-H
FEMALE L-H
Valid range LL-HH Correction const. 1, 2
W1-Abs Inc/Dec, Limit Hemolysis limit Icteric limit Lipemic limit Calib. Replicates
Replicates, Sens. Limit ***
Slope-Offset limits ***
Partner Test, Const. Prozone Judge, Limit
K1 (Slope) constant
[GGT ]
[0135]
[Rate
]
[Inst.Const.]
[U/L ] nKat/L
[22 ]
[32]
[ ]
[Single ]
[410]
[ ]
[ ]
[26]
[15]
[ ]
[
]
[No ]
[ ]
[210 ]
[Yes ]
[50 ]
[0]
[Serum
]
[9
] 150 [50 ] 840
[9
] 150 [30 ] 503
[1
] 17
[1000 ] 16670
[1.0 ]
[0.0 ]
[Inc]
[2500 ]
[ + ]
[ + ]
[ + ]
[4]
[2500]
[0.0 ]
[999]
[2500]
[ ++ ]
[ ++ ]
[ ++ ]
[ ++ ]
CLIA Complexity category:
CDC Analyte identifier code:
CDC Test System identifier code ILab 900:
CDC Test System identifier code ILab 1800:
moderate
2201
28322
28323
[ ]
[1.392 ] 23.20
*** Operator definable data
+ See interference section of the insert sheet
++ Not applicable to this method
Instrumentation Laboratory SpA - V.le Monza 338 - 20128 Milano (Italy)
Instrumentation Laboratory Company - Lexington, MA 02421-3125 (USA)
182542-06 R1 07/2003
Doc. code:
Rev.
Doc. Type
CO N°
I00018254206
1
D17
I01151
Title:
Artwork inserto stampato γ-GT
Product
Product p/n
γ-GT
0018254240
Insert Sheet p/n:
Paper spec's
00018254206
White paper, 50-60 g/m2 weight
DIMENSIONS
297 x 840 mm (11.7 x 33.07 inches)
COLORS PANTONE:
BLACK
GREEN 382
ORANGE 151
RED 032
BLUE 072
PER LA STAMPA IN QUADRICROMIA
I PANTONI INDICATI SONO SOLO A
SCOPO DI RIFERIMENTO.
ATTENZIONE!
Materiale di proprietà della IL S.p.A. che non deve essere assolutamente modificato o
danneggiato.
Instrumentation Laboratory S.p.A.
Viale Monza 338 - 20128 Milano
Via 327a, 11 - Zona Industriale Campolungo - 63100 Ascoli Piceno (Italia)
Instrumentation Laboratory SpA - V.le Monza 338 - 20128 Milano (Italy)
Instrumentation Laboratory Company - Lexington, MA 02421-3125 (USA)
182542-06 R1 07/2003