BBL CHROMagar Candida Medium

ISTRUZIONI PER L'USO
TERRENI SU PIASTRA
PRONTI ALL'USO
PA-257480.05
Rev.: July 2014
BBLTM CHROMagarTM Candida Medium
USO PREVISTO
BBL CHROMagar Candida Medium è un terreno per l'isolamento e l'identificazione della
Candida albicans, C. tropicalis e C. krusei da campioni clinici. Esercita un'azione inibitoria sui
batteri e può inoltre essere utilizzato come terreno di isolamento selettivo per altre specie di
lieviti e funghi filamentosi.
PRINCIPI E SPIEGAZIONE DELLA PROCEDURA
Metodo microbiologico.
BBL CHROMagar Candida Medium è un terreno di coltura selettivo e differenziale per
l'isolamento dei funghi. Con l'inclusione di substrati cromogeni nel terreno, le colonie di
C. albicans, C. tropicalis e C. krusei producono colori diversi, consentendo così la rilevazione
diretta di queste specie di lieviti sulla piastra di isolamento.1-6 Le colonie di C. albicans hanno
una colorazione che varia dal verde chiaro al verde medio, quelle di C. tropicalis dal bluverdastro al blu metallico e quelle di C. krusei sono rosa chiaro con bordo biancastro. Altre
specie di lieviti possono sviluppare il loro colore naturale (panna) o apparire rosa, oppure
apparire dal viola chiaro al viola scuro [ad es., Candida (Torulopsis) glabrata e altre specie]. Un
ulteriore vantaggio del terreno di coltura è la facilità di rilevazione delle colture di lieviti misti,
grazie al fatto che le colonie hanno colori diversi.1,5,6
Peptoni appositamente selezionati forniscono i nutrienti in BBL CHROMagar Candida
Medium. La miscela cromogena proprietaria è costituita da substrati artificiali (cromogeni), che
rilasciano composti di colore diverso a seconda della degradazione di enzimi specifici. Ciò
consente di differenziare determinate specie o di rilevare alcuni gruppi di organismi mediante
semplici test di conferma. Il cloranfenicolo inibisce la maggior parte dei batteri contaminanti.
CHROMagar Candida Medium è stato sviluppato da A. Rambach e viene venduto da BD
Diagnostic Systems su licenza di CHROMagar, Parigi, Francia.
REAGENTI
BBL CHROMagar Candida Medium
Formula* per litro di acqua purificata
Cromopeptone
10,0 g
Glucosio
20,0
Miscela cromogena
2,0
Cloranfenicolo
0,5
Agar
15,0
pH 6,0 ± 0,3
*Compensata e/o corretta per soddisfare i criteri di rendimento.
PRECAUZIONI
. Solo per uso professionale.
Non usare le piastre se presentano tracce di contaminazione microbica, alterazioni cromatiche,
essiccamento, fissurazioni o altri segni di deterioramento.
Per maneggiare i prodotti in condizioni asettiche, riconoscere i rischi biologici e smaltire i
prodotti usati, consultare le ISTRUZIONI GENERALI PER L'USO.
CONSERVAZIONE E VITA UTILE
Alla consegna, conservare le piastre al buio a 2 – 8 °C nella confezione originaria fino a
immediatamente prima dell'uso. Evitare congelamento e surriscaldamento. Le piastre possono
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essere inoculate sino alla data di scadenza (v. l'etichetta sulla confezione) e incubate per i
tempi di incubazione raccomandati.
Le piastre prelevate dalle confezioni da 10 già aperte possono essere usate per una settimana
se conservate in luogo pulito a 2 – 8 °C.
CONTROLLO DI QUALITÀ A CURA DELL'UTENTE
Inoculare i campioni rappresentativi con i seguenti ceppi (per informazioni più dettagliate, v.
ISTRUZIONI GENERALI PER L'USO). Incubare le piastre in aerobiosi per 20 – 48 h a 35
± 2 °C. Si noti che è necessaria un'incubazione di 42 h perché il colore delle colonie si sviluppi
completamente.
Ceppi
Candida albicans ATCC 60193
Candida albicans ATCC 10231
Candida krusei ATCC 34135
Candida tropicalis ATCC 1369
Candida tropicalis ATCC 9968
Pseudomonas aeruginosa
ATCC 27853
Non inoculate
BBL CHROMagar Candida Medium
Crescita da buona a eccellente, colonie da verde chiaro a
verde medio.
Crescita da buona a eccellente, colonie da verde chiaro a
verde medio.
Crescita da buona a eccellente; grandi colonie piatte, dal rosa
chiaro al rosa acceso, con bordo biancastro
Crescita da buona a eccellente; colonie dal grigio blu al bluverdastro o blu metallico, con o senza aloni violetti sul terreno
circostante
Crescita da buona a eccellente, colonie grigio-blu con o senza
aloni violetti
Inibizione da parziale a completa
Da incolori a beige chiaro, trasparenti
PROCEDURA
Materiali forniti
BBL CHROMagar Candida Medium (piastre impilate Stacker da 90 mm). Microbiologicamente
controllate.
Materiali non forniti
Terreni di coltura accessori, reagenti e apparecchiature di laboratorio necessarie.
Tipi di campioni
Questo terreno di coltura viene usato per l'isolamento e l'identificazione diretta di Candida
albicans, C. tropicalis e C. krusei da tutti i tipi di campioni clinici. Può inoltre essere usato per
l'isolamento di altri funghi (v. anche PRESTAZIONI METODOLOGICHE E LIMITAZIONI DELLA
PROCEDURA).
Procedura del test
Strisciare il campione sulla superficie del terreno di coltura per l'isolamento. Se il campione
viene posto in coltura da un tampone, passare delicatamente il tampone su una piccola area
della superficie del bordo e strisciare da questa area con un'ansa. Incubare le piastre in
aerobiosi a 35  2 °C per 20 – 48 h in posizione invertita. Perché le colonie di Candida
sviluppino completamente il colore è necessario lasciare in incubazione per 42 h. Ridurre al
minimo l'esposizione alla luce sia prima che durante l'incubazione.
Per gli isolati occasionali, quali il Cryptococcus neoformans e i funghi filamentosi, sono
necessari tempi di incubazione più lunghi e potenzialmente una temperatura minore perché la
crescita sia ottimale. Pertanto se si sospetta la presenza di altri funghi diversi dalla Candida è
opportuno inoculare e incubare a 20 – 25 °C una piastra con un secondo terreno di coltura per
funghi, ad es. BD Sabouraud Agar with Gentamicin and Chloramphenicol.
Risultati
Dopo l'incubazione le piastre di campioni contenenti funghi mostreranno una crescita. Si
consiglia di leggere le piastre su fondo bianco. Se sono presenti specie di Candida le colonie
avranno una colorazione che varia dal verde chiaro al verde medio (C. albicans), dal rosa
chiaro al rosa acceso con bordo biancastro (C. krusei) o dal blu-verdastro al blu metallico con o
senza aloni violetti (C. tropicalis). Altre specie di Candida e altri lieviti vanno dal viola chiaro al
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viola scuro (da rosa a violetto) oppure, se nessuno dei substrati cromogeni viene utilizzato, le
colonie assumeranno il loro colore naturale (dal panna al bianco).
I dati di vari studi indicano che non sono necessari ulteriori test di identificazione per la
Candida albicans, C. tropicalis e C. krusei.1-3
PRESTAZIONI METODOLOGICHE E LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA
L'uso di CHROMagar Candida Medium per l'indentificazione diretta della C. albicans,
C. krusei e C. tropicalis è stato documentato in diversi studi, consultabili per ulteriori
informazioni sulle procedure consigliate.1-5 I risultati di una recente valutazione delle prestazioni
di BBL CHROMagar Candida Medium sono stati documentati da Jabra-Rizk e collaboratori.4
La Candida (Torulopsis) glabrata di solito dà luogo a colonie che vanno dal viola al viola scuro
su questo terreno di coltura.2 Si consiglia tuttavia di verificare con ulteriori test biochimici gli
organismi che hanno questo aspetto, dato che tale colore della colonia può essere originato da
molte specie di lieviti.
Le colonie che su questo terreno appaiono di colore rosa pallido, dal viola chiaro al viola scuro
o del loro colore panna naturale devono essere identificate utilizzando metodi standard.7,8
Su questo terreno di coltura è altresì possibile isolare lieviti e funghi filamentosi non
appartenenti alle specie citate in precedenza se l'incubazione avviene ad una temperatura e
con una durata adatte a questi organismi.
Dato che le muffe ed altri funghi filamentosi sono in grado di metabolizzare i substrati
cromogeni, i colori presentati da questi organismi su BBL CHROMagar Candida Medium
possono differire da quelli che si ottengono su altri terreni di coltura per funghi. Non utilizzare
l'aspetto della crescita di funghi filamentosi su questo terreno di coltura per l'identificazione
morfologica tradizionale.
È stato riscontrato che la C. dubliniensis produce un particolare colore verde scuro in sede di
isolamento primario con BBL CHROMagar Candida Medium.9-11 È tuttavia possibile che
questa proprietà non venga conservata nella subcoltura. Sono necessari ulteriori test del
fenotipo e del genotipo per avere la conferma che si tratti di C. dubliniensis.
Prima di utilizzare per la prima volta BBL CHROMagar Candida Medium, si consiglia di far
pratica con l'aspetto di una colonia tipica utilizzando ceppi definiti di C. albicans, C. krusei e
C. tropicalis, ad es., i ceppi citati in CONTROLLO DI QUALITÀ A CURA DELL'UTENTE.
BIBLIOGRAFIA
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isolation medium for presumptive identification of clinically important Candida species. J.
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Candida Medium medium for isolation of yeasts from dental samples. J. Clin. Microbiol.
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a yeast stock collection. J. Clin. Microbiol. 36: 2869-2873.
CONFEZIONE/DISPONIBILITÀ
BBL CHROMagar Candida Medium
N. di cat. 257480
Terreni su piastra preparati, confezioni da 20
N. di cat. 254106
Terreni su piastra preparati, confezioni da 120
ULTERIORI INFORMAZIONI
Per ulteriori informazioni, rivolgersi al rappresentante BD di zona.
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