M.R.S. Agar

M.R.S. Agar
DM613. Per l’isolamento, la coltura e il conteggio dei
lattobacilli e di altri batteri produttori di acido lattico in
campioni alimentari e di origine diversa.
Contenuto: Cfr. etichetta della confezione.
Composizione*
Concentrazion
e nel terreno:
Miscela di peptoni
18,0g/litro
Estratto di lievito
4,0g/litro
Glucosio
20,0g/litro
Tween 80
1,0ml/litro
Fosfato di dipotassio
2,0g/litro
Citrato di tri-ammonio
2,0g/litro
Acetato di sodio anidro
3,0g/litro
Solfato di magnesio 7H2O
0,2g/litro
Solfato di manganese anidro
0,034g/litro
Agar
12,0g/litro
pH finale: 6,2 ± 0,2
Conservazione e validità
Conservare la confezione originale, ben sigillata, in un
luogo asciutto, a 25°C o a una temperatura inferiore, fino
alla data di scadenza indicata sull’etichetta della
confezione. Alcuni terreni possono richiedere una
conservazione a 2-8°C; consultare l’etichetta della
confezione.
Precauzioni
Esclusivamente per uso diagnostico in vitro. Rispettare le
precauzioni di sicurezza ed impiegare tecniche asettiche.
Deve essere utilizzato solo da personale di laboratorio
opportunamente qualificato. Prima dell’eliminazione,
sterilizzare tutti i materiali biologici pericolosi. Consultare
la scheda di sicurezza del prodotto (disponibile a richiesta
o sul sito web MAST).
Materiali richiesti ma non forniti
Attrezzature e prodotti per analisi microbiologiche di base,
per esempio: anse, supplementi selettivi MAST, tamponi,
inceneritori, termostati, ecc.. Inoltre: reagenti per indagini
sierologiche e biochimiche, e supplementi (per es.:
sangue).
Procedimento
1. Consultare l’etichetta della confezione per le quantità
e i volumi richiesti. Preparare l’M.R.S. Agar (DM613)
MAST sospendendo la polvere in acqua distillata o
deionizzata. Per le confezioni in busta, sospendere
l'intero contenuto della busta nel volume indicato
sull'etichetta della confezione.
2. Sterilizzare in autoclave a 121°C (15 p.s.i.) per 15
minuti.
3. Raffreddare a 50-55°C e mantenere a questa
temperatura in bagnomaria. Se è necessario un
terreno acidificato, rettificare il pH.
-1
4. Preparare un omogeneizzato 10 utilizzando uno
stomacher o un miscelatore e ulteriori diluizioni seriali
del campione alimentare.
-1
5. Trasferire 1ml dell’omogeneizzato 10 e ciascuna
diluizione in piastre Petri separate. Dispensare in
ciascuna piastra 15ml di M.R.S. Agar mantenuto fuso
e raffreddato a 45°C. Mescolare con cura e lasciare
solidificare.
6. Incubare in anaerobiosi o in microaerofilia (anidride
carbonica 5%, ossigeno 5-10%) per 2-5 giorni a
30°C. Per il conteggio dei batteri psicotrofi, le piastre
possono essere incubate a 22-25°C; per la ricerca dei
termofili incubare a 42°C. Se il laboratorio è
attrezzato per la sola ricerca dei microrganismi
aerobi, dopo che il terreno si è solidificato,
aggiungere a ciascuna piastra un secondo strato di
circa 5ml di M.R.S. Agar.
7. La superficie delle piastre non deve asciugarsi,
perché questa evenienza inibisce la crescita dei
lattobacilli, per una incrementata concentrazione di
acetato sulla superficie dell’agar.
Interpretazione dei risultati
Al termine dell’incubazione contare il numero di ciascun
tipo di colonia nelle piastre che contengono tra 15 e 150
colonie, e calcolare il numero di lattobacilli/batteri
produttori di acido lattico per grammo di alimento.
Controllo qualità
Verificare se sono presenti segni di deterioramento. Il
controllo di qualità deve essere eseguito impiegando
almeno un microrganismo che mostri una reazione
positiva ed almeno un microrganismo che mostri una
reazione negativa. Non utilizzare il prodotto se le reazioni
con i microrganismi di controllo non sono corrette. Di
seguito sono elencati alcuni ceppi per il controllo di qualita
che possono essere facilmente reperiti in commercio.
Microrganismi
Lactobacillus acidophilus
ATCC 314
Staphylococcus aureus
ATCC 25923
Risultato
Crescita
Nessuna
crescita
Limitazioni.
Nota: - L’M.R.S. Agar MAST consente il recupero dei
“batteri produttori di acido lattico” e la crescita dei lieviti. In
particolare, la differenziazione tra “batteri produttori di
acido lattico” e lattobacilli può essere ottenuta
esaminando al microscopio ottico pellicole di colonie di
forma diversa.
Bibliografia
La pertinente bibliografia è disponibile su richiesta.
IFU402 CC 09/08 V2
MAST è un marchio registrato
ATCC e un marchio registrato dell'American
Type Culture Collection, Manassas, Virginia, USA.
*La composizione può variare per soddisfare i criteri di rendimento