BBL Trypticase Soy Broth BBL Trypticase Soy Broth with 6.5

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BBL Trypticase Soy Broth
BBL Trypticase Soy Broth with 6.5% Sodium Chloride
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L007517 • Rev. 16 • ottobre 2015
PROCEDURE DI CONTROLLO DI QUALITÀ (Facoltativo)
I
INTRODUZIONE
BBL Trypticase Soy Broth è un terreno universale per la coltivazione di microrganismi esigenti e non esigenti. L’aggiunta di
cloruro di sodio al 6,5% consente la differenziazione tra specie tolleranti e intolleranti al sale.
II
PROCEDURA DEL TEST
A. Trypticase Soy Broth
1. Inoculare i campioni rappresentativi con le colture sotto elencate.
a. Usando pipette sterili da 1,0 mL, inoculare le provette con diluizioni di colture di 18 – 48 h di Trypticase Soy Broth. I
contenitori con volumi di riempimento maggiori di 5,0 mL devono essere inoculati con 0,75 mL di coltura. Le provette
con volumi uguali o minori di 5,0 mL devono essere inoculate con 0,075 mL di coltura.
b. Per Escherichia coli, Staphylococcus aureus e i microrganismi specificati nella United States Pharmacopeia (USP) per i
test di stimolazione della crescita di terreni per test di sterilità (ceppi di Bacillus, Candida e Aspergillus), la diluizione
usata non deve contenere più di 100 UFC/mL.
c. Per Streptococcus pneumoniae, la diluizione non deve contenere più di 1.000 UFC/mL.
d. Incubare a 30 – 35 °C le provette inoculate con E. coli ed S. aureus e quelle con S. pneumoniae, con i tappi non
completamente avvitati. Incubare le provette contenenti B. subtilis, C. albicans e A. brasiliensis a 20 ± 25 °C, con i tappi
non completamente avvitati.
NOTA - Quando si manipola A. brasiliensis ATCC 16404, lavorare sotto una cappa di sicurezza biologica.
2. Esaminare le colture di S. pneumoniae dopo 18 – 24 h e quelle di E. coli e S. aureus dopo 24 – 48 h di incubazione.
Esaminare B. subtilis, C. albicans e A. brasiliensis dopo 18 – 24 h e 66 – 72 h. C. albicans e A. brasiliensis possono essere
incubati per un massimo di 5 giorni.
3. Risultati attesi
Microrganismi di controllo CLSI (ceppi ATCC)
*Escherichia coli......................................... Crescita entro 48 h.
ATCC 25922
*Staphylococcus aureus ............................ Crescita entro 48 h.
ATCC 25923
Altri ceppi utilizzati
**Bacillus subtilis ........................................ Crescita entro 3 giorni
ATCC 6633
**Candida albicans..................................... Crescita entro 5 giorni
ATCC 10231
**Aspergillus brasiliensis ............................ Crescita entro 5 giorni
ATCC 16404
Streptococcus pneumoniae ....................... Crescita entro 24 h.
ATCC 6305
*Ceppo batterico raccomandato per il controllo di qualità a cura dell’utente.
** Per la verifica della stimolazione della crescita per l’uso in test di sterilità USP.
B. Trypticase Soy Broth with 6.5% Sodium Chloride
1. Inoculare i campioni rappresentativi con le colture sotto elencate.
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a. Con l’ausilio di un’ansa calibrata da 0,01 mL, inoculare le provette con una diluizione 10 di colture di 18 – 24 h di
Trypticase Soy Broth.
b. Incubare le provette – con i tappi non completamente avvitati – a 35 ± 2 °C – in aerobiosi.
2. Esaminare le provette dopo 18 – 24 e 42 – 48 h per verificare crescita e selettività.
3. Risultati attesi
*Enterococcus faecalis ........................Crescita
ATCC 29212
*Streptococcus gallolyticus ..................Nessuna crescita
ATCC 9809
*Ceppo batterico raccomandato per il controllo di qualità a cura dell’utente.
III
CONTROLLO DI QUALITÀ SUPPLEMENTARE
1. Esaminare le provette come descritto in “Deterioramento del prodotto”.
2. Eseguire un esame visivo delle provette rappresentative per garantire che l’eventuale presenza di difetti fisici non
interferisca con l’uso.
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3. Per il Trypticase Soy Broth, determinare il pH mediante potenziometria a temperatura ambiente per verificare che rientri
nel range specificato di 7,3 ± 0,2.
4. Incubare a 20 – 25 °C e a 30 – 35 °C le provette rappresentative non inoculate ed esaminarle dopo 7 giorni per verificare la
contaminazione microbica.
INFORMAZIONI SUL PRODOTTO
IV
USO PREVISTO
BBL Trypticase Soy Broth è conforme alle specifiche della United States Pharmacopeia (USP).
BBL Trypticase Soy Broth (terreno digerito soia-caseina) è un terreno universale usato in procedure qualitative per la
coltivazione di microrganismi esigenti e non esigenti da svariati materiali clinici e non clinici.
BBL Trypticase Soy Broth with 6.5% Sodium Chloride è usato per differenziare le specie enterococciche dagli streptococchi
del gruppo Streptococcus bovis.
V
SOMMARIO E SPIEGAZIONE
Trypticase Soy Broth (TSB) è un terreno nutritivo che supporta la crescita di un’ampia gamma di microrganismi, inclusi comuni
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batteri aerobi, anaerobi e anaerobi facoltativi e funghi. Grazie alla capacità di stimolare la crescita, questa formulazione è
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inclusa nella USP come terreno per i test di sterilità.
Il TSB è raccomandato anche – per le proprietà stimolanti la crescita – come brodo di inoculo nei test di sensibilità agli
antibiotici mediante disco-diffusione e diluizione in agar, secondo le norme Clinical and Laboratory Standards Institute (già
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NCCLS).
BBL Trypticase Soy Broth with 6.5% Sodium Chloride è usato per differenziare le specie enterococciche dagli streptococchi di
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gruppo Streptococcus bovis mediante test di tolleranza a NaCl al 6,5%.
VI
PRINCIPI DELLA PROCEDURA
I digeriti enzimatici di caseina e farina di soia forniscono aminoacidi e altre sostanze azotate complesse. Il destrosio è una
fonte di energia. Il cloruro di sodio mantiene l’equilibrio osmotico. Il fosfato di potassio dibasico funge da tampone per il
controllo del pH.
L’aggiunta di cloruro di sodio al 6,5% a Trypticase Soy Broth consente di differenziare gli enterococchi tolleranti al sale,
resistenti a un alto contenuto salino, dagli streptococchi del gruppo S. bovis e da altre specie di streptococchi. A questa
concentrazione, il cloruro di sodio è un agente selettivo che interferisce con la permeabilità della membrana e gli equilibri
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osmotico ed elettrocinetico.
VII
REAGENTI
BBL Trypticase Soy Broth
Formula approssimata* per L di acqua purificata
Digerito pancreatico di caseina .............................. 17,0 g
Digerito papaico di farina di soia .............................. 3,0 g
Cloruro di sodio ........................................................ 5,0 g
Fosfato dipotassico .................................................. 2,5 g
Destrosio .................................................................. 2,5 g
*Compensata e/o corretta per soddisfare i criteri di performance.
BBL Trypticase Soy Broth with 6.5% Sodium Chloride contiene 60 g/L di cloruro di sodio, oltre agli ingredienti sopra elencati.
Avvertenze e precauzioni
Per uso diagnostico in vitro.
Prestare cautela nel refertare i risultati della colorazione di Gram e/o altri risultati di colorazione microbiologica diretta su
campioni di tessuto trattati con questo terreno, in quanto è possibile la presenza di organismi non vitali nel terreno di coltura.
Aprire con estrema cautela le provette con i tappi serrati allo scopo di evitare lesioni dovute alla rottura del vetro.
I campioni clinici possono contenere microrganismi patogeni, inclusi i virus dell’epatite e i virus dell’immunodeficienza umana.
Manipolare tutti i materiali e gli articoli contaminati con sangue e altri fluidi biologici in conformità alle norme dell'istituto e alle
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“Precauzioni standard”.
Dopo l’uso, le provette preparate, i contenitori dei campioni e gli altri materiali contaminati devono
essere sterilizzati in autoclave prima dello smaltimento.
Istruzioni per la conservazione
Al ricevimento, conservare le provette al buio secondo le istruzioni riportate sull’etichetta. Evitare congelamento e
surriscaldamento. Aprire soltanto al momento dell’uso. Ridurre al minimo l’esposizione alla luce. I terreni in provetta conservati
come indicato sull'etichetta sino al momento dell’uso possono essere inoculati fino alla data di scadenza e incubati per la
durata raccomandata. Prima dell’inoculo, attendere che il terreno si porti a temperatura ambiente.
Deterioramento del prodotto
Non usare le provette se presentano tracce di contaminazione microbica, alterazione di colore, essiccamento o altri segni di
deterioramento.
VIII RACCOLTA E TRATTAMENTO DEI CAMPIONI
I campioni idonei per coltura possono essere manipolati con varie tecniche. Per informazioni dettagliate, consultare la
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documentazione appropriata. Raccogliere i campioni prima della somministrazione di antibiotici. Predisporre una consegna
tempestiva al laboratorio.
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IX
PROCEDURA
Materiali forniti
BBL Trypticase Soy Broth o
BBL Trypticase Soy Broth with 6.5% Sodium Chloride
Materiali necessari ma non forniti
Terreni di coltura accessori, reagenti, microrganismi per controllo di qualità e apparecchiature di laboratorio necessarie.
Procedura del test
Adottare tecniche asettiche.
Inoculare il terreno non appena i campioni pervengono in laboratorio. I campioni su tampone possono essere inseriti nel
terreno dopo l’inoculo del terreno in piastra appropriato. In caso di campioni liquidi, usare un’ansa da inoculo sterile per
trasferire un’ansata di campione nel brodo. I campioni di cui si è certi o che si sospetta che contengano anaerobi obbligati,
devono essere inoculati in prossimità del fondo della provetta.
Incubare le provette – con i tappi non completamente avvitati – a 35 ± 2 °C in aerobiosi con o senza supplementazione con
anidride carbonica. I terreni in provetta destinata alla coltivazione di anaerobi devono essere incubati in anaerobiosi. Un modo
semplice ed efficace per ottenere condizioni di anaerobiosi adatte, è l’uso del sistema per anaerobiosi BD GasPak EZ o di un
sistema equivalente alternativo.
Esaminare dopo 18 – 24 h e 42 – 48 h di incubazione per verificare la crescita.
Per l’uso in test di sterilità, consultare le norme USP per i dettagli procedurali e le specifiche di volume del terreno rispetto alle
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dimensioni del contenitore.
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Per l’uso nella preparazione di inoculi standardizzati per i test di sensibilità agli antibiotici, consultare le norme CLSI.
Controllo di qualità a cura dell’utente
Vedere “Procedure di controllo di qualità”.
Ciascun lotto di terreno è stato testato utilizzando organismi per il controllo di qualità appropriati, e tali test soddisfano le
specifiche di prodotto e gli standard CLSI, ove opportuno. Come di consueto, i test di controllo qualità devono essere eseguiti
in ottemperanza alle normative locali, statali, federali o nazionali vigenti, nonché ai requisiti di certificazione e/o alle procedure
standard di controllo di qualità del laboratorio specifico.
Per determinare fotometricamente il pH dei terreni in provetta, usare un singolo elettrodo di dimensioni sufficientemente ridotte
da permetterne l’inserimento nelle provette. Posizionare la punta dell’elettrodo al di sotto della superficie del brodo (solo
Trypticase Soy Broth).
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RISULTATI
La crescita nel brodo è indicata dalla presenza di torbidità rispetto al controllo non inoculato. Conservare i brodi di coltura per
almeno una settimana prima di classificarli come negativi e gettarli.
XI
LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA
Ai fini dell’identificazione, i microrganismi devono essere in coltura pura. Per l’identificazione finale, è necessario eseguire test
morfologici, biochimici e/o sierologici. Per informazioni dettagliate e procedure raccomandate, consultare la documentazione
3,13,14
appropriata.
I terreni di coltura contengono talvolta microrganismi morti derivati dai componenti del terreno, che possono essere visibili negli
strisci da terreni di coltura. Altre fonti di microrganismi morti visibili alla colorazione di Gram includono reagenti di colorazione,
olio di immersione, vetrini e gli stessi campioni usati per l’inoculo. In caso di incertezza sulla validità della colorazione di Gram,
reincubare la coltura per un’altra ora o due e ripetere il test prima di eseguire il referto.
Ceppi di altri cocchi gram-positivi catalasi-negativi, ossia Lactococcus, Leuconostoc, Pediococcus e Vagococcus, sono stati
isolati da infezioni umane. Non è quindi possibile eseguire l’identificazione presuntiva di enterococchi soltanto in base alla
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reazione bile-esculina e alla crescita in brodo NaCl al 6,5%.
XII
PERFORMANCE
BBL Trypticase Soy Broth
Trypticase Soy Broth è stato usato come controllo nella valutazione della bile come terreno di coltura per l’isolamento di
Salmonella da emocolture. Il sessantotto per cento (68%) delle colture Trypticase Soy Broth è risultato positivo per
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Salmonella. In un altro studio, sono stati comparati i pattern di crescita di Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Listeria
monocytogenes, streptococco β-emolitico di gruppo B (GBS), Klebsiella pneumoniae e Staphylococcus epidermidis usando
liquido cerebrospinale (LCS), Trypticase Soy Broth (TSB) e un tampone fosfato. S. aureus, GBS, L. monocytogenes, K.
pneumoniae ed S. epidermidis sono cresciuti nell’arco di 24 h in TSB; la crescita di questi batteri nel LCS e nel tampone
fosfato è rimasta compresa entro un log del punto di partenza, a eccezione di GBS ed S. epidermidis la cui crescita ha
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continuato a calare. Tutti e tre i liquidi hanno supportato la crescita di E. coli in misure diverse per 24 h.
BBL Trypticase Soy Broth with 6.5% Sodium Chloride
Prima della spedizione, vengono testate le performance di tutti i lotti di Trypticase Soy Broth with 6.5% Sodium Chloride. Con
l’ausilio di un’ansa calibrata da 0,01 mL, campioni rappresentativi del lotto vengono testati con colture in Trypticase Soy Broth
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diluite 10 di Enterococcus faecalis (ATCC 29212) e Streptococcus gallolyticus (ATCC 9809). Le provette vengono incubate a
35 °C ± 2 °C ed esaminate dopo 18 – 24 h e 42 – 48 h per verificare la crescita. E. faecalis presenta crescita moderata –
intensa mentre S. gallolyticus è completamente inibito.
Campioni rappresentativi vengono inoltre testati chimicamente mediante titolazione con nitrato d’argento per il contenuto di
cloruro di sodio. La percentuale di cloruro di sodio calcolata è del 6,0 – 7,0.
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XIII DISPONIBILITÀ
N. di cat.
Descrizione
295634
BD BBL Trypticase Soy Broth, 1 mL, cartone da 100 provette di misura K
221815
BD BBL Trypticase Soy Broth, 2 mL, cartone da 100 provette di misura K
221715
BD BBL Trypticase Soy Broth, 5 mL, confezione da 10 provette di misura K (filtrate)
221716
BD BBL Trypticase Soy Broth, 5 mL, cartone da 100 provette di misura K (filtrate)
221092
BD BBL Trypticase Soy Broth, 8 mL, confezione da 10 provette di misura K
221093
BD BBL Trypticase Soy Broth, 8 mL, cartone da 100 provette di misura K
297354
BD BBL Trypticase Soy Broth, 10 mL, cartone da 100 provette di misura A
221823
BD BBL Trypticase Soy Broth, 15 mL, cartone da 100 provette di misura A
299749
BD BBL Trypticase Soy Broth, 20 mL, cartone da 100 provette di misura A
221351
BD BBL Trypticase Soy Broth with 6.5% Sodium Chloride, cartone da 100 provette di misura K
XIV BIBLIOGRAFIA
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Assistenza e supporto tecnico BD Diagnostics: rivolgersi al rappresentante locale BD o visitare il sito www.bd.com/ds.
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