γ-GT - intermedical

γ-GT
γ-GT
Carbossi substrato. Cinetico
Determinazione quantitativa della γ-glutamiltransferasi (γ-GT)
IVD
Conservare a 2-8°C
WR (mL)
1.0
100
Campione (µL )
4. Mescolare,aspettare 1 minuto.
5. Leggere l’Ass.iniziale (A) del campione,far partire il cronometro e
leggere le assorbanze ad intervalli di 1 minuto per 3 minuti.
6.Calcolare il ∆A per minuto (∆A/min.).
PRINCIPIO DEL METODO
La γ-glutaliltransferasi (γ-GT) catalizza il trasferimento del gruppo γglutamil dalla γ-glutamil-p-nitroanilide alla glicilglicina,come dalla
seguente reazione:
γ-GT
γ-L-glutamyl-3-carboxi-4-nitroanilide + glycylglycine
γ-L-Glutamyl-glycylglycine + ac.2-Nitro-5-aminobenzoico
CALCOLI
∆A/min. x 1190*= U/L di γ-GT
La velocità di decremento della concentrazione di acido 2nitro-5-aminobenzoico formatosi,misurata per via
fotometrica,è proporzionale alla concentrazione catalitica
della γ-GT presente nel campione.
Unità:una unità internazionale (IU) è la quantità di enzima che
trasforma 1 µmol di substrato in 1 minuto,in condizioni standard. La
concentrazione è espressa in unità per litro di campione (U/L).
Fattori di conversione a diverse temperature
In dipendenza della temperatura di lavoro,correggere i risultati
moltiplicando per i seguenti fattori:
SIGNIFICATO CLINICO
La γ-GT è un enzima cellulare con una vasta distribuzione nei
tessuti,principalmente nel rene,pancreas,fegato e prostata.
La misura dell’attività della γ-GT viene utilizzata nella diagnosi e nel
trattamento delle malattie epatobiliari come ostruzione biliare,cirrosi
e tumori del fegato.
Temperatura
di lavoro
25°C
30°C
37°C
REAGENTI
R1 Tampone
TRIS pH 8.6
100 mmol/L
R2 Substrato
Glicilglicina
L-γ-glutamil-3-carbossi-4-nitroanilide
100 mmol/L
3 mmol/L
25°C
30°C
37°C
1.00
0.73
0.56
1.37
1.00
0.77
1.79
1.30
1.00
CONTROLLO QUALITA’
Si consiglia di utilizzare dei sieri di controllo per monitorare le
performance del procedimento.
Se i valori dei controlli sono al di fuori del range definito,controllare
lo strumento,i reagenti e la tecnica per determinare i problemi.
Ciascun laboratorio dovrebbe stabilire un proprio schema di
Controllo di Qualità e le azioni correttive se i controlli non rientrano
nei limiti di tollerabilità.
PREPARAZIONE
Soluzione di lavoro (WR):
Ref:CH-40
Sciogliere ( ) una tavoletta di Substrato R2 in 2 ml di Tampone R1.
Ref:CH-41
Sciogliere ( ) una tavoletta di Substrato R2 in 15 mL di Tampone
R1.
Agitare delicatamente per omogeneizzare la soluzione.
Stabilità: 21 gg. A 2-8°C o 5 gg a T.A (15-25°C ).
VALORI DI RIFERIMENTO
Uomini
Donne
25°C
4-18 U/L
6-28 U/L
30°C
5-25 U/L
8-38 U/L
37°C
7-32 U/L
11-50 U/L
Questi valori sono orientativi;ciascun laboratorio dovrebbe
stabilire un proprio intervallo di riferimento.
CONSERVAZIONE E STABILITA’
Tutti i componenti del kit sono stabili fino alla data di scadenza
indicata sull’etichetta se conservati ben chiusi a 2-8°C,protetti dalla
luce e se si evitano contaminazioni durante l’uso.
Non usare tavolette che appaiono spezzate.
Non utilizzare i reagenti oltre la data di scadenza.
Segnali di deterioramento dei reagenti:
-presenza di particelle e torbidità;
-assorbanza del bianco (A) a 405 nm > o =1.20.
CARATTERISTICHE DEL METODO
1. Range di misura: dal limite di detenzione di 2.56 U/L al limite
di linearità di 250 U/L. Se i valori ottenuti sono superiori al
limite di linearità,diluire il campione ½ con NaCl 9 g/L e
moltiplicare il risultato per 2.
2. Precisione:
MATERIALE ADDIZIONALE
-Spettrofotometro o colorimetro che misuri a 405 nm.
-Bagno termostatico a 25°C,30°C o 37°C (± 0.1°C).
-Cuvette con cammino ottico di 1 cm.
-Attrezzatura generale di laboratorio.
Media (U/L)
SD
CV (%)
3.
4.
CAMPIONI
Siero fresco. La γ-GT è stabile almeno 3 gg. a 2-8°C, 8 ore
a 15-25 °C e 1 mese a -20 °C.
PROCEDIMENTO
1.Condizioni operative:
Lunghezza d’onda:
405 nm
Cuvette : cammino ottico
1 cm
T. costante:
25°C/30°C/37°C
2. Azzerare lo strumento contro acqua distillata o aria.
3. Pipettare in cuvetta:
Intra-assay (n=20)
45.7
203
0.66
1.72
1.44
0.85
Inter-assay (n=20)
45.5
203
1.04
3.43
2.28
1.69
Sensibilità diagnostica: 1 U/L= 0.0008 ∆A/min.
Accuratezza: i risultati ottenuti con i reagenti di questo kit (y)
non mostrano differenze sistematiche se comparati con altri
reagenti in commercio (x).
Coefficiente di correlazione (r):0.99
Equazione di regressione: y=0.9919x-0.1042
INTERFERENZE
Non deve essere utilizzato il plasma.Gli anticoagulanti inibiscono
l’enzima.Elevata emolisi interferisce nel dosaggio.
Un elenco di farmaci ed altre sostanze che interferiscono con la
determinazione della γ-GT è stato riportato in letteratura da Young
e al.
1
Rev. 0 Ed. 2004
Intermedical srl. Via A:Genovesi,13– 80010 Villaricca (NA)
Tel. +39 081 3302705 Fax +39 081 3301453
E-Mail: [email protected] Sito: www.intermedical-italy.it
NOTA
Sono disponibili su richiesta le metodiche applicative per i più diffusi
analizzatori automatici.
BIBLIOGRAFIA
1. Gendler S. γ-GT.Kaplan A. Et al. Clin. Chem. The C.V. Mosby Co.
St.Louis.Toronto.Princeton 1984 ;1120-1123.
2. Persijn J.P. et al. J.Clin.Chem. Clin. Biochem. 1976; (14) 9:421-427.
th
3. Young DS. Effects of drugs on clin. Lab. test, 4 ed. AACC Press, 1995
4. Young DS. Effects of disease on clin. Lab. test, 4th ed. AACC Press, 2001.
rd
5. Burtis A. et al. Tietz Textbook of Clin. Chem.,3 ed. AACC 1999.
6. Tietz N.W. et al. Clin. Guide to Lab.Tests,3rd ed. AACC 1995.
CONFEZIONE γ-GT
Ref.:
CH-40
Cont
: 20 x 2 mL
Ref.:
CH-41
Cont
: 15 x 15 mL
SIMBOLI GRAFICI ADOTTATI
Consultare le istruzioni dell’uso
Conservare a 2-8°C
Fabbricante
Dispositivo medico-diagnostico in vitro
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