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LE TERAPIE AVANZATE:
ASPETTI SCIENTIFICI E
REGOLATORI
Maria Cristina Galli, Ph.D.
Dipartimento di Biologia Cellulare e Neuroscienze
Istituto Superiore di Sanità, Roma
EATRIS ATMP platform chair
Seminario SSFA, Fondazione Policlinico A. Gemelli,
Roma 21 giugno 2016
DISCLAIMER
Partecipo a questo evento a titolo personale di esperto nel
campo
Questa presentazione riflette solo il mio punto di vista
personale
Questa presentazione non può essere disseminata,
riprodotta o copiata, filmata o registrata, in tutto o in
parte, senza il mio assenso scritto
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EVOLUZIONE DEI MEDICINALI
Principi attivi: da molecole più o meno semplici a quelle
complesse e ottenute con le biotecnologie più sofisticate
• per secoli estratti dalle piante, poi sintetizzati chimicamente,
poi estratti da colture microbiche o da materiali animali o
umani
Plasma-derivati:
• immunoglobuline, fattori della coagulazione
Vaccini
• tecniche di coltura in vitro
• antigeni ricombinanti
Medicinali biotecnologici
• proteine ricombinanti
• anticorpi monoclonali
secolo XXI: TERAPIE AVANZATE
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INQUADRAMENTO REGOLATORIO
Sotto la legislazione generale dei medicinali che prevede:
• sperimentazione clinica (Dir.2001/20/EC, EU Reg.536/2014)
• autorizzazione al commercio (EU Reg.1394/2007)
• GLP, GMP, GCP
• farmacovigilanza
• testi della Farmacopea Europea
Dir. 2001/83/EC annex 1: TC e TG sono farmaci (definizione)
EU Reg.1394/2007: definizione legale di TEP
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DEFINIZIONE DI MEDICINALE PER
TERAPIA GENICA
Direttiva 2009/120/EC: un GTMP è un medicinale biologico
• containing a recombinant nucleic acid used to regulate, repair,
replace, add or delete a genetic sequence
• its clinical effect relates directly to that recombinant sequence or
to its product
Gene therapy medicinal products shall not include vaccines
against infectious diseases
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MEDICINALI PER TERAPIA GENICA
Classe eterogenea:
• vettori virali (e.g. ADV, AAV, HSV, RV, LV)
• vettori non virali (es. plasmidi o liposomi con plasmidi)
• virus oncolitici ricombinanti
• vettori batterici / batteri geneticamente modificati cioè
ricombinanti
• cellule umane geneticamente modificate
Indicazioni cliniche
¾ frequentemente per malattie rare
Ammesso solo trasferimento di geni in cellule SOMATICHE
umane
Trasduzione linea germinale: PROIBITA (EU dir. 2001/20,
EU Reg.536/2014)
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MEDICINALI PER TERAPIA
CELLULARE/INGEGNERIA TISSUTALE
EU Reg.1394/2007: sono entrambi medicinali biologici
¾ contengono cellule o tessuti soggetti a manipolazione
sostanziale oppure non usati per la stessa funzione
essenziale nel ricevente e nel donatore
ma differiscono per il meccanismo d’azione
¾ CTMP (Dir. 2009/120/EC): azione farmacologica,
immunologica o metabolica
¾ TEP (EU. Reg 1394/2007): usati per rigenerare, riparare o
sostituire un tessuto umano
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MEDICINALI PER TERAPIA
CELLULARE/INGEGNERIA TISSUTALE
Contengono cellule SOMATICHE umane autologhe o
allogeniche
Possono anche essere ottenuti da cellule staminali:
¾ adulte (mesenchimali/stromali, ematopoietiche, progenitori
tessuto-specifici)
¾ pluripotenti (embrionali umane o indotte)
se geneticamente modificati:
→ Medicinali per Terapia Genica (art 2:5, EU Reg.1394/2007)
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REQUISITI DI TRACCIABILITÀ PER GLI
ATMP
Reg.1394/2007, art. 15: i produttori e coloro che usano un
ATMP (es. negli ospedali) devono stabilire e mantenere
attivo un sistema di tracciabilità che assicuri di tracciare
per 30 anni dopo la scadenza:
• il prodotto e il suo processo produttivo, inclusi reagenti a
contatto con le cellule/tessuti
• il paziente e l’ATMP ricevuto
Dal prodotto al paziente e viceversa
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CAT CLASSIFICATION
1) Recombinant HSV-1 containing human GM-CSF proposed
for melanoma therapy
→CAT classification: GTMP
2) Adenoviral vector expressing a mutated HCV structural
region, proposed for prevention and treatment of hepatitis C
and HCV- induced liver carcinoma
→CAT classification: not an ATMP
3) Autologous CD34+ haematopoietic stem cells transduced with
LV encoding the human βA-T87Q-globin gene, intended for
therapy of beta-thalassemia, sickle cell anemia
→CAT classification: GTMP
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CAT CLASSIFICATION
Autologous in vitro expanded antigen-specific regulatory T
lymphocytes, for treating inflammatory eyes diseases and
inflammatory articular diseases
→CAT classification: CTMP
Autologous lipo-aspirate containing non-manipulated adipocytes
and stromal vascular fraction, for restoration of subcutaneous
fat
→CAT classification: NOT ATMP
Autologous adipose tissue-derived mesenchymal stem cell, for
treating degenerative arthritis, osteoarthritis, articular cartilage
defects
→CAT classification: TEP
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ATMP-CONFEZIONAMENTO
PRIMARIO E SECONDARIO
Annex III Reg. 1394/2007:
¾ Codice del donatore
¾ “questo prodotto contiene cellule umane
(descrizione)/animali (descrizione e specie)”
¾ “solo per uso autologo”
Ma attenzione!!
Se prodotto è paziente-specifico (es. uso autologo)
¾ deve contenere anche l’identificazione del ricevente
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REQUISITI DEI MEDICINALI
Qualità: identità, attività, quantità, purezza, sterilità,
endotossine, assenza virus, micoplasmi e prioni
Sicurezza: tossicità, biodistribuzione, farmacodinamica,
farmacocinetica, minima dose attiva e massima dose
tollerabile
• sia preclinica sia clinica
Efficacia: farmacodinamica, farmacocinetica, dosi attive, effetto
terapeutico
• sia preclinica sia clinica
(Dir. 2001/83/EC )
La completezza di questi dati dipende dalla fase dello sviluppo
(sperimentazione clinica/mercato)
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TESTI FARMACOPEA EUROPEA
APPLICABILI AGLI ATMP (1)
5.14 Gene transfer medicinal products for human use ♦
5.1.7 Viral Safety
5.2.12. Raw materials for the production of cell-based and gene
therapy medicinal products ♦
5.2.8 Minimising the risk for TSE
2.6.16 Test for extraneous agents in viral vaccines for human use
2.6.7 Mycoplasmas
♦ solo per informazione
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TESTI FARMACOPEA EUROPEA
APPLICABILI AGLI ATMP (2)
2.6.27 Controllo microbiologico dei prodotti cellulari
2.7.23 Conta cellule CD34/CD 45+ in prodotti emopoietici
2.7.24 Citofluorimetria
2.7.28 Colony-forming assay per progenitori emopoietici
umani
2.7.29 Conta cellulare vitale
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PRODUZIONE DI UN MEDICINALE
PER TERAPIA GENICA
• Scelta e costruzione del vettore
• Transfezione nelle cellule produttrici
• Coltura delle cellule produttrici: il vettore viene
amplificato e rilasciato nel terreno di coltura
• Raccolta del vettore dalla coltura
• Purificazione
• Formulazione, infialamento
• CQ
• Rilascio lotto
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PRODUZIONE DI UN MEDICINALE
PER TG CONTENENTE CELLULE
GENETICAMENTE MODIFICATE
Materiali di partenza: cellule e vettore (Dir. 2009/120/EC)
Scelta /origine /manipolazione/ controllo qualità delle cellule
da trasdurre
Scelta/ disegno molecolare/costruzione / produzione/ controllo
qualità del vettore
Processo di produzione:
• modifica genetica (trasduzione) delle cellule
• selezione/purificazione delle cellule trasdotte
Controllo qualità delle cellule trasdotte purificate
sia il vettore sia le cellule trasdotte vanno prodotti in GMP
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PRODUZIONE DI UN MEDICINALE PER
TERAPIA CELLULARE / INGEGNERIA
TISSUTALE
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Scelta cellule/tessuto di partenza
Donazione →materia prima (starting material)
Isolamento, coltura, raccolta cellule rilevanti
Purificazione cellule rilevanti
Ottenimento lembo tessuto
Formulazione
Confezionamento
CQ
Rilascio lotto
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DIR. 2004/23-SELEZIONE DEL DONATORE
DI CELLULE/TESSUTO
Saggi sierologici per:
¾ HIV-1,2, HBsAg, HBV core, HCV ,Sifilide
HTLV-I solo se donatore proviene da aree ad alta incidenza
Centri Aferesi, Centri Prelievo, Tissue Establishments (centri
dei tessuti)
¾ Autorità Competente: Centro Nazionale Trapianti
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STABILITÀ
Cellule somministrate fresche
Cellule crio-conservate
¾ In entrambi i casi sono necessari studi di stabilità per definire le
condizioni e i tempi di conservazione
Gli studi di stabilità devono comprendere saggi di vitalità, sterilità
e saggi funzionali.
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MEDICINALI A BASE DI CELLULE
STAMINALI
Staminali adulte
• mesenchimali/stromali
• ematopoietiche
• progenitori tessuto-specifici
Staminali pluripotenti
• embrionali umane (hESC)
• pluripotenti indotte (iPSC)
finora non ne sono stati autorizzati al commercio in EU
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RISCHI NELL’USO CLINICO DELLE
CELLULE STAMINALI
Rischio infettivo (virus,TSE) come per tutti i biologici
Rischio di sviluppare tumori
Rischio che nel paziente non si ottengano i tipi cellulari necessari
alla terapia
Rischio che nel paziente le cellule staminali si moltiplichino /
siano attive in organi/tessuti non voluti
Rischio che nel paziente le cellule staminali siano eliminate a
causa di reazioni immunitarie/infiammatorie
Mancano ancora metodi/ traccianti/marcatori non-invasivi per
seguire in vivo il destino delle cellule
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MEDICINALI PER TERAPIE AVANZATE
E GMP
Sono biologici e iniettabili:
¾ sterili e apirogeni (E.P. 01/2005:0520)
produzione in asepsi unica scelta possibile se contengono cellule:
¾ EU-GMP annex 1 e Annex 2
Sono potenziali vettori di patogeni e ottimo substrato per la crescita di agenti
tossici contaminanti (virus, micoplasmi, batteri, muffe) :
¾ EU-GMP annex 2, testi E.P. su sicurezza virale
Se sono sperimentali,
¾ EU-GMP Annex 13
Lotti piccoli e/o paziente-specifici:
¾ peculiarità per CQ, rilascio, ritiro e reclami
30 anni tracciabilità
¾ requisito di legge (Reg.1394/07)
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MEDICINALI PER TERAPIE
AVANZATE E GMP
• Tutti i farmaci, inclusi quelli da utilizzare in sperimentazione
clinica, devono essere prodotti in GMP
• Le strutture che producono medicinali per terapie avanzate
devono soddisfare i requisiti previsti dalle GMP
– Presenza di una Persona Qualificata (QP)
– Autorizzazione alla produzione rilasciata da AIFA
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MEDICINALI PER TERAPIE
AVANZATE
Vettori virali, virus oncolitici ricombinanti
Vettori non virali (e.g. plasmidi o liposomi con plasmidi)
¾ simili ai classici biologici e.g. vaccini
Cellule e tessuti (autologhi, allogenici), con dispositivo medico
¾ Nuove entità farmaceutiche
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PREVENZIONE DELLA CROSSCONTAMINAZIONE
Aree segregate e apparecchiature dedicate per cellule da
pazienti infetti e per vettori virali
Aree produzione CTMP separate da quelle GTMP
Flusso unidirezionale da area con cellule non g.m. a quella
con cellule g.m.
Non usare due LFH in una stanza per due prodotti/pazienti
contemporaneamente
Convalida a livello molecolare (es. transgene e/o vettore) per
cleaning al cambio prodotto
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PRODUZIONE IN ASEPSI DI ATMP
• Ambiente: deve soddisfare l’Annex 1 EU GMP
• Layout: tale da consentire manutenzione e pulizia
indispensabili per evitare il rischio di cross-contaminazioni e
accumulo di materiale
• la produzione deve avvenire in una classe A, rappresentata
in genere da una cappa a flusso laminare, posta in un
locale di classe B, cui si accede attraverso un sistema di
spogliatoi di classe B, C e D. Pass box dovranno gestire i
passaggio di materiale agli ambienti classificati.
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PRODUZIONE IN ASEPSI DI ATMP
I movimenti del personale devono essere limitati
Tutto ciò che entra nell’area classificata deve essere sterile, i
materiali di partenza anche apirogeni e senza virus
Convalida del processo sterile: tre media-fill consecutivi, con
esito positivo
Media-fill è la simulazione del processo di produzione:
¾ cappa/linea filling, contenitore/chiusura, locali e attrezzature,
processo di produzione e controlli in process, processo di
filtrazione, operatori coinvolti, eventuali interventi di
manutenzione, monitoraggi ambientali
Il media-fill deve essere ripetuto due volte l’anno per ogni
processo e per ogni linea di produzione
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QC E RILASCIO DEL LOTTO
Quando la quantità di cellule nel prodotto finale è limitata:
¾ per non compromettere la dose clinica, non si può effettuare
un programma di QC completo (identità, purezza, attività,
quantità, sterilità, micoplasmi)
GMP ANNEX 2 procedura rilascio lotto in 2 tempi
• valutazione dei dati presenti al momento dell’invio→
approvazione condizionale da parte della QP →spedizione
del prodotto alla clinica
• valutazione dei risultati analitici posteriori → approvazione
finale da parte della QP
NB: deve esserci una SOP che descrive le misure da prendere
(compreso raccordo con staff clinico) se i risultati posteriori
sono fuori specifica
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