RADIOIMMUNOLOGIA

RADIOIMMUNOLOGIA
COMPONENTI REAZIONI
ESECUZIONE DOSAGGI R.I.A.
Radioimmunologia
Inserita nel contesto della Medicina Nucleare
La storia
Il RIA
nasce dalla combinazione di tecniche
mutuate
dall’immunochimica e dalla radio
chimica
(R.S.Yalow e S.A. Berson 1959):
è un metodo di misura della
concentrazione
Requisiti essenziali delle
Metodiche Radioimmunologiche
Sensibilità
capacità di rilevare la sostanza di interesse
anche a concentrazioni molto basse
Specificità
capacità di distinguere le sostanze di interesse
da altre a struttura simile (eventualmente
presenti anche a livelli più elevati) nei fluidi
biologici
Operatori in Radioimmunologia
Equipe formata da
Tecnico sanitario di radiologia medica
Infermiere
Medico Nucleare
Logistica in Radioimmunologia
Accettazione
Ambulatorio prelievi
(dentro la provetta…un paziente)
Laboratorio radioimmunologico
Struttura ed accessori di un
laboratorio
RIA
o Pareti
o Pavimenti
o Banconi
o Vetreria
o Strumentazione
Frigorifero e Kit
Banconi
La Strumentazione
ELEMENTI CHE COMPONGONO KIT PER
DOSAGGIO RADIOIMMUNOLOGICO
•STANDARS
•ANTIGENE (caldo, marcato o tracciante-freddo
•ATISIERO (liquido, solido)
•SEPARATORE
•TAMPONE
•PROVETTE O BIGLIE SENSIBILIZZATE
Sostanze di reazione
Antigene (Ag)
Antigene (Ag*)
Anticorpo (Ab)
Anticorpo (Ab*)
sostanza presa in esame (Analita) e
sostanza di riferimento (Standard)
introduzione di un isotopo nella sua
struttura molecolare (R.I.A.)
proteina sierica, appartenente alle
immunoglob.,reagisce con Ag
Introduzione di un isotopo nella sua
struttura molecolare (IRMA)
Proprietà dell’antisiero
• Titolo
Indica la diluizione finale
dell’antisiero, che deve essere tale da
legare in assenza di Ag inattivo il 50%
dell’Ag*.
• Affinità
Avidità con cui l’Ag lega l’Ab
Proprietà dell’antigene marcato
• Purezza radiochimica è la percentuale di
attività totale dovuta al radionuclide
presente nella forma chimica desiderata.
• Attività specifica è il numero di atomi
radioattivi introdotti nella molecola.
• Immunoreattività è la capacità di
interazione anticorpale.
ANTIGENE(Ag*)ANTICORPO(Ab*)
L’Antigene o l’Anticorpo possono essere marcati
con diversi isotopi radioattivi, i più usati sono:
Isotopo
125 J
3H
57 Co
T½
60 gg
12,26 anni
267 gg
Emiss.
KeV
γ
β
γ
28,35
18
122
TERMINOLOGIA
• ANTIGENE sostanza capace di indurre la produzione di
anticorpi
• ANTISIERO miscela di anticorpi in grado di legare
specificatamente la molecola da da dosare
• TRACCIANTE di solito Ag reso radioattivo mediante
l’introduzione di un radioisotopo nella struttura molecolare
• INCUBAZIONE tempo necessario affinchè avvenga la
reazione
• COMPETIZIONE l’Ag non marcato e l’Ag* competono per
i siti leganti di un Ab specifico ( RIA )
TERMINOLOGIA
• IMMUNOCOMPLESSO complesso
antigene – anticorpo ( legato B bound )
• SEPARAZIONE si separa il libero ( F ) dal
legato ( B )
• NSB o Bianco, quota di legame aspecifico
• CONTEGGIO contatore Y multipozzetto a
scintillazione solida, contatore ß a
scintillazione liquida
Fattori che concorrono alla
buona riuscita dell’esame
•
•
•
•
•
•
•
Accettazione
Modalità di prelievo
Separazione
Stoccaggio
Scongelamento
Stoccaggio Kits
Giusta ricostituzione dei reagenti ed
esecuzione dell’esame
Tecnica di dosaggio
•
•
•
1)
2)
•
•
•
A- Ricostituzione dei reagenti
B- Addizione dei reattivi
C- Incubazione
temperatura
tempo
D- Separazione dell’Ag libero (free) dal
complesso Ag/ Ab (Bound)
E- Conteggio (scintill. solida, scintill.
liquida)
F- Calcolo dei risultati
Componenti dosaggi R.I.A.
•
•
•
•
Antigene (Ag) freddo
Antigene (Ag*) caldo, marcato, tracciante
Antisiero (Ab) specifico (liquido o solido)
Precipitante o Separatore
Reazione R.I.A.
Dosaggio per competizione
Analita da dosare
Ag
Ag Ab
Ag*
Ab
Ag*
(Ag Ab)*
Bound
NB:
Inversamente proporzionale
Free
Cpm
Risposta
(Bound)
DOSE
Componenti dosaggi IRMA
•
•
•
•
Antigene (Ag) freddo
Anticorpo (Ab) freddo
Anticorpo (Ab*) marcato. Tracciante
Provette sensibilizzate, biglie sensibilizzate
Reazione IRMA (Ab*)
Metodo Sandwich
Ag è in grado di legarsi con due molecole anticorpali
Fase 1
Immuno estrazione
in fase solida
Fase 2
Ab*
Ag
incubaz
Ab
Rimozione
del
Sovranatante
incubaz
Ab
Ag
Rimozione
del
Sovranatante
Bound direttamente proporzionale alla concentrazione dell’analita
Diversificazione
dei rifiuti
• Rifiuti radioattivi : Liquidi o solidi
• Rifiuti biologici
• Rifiuti cartacei