BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX)

ISTRUZIONI PER L'USO
TERRENI SU PIASTRA
PRONTI ALL'USO
PA-254060.06
Rev.: Sep 2011
BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX)
BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base)
USO PREVISTO
BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) (agar cioccolato [agar GC II con IsoVitaleX]) e
BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) (agar cioccolato [base agar sangue n. 2]) sono
terreni non selettivi per l'isolamento e la coltura di microrganismi esigenti, in particolare Neisseria ed
Haemophilus species, da diversi campioni clinici.
PRINCIPI E SPIEGAZIONE DELLA PROCEDURA
Metodo microbiologico.
Carpenter e Morton hanno documentato un terreno ottimizzato per l'isolamento del gonococco in
24 h.1 L'efficacia di questo terreno, agar GC integrato con emoglobina e concentrato di lievito, è
stata dimostrata in uno studio su dodici terreni usati per l'isolamento di questo organismo.2 Il
terreno è stato poi perfezionato a più riprese.3-5 Nel BD Chocolate Agar (GC II Agar with
IsoVitaleX), i nutrienti sono costituiti dalla base GC II, che contiene caseina e peptoni di carne
selezionati per fornire l'azoto, fosfati per mantenere il pH e amido di granturco per neutralizzare
gli acidi grassi tossici eventualmente presenti nell'agar. L'emoglobina fornisce il fattore X (emina).
BD IsoVitaleX è un supplemento definito che fornisce il fattore V (nicotinamide adenina
dinucleotide, NAD), indispensabile per le specie Haemophilus, oltre a vitamine, aminoacidi,
coenzimi, glucosio, ione ferrico e altri fattori che stimolano la crescita di Neisseria patogene e altri
organismi esigenti. Sono stati aggiunti piridossale e alcuni fattori di crescita per migliorare lo
sviluppo dei batteri Gram-positivi; con l'integrazione della piridossale si sostiene la crescita delle
specie Granulicatella e Abiotrophia (= streptococchi con variazioni nutritive).6-9
L'agar cioccolato (base agar sangue n. 2) è un terreno alternativo per l'isolamento di organismi
esigenti da campioni clinici.7 BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) contiene peptone
proteosico, digerito di fegato ed estratto di lievito come fonti di azoto e vitamine. L'equilibrio
osmotico è garantito dal cloruro di sodio. Il sangue di cavallo riscaldato (denaturato al calore)
fornisce, oltre a vari nutrienti, anche il fattore X (eme) e, non contenendo NADasi, il fattore V
(nicotinamide adenina dinucleotide, NAD), indispensabili per lo sviluppo di Haemophilus
influenzae.
REAGENTI
Formule* per litro di acqua purificata
BD Chocolate Agar (GC II Agar with
BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2
IsoVitaleX)
Base)
Digerito pancreatico di
7,5 g
Peptone proteosico n. 3
15,0 g
caseina
Peptone di carne selezionato
7,5
Digerito di fegato
2,5
Amido di granturco
1,0
Estratto di lievito
5,0
Fosfato dipotassico
4,0
Cloruro di sodio
5,0
Fosfato monopotassico
1,0
Sangue di cavallo (riscaldato)
7%
Cloruro di sodio
5,0
pH 7,4 ± 0,2
Agar
12,0
Emoglobina
10,0
Supplemento IsoVitaleX
12,0 mL
Piridossina
0,01 g
Fattori di crescita
0,5
pH 7,2 ± 0,2
*Compensata e/o corretta per soddisfare i criteri di rendimento.
PA-254060.06
-1-
Il supplemento BD IsoVitaleX contiene i seguenti fattori di crescita (formula* per litro di acqua
purificata):
0,01 g
Vitamina B 12
L-glutamina
10,0
Adenina
1,0
Cloridrato di guanina
0,03
Acido p-aminobenzoico
0,013
Nicotinamide adenina dinucleotide (NAD)
0,25
Pirofosfato di tiamina
0,1
Nitrato di ferro
0,02
Cloridrato di tiamina
0,003
Cloridrato di cisteina
25,9
L-cistina
1,1
Glucosio
100,0
*Compensata e/o corretta per soddisfare i criteri di rendimento.
PRECAUZIONI
. Solo per uso professionale.
Non usare le piastre se presentano tracce di contaminazione microbica, alterazioni di colore,
essiccamento, incrinature o altri segni di deterioramento.
Per maneggiare i prodotti in condizioni asettiche, riconoscere i rischi biologici e smaltire i
prodotti usati, consultare le ISTRUZIONI GENERALI PER L'USO.
CONSERVAZIONE E VITA UTILE
Alla consegna, conservare le piastre al buio a 2 – 8 °C nella confezione originaria fino a
immediatamente prima dell'uso. Evitare congelamento e surriscaldamento. Le piastre possono
essere inoculate sino alla data di scadenza (v. l'etichetta sulla confezione) e incubate per i
tempi di incubazione raccomandati.
Le piastre prelevate dalle confezioni da 10 già aperte possono essere usate per una settimana
se conservate in luogo pulito a 2 – 8 °C.
CONTROLLO DI QUALITÀ A CURA DELL’UTENTE
Inoculare i campioni rappresentativi con i seguenti ceppi (per informazioni più dettagliate, v.
ISTRUZIONI GENERALI PER L'USO). Incubare le piastre a 35 ± 2 °C in atmosfera aerobica
con aggiunta di anidride carbonica. Leggere le piastre dopo 18 – 24 e 42 – 48 ore di
incubazione.
Ceppi*
BD Chocolate Agar (GC II Agar with
IsoVitaleX) e
BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base)
Haemophilus influenzae ATCC 10211
Crescita da buona a eccellente
Neisseria gonorrhoeae ATCC 43069
Crescita da discreta a eccellente
Neisseria meningitidis ATCC 13090
Crescita da buona a eccellente
Streptococcus pneumoniae ATCC 6305
Crescita da buona a eccellente
Non inoculate
Marrone cioccolata, opaca, può essere
leggermente disomogenea
* BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) può essere utilizzato anche con
Granulicatella (Abiotrophia) adiacens DSM 9848 per evidenziare la crescita di streptococchi con
variazioni nutritive.8,9
PROCEDURA
Materiali forniti
BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) o BD Chocolate Agar (Blood Agar No 2
Base), entrambi su piastre impilate Stacker da 90 mm. Microbiologicamente controllate.
PA-254060.06
-2-
Materiali non forniti
Terreni di coltura accessori, reagenti e apparecchiature di laboratorio necessarie.
Tipi di campioni
Questi terreni sono usati prevalentemente per tutti i tipi di campioni di infezioni che si sospetta
possano contenere organismi esigenti, in particolare i campioni prelevati da siti corporei
essenzialmente sterili (ad es., liquido cerebrospinale, ascessi). Se ne fa uso soprattutto per
l'isolamento non selettivo di Neisseria, Haemophilus e altri batteri che potrebbero non crescere
sui terreni agar sangue utilizzati abitualmente, come l'agar Columbia con 5% di sangue di
montone BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX), inoltre, può essere usato per
l'isolamento delle specie Abiotrophia e Globicatella (= streptococchi con variazioni nutritive).8,9
Questi terreni possono essere usati anche come basi per eseguire subcolture a partire da
emocolture (v. anche PERFORMANCE E LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA).
Prelievo e trasporto dei campioni
Neisseria gonorrhoeae, N. meningitidis, Haemophilus e altri organismi esigenti sono sensibili
alle condizioni ambientali avverse. Utilizzare quindi terreni di trasporto appropriati per tutti i
campioni. I campioni devono essere inviati quanto prima al laboratorio e non devono avere più di
24 ore, anche se si usa un terreno di trasporto. La temperatura ottimale per il trasporto è
20 – 25 °C. Non conservare in frigorifero.10,11
Procedura del test
Strisciare il campione non appena viene consegnato in laboratorio su BD Chocolate Agar (GC
II Agar with IsoVitaleX) o BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base). La piastra strisciata
è utilizzata prevalentemente per isolare le colture pure dai campioni contenenti flora mista.
In alternativa, se il materiale in coltura proviene direttamente da un tampone, rotolare il tampone
su una piccola area del bordo e strisciare da questa zona inoculata.
Se il campione è stato prelevato da un sito corporeo contenente flora normale, deve essere
inoculato anche su terreni selettivi appropriati, in funzione dell'agente patogeno isolato.
Aggiungere anche una piastra di BD Martin-Lewis Agar, modified o BD GC-Lect Agar per
Neisseria gonorrhoeae e una piastra di BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin
per Haemophilus.
Incubare le piastre a 35 ± 2 °C in atmosfera aerobica con aggiunta di anidride carbonica.
Leggere le piastre dopo 18 – 24 e 42 – 48 ore di incubazione.
Risultati
La tipica morfologia delle colonie è la seguente:
Organismi
BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) e
BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base)
Piccole (1 mm), umide, perlacee con caratteristico odore
Haemophilus influenzae
murino
Piccole, da bianco-grigiastre a incolori, mucoidi
Neisseria gonorrhoeae
Da medie a grandi, grigio-azzurre, mucoidi
Neisseria meningitidis
Streptococcus pneumoniae Piccole colonie piatte o grandi, mucoidi e verdastre, con
terreno circostante eventualmente verdastro
Granulicatella (Abiotrophia) Piccole colonie grigio-verdastre, con terreno circostante
eventualmente verdastro
adiacens*
PERFORMANCE E LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA
BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) e BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2
Base) sono terreni arricchiti non selettivi su cui crescono batteri esigenti e non esigenti, inclusa
la normale microflora. Pertanto, si raccomanda di inoculare i campioni prelevati da siti corporei
contenenti flora normale su terreni selettivi appropriati.
L'espressione “batteri esigenti” definisce i batteri che non crescono o crescono con difficoltà sui
tradizionali terreni di isolamento primario contenenti sangue di montone, ad es., Haemophilus,
Neisseria patogene e diversi altri microrganismi. Per ulteriori indicazioni sul tipo di campioni che
PA-254060.06
-3-
devono essere inoculati su questi terreni e sul tipo di microrganismi isolati su di essi, consultare
la bibliografia.8,9,11,12
Il numero e la tipologia delle specie batteriche che si comportano da agenti infettivi è molto
ampio. Pertanto, prima di usare i terreni di routine con bacilli isolati raramente o descritti di
recente, l'utilizzatore deve verificarne l'idoneità coltivando colture pure dell'organismo in
questione.
BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) non è stato testato per stabilire se stimola la
crescita di specie Abiotrophia e altri streptococchi con variazioni nutritive.
Per un'analisi più approfondita sugli streptococchi con variazioni nutritive, consultare la
bibliografia.6,8,9,13
BIBLIOGRAFIA
1. Carpenter, C.M., and H.E. Morton. 1947. An improved medium for isolation of the
gonococcus in 24 hours. Proc. N.Y. State Assoc. Public Health Labs. 27:58-60.
2. Carpenter, C.M., M.A. Bucca, T.C. Buck, E.P. Casman, C.W. Christensen, E. Crowe, R.
Drew, J. Hill, C.E. Lankford, H.E. Morton, L.R. Peizer, C.I. Shaw, and J.D. Thayer. 1949.
Evaluation of twelve media for the isolation of the gonococcus. Am. J. Syphil. Gonorrh.
Venereal Diseases 33:164-176.
3. Power, D.A. (ed.), and P.J. McCuen. 1988. Manual of BBL products and laboratory
procedures, 6th ed. Becton Dickinson Microbiology Systems, Cockeys ville, Md.
4. Martin, J.E., T.E. Billings, J.F. Hackney, and J.D. Thayer. 1967. Primary isolation of N.
gonorrhoeae with a new commercial medium. Public Health Rep. 82:361-363.
5. Vastine, D.W., C.R. Dawson, I. Hoshiwara, C. Yonega, T. Daghfous, and M. Messadi. 1974.
Comparison of media for the isolation of Haemophilus species from cases of seasonal
conjunctivitis associated with severe endemic trachoma. Appl. Microbiol. 28:688-690.
6. Ruoff, L.R. 2003. Aerococcus, Abiotrophia, and other infrequently isolated aerobic catalasenegative, gram-positive cocci. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller,
and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8thed. American Society for
Microbiology, Washington, D.C.
7. Anonymous. 1998. DIFCO Manual, 11th edition. DIFCO Laboratories, Division of Becton
Dickinson and Co. Sparks, MD, USA.
8. Reimer, L.G., and L.B. Reller. 1981. Growth of nutritionally variant streptococci on common
laboratory and 10 commercial blood culture media. J. Clin. Microbiol. 14:329-332.
9. Collins, M.D., and P.A. Lawson. 2000. The genus Abiotrophia (Kawamura et al.) is not
monophyletic: proposal of Granulicatella gen. nov., Granulicatella adiacens comb. nov.,
Granulicatella elegans comb. nov. and Granulicatella balaenopterae comb. nov. Int. J. Syst.
Evol. Microbiol. 50: 365-369.
10. Thomson, R.B., and J.M. Miller. 2003. Specimen collection, transport, and processing:
bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken
(ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
11. Forbes, B.A., and P.A. Granato. 1995. Processing specimens for bacteria. In P.R. Murray,
E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical
microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
12. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). 2003.
Manual of clinical microbiology, 8thed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
13. Ruoff, K.L. 2003. Aerococcus, Abiotrophia, and other infrequently isolated aerobic catalasenegative, gram-positive cocci. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller,
and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for
Microbiology, Washington, D.C.
CONFEZIONE/DISPONIBILITÀ
BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX)
N. di cat. 254060
Terreni su piastra pronti all'uso, confezioni da 20
N. di cat. 254089
Terreni su piastra pronti all'uso, confezioni da 120
PA-254060.06
-4-
BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base)
Terreni su piastra pronti all'uso, confezioni da 20
N. di cat. 257011
Terreni su piastra pronti all'uso, confezioni da 120
N. di cat. 257456
ULTERIORI INFORMAZIONI
Per ulteriori informazioni, rivolgersi al rappresentante BD di zona.
Becton Dickinson GmbH
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
[email protected]
http://www.bd.com
http://www.bd.com/europe/regulatory/
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection
BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company. © 2011 BD
PA-254060.06
-5-