LAP Test Kit - Thermo Fisher Scientific

NOTE: Precipitate formation or color variation from straw to pink in
the Color Developer is common and does not affect test performance.
LAP Test Kit
(English)
INTENDED USE
Remel LAP Test Kit is a rapid assay recommended for use in
qualitative procedures for the detection of leucine aminopeptidase
activity in streptococci and related genera.
SUMMARY AND EXPLANATION
In 1984, Colman and Ball reported that, unlike streptococci,
1
Aerococcus species did not produce leucine aminopeptidase (LAP).
Fertally and Facklam confirmed this finding in 1987 while investigating
2
They found Aerococcus
methods of streptococci identification.
strains to be consistently negative for leucine aminopeptidase, while
strains of Enterococcus and Streptococcus would give positive
reactions. LAP, in conjunction with PYR and other conventional
tests, is an important parameter in the identification of Aerococcus,
3,4,5
Leuconostoc, Pediococcus, and related genera.
PRINCIPLE
Filter paper disks are impregnated with leucine-β-naphthylamide which
serves as a substrate for the detection of leucine aminopeptidase.
Following hydrolysis of the substrate by the enzyme, the resulting
β-naphthylamine produces a red color upon the addition of
ρ-dimethylaminocinnamaldehyde (Color Developer).
REAGENTS AND MATERIALS SUPPLIED
1. LAP Disks (1 vial of 50)
Reactive Ingredient: L-leucine-β-naphthylamide hydrochloride
2. Color Developer (1 bottle, 4.5 ml)
Reactive Ingredient: 0.01% ρ-dimethylaminocinnamaldehyde
3. Applicator Sticks (1 vial of 50)
PRECAUTIONS
This product is For In Vitro Diagnostic Use and should be used by
properly trained individuals. Precautions should be taken against the
dangers of microbiological hazards by properly sterilizing specimens,
containers, and media after use. Directions should be read and
followed carefully.
Caution!
The Color Developer is toxic and may cause harm to the environment.
Harmful by inhalation, contact with skin or eyes, or if swallowed. May
impair fertility or cause harm to unborn child. Refer to the Material
Safety Data Sheet for detailed information on reagent chemicals.
STORAGE
This product is ready for use and no further preparation is necessary.
The product should be stored in the dark in its original container at
2-8°C until used. Do not freeze or overheat. Allow product to come
to room temperature before use. Do not incubate prior to use.
PRODUCT DETERIORATION
This product should not be used if (1) the color of the disks has
changed from white, (2) the expiration date has passed, or (3) there
are other signs of deterioration. Protect disks from moisture by
removing only those disks necessary for testing from the vial.
Promptly replace the cap and return the vial to 2-8°C.
SPECIMEN COLLECTION, STORAGE, AND TRANSPORT
Specimens should be collected and handled following recommended
5
guidelines. The LAP test should be performed on pure or isolated
cultures of catalase-negative, gram-positive cocci which are 18-72
hours old.
MATERIALS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED
(1) Loop sterilization device, (2) Inoculating loop, swab, collection
containers, (3) Incubators, alternative environmental systems,
(4) Supplemental media, (5) Quality control organisms, (6) Forceps,
(7) Demineralized water.
Optional Materials:
(1) Microscope slide, (2) Micropipette or microbiological loop (10 µl).
PROCEDURE
1. Using forceps, place the disk on a clean microscope slide or in
the lid of an agar plate free from excess moisture.
2. Moisten the disk slightly with 5-10 µl of demineralized water using
an adjustable micropipette or a 10-µl inoculating loop. DO NOT
OVERSATURATE. Alternatively, the disk may be placed on the
agar surface of the plated medium for rehydration.
3. Pick up a visible “paste” from an 18-72-hour culture using a
sterile loop or wooden applicator stick.
4. Rub the inoculum gently into a small area of the disk.
5. Incubate at room temperature for 5 minutes.
6. Add one (1) drop of Color Developer to the disk.
7. Allow up to one minute for a color change.
INTERPRETATION OF THE TEST
Positive Test Pink to red color development within one minute of
applying Color Developer
Negative Test -
No color change or a slight yellow color development
within one minute of applying Color Developer
4,5,6
EXPECTED VALUES
Aerococcus urinae
Aerococcus viridans
Enterococcus
Gemella haemolysans
Gemella morbillorum
Globicatella
(+)
(–)
(+)
(–)
(+)
(–)
Helcococcus
Lactococcus
Leuconostoc
Pediococcus
Streptococcus
(–)
(+)
(–)
(+)
(+)
QUALITY CONTROL
All lot numbers of the LAP Test Kit have been tested using the
following quality control organisms and have been found to be
acceptable. Testing of control organisms should be performed in
accordance with established laboratory quality control procedures. If
aberrant quality control results are noted, patient results should not
be reported.
CONTROL
Enterococcus faecalis
ATCC® 29212
INCUBATION
Aerobic, 5 min.
@ 25°C
RESULTS
Positive
Aerococcus viridans
ATCC® 11563
Aerobic, 5 min.
@ 25°C
Negative
LIMITATIONS
1. Color development noted after one minute should be disregarded.
2. False negative reactions may occur if inadequate inoculum is used.
3. It should be emphasized that this test is only part of the overall
scheme for identification. Further biochemical and serological
testing may be necessary for definitive identification.
6.
7.
Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.A. Pfaller, and R.H.
th
Yolken. 2003. Manual of Clinical Microbiology. 8 ed., Vol. 1.
ASM, Washington, D.C.
Data on file. 1991. Remel Inc., Lenexa, KS.
PACKAGING
REF 30168501, LAP Test Kit............................................. 50 Tests/Kit
7
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
An evaluation of 114 strains of streptococci and related genera
showed 97% correlation with expected values.
Genus
Aerococcus
Leuconostoc
Gemella
Streptococcus
Enterococcus*
Lactococcus
Pediococcus
No. Tested
17
14
13
20
26
13
11
No. Positive
0
0
9
20
22
13
11
% Positive
0
0
69
100
85
100
100
Symbol Legend
REF
Catalog Number
IVD
In Vitro Diagnostic Medical Device
LAB
For Laboratory Use
Consult Instructions for Use (IFU)
Temperature Limitation (Storage Temp.)
LOT
*All E. faecalis and E. faecium, which comprise >95% of the enterococci
isolated from clinical specimens, were LAP positive in this evaluation
(R. Facklam, unpublished data).
Use By (Expiration Date)
EC REP
BIBLIOGRAPHY
1. Colman, G. and L.C. Ball. 1984. J. Appl. Bacteriol. 57:1-14.
2. Fertally, S. and R. Facklam. 1987. J. Clin. Microbiol. 25:1845-1850.
3. Ruoff, K.L., D.R. Kuritzkes, J.S. Wolfson, and M.J. Ferraro.
1988. J. Clin. Microbiol. 26:2064-2068.
4. Facklam, R. and J.A. Elliott. 1995. Clin. Microbiol. Rev. 8:479-495.
5. Facklam, R.R. 2001. Clin. Microbiol. Newsl. 23:1-7
Batch Code (Lot Number)
European Authorized Representative
ATCC® is a registered trademark of American Type Culture Collection.
IFU 30168501, Revised January 18, 2006
12076 Santa Fe Drive, Lenexa, KS 66215, USA
General Information: (800) 255-6730
Technical Service: (800) 447-3641
Order Entry: (800) 447-3635
Local/International Phone: (913) 888-0939
International Fax: (913) 895-4128
Website: www.remel.com
Email: [email protected]
Printed in U.S.A.
DÉTÉRIORATION DU PRODUIT
Ce produit ne doit pas être utilisé (1) si la couleur blanche des
disques a changé, (2) la date de péremption est dépassée ou (3) si
d’autres signes de détérioration sont présents. Pour protéger les
disques de l’humidité, ne retirer du flacon que ceux qui sont
nécessaires pour le test. Reboucher immédiatement le flacon avant
de le remettre en place à une température comprise entre 2 et 8 °C.
Kit de test de LAP
(Français)
INDICATION
Le kit de test de LAP de Remel est un dosage rapide indiqué dans
les procédures qualitatives pour la détection de l’activité de la leucine
aminopeptidase dans les streptocoques et les genres apparentés.
RÉSUMÉ ET EXPLICATION
En 1964, Colman et Ball ont signalé que, à la différence des
streptocoques, les espèces du genre aerococcus ne produisent pas
1
de leucine aminopeptidase (LAP). En 1987, Fertally et Facklam ont
confirmé cette conclusion en examinant les méthodes d’identification
2
des streptocoques. Ils trouvèrent que les couches d’aerococcus
étaient systématiquement négatives à la leucine aminopeptidase,
tandis que les couches des genres enterococcus et streptococcus
produisaient des réactions positives. La LAP, conjointement avec le
PYR et d’autres test conventionnels, représente un paramètre
important dans l’identification des genres aerococcus, leuconostoc,
3,4,5
pediococcus et d’autres genres apparentés.
PRINCIPE
Des disques de papier filtre sont imprégnés de leucine-βnaphthylamide qui sert de substrat pour la détection de la leucine
aminopeptidase. À la suite de l’hydrolyse du substrat par l’enzyme, la
β-naphthylamine produit une coloration rouge si on ajoute du ρdiméthylaminocinnamaldéhyde (révélateur de couleur).
RÉACTIFS ET MATÉRIEL FOURNIS
1. Disques de LAP (1 flacon de 50)
Ingrédient réactif: chlorhydrate de L-leucine-β-naphthylamide
2. Révélateur de couleur (1 bouteille de 4,5 ml)
Ingrédient réactif: 0,01 % ρ-diméthylaminocinnamaldéhyde
3. Bâtonnets applicateurs (1 flacon de 50)
PRÉCAUTIONS
Ce produit exclusivement destiné à un usage diagnostique in vitro ne
doit être utilisé que par des personnes dûment formées. Toutes les
précautions contre les risques microbiologiques doivent être prises et
il est indispensable de bien stériliser les prélèvements, les récipients
et les milieux après usage. Toutes les instructions doivent être lues
attentivement et scrupuleusement respectées.
Attention!
Le révélateur de couleur est toxique et peut être nuisible pour
l’environnement. Nocif en cas d’inhalation, d’ingestion ou de contact
avec la peau ou les yeux. Risque de réduire la fécondité. Dangereux
pour l’enfant à naître. Se reporter aux fiches signalétiques pour les
informations détaillées sur les réactifs chimiques.
REMARQUE: La formation de précipité ou une variation de couleur
de paille à rosé dans le révélateur de couleur est normale et n’a
aucune influence sur la performance du test.
COLLECTE, CONSERVATION ET TRANSPORT DE PRÉLÈVEMENTS
Les prélèvements doivent être recueillis et manipulés conformément
5
aux directives en usage dans la profession. Le test de LAP doit être
exécuté sur des cultures pures ou isolées de coques gram-positives,
négatives à la catalase, de 18 à 72 heures.
MATÉRIEL REQUIS NON FOURNI
(1) Dispositif de stérilisation en boucle, (2) boucle à inoculation,
écouvillon, récipients de collecte (3) incubateurs, systèmes
environnementaux alternatifs, (4) milieux supplémentaires, (5)
organismes de contrôle de qualité, (6) pinces, (7) eau déminéralisée.
Matériel facultatif:
(1) Lame de microscope,
microbiologiques (10 µl).
(2)
micropipettes
boucles
PROTOCOLE
1. En utilisant des pinces, placer le disque sur une lame de
microscope propre ou dans le couvercle d’une plaque de gélose
sans excédent d’humidité.
2. Humecter légèrement le disque avec 5 à 10 µl d’eau
déminéralisée en utilisant une micropipette réglable ou une boucle
à inoculation de 10 µl. NE PAS SURSATURER. Il est également
possible de placer le disque sur la surface de gélose de la
plaque pour la réhydratation.
3. Prendre une « pâte » visible d’une culture de 18 à 72 heures en
utilisant une boucle stérile ou un bâtonnet applicateur en bois.
4. Frotter doucement l’inoculum contre une petite zone du disque
pour le faire pénétrer.
5. Incuber à température ambiante pendant 5 minutes.
6. Ajouter au disque une (1) goutte de révélateur de couleur.
7. Attendre jusqu’à une minute que la couleur change.
INTERPRÉTATION DU TEST
Test Positif - Développement d’une couleur rose à rouge après
une minute d’application du révélateur de couleur
Test Négatif - Pas de changement de couleur ou apparition d’une
légère coloration jaune dans la minute suivant
l’application du révélateur de couleur
4.5.6.
CONSERVATION
Ce produit étant prêt à être utilisé n’a pas besoin d’autre préparation.
Il doit être stocké dans l’obscurité, dans son conditionnement
d’origine et à une température de 2 à 8 °C jusqu’à utilisation. Ne pas
congeler ou surchauffer. Attendre que les produits soient à température
ambiante avant de les utiliser. Ne pas incuber avant l’usage.
ou
VALEURS ATTENDUES
Aerococcus urinae
(+)
Aerococcus viridans
(–)
Enterococcus
(+)
Gemella haemolysans (–)
Gemella morbillorum
(+)
Globicatella
(–)
Helcococcus
Lactococcus
Leuconostoc
Pediococcus
Streptococcus
(–)
(+)
(–)
(+)
(+)
CONTRÔLE DE QUALITÉ
Tous les numéros de lots du kit de test de LAP ont été testés avec
les organismes de contrôle de qualité suivants et reconnus
acceptables. Les tests des organismes de contrôle effectués doivent
satisfaire aux critères établis pour les procédures de contrôle de
qualité en laboratoire. En cas de résultats de contrôle de qualité
aberrants, les données patient ne doivent pas être enregistrées.
CONTRÔLE
Enterococcus faecalis
ATCC® 29212
INCUBATION
Aérobie, 5 min.
à 25 °C
RÉSULTATS
Positif
Aerococcus viridans
ATCC® 11563
Aérobie, 5 min.
à 25 °C
Négatif
LIMITES
1. Un développement de la couleur noté au-delà d’une minute doit
être ignoré.
2. Des réactions faussement négatives peuvent se produire si on
utilise un inoculum inadéquat.
3. Il faut toujours considérer que ce test n’est qu’une partie d’un
processus d’identification plus large. Des tests biochimiques et
sérologiques ultérieurs pourront être nécessaires pour obtenir
une identification définitive.
BIBLIOGRAPHIE
1. Colman, G. et L.C. Ball. 1984. J. Appl. Bacteriol. 57:1-14.
2. Fertally, S. et R. Facklam. 1987. J. Clin. Microbiol. 25:18451850.
3. Ruoff, K.L., D.R. Kuritzkes, J.S. Wolfson et M.J. Ferraro. 1988.
J. Clin. Microbiol. 26:2064-2068.
4. Facklam, R. et J.A. Elliott. 1995. Clin. Microbiol. Rev. 8:479-495.
5. Facklam, R.R. 2001. Clin. Microbiol. Newsl. 23:1-7
6. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.A. Pfaller et R.H.
ème
éd., Vol. 1.
Yolken. 2003. Manuel de microbiologie clinique. 8
ASM, Washington, D.C.
7. Données sur fichier. 1991. Remel Inc., Lenexa, KS.
CONDITIONNEMENT
REF 30168501, Kit de test de LAP................................. 50 kits de test
Légendes des symboles
REF
Numéro de référence
IVD
Dispositif médical de diagnostic in vitro
LAB
Pour l ‘usage de laboratoire
Lire les instructions avant utilisation
(IFU = mode d’emploi)
Limites de température (stockage)
7
CARACTÉRISTIQUES DE PERFORMANCE
Une évaluation de 114 souches de streptocoques et genres
apparentés a montré une corrélation de 97 % avec les valeurs
attendues.
Genre
Aerococcus
Leuconostoc
Gemella
Streptococcus
Enterococcus*
Lactococcus
Pediococcus
Nbre testés
17
14
13
20
26
13
11
Nbre positifs
0
0
9
20
22
13
11
% positif
0
0
69
100
85
100
100
* Toutes les souches d’E. faecalis et d’E. faecium, qui comprennent >95 % des
entérocoques isolés des échantillons cliniques, étaient LAP positives dans
cette évaluation (R. Facklam, données non publiées).
LOT
Code de lot (numéro)
À utiliser avant le (date de péremption)
EC REP
Représentant autorisé pour l'UE
ATCC® est une marque déposée d’American Type Culture Collection.
IFU 30168501, révisé le 2006-01-18
Imprimé aux États-Unis d’Amérique
12076 Santa Fe Drive, Lenexa, KS 66215, États-Unis
Renseignements : (800) 255-6730 Service technique : (800) 447-3641
Service commercial : (800) 447-3635 (États-Unis)
Téléphone (international) : +1 (913) 888-0939 Télécopie (international) : +1 (913) 895-4128
Site Web : www.remel.com
E-mail : [email protected]
LAP Test Kit
PRODUKTSCHÄDEN
Dieses Produkt sollte nicht verwendet werden, falls (1) eine
Farbänderung der weißen Nährböden eingetreten ist, (2) das
Verfallsdatum abgelaufen ist, sowie (3) bei anderen Anzeichen von
Beschädigung. Nährböden müssen vor Feuchtigkeit geschützt
werden, daher nur die für den Test erforderlichen Nährböden aus der
Flasche entnehmen. Verschluss sofort wieder aufsetzen und Flasche
wieder bei 2-8°C lagern.
(Deutsch)
INDIKATIONEN
Das Remel LAP Test Kit ist eine Schnellprobe für die Verwendung
bei der Erkennung von Leucin-Aminopeptidase-Aktivität in
Streptokokken und verwandten Genera.
ZUSAMMENFASSENDE ERKLÄRUNG
Colman und Ball haben 1984 gezeigt, dass die Spezies Aerococcus,
anders als Streptokokken, keine Leucin-Aminopeptidase (LAP)
1
produzieren. Fertally und Facklam bestätigten dieses Ergebnis in
1987, während sie Methoden zum Nachweis von Streptokokken
2
Sie
haben
festgestellt,
dass
Aerococcusuntersuchten.
Stammkulturen konsistent negativ für Leucin-Aminopeptidase sind,
während Stammkulturen von Enterococcus und Streptococcus
positive Reaktionen produzieren. LAP ist, zusammen mit PYR und
anderen konventionellen Tests, ein wichtiger Parameter beim Nachweis
von Aerococcus, Leuconostoc, Pediococcus und verwandten
3,4,5
Genera.
TESTPRINZIP
Nährboden-Filterpapier wurde mit Leucin-β-Naphthylamid imprägniert,
das als Substrat für den Nachweis für Leucin-Aminopeptidase dient.
Im Anschluss einer Hydrolyse des Substrats durch das Enzym
produzierte das daraus resultierende β-Naphthylamin bei der Zugabe
von ρ-Dimethylaminocinnamaldehyd (Farbentwickler) eine rote Farbe.
REAGENZIEN UND IM LIEFERUMFANG ENTHALTENE
MATERIALIEN
1. LAP Nährböden (1 Flasche à 50)
Reaktiver Inhaltstoff: L-Leucin-β-Naphthylamid-Hydrochlorid
2. Farbentwickler (1 Flasche, 4,5 ml)
Reaktiver Inhaltstoff: 0.01% ρ-Dimethylaminocinnamaldehyd
3. Abstrichtupfer (1 Flasche à 50)
VORSICHTSMASSNAHMEN
Dieses Produkt ist für die Verwendung in der In-Vitro-Diagnostik
bestimmt und sollte nur von entsprechend geschulten Personen
verwendet werden. Es sind Vorsichtsmaßnahmen gegen die von
mikrobiologischen Materialien ausgehenden Gefahren zu ergreifen,
indem Proben, Container und Medien nach Gebrauch
ordnungsgemäß sterilisiert werden. Die Gebrauchsanweisung muss
sorgfältig gelesen und befolgt werden.
Achtung!
Der Farbentwickler ist toxisch und kann Umweltschäden verursachen.
Gesundheitsschädigend bei Inhalation, bei Kontakt mit Haut oder
Augen oder bei Verschlucken. Kann die Fruchtbarkeit beeinträchtigen
oder ungeborene Säuglinge schädigen. Für genaue Angaben zur
chemischen Zusammensetzung der Reagenzien siehe das Datenblatt
für Materialsicherheit.
LAGERUNG
Das Produkt ist gebrauchsfertig, keine weitere Vorbereitung
erforderlich. Dieses Produkt bis zur Verwendung in seiner
Originalverpackung im Dunkeln bei 2-8°C aufbewahren. Nicht
einfrieren oder überhitzen. Vor Verwendung auf Zimmertemperatur
erwärmen lassen. Vor der Verwendung nicht inkubieren.
HINWEIS: Die Bildung von Fällungen oder Farbvariation von
strohfarben zu rosa im Farbentwickler ist normal und wirkt sich nicht
auf die Testergebnisse aus.
PROBENENTNAHME, LAGERUNG UND TRANSPORT
Die Proben sollten entsprechend der folgenden Richtlinien
5
entnommen und gehandhabt werden. Der LAP-Test sollte mit reinen
oder isolierten Testkulturen von Katalase-negativ, grampositiven
Kokken, die 18-72 Stunden alt sind, ausgeführt werden.
ERFORDERLICHE MATERIALIEN, DIE NICHT IM LIEFERUMFANG
ENTHALTEN SIND
(1)
Gerät
zur
Sterilisierung
der
Inokulationsschlinge,
(2) Inokulationsschlinge,
Abstrichtupfer,
Sammelbehälter,
(3) Inkubatoren, alternative Umweltsysteme, (4) zusätzliche
Medien, (5) Organismen zur Qualitätskontrolle, (6) Pinzetten,
(7) Deionat.
Optionale Materialien:
(1) Mikroskop-Objektträger, (2) Mikropipette oder mikrobiologische
Schlinge (10 µl).
VERFAHREN
1. Mit Hilfe der Pinzetten den Nährboden auf einen sauberen
Mikroskop-Objektträger oder auf den Deckel einer Agarplatte
streichen, der frei von Feuchtigkeit ist.
2. Den Nährboden mit Hilfe einer anpassbaren 5-10 µ Mikropipette
oder
einer
10-µl
Inokulationsschlinge
leicht
mig
demineralsiertem Wasser befeuchten. NICHT ÜBERSÄTTIGEN.
Der Nährboden kann zur Rehydration auf die Agarplatte des
Mediums platziert werden.
3. Mit Hilfe einer sterilen Schlinge oder eines hölzernen
Abstrichtupfers einer 18-72 Stunden alten Kultur etwas sichtbare
"Masse" entnehmen.
4. Das Inokulum vorsichtig auf einen kleinen Bereich des
Nährbodens reiben.
5. Bei Zimmertemperatur 5 Minuten inkubieren.
6. Je 1 Tropfen Farbentwickler auf den Nährboden geben.
7. Mindestens 1 Minute Farbentwicklung abwarten.
INTERPRETATION DES TESTS
Positiv-Test - Rosa bis rote Farbentwicklung innerhalb einer Minute
nach Zugabe des Farbentwicklers
Negativ-Test - Keine Farbänderung oder eine leichte gelbe
Farbentwicklung innerhalb einer Minute nach Zugabe
des Farbentwicklers
4,5,6
ZU ERWARTENDE WERTE
Aerococcus urinae
(+)
Aerococcus viridans
(–)
Enterococcus
(+)
Gemella haemolysans
(–)
Gemella morbillorum
(+)
Globicatella
(–)
Helcococcus
Lactococcus
Leuconostoc
Pediococcus
Streptococcus
(–)
(+)
(–)
(+)
(+)
QUALITÄTSKONTROLLE
Alle Chargen-Nummern des LAP Test Kit wurden unter Verwendung
der nachfolgend aufgeführten Organismen zur Qualitätskontrolle
getestet und als tauglich befunden.
Das Testen von
Kontrollorganismen
sollte
nach
den
üblichen
Qualitätskontrollverfahren für Labore durchgeführt werden. Falls
anomale Qualitätskontrollresultate festzustellen sind, sollten die
Patientenresultate nicht in den Bericht aufgenommen werden.
KONTROLLE
Enterococcus faecalis
ATCC® 29212
INKUBATION
Aerob, 5 Min.
@ 25°C
ERGEBNISSE
Positiv
Aerococcus viridans
ATCC® 11563
Aerob, 5 Min.
@ 25°C
Negativ
LITERATURVERWEISE
1. Colman, G. and L.C. Ball. 1984. J. Appl. Bacteriol. 57:1-14.
2. Fertally, S. and R. Facklam. 1987. J. Clin. Microbiol. 25:18451850.
3. Ruoff, K.L., D.R. Kuritzkes, J.S. Wolfson, and M.J. Ferraro.
1988. J. Clin. Microbiol. 26:2064-2068.
4. Facklam, R. and J.A. Elliott. 1995. Clin. Microbiol. Rev. 8:479495.
5. Facklam, R.R. 2001. Clin. Microbiol. Newsl. 23:1-7
6. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.A. Pfaller, and R.H.
th
Yolken. 2003. Manual of Clinical Microbiology. 8 ed., Vol. 1.
ASM, Washington, D.C.
7. Data on file. 1991. Remel Inc., Lenexa, KS.
PACKUNGSINHALT
REF 30168501, LAP Test Kit............................................. 50 Tests/Kit
EINSCHRÄNKUNGEN
1. Eine Farbentwicklung nach einer Minute sollte ignoriert werden.
2. Bei Verwendung eines inadäquaten Inokulums können falsch
negative Reaktionen auftreten.
3. Es sollte betont werden, dass dieser Test nur ein Teil des
gesamten Nachweisverfahrens ist. Für einen definitiven
Nachweis können weitere biochemische und serologische Tests
erforderlich sein.
Verwendete Symbole
REF
Katalog-Nr.
IVD
Medizinisches Produkt für die In-Vitro-Diagnostik
LAB
Für Laborgebrauch
Gebrauchsanweisung beachten
7
LEISTUNGSMERKMALE
Eine Auswertung von 114 Streptokokken-Stämmen und verwandten
Genera wiesen eine 97% Korrelation mit den erwarteten Werten auf.
Genus
Aerococcus
Leuconostoc
Gemella
Streptococcus
Enterococcus*
Lactococcus
Pediococcus
Anzahl getestet
17
14
13
20
26
13
11
Anzahl positiv
0
0
9
20
22
13
11
% Positiv
0
0
69
100
85
100
100
*Alle E. faecalis und E. faecium, aus denen >95% der aus den klinischen
Proben isolierten Enterococci bestehen, waren LAP-positiv in dieser
Auswertung (R. Facklam, unveröffentlichte Daten).
Temperatureinschränkungen (Lagertemp.)
LOT
Chargenbezeichnung (Chargen-Nr.)
Zu verwenden bis (Verfallsdatum)
EC REP
Autorisierte Vertretung für U-Länder
ATCC® ist ein eingetragenes Warenzeichen von American Type Culture Collection.
IFU 30168501, Revidierte Fassung vom 2006-01-18
Printed in U.S.A.
12076 Santa Fe Drive, Lenexa, KS 66215, USA
Allgemeine Auskünfte: (800) 255-6730
Technische Unterstützung: (800) 447-3641
Bestellungen: (800) 447-3635
Telefon lokal/international: (913) 888-0939
Fax international: (913) 895-4128
Website: www.remel.com
E-Mail: [email protected]
DETERIORAMENTO DEL PRODOTTO
Non utilizzare il prodotto se (1) il colore bianco dei dischi è variato, (2)
è stata superata la data di scadenza del prodotto o (3) sono presenti
altri segni di deterioramento.
Proteggere i dischi dall’umidità,
rimuovendo dalla fiala solo quelli necessari per l’esecuzione del test.
Rimettere subito il tappo e porre immediatamente la fiala a 2-8°C.
LAP Test Kit
(Italiano)
USO PREVISTO
LAP Test Kit di Remel è un saggio rapido consigliato per l’uso nelle
procedure qualitative per la determinazione dell’attività della leucina
amminopeptidasi negli streptococchi e nei generi correlati.
DESCRIZIONE DEL PRODOTTO
Nel 1984, Colman e Ball hanno riferito che, diversamente dagli
streptococchi, la specie Aerococcus non produceva la leucina
1
Fertally e Facklam hanno confermato
amminopeptidasi (LAP).
questa scoperta nel 1987 durante l’indagine sui metodi di
2
Essi hanno trovato ceppi di
identificazione degli streptococchi.
Aerococcus ripetutamente negativi alla leucina amminopeptidasi,
mentre i ceppi di Enterococcus e Streptococcus hanno fornito reazioni
positive. LAP, unitamente a PYR e ad altri test convenzionali,
rappresenta un parametro importante nell’identificazione di
3,4,5
Aerococcus, Leuconostoc, Pediococcus e dei generi correlati.
PRINCIPIO
I dischi di carta filtro sono impregnati di leucina-β-naftilammide, che
serve come substrato per la determinazione dell’amminopeptidasi
della leucina. Successivamente all’idrolisi del substrato da parte
dell’enzima, la β-naftilammina ottenuta produce un colore rosso dopo
l’aggiunta di ρ-dimetilamminocinnamaldeide (sviluppatore del colore).
REAGENTI E MATERIALI FORNITI
1. Dischi LAP (1 fiala da 50) Ingrediente reattivo:
Idrocloruro di L-leucina-β-naftilammide
2. Sviluppatore del colore (1 flacone, 4,5 ml) Ingrediente reattivo:
0.01% ρ-dimetilamminocinnamaldeide 0,01%
3. Bastoncini applicatori (1 fiala da 50)
PRECAUZIONI
Il prodotto è indicato esclusivamente per Uso diagnostico in vitro e
deve essere utilizzato solo da personale competente ed esperto. Si
raccomanda di prendere le dovute precauzioni contro eventuali rischi
microbiologici sterilizzando opportunamente dopo l'uso campioni,
contenitori e strumenti.
Leggere con attenzione le istruzioni
contenute in questo documento e seguirle scrupolosamente.
Attenzione!
Lo sviluppatore del colore è tossico e può provocare danni
ambientali. È nocivo per inalazione, contatto con la pelle o con gli
occhi e per ingestione. Può ridurre la fertilità e danneggiare i bambini
non ancora nati. Consultare la Scheda di Sicurezza del prodotto per
informazioni dettagliate sui reagenti chimici.
CONDIZIONI DI CONSERVAZIONE
Questo prodotto è pronto per l’uso e non necessita di alcuna
preparazione. È necessario conservare il prodotto in un luogo buio
nel proprio contenitore originale a 2-8°C fino al momento dell’uso.
Non congelare o surriscaldare. Il prodotto deve essere portato a
temperatura ambiente prima dell'uso. Non incubare prima dell’uso.
NOTA: La formazione di precipitato o la variazione del colore da
paglierino a rosa nello sviluppatore del colore è comune e non
influisce sulle prestazioni del test.
RACCOLTA DEI CAMPIONI, CONSERVAZIONE E TRASPORTO
Prelevare e trattare i campioni seguendo le linee guida
5
raccomandate. È necessario eseguire il LAP test su colture pure o
isolate di cocci gram-positivi, catalasi-negativi, che abbiano un’età di
18-72 ore.
MATERIALE NECESSARIO MA NON FORNITO
(1) Dispositivo di sterilizzazione per anse, (2) ansa per inoculo,
tampone, contenitori per la raccolta, (3) incubatori o sistemi
ambientali alternativi, (4) terreni di coltura supplementari,
(5) microrganismi per il controllo qualità, (6) pinze, (7) acqua
demineralizzata.
Materiali opzionali:
(1) Vetrino per microscopio, (2) micropipetta o ansa microbiologica
(10 µl).
PROCEDIMENTO
1. Con le pinze, posizionare il disco su un vetrino pulito per
microscopio o sul coperchio di una piastra di agar priva di
umidità in eccesso.
2. Inumidire leggermente il disco con 5-10 µl di acqua
demineralizzata usando una micropipetta regolabile o un’ansa per
inoculo da 10 µl . NON SOVRASATURARE. In alternativa, è
possibile posizionare il disco sulla superficie dell’agar del
terreno in piastra per la reidratazione.
3. Raccogliere una “pasta” visibile da una coltura di 18-72 ore con
un’ansa sterile o un bastoncino applicatore di legno.
4. Strisciare delicatamente l’inoculo in una piccola zona del disco.
5. Incubarle a temperatura ambiente per 5 minuti.
6. Aggiungere una (1) goccia di sviluppatore di colore al disco.
7. Attendere fino a un minuto per una modifica del colore.
INTERPRETAZIONE DEL TEST
Test Positivo Sviluppo di colore da rosa a rosso entro un minuto
dall’applicazione dello sviluppatore di colore
Test Negativo -
Nessuna modifica del colore o sviluppo di un
colore leggermente giallo entro un minuto
dall’applicazione dello sviluppatore di colore
4,5,6
RISULTATI ATTESI
Aerococcus urinae
Aerococcus viridans
Enterococcus
Gemella haemolysans
Gemella morbillorum
Globicatella
(+)
(–)
(+)
(–)
(+)
(–)
Helcococcus
Lactococcus
Leuconostoc
Pediococcus
Streptococcus
(–)
(+)
(–)
(+)
(+)
CONTROLLO QUALITÀ
Ogni lotto di LAP Test Kit è stato sottoposto a controllo qualità con i
microrganismi indicati di seguito ed è risultato soddisfacente. I test di
controllo qualità devono essere eseguiti conformemente alle
procedure di controllo qualità definite dal laboratorio. Se i test di
controllo qualità forniscono risultati aberranti, i risultati ottenuti con i
campioni in esame non devono essere refertati.
CAMPIONE DI CONTROLLO
Enterococcus faecalis
ATCC® 29212
INCUBAZIONE
Aerobica, 5 min.
@ 25°C
RISULTATI
Positiva
Aerococcus viridans
ATCC® 11563
Aerobica, 5 min.
a 25°C
Negativa
LIMITAZIONI
1. Non si dovrebbe tenere conto dello sviluppo di colore osservato
dopo un minuto.
2. È possibile che si verifichino reazioni false negative, se viene usato
un inoculo inadeguato.
3. È necessario evidenziare che questo test fa parte solo dello
schema complessivo per l'identificazione. È possibile che sia
necessario un ulteriore test biochimico e sierologico per
l’identificazione definitiva.
BIBLIOGRAFIA
1. Colman, G. and L.C. Ball. 1984. J. Appl. Bacteriol. 57:1-14.
2. Fertally, S. and R. Facklam. 1987. J. Clin. Microbiol. 25:1845-1850.
3. Ruoff, K.L., D.R. Kuritzkes, J.S. Wolfson, and M.J. Ferraro.
1988. J. Clin. Microbiol. 26:2064-2068.
4. Facklam, R. and J.A. Elliott. 1995. Clin. Microbiol. Rev. 8:479-495.
5. Facklam, R.R. 2001. Clin. Microbiol. Newsl. 23:1-7
6. Murray, P.R., E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H.
th
Yolken. 2003. Manual of Clinical Microbiology. 8 ed., Vol. 1.
ASM, Washington, D.C.
7. Data on file. 1991. Remel Inc., Lenexa, KS.
CONFEZIONE
REF 30168501, LAP Test Kit.......................................... Kit per 50 test
Legenda dei simboli
REF
Codice numero
IVD
Dispositivo per uso diagnostico in vitro
LAB
Per uso del laboratorio
Consultare le istruzioni per l'uso (IFU)
Limitazioni per temperatura (Temp. di conservazione)
7
CARATTERISTICHE DEL METODO
Una valutazione di 114 ceppi di streptococco e dei generi correlati ha
mostrato una correlazione del 97% con i risultati attesi.
Genere
Aerococcus
Leuconostoc
Gemella
Streptococcus
Enterococcus*
Lactococcus
Pediococcus
N. sottoposti a test
17
14
13
20
26
13
11
N. positivi
0
0
9
20
22
13
11
% positiva
0
0
69
100
85
100
100
*Tutti gli E. faecalis ed E. faecium, che compongono >95% degli enterococchi
isolati da campioni clinici, erano positivi al LAP in questa valutazione (R.
Facklam, dati non pubblicati).
LOT
Codice batch (Numero Lotto)
Da utilizzare entro (data di scadenza)
EC REP Rappresentante autorizzato per l'Europa
ATCC® è un marchio registrato di American Type Culture Collection.
IFU 30168501, Data ultima revisione: 2006-01-18
Stampato in U.S.A.
12076 Santa Fe Drive, Lenexa, KS 66215, USA
Informazioni generali: (800) 255-6730
Assistenza tecnica: (800) 447-3641
Ufficio vendite: (800) 447-3635
Tel. locali/internazionali: (913) 888-0939
Fax internazionale: (913) 895-4128
Sito web: www.remel.com
E-Mail: [email protected]
DETERIORO DEL PRODUCTO
Este producto no se debe usar si (1) el color de los discos ha cambiado
y ya no es blanco, (2) se ha sobrepasado la fecha de caducidad, o (3)
hay otros signos de deterioro. Proteger los discos de la humedad
extrayendo del vial sólo los discos necesarios para la prueba. Volver a
poner rápidamente el tapón y guardar el vial a 2-8 °C.
Kit de pruebas LAP
(Español)
USO PREVISTO
El kit de pruebas LAP de Remel es un ensayo rápido recomendado
para uso en procedimientos cualitativos para la detección de la
actividad de leucina aminopeptidasa en estreptococos y otros
géneros relacionados.
RESUMEN Y EXPLICACIÓN
En 1984, Colman y Ball observaron que, a diferencia de los
estreptococos, las especies de Aerococcus no producían leucina
1
aminopeptidasa (LAP) . Fertally y Facklam confirmaron este
descubrimiento en 1987 al investigar métodos para la identificación
2
de estreptococos . Descubrieron que las cepas de Aerococcus daban
constantemente negativo para leucina aminopeptidasa, mientras que
las cepas de Enterococcus y Streptococcus daban reacciones
positivas. LAP, junto con PYR y otras pruebas convencionales, es un
parámetro importante en la identificación de Aerococcus, Leuconostoc,
3,4,5
Pediococcus, y géneros relacionados .
PRINCIPIO
Los discos de papel de filtro se impregnan con leucina-β-naftilamida
que sirve como sustrato para la detección de leucina
aminopeptidasa. Una vez que la enzima hidroliza el sustrato, la βnaftilamina resultante produce un color rojo al añadírsele
ρ-dimetilaminocinamaldehído (reactivo de desarrollo de color).
REACTIVOS Y MATERIALES SUMINISTRADOS
1. Discos LAP (1 vial de 50)
Ingrediente del reactivo: Hidrocloruro de L-leucina-β-naftilamida
2. Reactivo de desarrollo de color (1 frasco de 4,5 ml)
Ingrediente del reactivo: 0,01% ρ-dimetilaminocinamaldehído
3. Varillas aplicadoras (1 vial de 50)
PRECAUCIONES
Este producto es para uso diagnóstico in vitro y debe ser utilizado por
personal con la formación adecuada. Se tomarán precauciones
frente a los riesgos microbiológicos esterilizando correctamente las
muestras, envases y medios después de su uso. Se deben leer y
seguir atentamente las instrucciones.
¡Precaución!
El reactivo de desarrollo de color es tóxico y puede provocar daños al
medio ambiente. Peligroso por inhalación, por contacto con la piel o
los ojos, o por ingestión. Puede alterar la fertilidad o provocar daños
al feto. Encontrará información más detallada en la Hoja de datos de
seguridad sobre productos químicos.
ALMACENAMIENTO
Este producto se presenta listo para su uso y no requiere más
preparación. Se debe almacenar en su envase original, en la
oscuridad, a 2-8 °C hasta el momento de su uso. No congelar ni
sobrecalentar. Dejar estabilizar el producto a temperatura ambiente
antes de su uso. No incubar antes de su uso.
NOTA: Es frecuente que se forme un precipitado en el reactivo de
desarrollo de color, o que su color cambie de pajizo a rosa, lo que no
afectará al resultado de la prueba.
OBTENCIÓN, ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE DE
MUESTRAS
Las muestras se deben obtener y manipular siguiendo las normas
5
recomendadas . La prueba LAP debe realizarse en cultivos puros o
aislados de cocos gram-positivos y catalasa-negativos que tengan de
18 a 72 horas.
MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS
(1) Asa para esterilización, (2) asa de inoculación, torunda y envases
para recogidas, (3) incubadoras, sistemas ambientales alternativos, (4)
medio suplementario, (5) microorganismos para el control de calidad,
(6) pinzas y (7) agua desmineralizada.
Materiales opcionales:
(1) Portaobjetos, (2) micropipetas o asa microbiológica (10 µl).
PROCEDIMIENTO
1. Con las pinzas, poner el disco en un portaobjetos limpio o en la
tapa de una placa de agar que no tenga una humedad excesiva.
2. Humedecer ligeramente el disco con 5-10 µl de agua
desmineralizada usando una micropipeta ajustable o un asa de
inoculación de 10 µl. NO SOBRESATURAR. Como alternativa,
el disco se puede colocar en la superficie de agar del medio
usado en la placa para rehidratación.
3. Coger la “pasta” visible de un cultivo de 18-72 horas usando un
asa estéril o una varilla aplicadora de madera.
4. Frotar suavemente el inóculo en una pequeña zona del disco.
5. Incubar a temperatura ambiente durante 5 minutos.
6. Añadir 1 gota de reactivo de desarrollo de color al disco.
7. Dejar hasta un minuto para el cambio de color.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Prueba Positiva - Desarrollo de un color de rosa a rojo un minuto
después de aplicar el reactivo de desarrollo de
color
Prueba Negativa - Sin cambio de color o desarrollo de un color
crema o amarillo un minuto después de aplicar el
reactivo de desarrollo de color
4,5,6
VALORES ESPERADOS
Aerococcus urinae
(+)
Aerococcus viridans
(–)
Enterococcus
(+)
Gemella haemolysans (–)
Gemella morbillorum
(+)
Globicatella
(–)
Helcococcus
Lactococcus
Leuconostoc
Pediococcus
Streptococcus
(–)
(+)
(–)
(+)
(+)
CONTROL DE CALIDAD
Todos los números de lote de la prueba LAP se han estudiado
usando los siguientes microorganismos de control de calidad y los
resultados son aceptables. El estudio de los microorganismos de
control se debe realizar de acuerdo con los procedimientos de control
de calidad establecidos en el laboratorio. Si se observan resultados
anómalos en el control de calidad, no se informará de los resultados
de ese paciente.
CONTROL
Enterococcus faecalis
ATCC® 29212
INCUBACIÓN
Aerobiosis, 5
minutos a 25°C
RESULTADOS
Positivo
Aerococcus viridans
ATCC® 11563
Aerobiosis, 5
minutos a 25°C
Negativo
LIMITACIONES
1. El desarrollo del color tras un minuto carece de importancia.
2. El uso de un inóculo inadecuado puede provocar reacciones falsas
negativas.
3. Es importante tener en cuenta que esta prueba es sólo una parte
del proceso general de identificación. Para la identificación
definitiva puede ser necesaria una identificación bioquímica y
serológica más detallada.
7
CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO
Una evaluación de 114 cepas de estreptococos y sus géneros
relacionados, dio como resultado una correlación del 97% con los
valores esperados.
BIBLIOGRAFÍA
1. Colman, G. and L.C. Ball. 1984. J. Appl. Bacteriol. 57:1-14.
2. Fertally, S. and R. Facklam. 1987. J. Clin. Microbiol. 25:1845-1850.
3. Ruoff, K.L., D.R. Kuritzkes, J.S. Wolfson, and M.J. Ferraro.
1988. J. Clin. Microbiol. 26:2064-2068.
4. Facklam, R. and J.A. Elliott. 1995. Clin. Microbiol. Rev. 8:479-495.
5. Facklam, R.R. 2001. Clin. Microbiol. Newsl. 23:1-7
6. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.A. Pfaller, and R.H.
th
Yolken. 2003. Manual of Clinical Microbiology. 8 ed., Vol. 1.
ASM, Washington, D.C.
7. Información en archivo. 1991. Remel Inc., Lenexa, KS, EE.UU.
PRESENTACIÓN
REF 30168501, Kit de pruebas LAP...............................50 pruebas/kit
Símbolos
REF
Número de catálogo
IVD
Dispositivo médico para diagnóstico in vitro
LAB
Para el uso del laboratorio
Consultar las instrucciones de uso
Límite de temperatura (Temp. de almacenamiento)
LOT
Fecha de caducidad
EC REP
Género
Aerococcus
Leuconostoc
Gemella
Streptococcus
Enterococcus*
Lactococcus
Pediococcus
Nº de pruebas
17
14
13
20
26
13
11
Positivos
0
0
9
20
22
13
11
% de positivos
0
0
69
100
85
100
100
*En esta evaluación, todos los E. faecalis y E. faecium, que componen >95%
de los enterococos aislados de las muestras clínicas, dieron positivo en la
prueba LAP (R. Facklam, datos no publicados).
Código de lote (Número de lote)
Representante autorizado en Europa
ATCC® es una marca registrada de American Type Culture Collection.
IFU 30168501, Revisado el 2006-01-18
12076 Santa Fe Drive, Lenexa, KS 66215, EE.UU.
Información general: (800) 255-6730
Servicio técnico: (800) 447-3641
Pedidos: (800) 447-3635
Teléfono local/Internacional: (913) 888-0939
Fax internacional: (913) 895-4128
Dirección en Internet: www.remel.com
Correo electrónico: [email protected]
Impreso en los EE.UU.