Protein Block, Serum-Free Prodotto pronto all`uso Codice

Protein Block, Serum-Free
Prodotto pronto all'uso
Codice X0909
Uso previsto
Per uso diagnostico in vitro.
Questa soluzione bloccante è intesa per essere usata con i kit di colorazione immunoenzimatica come
LSAB™2, LSAB™+, i sistemi EnVision™ e i sistemi EnVision™+.
Cenni introduttivi
Questo prodotto inibisce la colorazione aspecifica nel corso della rilevazione immunoistochimica (IHC) degli
antigeni. Può essere particolarmente utile se impiegato nella colorazione del tessuto connettivo e del tessuto
epiteliale, delle cellule adipose o di altri tipi di tessuti in cui la presenza di fondo è tendenzialmente elevata.
Fare riferimento alle istruzioni generali per la colorazione immunoistochimica di Dako o alle istruzioni del
sistema di rilevazione in uso relative alle procedure IHC per: 1) principio della procedura, 2) materiali necessari
ma non forniti, 3) conservazione, 4) preparazione dei campioni, 5) procedura di colorazione, 6) controllo della
qualità, 7) risoluzione dei problemi, 8) interpretazione della colorazione, 9) limiti generali.
Reagente fornito
Protein Block, Serum-Free: caseina 0,25% in soluzione PBS, con proteina stabilizzante e sodio azide 0,015 mol/L.
Precauzioni
1.
Per uso professionale.
2.
Questo prodotto contiene sodio azide (NaN3), una sostanza chimica fortemente tossica in forma pura. Alle
concentrazioni indicate, il prodotto non è classificato come pericoloso, ma la sodio azide potrebbe reagire
con le tubature in piombo e rame formando azidi metalliche altamente esplosive. Durante lo smaltimento,
sciacquare le tubature con abbondante acqua per prevenire l'eventuale accumulo di azide metallica.
3.
Adottare le normali procedure previste per il trattamento dei prodotti di origine biologica.
4.
Indossare dispositivi di protezione personale adeguati, per evitare il contatto con gli occhi e la pelle.
5.
Smaltire la soluzione inutilizzata nel rispetto delle disposizioni locali, regionali e nazionali vigenti in materia.
6.
Per ulteriori informazioni, fare riferimento alla scheda di sicurezza dei materiali.
Conservazione
Conservare a 2-8 °C. Non congelare. Non utilizzare dopo la data di scadenza stampata sulla fiala. Se i reagenti
sono conservati in condizioni diverse da quelle specificate, le loro condizioni dovranno essere verificate
dall'utente. Non sono stati osservati segni evidenti che suggeriscano l'instabilità di questo prodotto; pertanto, è
opportuno analizzare un controllo positivo e un controllo negativo insieme ai campioni dei pazienti. Qualora si
ottenga una colorazione imprevista, che non sia cioè giustificata da un cambiamento delle procedure di laboratorio
ma sia dovuta a un probabile problema del prodotto, contattare il servizio di assistenza tecnica Dako.
Caratteristiche
prestazionali
Nel corso della dimostrazione degli antigeni del tessuto mediante tecniche immunoistochimiche (IHC), la
valutazione della colorazione specifica è spesso ostacolata dalla presenza di una colorazione non specifica
(fondo), che può portare a una interpretazione erronea o a risultati falsi positivi.
Di norma, una colorazione di fondo diffusa è causata da interazioni idrofobe o ioniche tra l'anticorpo primario o
i reagenti secondari e i componenti del tessuto diversi dall'antigene bersaglio.1,2
Tradizionalmente le interazioni tra le immunoglobuline di collegamento e le proteine del tessuto venivano
ridotte applicando un siero bloccante non immune prima dell'incubazione con l'anticorpo primario.1,2 Era
tuttavia necessario che il siero bloccante avesse caratteristiche identiche a quelle dell'anticorpo primario e a
quelle dell'anticorpo di collegamento, così da prevenire una reattività crociata.1,2
Il Protein Block Serum-Free, invece, non deve avere le stesse caratteristiche degli anticorpi primari e di
collegamento, poiché è compatibile con qualsiasi sistema reagente secondario, annullando così la possibilità di
reattività crociate non previste, e in aggiunta è totalmente privo di materiali potenzialmente infetti.
Il Protein Block Serum-Free è a base di caseina, una proteina idrofila capace di ridurre i legami aspecifici
dell'anticorpo primario e dei reagenti secondari nelle procedure IHC e negli immunodosaggi enzimatici.2
Campioni
Il prodotto può essere applicato a sezioni di tessuto fissate in formalina e incluse in paraffina, oltre che a
sezioni di tessuto congelate e strisci di sangue.
Procedura
Le sezioni di tessuto vengono incubate con la soluzione bloccante per 5-10 minuti a temperatura ambiente. La
soluzione bloccante viene quindi rimossa, il vetrino viene asciugato intorno alla sezione di tessuto e si procede
all'applicazione dell'anticorpo primario.
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Limitazioni
La colorazione del tessuto dipende dal modo in cui il tessuto viene pretrattato. I fissativi che contengono
aldeide, ad esempio la formalina e la glutaraldeide, spesso accentuano la colorazione di fondo.1 La fissazione,
il congelamento, lo scongelamento, il lavaggio, l'essiccazione, il riscaldamento, il sezionamento eseguiti in
modo scorretto possono produrre artefatti,
intrappolare l'anticorpo o generare risultati falsi negativi. Una colorazione falsa positiva può anche essere
riconducibile alle seguenti cause: reattività crociata di altri reagenti della colorazione IHC, fosfatasi alcalina
endogena, perossidasi endogena, pseudoperossidasi, attività endogena di legame all'avidina e reazione
aspecifica con cellule necrotiche o degenerate.
Bibliografia
1.
Key M (ed). Education Guide: Immunohistochemical Staining Methods. 4th ed. Dako 2006.
2.
Ramos-Vara JA. Review Article: Technical aspects of Immunohistochemistry.
Vet Pathol 2005;42:405-426.
Edizione 09/09
(121976-001)
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