ii sistema di diagnostica fecale per la parassitologia

G es el ls c h af t f ür Me d i z i n- un d L a bor t ec h n ik m bH
II SISTEMA DI DIAGNOSTICA FECALE PER
LA PARASSITOLOGIA
Il sistema di trasporto e di trasformazione Biosepar, concepito per la diagnostica parassitologica,
stato sviluppato dal gruppo di ricerca parassitologica all'Istituto per 1'Igiene e la Microbiologia
Medicale, Max von Pettenkofer, dell'Universitä di Monaco. Applicabile in condizioni
scientifiche e nel campo della diagnostica pratica, il concetto risponde alle piü alte esigenze e si
trova in conformitä alle raccomandazioni degli uffici d'igiene d'Europa e degli Stati Uniti, dei
primari rappresentanti della scienza parassitologica, dei medici di laboratorio, microbiologisti ed
epidemiologisti specializzati nel campo dell'infezione. Permette la diagnostica di: uova di vermi,
larve, protozoari (cisti et formazioni vegetative) provenenti dalle feci. Permette pure la
conservazione di parassiti provenienti di liquidi fisischi (p.es. del liquidi duodenali et dell'urina)
e la loro trasformazione seguente per la diagnostica, senza rischio di proliferazione et
decomposizione batteriche, nello stesso tempo conservando pienamente la morfologia dell'agente
patogeno, necessaria alla diagnostica. Quindi il sistema Biosepar s'adatta perfettamente al
controllo di qualitä. E' applicabile alla medicina umana e veterinaria ugualmente.
Abbiamo insistito sull'aspetto di razionalizzazione e di standardizzazione, essendo la condizione
di un modo di lavoro efficiente dal punto di vista tanto economico quanto diagnostico. I1
concetto del sistema permette l'uso di ogni strumento di laboratorio ed ogni mezzo ausiliario
correnti in assenza di tali mezzi possibile d'impiegare il sistema stesso per eseguire tutti gli esami
necessari, con gradazioni cronologiche. Questo punto e particolarmente importante per quanto
riguarda l'impiego del sistema nel terzo mondo, in progetti di medicina umana e veterinaria ed
investigazioni scientifiche / epidemiologiche.
Fondato sul metodo M.I.F.C, il concetto Biosepar anche attuabile usando il 'metodo di
flotazione'.
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BIOSEPAR SISTEMA DI TRASPORTO ET DI
TRASFORMAZIONE DELLE FECI PER ESAMI
PARASSITOLOGICI
Il nuovo sistema di Biosepar offre numerosi vantaggi, favorendo la Vs. sicurezza ed una
diagnostica moderna, cioe
• condizioni igieniche ottimali, protezzione dalle infezioni e contaminazioni in tutte le fasi
di lavoro, incluso il trasporto. Condizioni sterili poco dopo la campionatura (HIV, virus
d'epatite, salmonelle, shigelle, amebi, ecc.)
• indipendenza cronologica durante il trasporto e la trasformazione
• risparmio sullo spazio, sul materiale e sul tempo, cioe efficienza e con cio´ risparmio
sulle spese
• materiale diagnostico di alta qualitä dal momento del campionamento, senza
refrigerazione ne calorificazione, producendo risultati ottimali ed un guadagno
massimale; impiego al controllo di qualitä.
• maneggio facile per i pazienti ed il personale di laboratorio
• assenza di odori
• grazie al modo di lavoro chiuso, nessun importunatamento del lavoro con solventi
organici
• spese d'invio postale modiche: due tubetti da feci s'adattano facilmente ad un contenitore
di trasporto per un tubetto da sangue. I1 sistema inoltre conforme ai nuovi regolarmenti
postali (Europa).
Elementi del sistema diagnostico Biosepar per la parassitologia Il sistema Biosepar consiste in un
tubetto d'invio (1) riempito di un medio di trasporto et di conservazione. In caso di bisogno, un
cucchiaio di legno (6) oppure una pipetta di plastica da uso unico, la cosiddetta pipetta Pasteur
(8), possono essere impiegati. L'elemento 2 serve alla trasformazione al laboratorio e contiene il
tubetto di centrifugazione con un elemento intermedio avvitato integrando un filtro. I1 coperchio
parapolvere sull'elemento 2 servendo alla pulizia del filtro puo esser tolto soltanto poco prima
dell'uso.
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Prelievo di materia
La materia presa con l'aiuto dello stantuffo integrato al coperchio a vite del tubetto d'invio (A).
Potete anche servirVi di un cucchiaino di legno (B) o in caso di feci liquide, di una pipetta di
plastica da uso unico (C) (vedi sotto).
Introduzione della materia campione
Mettere il tubetto da parte per impedire che sia rovesciata inavvertitamente causando la perdita
del medio liquido (A) durante il prelievo.
Lo stantuffo puö essere riempito fino ali'orlo al massimo. Inserirlo con cura nel tubetto di
trasporto (elemento A) col liquido. Avvitare il coperchio.
Attenzione:
non respirare i vapori della soluzione A. In caso di contaminazione, lavare le superfici
contaminate semplicemente con acqua. Assorbita in grandi quantitä (a partire di 20-30 ml), la
soluzione A puö avere un effetto tossico sul organismo.
Trasporto ed immagazzinamento del materiale campione
I1 tubetto ben chiuso viene scosso brevemente 1-2 volte. I1 sistema e ormai pronto al trasporto o
l'immagazzinamento. Se il sistema e caricato conformemente alle istruzioni, i germi (virus,
batteri, funghi, parassiti) sono distrutti in pocc tempo. Un'infezione non piü possibile, anche in
caso di rottura.
Importante: La refrigerazione o calorificazione non necessaria. Impedire pero un'irradiazione
solare diretta. Non mettere il tubetto sul radiatore o sugli strumenti calorifici. Avendo un
magazzinaggio prescripto la durabilita´ del campione dentro del tubeto di trasporto e´ di un
minimo 8 settimane.
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Quantitä ottimale di materia campione
La suspensione fecale non deve surpassare 1'orlo superiore del campo bianco stampato. Se
seguite le istruzioni per il caricamento, ottenete sempre una quantitä uniforme di materia
sufficente agil esami parassitologici necessari.
Procedimenti di trasformazione al laboratorio
Aprire la chiusura a vite del tubetto d'invio (A). Se necessario, potete rimestare la suspensione
fecale a mezzo dello stantuffo senza ricorrere ad altri strumenti ausiliari: sollevare la chiusura a
vite circa 10-15 mm sopra l'orlo del tubetto (ili. 6) e rispingerlo fino all'orlo (i11.7).
E' importante che lo stantuffo non sia sollevato al di la´ del livello del fluido. Dopo pochi
secondi di pratica lenta sarete esperte del processo.
A condizione di un uso corretto del sistema potete Voi stessi lavorare nella posizione obliqua
senza rischio di spruzzare.
In caso di spruzzamento non c'e pericolo d'infezione (vedi sopra): le superfici contaminate
possono essere pulite con acqua ed alcol diluito.
Rimozione del coperchio del tubetto A.
Togliere il coperchio di chiusura contenente lo stantuffo vuoto.
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Caricamento del sistema con il medio B (per la separazione delle fasi).
Versare con cura 1,5 ml del medio B (non andare troppo presto!) nel tubetto A.
Attenzione:
Il medio B inflammabile. Le fiamme aperte a prossimitä sono vietate. Non respirare i vapori. La
conservazione al fresco consigliabile.
Caricamento del sistema con il medio C (colorazione dei parassiti).
Aggiungere 0,2 ml del medio C.
Accoppiamento del tubetto d'invio all'elemento D
Avvitare il tubo di centrifugazione col filtro (elemento D) dall'alto sul tubetto riempito (dopo
aver tolto il coperchio parapolvere).
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Operazione di scossa, inizio della filtrazione attiva
Girare il sistema intero di 180° e scuoterlo a mezzo di un'aparecchio di scossa per circa 10-15
sec. con una velocitä di rotazione massima. E' sufficente di premere leggeramente con la punta
del dito sul tubetto superiore, tenendo fermo allo stesso tempo il sistema. Dopo quest'operazione
la meta´ della suspensione fecale si trova giá nel cono inferiore del serbatoio di centrifugazione.
Se non possedete 1'apparecchio di scossa, scuotere il sistema accoppiato vigorosamente con la
mano per circa 30 sec. (senza illustrazione).
Fine dell'operazione di filtrazione attiva
I1 resto viene trasferito con un battito leggero (come per il termometro) dal recipiente superiore
al recipiente inferiore. Durante l'intera operazione di scossa si svolge un processo attivo di
filtrazione, aumentando ancora il guadagno di parassiti. L'apparecchio concepito in maniera a
produrre una proporzione ideale fra: volume di suspensione (superficie di
filtrazione) quota di sedimentazione. Lasciar riposare la suspensione per 1-2 minuti.
Centrifugazione, separazione delle fasi
Centrifugare la suspensione filtrata per 5-10 minuti a 1500 g. In luogo di centrifugazione: lasciar
riposare il sistema per alcune ore fino ad una separazione chiara delle fasi.
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Formazione delle fasi
Dopo la centrifugazione si formano 4 strati.
Rimozione del serbatoio d'invio e del filtro
Il serbatoio d'invio con il filtro viene rimosso.
Isolazione del concentrato di parassiti
Lo strato superiore solido deve essere staccato dalla parete a mezzo di una bacchetta di ovatta
(girandola una volta per la parete interiore). I1 serbatoio di centrifugazione viene decantato con
cura. Gocciare bene. Non scuotere per non perdere inavvertitamente il concentrato di parassiti.
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Suspensione del concentrato di parassiti
Per diluire acclùdere ca. 0,1-0,2 ml NaCl una soluzione salina fisiologica nel tubo A.
Si puö anche impiegare il medio A per conservare.
E' utile di versare (1-2 alcune gotte) del medio C nel recipiente di centrifigazione, producendo,
oltre la diluizione, una colorazione intensa dei parassiti.
Preparazione del concentrato
Mescolare il concentrato nel cono del recipiente aspirando più volte con una pipetta da uso
unico.
Importante:
il concentrato liquido grosso dovrá essere ancora diluido.
Preparazione alla diagnostica microscopica
Una gotta del concentrato fecale per portaoggetto è normalmente sufficente alla diagnostica.
Per effettuare una diagnostica sarebbero importante il minimo due portaoggetti.
Criteri per la preparazione ottimale
Coperta di vetro, la preparazione e pronta alla diagnostica al microscopio. Stare attenti che la Vs.
preparazione no sia troppo densa. Attraverso essa un testo deve essere chiaramente leggibile.
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Prelievo di feci in condizioni speciali
In condizioni difficili le feci possono anche essere prese con l'aiuto di un cucchiaino di legno
(elemento B), compreso nella consegna. Riempiere lo stantuffo con questo mezzo ausiliario. In
seguito eliminare conforme le prescrizioni igieniche vigente. I1 materiale si rammorbidisce
facilmente al contatto con l'acqua e si decompone rapidamente senza danneggiare l'ambiente.
Attenzione:
Per motivi igienici e diagnostici il mezzo ausiliario (elementc B) non puö essere riutilizzato!
Estrazione di materia fecale liquida, esame parassitologico di urina ed altri liquidi fisichi
L'estrazione di feci liquide o di urina puö essere fatta a mezzo di una pipetta Pasteur (elemento
C) compresa nella consegna. I1 contenuto della pipetta viene vuotato con cura nel tubetto d'invio
(elemento A) contenente il medio di trasporto. Depositi mucosi e sanguigni dovrebbero essere
trasferiti al recipiente con il cucchiaino (elemento B) a mezzo dello stantuffo.
Procedimento raccomandato per l'urina ed il liquido duodenale: centrifugare circa 10-20 ml di
materiale fresca per 5 min. ad un velocitä di rotazione massima. Prelevare 0,5 ml dallo strato de
deposito con la pipetta da uso unico che fa parte della consegna et trasferirlo al tubetto d'invio
contenente il medio A.
Attenzione:
La pipetta puo´ essere riempita soltanto fino al contrassegno de 0,5 ml (circa a metá del tubo
aspiratore). La pipetta puó essere usata sólo una volta. In seguito eliminare conforme le
prescrizioni igieniche vigente. Come il materiale non contiene alogeni, la combustione e
possibile senza rischio per l'ambiente.
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Riempimento del tubo d'invio col medio di trasporto et di trasformazione
Se il sistema Biosepar viene consegnato senza medio, procedere come segue:
Togliere la chiusura a vite del tubetto A e riempirlo con cura col medio A con 3,5 ml.
Importante: il riempimento preciso ed equilibrato dei tubetti favorisce la qualitä degli esami.
Attenzione: Se il tubetto contiene troppo poco medio A o ne contiene troppo, conviene vuotarlo
et riempirlo di nuovo del medio di trasporto, seguendo esattamente la quantitä prescritta.
Compatibilità coi mezzi de laboratorio
I1 sistema Biosepar e concepito di tale maniera che ogni portaprovetta per tubetti da sangue
correnti puö essere usato.
Vantaggio:
un massimo di esami puö essere condotto col sistema Biosepar, occupando un minimo di spazio.
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Compatibilità con gli strumenti di laboratorio
La centrifugazione non presenta problemi. Il sistema Biosepar adattato ad ogni centrifuga
tradizionale usata per la centrifugazione di sangue.
Scegliere inserti adattati a tubetti di centrifugazione avendo uri diametro di 25-26 mm oppure
inserti tenendo i tubetti da sangue standard, con l'orlo superiore non surpassando i 55 mm. Se
avete domande al riguardo, vogliate rivolgerVi a Vs. fornitore di centrifughe, al commercio
specializzato di strumenti di laboratorio oppure alla ditta Biosepar.
Alimentazione del sistema coi medi A, B e C
Dosatrici speciali con distributore regolabile (vedi numero d'ordinazione) sono opportuni per
aggiungere dei medi A, B e C.
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Trasporto e spedizione postale dei tubetti Biosepar caricati
I1 sistema Biosepar corrisponde a tutte le norme postali europee. I tubetti Biosepar sono
fabbricati di materiale molto resistente, a prova di rottura. I1 trasporto é sicuro, comodo e costa
poco. Per motivi di sicurezza conviene spedire i tubetti in un contenitore con chiusura a vite
(regolarmenti postali europei). Ogni contenitore corrente per il trasporto del sangue tiene 2
tubetti d'invio di materia fecale (elemento A).
Importante:
Se tuttavia un tubetto dovesse essere dannegiato durante il trasporto o se dovesse rómpere, non
c'e pericolo: tubetti caricati correttamente non sono infettosi siccome il medio di trasporto.
Biosepar distrugge in un tempo molto breve tutti batteri, virus, funghi e parassiti (vedi sopra).
Questo fatto ha grandissima importanza per quanto riguarda materiale contaminata di HIV in
caso di AIDS, tutti virus di epatite, salmonelle, shigelle, amibe, ecc.
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