Alemtuzumab - Corsi di Studio del Dipartimento di Biotecnologie

UNIVERSITA’ DI TORINO
LAUREA SPECIALISTICA IN BIOTECNOLOGIE
MOLECOLARI
CORSO DI IMMUNOLOGIA
CD52 e ruolo nei tumori ematologici.
Campath (Alemtuzumab):
azioni biologiche, evidenze terapeutiche,
problemi e sviluppi biotecnologici.
Moira Marizzoni
25 0ttobre 2007
Alemtuzumab
(anti-CD52)
Anticorpo IgG1 umanizzato
Commercialmente: Campath-1H
Antigene CD52
• Lega GPI
• Espresso
•
•
►
Tutti i linfociti
►
Monociti
►
Eosinofili
►
Cellule pzt CLL e PLL
Non espresso
►
Progenitori ematopoietici
►
Eritrociti
►
Piastrine
Approvazione FDA maggio 2001
campath.legalview.com/wikipedia/Ale
mtuzumab
Leucemia linfatica cronica (CLL)
• Piu’ frequente leucemia in Occidente (30% delle leucemie vs
2-5% in Asia)
• Eta’ media alla diagnosi: ~65 anni
• Aumento diagnosi in pazienti piu’ giovani: ~20% ha meno di
55 anni
• M/F ratio 1.5:1
• Disturbi immunitari: ipogammaglobulinemia (20–40%),
anemia emolitica autoimmune (10–20%), difetti nelle celluleT
e NK
CLL
tipica
CLL
atipica
Fattori prognostici
BASSO RISCHIO
(OS >15 anni)
ALTO RISCHIO
(OS <5 anni)
Stadi clinici
A, O, I
B, C, II–IV
Conta linfocitaria
Basso
Alta
Infiltrazioni midollari
Basso
Diffuse
Tipica
Normale
Atipica
Abnormale
Normale, del13q
+12, del17p, del11q
Marcatori sierici*
Normali
Aumentati
Mutazioni IgVH
Mutate
<30%
<20%
Non mutate
≥30%
≥20%
Morfologia
CT addominale
Citogenetica
CD38
ZAP-70
Adattata da Montserrat. ASH Educ Program, 2006.
*ß2-M, sCD23, LDH
Citogenetica
• No traslocazioni bilanciate ricorrenti (≠ linfomi)
– Aberrazioni cromosomiche nell’ 80%
• No instabilita’ genica (≠ tumori solidi)
• del(13q14): 54% (Associata a buona prognosi)
• Trisomia 12: 30%
• del(11q): 15%
• del(17p): 7%
Fattori di rischio citogenetici:
prognosi
100
Patients surviving
(%)
80
13q deletion
60
40
20
7%0of
0
patients
12q trisomy
11q deletion
Normal
17p (p53)
deletion
24
Döhner et al., N Engl J Med 2000.
48
72
96
Months
120
144
168
del(17p)
• 5–15% dei pazienti alla diagnosi
• 30% dei pazienti ricade!!
• L’ammontare delle delezioni influenza la risposta (>20%)
Pellagatti et al., Blood 2006.
• Trattamento con Fludarabina induce una potenziale
selezione delle cellule di CLL con p53 mutato
Rosenwald et al., Blood 2004.
∀ ↓ tasso e durata della risposta nei pazienti trattati con:
– Fludarabina e Fludarabina + Ciclofosfamide
– Fludarabina + Rituximab
– Agenti alchilanti
Grever et al., J Clin Oncol 2007.
Catovsky et al., Blood 2004.
Risposta associata alla
percentuale di cellule CLL p53
mutate e 17p
17p del
No.
<5% (-ve)
310
5%–20%
18
>20%–100%
15
Binet et al., Blood 2006.
CR/Nod PR
PR
NR/PD
43%
39%
18%
61%
22%
17%
13%
87%
0%
del(17p)
• 5–15% dei pazienti alla diagnosi
• 30% dei pazienti ricade!!
• L’ammontare delle delezioni influenza la risposta (>20%)
Pellagatti et al., Blood 2006.
• Trattamento con Fludarabina induce una potenziale
selezione delle cellule di CLL con p53 mutato
Rosenwald et al., Blood 2004.
∀ ↓ tasso e durata della risposta nei pazienti trattati con:
– Fludarabina e Fludarabina + Ciclofosfamide
– Fludarabina + Rituximab
– Agenti alchilanti
Grever et al., J Clin Oncol 2007.
Catovsky et al., Blood 2004.
Come oltrepassare la
resistenza p53-dipendente?
• Agenti alchilanti danno al DNA
• Analoghi delle purine danno al DNA
• Rituximab apoptosi p53-dipendente
• Alemtuzumab ADCC / lisi cellulare complemento
mediata
• Flavopiridolo inibizione della proliferazione
• Trapianto allogenico effetti cellulari
Meccanismo d’azione
Fc receptor
(Fcγ RIII)
Granules
NK cell
C
C
AD
Antigen
Fc region
Antibody
Pores
(perforin)
C1r
C1s
C1q
C1
H20,
ions,
granzymes
Granules release perforins
and granzymes; cytokines
secreted (eg, IFN-γ)
Lysis
H20,
ions
CDC
Pores
(8-18 C9s)
B cell
Lysis
s
si
to
op
Ap
Adattata da Hillmen. Invention and Innovation in the Treatment of Hematological Malignancies. Roma, 2007.
Alemtuzumab e del(17p)
%%
ofof
patients
patientswith
with
mutations
mutations
(somewith
with>1
>1mutation)
mutation)
(some
36 pazienti CLL refrattaria a F
Risposta globale= 31%
42
p53 mutations
or
del(17)
31
del(11)
11
8
8
del(13)(q14)
trisomy 12
normal cytogenetics
40% response rate
28% response rate
Cytogenetic abnormalities (prioritized according to risk)
Lozanski et al., Blood 2004.
Tasso di risposta correlato alle
anormalita’ citogenetiche
i.v. alemtuzumab (n = 147)
Chlorambucil orale (n = 147)
100
90
ORR (%)
80
70
60
50
40
30
20
10
0
17p del
11q del
Cortesia del Dr. Peter Hillmen, ASH 2006.
Trisomia 12
Normale
del 13q
Studi in corso di alemtuzumab in
combinazione con altri farmaci
Studio
Tipo di sperimentazione
Investigatori / paesi
FCR vs FCCam
Lepretre, Fugier / various
FC (p.o.) vs
FC (p.o.)-Cam (s.c.)
Geisler / NL, Scandinavia,
CZ, PL
F (i.v.) Cam (i.v.) →PR: ± SCT
or Cam (s.c.)
Foà, Mauro / Italy
Cam s.c. – prednisone
Pettitt / UK
FC-Cam (s.c.)
Engert / Germany
FLUSALEM
F (p.o.)-Cam (s.c.)
Greil / Austria
NIGUARDA
FC (p.o.)-Cam (s.c.)
Montillo / Italy
CLL2007
HOVON 68
GIMEMA LLC0405
UKCLL06
CLL2L
Adattata da Foa. Invention and Innovation in the Treatment of Hematological Malignancies. Roma, 2007.
Terapia combinatoria
Fludarabina-alemtuzumab
(FluCam)
• Studio di fase II su 36 pazienti con CLL ricaduta/refrattaria
• Eta’ media 61.5 anni (intervallo 38–80 anni)
• 12/36 pazienti refrattari ad altre terapie
• 22 pazienti trattati in precedenza con fludarabina
– 9/22 refrattari alla fludarabina
Elter et al., J Clin Oncol 2005.
% of patients
(NCI criteria)
FluCam:
Tasso di risposta globale
(ORR)
90
83%
80
70
60
50
40
30
20
10
0
PR
(53%)
CR
(30%)
ORR
14%
3%
Stable
disease
6/9 fludarabine-refractory
patients responded to FluCam
Elter et al., J Clin Oncol 2005.
Progressive
disease
FluCam: Sopravvivenza
globale (OS)
Cumulative probability
1.0
n = 11
CR
0.8
OS media non raggiunta
TTP media 21.9 mesi
0.6
n = 19
0.4
PR
0.2
0
12
24
36
Overall survival (months)
Elter et al., J Clin Oncol 2005.
OS media 35.6 mesi
TTP media 12.97 mesi
48
Malattia minima residua (MRD)
• Presenza di cellule di CLL nel sangue periferico o nel
midollo osseo in pazienti che hanno raggiunto una
risposta completa
• Necessita’ di attualizzare il concetto di CR
• Sviluppo di saggi altamente sensibili per individuare la
MRD: PCR e Citofluorimetria di flusso
Malattia minima residua (MRD)
Immuno-chemioterapia
MRD negativo
MRD positivo
Consolidamento
MRD positivo
MRD negativo
Trapianto allogenico
Adattata da Foa. Invention and Innovation in the Treatment of Hematological Malignancies. Roma, 2007.
Rischio di progressione e MRD
Probability of progression
100
MRD positive
80
60
40
MRD negative
20
p < 0.01
0
0
12
24
36
Months
Esteve et al., Blood 2002.
46
50
Alemtuzumab e malattia
minima residua (MRD)
• Risposta nel 33% dei pazienti con CLL resistente alla
fludarabina.
Keating et al., Blood 2002.
• Pulisce sangue periferico, milza e midollo osseo dalle
cellule tumorali in pazienti con B-CLL non-trattata o
ricaduta/refrattaria.
Osterborg et al., Br J Haematol 1996.
Dyer et al., Br J Haematol 1996.
• Eradica la malattia minima residua (MDR) in pazienti che
hanno ricevuto fludarabina.
Montillo et al., Haematologica 2002.
Eradicazione MRD dopo
alemtuzumab
• Studio su 91 pazienti
• Eta’ media 58 anni
• 44/91 pazienti refrattari agli analoghi purinici
• MDR-negativi individuati mediante colorazione quadrupla al
FACS
Alemtuzumab eradica MRD nel 25% dei casi
Moreton et al., J Clin Oncol 2005.
Eradicazione MRD dopo
alemtuzumab: OS e stato MRD
Cumulative probability
1.0
Pazienti (n=24) MRD-negativi
Sopravvivenza media non raggiunta
0.8
0.6
Pazienti (n=67) MRD-positivi
Sopravvivenza media 19 mesi
0.4
0.2
p = 0.002
0.0
0
12
24
Moreton et al., J Clin Oncol 2005.
36
48
60
Time (months)
72
84
96
Effetti collaterali
alemtuzumab i.v.
90
Studio su 93 pazienti
9.7% sviluppa infezioni gravi
80
% casi affetti
70
60
50
40
30
20
10
0
Febbre
Rigidita’ Orticaria
muscolare
Keating et al., Blood 2002.
Ipotensione
Dispnea
Nausea
vomito
Confronto tra alemtuzumab
i.v. e s.c.
• Pazienti con CLL mai trattati
– Intravena:
24% CR, 83% ORR
– Sottocute:
17% CR, 81% ORR
• Pazienti con CLL refrattari alla fludarabina
– Intravena:
2% CR, 33% ORR
– Sottocute:
14% CR, 45% ORR
s.c. e’ molto meglio tollerata di i.v.
Possibile auto-somministrazione
Terapia via s.c. e i.v danno una risposta simile
Lundin et al., Blood 2002.
Referenze
Adattata da Foa. Invention and Innovation in the Treatment of Hematological Malignancies. Roma, 2007.
Adattata da Hillmen. Invention and Innovation in the Treatment of Hematological Malignancies. Roma,
2007.
Binet JL et al., Perspectives on the use of new diagnostic tools in the treatment of chronic lymphocytic
leukemia. Blood 2006; 107:859.
Campath.legalview.com/wikipedia/Alemtuzumab.
Catovsky D et al., The WHO classification of mature T-cell leukemias, Blood 2004; 104:2989.
Döhner H et al., Genomic aberrations and survival in chronic lymphocytic leukemia, N Engl J Med 2000;
343:1910.
Dyer MJ et al., Humanized CD52 monoclonal antibody Campath-1H as first-line treatment in chronic
lymphocytic leukaemia. Br J Haematol 1996; 97:669.
Elter T et al., Fludarabine in combination with alemtuzumab is effective and feasible in patients with
relapsed or refractory B-cell chronic lymphocytic leukemia: results of a phase II trial. J Clin Oncol.
2005; 23:7024.
Esteve J et al., Different clinical value of minimal residual disease after autologous and allogenic stem
cell transplantation for chronic lymphocytic leukemia. Blood 2002; 99:1873.
Grever MR et al., Comprehensive assessment of genetic and molecular features predicting outcome in
patients with chronic lymphocytic leukemia: results from the US Intergroup Phase III Trial E2997. J
Clin Oncol 2007; 25:799.
Keating MJ et al., Therapeutic role of alemtuzumab (Campath-1H) in patients who have failed
fludarabine: results of a large international study. Blood 2002; 99:3554.
Referenze
Lozanski G et al., Alemtuzumab is an effective therapy for chronic lymphocytic leukemia with p53
mutations and deletions. Blood 2004; 103:3278.
Lundin J et al., Phase II trial of subcutaneous anti-CD52 monoclonal antibody alemtuzumab (Campath1H) as first-line treatment for patients with B-cell chronic lymphocytic leukemia (B-CLL). Blood 2002;
100: 768.
Montillo M et al., Safety and efficacy of subcutaneous Campath-1H for treating residual disease in
patients with chronic lymphocytic leukemia responding to fludarabine..Haematologica 2002; 87:695.
Montserrat E. New prognostic markers in CLL. Hematology Am Soc Hematol Educ Program. 2006; 279.
Moreton P et al., Eradication of minimal residual disease in B-cell chronic lymphocytic leukemia after
alemtuzumab therapy is associated with prolonged survival. J Clin Oncol 2005; 23: 2971.
Osterborg A et al., Humanized CD52 monoclonal antibody Campath-1H as first-line treatment in chronic
lymphocytic leukaemia. Br J Haematol 1996; 93:151.
Pellagatti A et al., Gene expression profiles of CD34+ cells in myelodysplastic syndromes: involvement
of interferon-stimulated genes and correlation to FAB subtype and karyotype. Blood 2006; 108:337.
Rosenwald A et al., Fludarabine treatment of patients with chronic lymphocytic leukemia induces a p53dependent gene expression response, Blood 2004;104:1428.
Tratto dalla comunicazione orale del Dr. Peter Hillmen, ASH 2006.