Scheda Tecnica - Biolife Italiana
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Scheda Tecnica - Biolife Italiana
Biolife Scheda Tecnica Italiana Srl N°402137 B I-4 12/2011 Pagina 1 di 2 THIOGLYCOLLATE MEDIUM Terreno in polvere, pronto all’uso in provetta e flacone per il test di sterilità batterica in accordo al metodo armonizzato EP, USP, JP. FORMULA TIPICA (g/L) Idrolisato pancreatico di caseina Glucosio monoidrato Estratto di lievito Sodio cloruro L-cistina Sodio tioglicolato Agar Resazurina 15.000 5.500 5.000 2.500 0.500 0.500 0.750 0.001 PREPARAZIONE DEL TERRENO IN POLVERE Sospendere 30 g di polvere in 1000 mL di acqua distillata fredda. Portare ad ebollizione sotto agitazione, distribuire e autoclavare a 121°C per 15 minuti. Raffreddare rapidamente e conservare al buio a temperatura ambiente. Se necessario mantenere in bagno a vapore prima dell’uso e addizionare gli arricchimenti necessari con le precauzioni dell’asepsi. pH finale 7.1 ± 0.2. DESCRIZIONE Thioglycollate Medium è preparato secondo la formula raccomandata dal metodo armonizzato EP, USP, JP per il test di sterilità dei prodotti farmaceutici. L’agar presente alla concentrazione dello 0.75%, permette una buona crescita degli anaerobi poichè ritarda la diffusione dell’ossigeno nel mezzo e permette solo una lenta liberazione dal terreno delle sostanze riducenti prodotte dai microrganismi e dell’anidride carbonica. Il sodio tioglicolato, ad una concentrazione in cui possiede una ridotta tossicità per i microrganismi, agisce come sostanza riducente ed elimina le molecole di ossigeno dal terreno; in questo modo si mantiene nel mezzo un basso potenziale di ossidoriduzione che previene la formazione di perossidi, letali per i microrganismi aerobi e anaerobi. Il sodio tioglicolato inoltre neutralizza gli effetti batteriostatici dei composti mercuriali presenti nelle preparazioni biologiche di cui si deve testare la sterilità; 15 mL di Thioglycollate Medium neutralizzano 3 mL di soluzione contenente sali di mercurio d’uso comune, alla diluizione 1:10.000. La resazurina è presente nel terreno come indicatore di ossidoriduzione in sostituzione del blu di metilene, presente nella formula originale di Brewer e più tossico. La cistina ed il peptone di caseina sono fonti di azoto per la crescita microbica, il glucosio è una fonte di carbonio, il sodio cloruro consente di mantenere un adeguato tenore osmotico al brodo di coltura. METODO ED INTERPRETAZIONE DEL RISULTATI Per la semina di campioni clinici ove si desideri coltivare anaerobi stretti, le provette di Thioglycollate Medium dovrebbero essere pre-ridotte lasciando le provette con i tappi allentati in anaerobiosi per 1824 ore. Incubare alla temperatura e per il tempo previsto dalle proprie procedure ed in funzione del microrganismo che si desidera coltivare. La presenza di microrganismi è indicata da un intorbidimento di varia entità del brodo di coltura o dalla presenza di un sedimento sul fondo della provetta o da una crescita in corrispondenza del menisco rosa del brodo. Le caratteristiche delle crescite sono in stretto rapporto al tipo o ai tipi di microrganismi coltivati. Per l’esecuzione del test di sterilità con Thioglycollate Medium si raccomanda di seguire le indicazioni del metodo armonizzato EP. USP, JP. LIMITI I microrganismi cresciuti sul terreno devono essere sottoposti a colorazione Gram ed agli appropriati test biochimici e sierologici per la loro identificazione. La presenza di una lieve torbidità nel brodo in provetta prima della semina deve considerarsi normale poiché il terreno contiene una bassa concentrazione di agar. Biolife Italiana S.r.l. Viale Monza 272, 20128 Milano. Tel. n° 02-25209.1, Fax n° 02-2576428, E-mail: [email protected] ; sito Web: www.biolifeitaliana.it Biolife Scheda Tecnica Italiana Srl N°402137 B I-4 12/2011 Pagina 2 di 2 CONTROLLO QUALITÀ SUGGERITO PER L’UTILIZZATORE Controllo produttività (30-35°C per 48 ore) B.fragilis ATCC 25285*: crescita S.aureus ATCC 25923*: crescita THIOGLYCOLLATE MEDIUM ARRICCHITO CON VITAMIN K ED P.aerobius ATCC 27337*: crescita B.vulgatus ATCC 8482*: crescita C.perfringes ATCC 13124*: crescita HAEMIN (30-35°C 48 ORE) *Ceppi raccomandati da NCCLS M22-A3 PER IL CONTROLLO DI QUALITÀ NEL SETTORE FARMACEUTICO FARE RIFERIMENTO ALLA FARMACOPEA EUROPEA EDIZIONE CORRENTE. CONSERVAZIONE Terreno in polvere: conservare a 10-30°C al riparo della luce, in luogo asciutto. In queste condizioni il prodotto è valido fino alla data di scadenza indicata in etichetta. Non utilizzare oltre questa data. Eliminare se vi sono segni evidenti di deterioramento della polvere (modifiche del colore, indurimento della polvere ecc.) Conservare le provette ed i flaconi preparati in laboratorio per un massimo di 1 mese a 15-25°C. Riscaldare prima dell’uso in bagnomaria fino a che non sia scomparsa la colorazione rosa del terreno ed eliminato quindi tutto l’ossigeno atmosferico assorbito. Terreni pronti all’uso in provetta e flacone: conservare a 15-25°C fino alla data di scadenza indicata in etichetta. Eliminare se vi sono segni di deterioramento. PRECAUZIONI E SICUREZZA DEGLI OPERATORI Terreno in polvere: il preparato qui descritto non è classificabile come pericoloso ai sensi della legislazione vigente ma contiene sodio tioglicolato ad una concentrazioni >1% e come tale richiede la scheda di sicurezza, che deve essere consultata prima dell’uso. . Terreni pronti all’uso in provetta e flacone i preparati qui descritti non sono classificati come pericolosi ai sensi della legislazione vigente né contengono sostanze pericolose in concentrazioni 1%. I prodotti qui descritti sono solo per uso diagnostico in vitro e devono essere usati solo in laboratorio, da operatori adeguatamente addestrati, con metodi approvati di asepsi e di sicurezza nei confronti degli agenti patogeni. Sterilizzare le provette ed i flaconi dopo il loro uso e prima dell’eliminazione come rifiuto. BIBLIOGRAFIA • CLSI document M22-A3, 2004. Quality Control of Commercially Prepared Microbiological Media: Approved Standard - Third Edition. Vol. 24 No.19 CONFEZIONI Terreno in polvere 4021372 Thioglycollate Medium, 4021374 Thioglycollate Medium, 500 g (16.7 L) 5 kg (167 L) Terreni pronti in provetta e flacone 5121372 Thioglycollate Medium, 552137 Thioglycollate Medium, 6 flaconi da 100 mL 20 provette da 10 mL IVD Biolife Italiana S.r.l. Viale Monza 272, 20128 Milano. Tel. n° 02-25209.1, Fax n° 02-2576428, E-mail: [email protected] ; sito Web: www.biolifeitaliana.it