Calprotectina-Lattoferrina card Metodica REF C

Calprotectina-Lattoferrina card
Metodica
REF C-90
20 test
Test rapido per la rilevazione qualitativa della Calprotectina e Lattofferina
nelle feci umane
Solo per uso diagnostico professionale in vitro.
USO PREVISTO
La card per il test Calprotectina-Lattoferrina è un test rapido
immunocromatografico a flusso laterale per la determinazione qualitativa
della calprotectina e lattoferrina in campioni di feci umane, uno strumento utile
per la diagnosi di malattie infiammatorie gastrointestinali.
RIEPILOGO
La Calprotectina è una proteina contenente calcio che costituisce il 5% delle
proteine totali e il 60% della proteine citoplasmatiche dei neutrofili.
Ha proprietà batteriostatiche e fungistatiche e si trova nelle feci a livelli sei
volte superiori rispetto a quelli nel plasma. Questo Biomarker fecale è utile per
valutare l'attività della malattia infiammatoria intestinale (IBD).
Le IBD comprendono la Malattia di Crohn (CD) e la colite ulcerosa (UC) e
sono associati con livelli elevati di neutrofili.
Questo dosaggio della calprotectina fecale è utile nella differenziazione della
malattia infiammatoria intestinale organica (IBD) da quella funzionale (IBS:
sindrome del colon irritabile). Si tratta di un semplice, Biomarker non invasivo
che è particolarmente utile nei bambini, che possono richiedere l'anestesia
generale per la colonscopia. La rivelazione della calprotectina fecale è in grado
di prevedere le ricadute. La lattoferrina è una glicoproteina che viene prodotta
dai neutrofili, fagociti mononucleati e dalle cellule epiteliali ed è contenuta nei
liquidi secretori come la saliva e nel latte materno. La sua funzione è quella di
bloccare la crescita batterica limitando la disponibilità di ferro e questo effetto
è potenziato dalla presenza di specifici anticorpi IgA secretori diretti contro i
batteri. Se ha anche un effetto battericida, provoca danni diretti alle membrane
cellulari, in collaborazione con il lisozima.
Quando l'infiammazione si sviluppa nel tratto gastrointestinale, i neutrofili e le
cellule fagocitarie migrano verso il focolaio infiammatorio e rilasciano dei
granuli contenenti Lf. Se è stabile nelle feci,può essere facilmente rilevato
tramite i metodi immunochimici.
Questo Biomarker è elevato nei pazienti con malattia infiammatoria intestinale.
Le malattie infiammatorie intestinali (IBD), tra cui la colite ulcerosa (UC) e
morbo di Crohn (CD), rappresentano uno spettro di malattie caratterizzate da
una infiammazione cronica idiopatica e che interessano il tratto
gastrointestinale (GI). Pazienti adulti e pediatrici con malattia infiammatoria
intestinale possono presentare una varietà di sintomi clinici (tra cui dolore
addominale e diarrea) che possono essere non-specifici.
PRINCIPIO
Il dispositivo Calprotectina-lattoferrina è un test immunologico qualitativo per
il rilevamento della calprotectina e lattoferrina in campioni di feci.
La membrana è pre-coattata con anticorpi monoclonali contro la calprotectina
e lattoferrina nella zona delle linee del test. Durante il test, il campione reagisce
con le particelle rivestite con anticorpi anti-calprotectina umana e gli anticorpi
anti-lattoferrina umana, che sono stati pre-essiccati sulla striscia. La miscela si
muove verso l'alto sulla membrana per azione capillare. In caso di risultato
positivo,anticorpi specifici presenti sulla membrana reagiscono con la miscela
di coniugato generando sulla linea del test delle bande colorate. Una banda di
colore verde appare sempre nella linea di controllo e serve come verifica che è
stato aggiunto un volume sufficiente e che la migrazione è avvenuta in maniera
corretta.
PRECAUZIONI
•
Solo per uso diagnostico professionale in vitro. Non utilizzare oltre la
data di scadenza.
•
Conservare la card nell’involucro chiuso fino al momento dell’uso.
•
Tutti i campioni devono essere considerati potenzialmente pericolosi
e, pertanto, vanno manipolati con le precauzioni d’uso relative ai prodotti
potenzialmente infettivi.
•
Dopo l’uso, la card deve essere eliminata secondo le norme locali in
vigore.
•
Il test deve essere effettuato entro 2 ore dall'apertura del sacchetto
sigillato.
PROCEDURA
Per elaborare i campioni di feci raccolti (vedi figura 1):
1. Usare una flaconcino di raccolta separato per ogni campione. Svitare il tappo
del flacone e introdurre il bastone per tre volte nel campione di feci per
prendere il campione(approx. 10-20 mg). Chiudere il flaconcino con il
tampone e il campione di feci. Questo flacone con il campione può essere
conservato per 5 giorni.
2. Agitare il flacone al fine di garantire una buona dispersione del campione.
Per i campioni di feci liquide, aspirare il campione di feci con un contagocce e
aggiungere ca. 10-20 µL nel flaconcino con il tampone di raccolta del
campione.
Procedura del test (vedi figura 2)
Lasciare che il test, i campioni di feci e il tampone raggiungano la
temperatura ambiente (15-30 º C) prima del test. Non aprire gli involucri
fino al momento di eseguire il test.
3. Rimuovere il dispositivo calprotectina-lattoferrina dalla busta sigillata e
utilizzarla il prima possibile. Mettere in una superficie pulita e piana.
4. Agitare il flacone di raccolta dei campioni per assicurare una buona
dispersione del campione. Rompere la punta del flacone.
5. Utilizzare un dispositivo separato per ogni campione. Dispensare 4 gocce o
100 microlitri nel pozzetto (S). Avviare il timer.
6. Leggere il risultato dopo 10 minuti dopo l'erogazione del campione.
Illustrazione 1
CONSERVAZIONE E STABILITA’
Conservare nell'involucro chiuso ad una temperatura refrigerata o a
temperatura ambiente (2-30 º C). Il test è stabile fino alla data di scadenza
indicata sulla confezione. Il test deve rimanere chiuso fino al momento dell'uso.
FECI
Non congelare.
Illustrazione 2
COMPOSIZIONE DELLA CONFEZIONE
Materiale fornito
card
-
Materiale richiesto ma non fornito
Calprotectina-Lattoferrina
Contenitore per la raccolta
del campione
Metodica
Guanti
Tubo di raccolta con tampone Timer
PRELIEVO E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI
Raccogliere quantità sufficienti di feci (1-2 grammi o mL per campione
liquido). I campioni di feci devono essere raccolti in contenitori puliti e
asciutti (senza aggiunta di conservanti o terreno di trasporto). I campioni
possono essere conservati in frigorifero (2-4 C°) per 7 giorni prima del test.
Per la conservazione prolungata del campione deve essere mantenuto
congelato a -20º. In questo caso, il campione sarà completamente
scongelato, e portato a temperatura ambiente prima del test.
S
S
INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI
Calprotectina
Lattoferrina
FCP&FLF
POSITIVA
POSITIVA
POSITIVE
NEGATIVO
NON VALIDO
(Vedere l’illustrazione precedente)
Calprotectina POSITIVA Due bande appaiono attraverso la finestra
centrale, nella zona del risultato (linea del test rossa contrassegnata con la
lettera T) e nella zona di controllo (linea di controllo verde contrassegnata
con la lettera C). Un risultato positivo della calprotectina potrebbe essere
indicativa che è presente una patologia gastrointestinale infiammatoria.
Lattofferina POSITIVA: Due bande appaiono attraverso la finestra
centrale, nella zona del risultato (linea del test blu contrassegnata con la
lettera T) e nella zona di controllo (linea di controllo verde contrassegnata
con la lettera C)..Interpretazione: probabilmente IBD (malattia
infiammatoria intestinale).
Calprotectina (FCP) e la lattoferrina (FLF) POSITIVE: Tre bande
appaiono attraverso la finestra centrale, nella zona del risultato due bande
(banda rossa e blu del test contrassegnate con la lettera T) e nella zona di
controllo (banda di controllo verde contrassegnata con la lettera C). Un
risultato positivo alla Calprotectina (CP) e alla lattoferrina (LF) potrebbero
essere indicative che è presente una infiammazione intestinale (malattia
organica).
NEGATIVO: solo una banda verde appare in tutta la zona di controllo
contrassegnata con la lettera C (banda di controllo verde). Un risultato
negativo indica che non è attiva una infiammazione gastrointestinale.
NON VALIDO: L'assenza totale della banda di controllo di colore verde,
indipendentemente dall'aspetto o non della banda del test rossa o blu.
Nota: il volume di campione insufficiente, tecniche procedurali non corrette
o deterioramento dei reagenti sono le cause più probabili della mancata
comparsa della banda di controllo. Rivedere la procedura e ripetere il test
con un nuovo dispositivo. Se il problema persiste, non utilizzare più il kit e
contattare il distributore locale.
L'intensità della banda di colore rosso o blu nella zona del risultato (T) varia
a seconda della concentrazione di calprotectina e lattoferrina nel campione.
LIMITI
1 Un eccesso di campione può causare risultati errati (appare una banda
marrone). Diluire il campione con il tampone e ripetere il test.
2 Alcuni campioni di feci possono diminuire l'intensità della banda di
controllo.
3 I pazienti affetti da malattie infiammatorie dell'intestino come il morbo di
Crohn e la colite ulcerosa, sono positivi per la calprotectina fecale.
Il dispositivo Calprotectina-lattoferrina può essere utilizzato per i pazienti
con diarrea cronica.
4 Risultati positivi alla calprotectina confermano la presenza di
calprotectina in campioni di feci, tuttavia, può essere dovuto a diverse
cause, malattie infiammatorie intestinali, cancro del colon-retto e alcuni
enteropatie. I risultati positivi dovrebbero essere seguiti da ulteriori
procedure di diagnosi da parte di un medico per determinare l'esatta causa
dell’ infiammazione.
5 I livelli di calprotectina fecale neonatale sono stati riportati più elevati
rispetto ai bambini normali, con una mediana di 167µg / g.
6 Risultati positivi alla lattoferrina confermano la presenza della lattoferrina
umana in campioni di feci, tuttavia, può essere anche dovuto a diverse
cause, oltre la IBD. Un risultato positivo dovrebbe essere seguito da ulteriori
procedure diagnostiche. Le endoscopie e gli esami istologici su campioni
bioptici sono i metodi per rilevare e quantificare l'infiammazione intestinale.
7 La lattoferrina è una componente del latte materno, il test sarà positivo nei
bambini allattati al seno e non deve essere utilizzato per valutare neonati che
ricevono latte materno.
PERFORMANCE
Sensibilità
Campioni contenenti livelli di calprotectina a concentrazioni pari o superiori
a 50µg / g di feci e / o contenenti livelli di lattoferrina in concentrazione pari
o superiore a 10ug HLF / g feci produce risultati positivi quando si utilizza
il dispositivo del test calprotectina-lattoferrina .
Diluizioni differenti di calprotectina e lattoferrina sono stati testati
direttamente nel buffer di estrazione o in un campione di feci negativo
secondo le istruzioni del kit per determinare il limite di rilevazione del test.
Il test calprotectina-lattoferrina ha mostrato un livello di sensibilità >94%
rispetto ad un altro immunodosaggio commerciale (Calprest ® Eurospital).
La rilevazione della lattoferrina umana con dispositivo del test calprotectinalattoferrina ha mostrato una sensibilità del 99% rispetto ad un altro
immunodosaggio commerciale.
CONTROLLO DI QUALITA’
I controlli interni procedurali sono inclusi nel test:
- Una banda verde che compare nella zona di controllo (C) conferma che il
volume di campione è sufficiente e che la procedura è corretta.
- Uno sfondo chiaro è un controllo interno di fondo negativo. Se il test
funziona correttamente, lo sfondo nell'area dei risultati dovrebbe essere
chiaro e non interferire con la capacità di lettura del risultato.
Specificità
La rilevazione di calprotectina umana con test calprotectina-lattoferrina ha
mostrato una specificità del 93% rispetto ad un altro immunodosaggio
commerciale (Calprest ® Eurospital). E la rilevazione della lattoferrina
umana con il test del dispositivo calprotectina-lattoferrina ha mostrato una
sensibilità del 99% rispetto ad un altro immunodosaggio commerciale IBD
EZ VUE® TechLab ® .
Il dispositivo del test Calprotectina-lattoferrina è specifico per la
calprotectina umana e lattoferrina umana, che non mostrano reattività
crociata con altre calprotectine o lattoferrine bovine.
VALORI ATTESI
Alti livelli di calprotectina nelle feci sono associati ad un aumentato rischio
di recidiva nei pazienti con malattia infiammatoria intestinale (IBD).
Alcuni studi hanno stabilito un cut-off uguale o superiore a HFCP 50µg / g
feci per consentire di rilevare pazienti adulti con problemi infiammatori
gastro-intestinali. Un campione contenente lattoferrina in concentrazione
pari o superiore a 10ug HLF / g feci produce risultati positivi utilizzando il
dispositivo calprotectina-lattoferrina.
BIBLIOGRAFIA
VIEIRA, A. et al., “Inflammatory bowel disease activity assessed by fecal
calprotectin and lactoferrin: correlation with laboratory parameters, clinical,
endoscopic and histological indexes”, BMC Research Notes 2009, 2:221.
HANAI, H. et al. «“Relationship Between Fecal Calprotectin, Intestinal
Inflammation, and Peripheral Blood Neutrophils in Patients with Active
Ulcerative Colitis” Digestive Diseases and Sciences, Sept. 2004, Vol 49, No
9, pp 1438-1443.
BONNIN TOMAS, A, et al. “Calprotectina fecal como marcador diferencia
entre patología gastrointestinal orgánica y funcional”. Rev. Esp. de Enf.
Dig. 2007, Vol 99, No 12, pp. 689-693.
Amemoto K. et al. Clinical evaluation of fecal lactoferrin and -1antitrypsin in pediatric gastrointestinal infections, Pathophysiology. Vol 3;
1996, p. 87-90.
Walker, T.R. et al. Fecal Lactoferrin is a Sensitive and Specific Marker of
Disease Activity in Children and Young Adults with Inflammatory Bowel
Disease. J. Pediatr Gastroenterol. Nutr. April 2007; Vol 44, No 4, p. 414422.
Indice dei Simboli
Attenzione,
consultare
Solo per uso
diagnostico
Conservare a 2-30°C
Rev. 0 05/2016
Fabbricante
INTERMEDICAL s.r.l.
Via A.Genovesi,13
80010 Villaricca(Na)-ITALY
N°determinazi
oni per kit
Usare entro
Numero del
lotto
Fabbricant
eNon
riutilizzare
REF Codice #