FERRITINA

FERRITINA
(Ref. NPP38N)
REAGENTI PER LA DETERMINAZIONE QUANTITATIVA DELLA FERRITINA NEL SIERO
UMANO CON METODO NEFELOMETRICO
PER USO DIAGNOSTICO IN VITRO
APPLICAZIONI CLINICHE
La molecola della Ferritina è costituita da 24 subunità proteiche, ciascuna con un peso
molecolare di 20.000 D. La funzione primaria della Ferritina è quella di accumulare il ferro
intracellulare proteggendo la cellula dagli effetti tossici del metallo libero e costituendo una
riserva di ferro rapidamente mobilizzabile. La maggior parte della Ferritina nell'organismo si
trova nelle cellule del fegato e nelle cellule del sistema reticolo endoteliale di fegato, milza e
midollo osseo, quantità minori si trovano nel cuore, nel pancreas e nel rene. Piccole, ma
significative quantità di Ferritina si trovano nel siero umano. La funzione della Ferritina sierica
non è nota, ma esiste una stretta correlazione tra la concentrazione nel siero di questa proteina
e i depositi di ferro dell'organismo: il dosaggio della Ferritina sierica rappresenta quindi il
metodo più semplice e meno invasivo per la sua valutazione. L'andamento delle concentrazioni
della Ferritina sierica riflette le modificazioni dell'equilibrio corporeo dovute all'età e al sesso.
Per individui normali, i livelli medi, lievemente più elevati alla nascita, si abbassano durante
l'infanzia fino al raggiungimento della pubertà. Successivamente, nei maschi, si ha un
progressivo aumento dei depositi corporei di ferro e, proporzionalmente, della Ferritina sierica,
mentre, nelle donne in età feconda, si osservano valori più bassi e stabili ed un aumento della
Ferritinemia solo dopo la menopausa. Valori di Ferritina inferiori alla norma indicano, con
sicurezza, carenza di ferro e permettono la diagnosi differenziale tra anemia sideropenica ed
anemia dovute ad altre cause. Il sovraccarico parziale, sia esso dovuto ad aumentato
assorbimento di ferro, come nell'emocromatosi idiopatica o a trasfusioni multiple, determina un
incremento della Ferritina sierica spesso molto superiore alla soglia dei valori normali. Un
aumento della Ferritinemia si osserva anche in altre condizioni patologiche quali: epatopatie,
processi infettivi ed infiammatori, leucemia, linfoma di Hodgkin ed altre forme neoplastiche.
PRINCIPIO DEL METODO
La Ferritina contenuta nel siero umano forma degli immunocomplessi, reagendo con gli
anticorpi specifici adesi su particelle di polistirene. Sfruttando il fenomeno della diffrazione della
luce che questi immunocomplessi provocano, si è in grado, per mezzo del nefelometro, di
misurare l'intensità della luce diffratta, che risulta proporzionale alla concentrazione della
Ferritina presente nel campione in esame. La valutazione avviene per confronto con un
calibratore a concentrazione nota.
REAGENTE CONTENUTO NELLA CONFEZIONE
−
I reagenti devono essere conservati a 2°-8°C.
−
La data di scadenza è indicata sull’etichetta e si riferisce al componente conservato chiuso
a 2°-8°C.
Reagente Ferritina: 3 flaconi (2.8 mL) contenente latex rivestito con antisiero anti-Ferritina.
Conservante: NaN3 (<0.1%). Pronto per l'uso. Dopo l'impiego, conservare il reagente
ermeticamente chiuso a 2°-8°C per 4 settimane. Non congelare.
Reagente Supplementare Ferritina: 2 flaconi (5.25 mL) di soluzione tamponata e
catalizzatore. Conservante: NaN3 (<0.1%). Pronto per l’uso. Dopo l'impiego, conservare il
reagente ermeticamente chiuso a 2°-8°C per 4 settimane. Non congelare.
•
•
1
MATERIALE NECESSARIO MA NON FORNITO
L'antisiero deve essere utilizzato con i seguenti reagenti:
• Calibratore Proteine S, (Ref. NCPP1)
• Controllo Proteine S/L, (Ref. NCPP2L)
• Controllo Proteine S/M, (Ref. NCPP2M)
• Controllo Proteine S/H, (Ref. NCPP2H)
• Diluente, (Ref. NDPP1)
• Tampone di Reazione, (Ref. NDPP2)
• Nefelometro Delta (Ref. 010138)
• Altro materiale di consumo e attrezzature sono descritte nel manuale d'uso del Nefelometro
Delta.
AVVERTENZE E PRECAUZIONI
Per ottenere risultati corretti e riproducibili, è necessario osservare le seguenti norme:
− Non usare i reagenti dopo la data di scadenza.
− Evitare accuratamente contaminazioni tra campioni e reagenti; a tal fine è consigliabile
usare pipette con puntali monouso per ogni campione e per ogni reattivo.
Per evitare contaminazioni personali ed ambientali, è necessario osservare le seguenti
norme di sicurezza:
− Utilizzare guanti monouso durante la manipolazione di materiale potenzialmente infetto e
durante il dosaggio.
− Non fumare, mangiare, bere o applicare cosmetici durante l'esecuzione del dosaggio.
− Evitare la produzione di schizzi e la formazione di aerosol; in tal caso, ripulire
accuratamente con ipoclorito di sodio ad una concentrazione del 3%. Il mezzo adoperato per la
pulizia deve essere trattato come residuo potenzialmente infetto ed eliminato secondo le
modalità sotto riportate.
− I reagenti per cui non si fornisce la scheda di sicurezza non contengono sostanze chimiche
pericolose o se presenti, queste sono al di sotto dei limiti di concentrazione definiti nel
D.Lgs.285/98 e nella direttiva CEE 91/155.
− Ai sensi del D.L. italiano n. 22 del 05.02.97, che fa riferimento alle direttive CEE
(91/156/CEE, 91/689/CEE, 94/62/CEE) tutti i rifiuti provenienti da lavorazioni manuali e/o in
automatico sono classificati rifiuti speciali pericolosi con codice di classificazione CER 180103;
devono quindi essere eliminati affidandoli a ditte autorizzate al ritiro ed allo smaltimento.
RACCOLTA E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI
Il dosaggio può essere effettuato su campioni di siero umano. I campioni di siero devono essere
completamente coagulati e, dopo essere stati centrifugati, non devono contenere particelle o
tracce di fibrina in sospensione; prima del dosaggio, accertarsi che i campioni siano
perfettamente limpidi. Pertanto, campioni fortemente lipemici o campioni congelati, che dopo lo
scongelamento si presentano torbidi, devono essere chiarificati mediante centrifugazione (10' a
ca.15000 g). I campioni di siero possono essere conservati a 2°-8°C per 8 giorni, per tempi più
lunghi (1 anno) si consiglia di congelarli a -20°C. Evitare ripetuti congelamenti e scongelamenti.
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PROCEDIMENTO OPERATIVO
− Tutte le fasi vengono eseguite automaticamente dallo strumento
− Attendere che i reagenti ed i campioni raggiungano la temperatura ambiente (15°-25°C).
− Seguire il procedimento operativo descritto sul manuale d'uso del Nefelometro Delta, che
prevede l'allestimento di quanto segue:
• Curva di calibrazione: viene preparata automaticamente dallo strumento mediante
diluizioni seriali del Calibratore (Ref. NCPP1) con l'apposito Diluente (Ref. NDPP1). Le
diluizioni effettuate vengono quindi impiegate per la calibrazione, che rimane valida purché il
dosaggio dei sieri di controllo rientri nei limiti attesi. La calibrazione deve essere
necessariamente ripetuta ogni qualvolta si utilizzi un nuovo lotto di antisiero.
− Campioni: prima del dosaggio, i sieri vengono diluiti automaticamente dallo strumento alla
diluizione di 1:20 utilizzando l'apposito Diluente (Ref. NDPP1). Qualora i valori dei campioni
siano al di fuori dell'ambito di misura è opportuno ripetere il test, utilizzando una diluizione
maggiore o minore.
CONTROLLO DI QUALITÀ INTERNO
Per ogni serie di campioni e ogni volta che si utilizza un nuovo flacone di antisiero, è necessario
effettuare un controllo di accuratezza e di precisione, utilizzando il Controllo per Proteine S/L
(Ref. NCPP2L), S/M (Ref. NCPP2M) e S/H (Ref. NCPP2H). I controlli vengono trattati come i
campioni in esame. Per i limiti attesi di tali controlli fare riferimento alla relativa tabella fornita a
corredo della confezione dei controlli stessi.
CALCOLO DEI RISULTATI
La valutazione dei campioni viene eseguita in modo automatico, mediante elaborazione dei
risultati con una funzione logit-log.
VALORI NORMALI
I valori di Ferritina sotto riportati sono soltanto indicativi. Si raccomanda a ciascun laboratorio di
stabilire i propri intervalli di riferimento.
Ferritina nel siero
µg/L
Uomini
20 - 280
Donne pre-menopausa
10 - 140
Donne post-menopausa
25 - 250
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CARATTERISTICHE METODOLOGICHE
SPECIFICITA'
Il reagente utilizzato risulta essere specifico per la determinazione della Ferritina.
SENSIBILITA'
La sensibilità della determinazione viene definita dal limite inferiore della curva di calibrazione e
dipende quindi dalla concentrazione delle proteine nel calibratore.
Gli ambiti di misura sono riportati nel manuale d'uso del Nefelometro Delta.
PRECISIONE
La precisione è stata valutata misurando la variabilità intra-saggio ed inter-saggio.
Intra-saggio
Inter-saggio
Proteina
n° repl.
Valore medio [g/L]
Ferritina
16
151.9
CV % n° repl. Valore medio [g/L] CV %
2.6
32
147.1
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CORRELAZIONE TRA METODI
Campioni di siero sono stati esaminati con il Reagente Radim Ferritina (y). Tali risultati sono
stati messi a confronto con un sistema nefelometrico di riferimento (x). Le correlazioni dei
risultati sono riportate nella tabella sottostante:
Proteina
Regressione lineare
Coeff. di correlazione
n° sieri
Ferritina
y = 1.11x – 7.92
0.99
97
LIMITI DEL TEST
La presenza di torbidità o di particelle può interferire nell'esecuzione del test. Si raccomanda,
pertanto, di rimuovere mediante centrifugazione eventuali particelle dovute a sieri non
completamente coagulati o a denaturazione proteica. Per motivazioni tecniche relative alla
produzione e/o all'invecchiamento dei campioni, i risultati ottenuti con i sieri di controllo e con i
sieri per il controllo di qualità inter-laboratori possono differire in funzione del metodo utilizzato.
Può quindi rendersi necessario valutare i risultati ottenuti facendo riferimento a valori specifici
per i diversi metodi utilizzati.
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FERRITIN
(Ref. NPP38N)
REAGENTS FOR QUANTITATIVE DETERMINATION OF FERRITIN
IN HUMAN SERUM WITH NEPHELOMETRIC METHOD
FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE ONLY
CLINICAL APPLICATIONS
The Ferritin molecule consists of 24 protein subunits, each with molecular weight of 20000 D.
The primary Ferritin function consists in accumulating intracellular iron, thereby protecting the
cells from toxic effects of unbound iron; it also represents a reservoir of easily released iron.
Ferritin in the organism is mostly found in liver cells and in the reticuloendothelial system of
liver, spleen and bone marrow. Minor Ferritin amounts are also found in heart, pancreas and
kidneys. Small, but significant quantities are found in human serum. The exact role of serum
Ferritin is unknown, however there is a close correlation between serum concentrations of this
protein and the status of body iron stores. Measuring serum Ferritin levels represents therefore
a simple, non-invasive method to evaluate iron metabolism. Serum Ferritin concentration trends
reflect iron balance variations due to age and sex. In normal subjects, the mean levels are
slightly higher at birth, after which they decrease during childhood until puberty is reached.
Subsequently, a progressive increase in iron storage is observed in the male body, with
consequent rise of Ferritin levels. In females, during their child bearing years, lower and more
stable values are observed until menopause, when Ferritinemia tends to rise. Ferritin levels
below normal ranges clearly indicate iron deficiency, thereby allowing a differential diagnosis
between iron and non-iron deficiency anemia. Iron overload, whether it is due to an increase in
iron uptake (as in idiopathic hemochromatosis) or to multiple transfusions, gives rise to an
increase in serum Ferritin levels which are often much higher than normal ranges. High Ferritin
levels may also be found in several clinical conditions such as: liver disease, infectious as well
as inflammatory processes, leukemia, Hodgkin's disease and other neoplasms.
PRINCIPLE OF THE ASSAY
The Ferritin in human serum forms immune complexes with specific antibodies adsorbed onto
polystyrene particles. With the light diffraction phenomenon produced by these complexes it is
possible to measure the intensity of scattered light using a nephelometer. This intensity is
proportional to the concentration of the Ferritin in the sample. The result is evaluated by
comparison with a calibrator of known concentration.
REAGENT PROVIDED WITH THE KIT
- Store the reagent at 2°-8 °C.
- The expiry date is given on the label and it refers to the closed component stored at 2°-8°C.
• Ferritin Reagent: 3 vials (2.8 mL) of latex coated with specific antibodies to human IgE.
Preservative: NaN3 (< 0.1 %). Ready for use. After each use store the reagent, sealed
hermetically, at 2°-8°C for 4 weeks. Do not freeze.
• Ferritin Supplementary Reagent: 2 vials (5.25 mL) of buffered solution of detergents.
Preservative: NaN3 (< 0.1 %). Ready for use. After each use store the reagent, sealed
hermetically, at 2°-8°C for 4 weeks. Do not freeze.
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MATERIALS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED
The Antiserum must be used with the following reagents:
• Protein Calibrator S, (Ref. NCPP1)
• Protein Control S/L, (Ref. NCPP2L)
• Protein Control S/M, (Ref. NCPP2M)
• Protein Control S/H, (Ref. NCPP2H)
• Diluent, (Ref. DPP1)
• Reaction Buffer, (Ref.DPP2)
• Delta Nephelometer (Ref. 010138)
• Disposable materials and samples as described in the instruction manual for the Delta
Nephelometer.
WARNINGS AND PRECAUTIONS
In order to obtain correct and reproducible results, the following rules must be observed:
- Do not use reagents beyond their expiry date
- Avoid any contamination among samples and reagents. For this purpose disposable tips
should be used for each sample and reagent.
In order to avoid personal and environmental contamination, the following precautions
must be observed:
- Use disposable gloves while handling any potentially infectious material and while
performing the assay.
- Do not smoke, eat, drink or apply cosmetics during the assay.
- Avoid splashing and aerosol formation; in such cases wash carefully with a 3% sodium
hypochlorite solution. Any such cleaning material must be treated as potentially infectious
and disposed of accordingly.
- The reagents for which a Safety Data Sheet is not supplied do not contain hazardous
chemical substances or, if they do, are below the concentration limits established by the
Italian decree D.Lgs.285/98 in compliance with EEC directive 91/155.
- According to Italian decree D.L. no. 22 dated 05.02.97, in compliance with EEC directives
(91/156/EEC, 91/689/EEC, 94/62/EEC) all waste products originating from either manual
and/or automated processing are classified as hazardous special waste materials (European
classification code180103). As such they must be eliminated by delegating to special
enterprises qualified in waste collection and disposal.
SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION
Fresh serum human samples are suitable for use. Serum samples should have coagulated
completely and, after centrifugation, should contain no particles or traces of fibrin. Prior to use
be sure that samples are perfectly clear. Specimens showing particulate matter or turbidity
should be centrifuged (10 minutes at approx. 15,000 x g) prior to use. Serum samples can be
stored at 2°-8 °C for 8 days, for longer periods (1 year) it is advisable to freeze samples at -20
°C. Repeated Freeze/thawing of samples should be avoided.
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ASSAY PROCEDURE
- All steps are automatically performed by the instrument.
- Allow the reagents and samples to warm up to room temperature (15° to 25°C).
- Consult the Delta Nephelometer manual for details regarding the operation of the instrument
in preparation of the following:
• Reference curve: is automatically prepared by instrument with serial dilutions of the
Calibrator (Ref. NCPP1) using the supplied Diluent (Ref. NDPP1). These dilutions are used
for calibration. The calibration is valid as long as control serum performances are
reproduced within their expected limits. Every time a different lot of antiserum is used a new
calibration curve must be prepared.
- Specimens: prior to use, serum samples are automatically diluted 1:20 for Ferritin assay
using the supplied Diluent (Ref. NDPP1). If the readings obtained are outside the assay
range the assay can be repeated using a higher or lower dilution of sample.
- Internal Quality Control: for each series of serum samples as well as the initial opening of
an antiserum vial, an accuracy and precision control should be assessed using the Protein
Controls S/L (Ref. NCPP2L), S/M (Ref. NCPP2M) and S/H (Ref. NCPP2H). The controls are
assayed and results evaluated as for patient samples. For the expected values refer to the
table provided with the control kit.
CALCULATION OF RESULTS
The evaluation of samples is automatic and the results are elaborated by means of a logit-log
function.
NORMAL VALUES
The Ferritin values reported below are indicative. We suggest that each laboratory establish its
own normal range:
Serum Ferritin
µg/L
Men
20 - 280
Women premenopausal
10 - 140
Women postmenopausal
25 - 250
ASSAY PERFORMANCE
SPECIFICITY
Antisera used are specific for determination of corresponding human Ferritin.
SENSITIVITY
The sensitivity of the assay is established by the lower limit of the reference curve and depends
therefore upon the concentrations of the proteins in the calibrator.
Typical measuring ranges are given in the Delta Nephelometer instruction manual.
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PRECISION
Precision was evaluated upon intra- and inter-assay variability.
Intra-assay
Inter-assay
Proteina
repl. n°
Mean value [g/L]
Ferritin
16
151.9
CV % repl. n°
2.6
Mean value [g/L]
CV %
147.1
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METHOD COMPARISON
Serum samples were assayed with Radim Reagent Ferritin (y). These results were confronted
with a reference nephelometric system(x). Correlation results yielded the following data:
Protein
Linear Regression
Coeff. of correlation
n° samples
Ferritin
y = 1.11x – 7.92
0.99
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LIMITS OF THE ASSAY
Turbidity or particles can interfere with the assay. Any particles formed due to serum samples
not completely coagulated, proteinic denaturation in samples must be removed by
centrifugation.
Due to technical manufacturing reasons and/or aged samples the results obtained for control
samples and inter-laboratory survey samples may differ depending on the assay method used.
It may therefore be necessary to assess these results in relation to method-specific target
values.
M363 - Rev.1
−
Maggio 2005
RADIM SpA - Via del Mare, 125 - 00040 Pomezia (Roma) Italia – Tel.: 0039/06/91249.1 Fax: 0039/06/91249.443; National Order Entry: 0039/06/91249.702; Export Dept.:
0039/06/91249.701; Customer Care: 0039/06/91249.700; www.radim.it
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