BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood

ISTRUZIONI PER L'USO
TERRENI SU PIASTRA
PRONTI ALL'USO
PA-254094.06
Rev.: July 2014
BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood
USO PREVISTO
BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood (agar selettivo per Gardnerella con 5%
di sangue umano) è un terreno differenziale parzialmente selettivo per l'isolamento di
Gardnerella vaginalis da campioni clinici.
PRINCIPI E SPIEGAZIONE DELLA PROCEDURA
Metodo microbiologico.
Gardnerella vaginalis è uno dei bacilli che causano le vaginiti.1-4 Benché il bacillo possa essere
presente nella microflora vaginale di un elevato numero di donne sane, la sua rilevanza quale
agente causale della vaginite non specifica (denominata anche vaginosi batterica) non è mai
stata messa in dubbio. Nelle donne sintomatiche, spesso G. vaginalis è associata ad anaerobi
quali Prevotella bivia, P. disiens, Mobiluncus, Peptostreptococcus e/o ad altri commensali della
flora uretrale o intestinale, ma non vaginale. Nelle vaginiti non specifiche, la normale flora di
Lactobacillus è ridotta o assente. Gardnerella vaginalis è il microrganismo indicatore della
vaginite non specifica, che in realtà è una infezione polimicrobica.3,4 Nonostante da alcuni anni si
raccomandi di usare metodi diversi per i campioni genitali, come la colorazione di Gram diretta,
numerosi laboratori continuano a preferire le colture.1,5 G. vaginalis può essere responsabile di
svariate condizioni patologiche, quali parto prematuro, corioamnionite, infezioni del tratto
urinario, infezioni del neonato e setticemia.6
È difficile isolare il bacillo sui terreni abituali perché Gardnerella e altri batteri come lattobacilli e
streptococchi possono produrre alfa-emolisi su terreni contenenti sangue di montone. Su terreni
contenenti sangue umano, tuttavia, Gardnerella vaginalis produce la caratteristica betaemolisi.1,7-9 Gardnerella vaginalis, benché spesso considerata Gram-negativa, in realtà è un
batterio Gram-positivo selezionabile su terreni contenenti colistina e acido nalidixico.1,10,11
BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood è basato su Columbia CNA Agar, che
fornisce le sostanze nutritive e gli inibitori colistina e acido nalidixico per inibire i batteri Gramnegativi ma non i Gram-positivi. Il terreno è integrato con peptone proteosico per stimolare la
crescita di Gardnerella. Viene aggiunta anche amfotericina B per ridurre la crescita di lieviti
(Candida) spesso presenti nei campioni vaginali. Il sangue umano viene aggiunto come
nutriente e per rivelare la diffusa beta-emolisi caratteristica del bacillo.
REAGENTI
BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood
Formula* per litro di acqua purificata
12,0 g
Digerito pancreatico di caseina
Digerito peptico di tessuto animale
5,0
Peptone proteosico
10,0
Estratto di lievito
3,0
Estratto di carne bovina
3,0
Amido di granturco
1,0
Cloruro di sodio
5,0
Agar
13,5
Colistina
0,01
Acido nalidixico
0,01
Amfotericina B
0,004
Sangue umano, defibrinato
5%
pH 7,3 ± 0,2
*Compensata e/o corretta per soddisfare i criteri di rendimento.
PA-254094.06
-1-
PRECAUZIONI
. Solo per uso professionale.
Non usare le piastre se presentano tracce di contaminazione microbica, alterazioni di colore,
essiccamento, incrinature o altri segni di deterioramento.
Per maneggiare i prodotti in condizioni asettiche, riconoscere i rischi biologici e smaltire i
prodotti usati, consultare le ISTRUZIONI GENERALI PER L'USO.
AVVERTENZA
Contiene materiale che presenta un potenziale rischio biologico. Il sangue
umano utilizzato per la preparazione di questo terreno è stato sottoposto ai
test per HIV, HBsAg e altri tipi di epatite, applicando i criteri e i metodi
attualmente impiegati dalle banche del sangue per lo screening del sangue
umano usato nelle trasfusioni, e non è risultato in alcun modo reattivo.
Poiché nessun test attualmente disponibile può garantire con certezza
assenza di HIV, virus dell’epatite e altri agenti infettivi, i campioni e questo
terreno devono essere trattati come se fossero in grado di trasmettere
malattie infettive. Si raccomanda pertanto di trattare questo terreno in
conformità con il Livello di Sicurezza Biologica 2.
CONSERVAZIONE E VITA UTILE
Alla consegna, conservare le piastre al buio a 2 – 8 °C nella confezione originaria fino a
immediatamente prima dell'uso. Evitare congelamento e surriscaldamento. Le piastre possono
essere inoculate sino alla data di scadenza (v. l'etichetta sulla confezione) e incubate per i
tempi di incubazione raccomandati.
Le piastre prelevate dalle confezioni da 10 già aperte possono essere usate per una settimana
se conservate in luogo pulito a 2 – 8 °C.
CONTROLLO DI QUALITÀ A CURA DELL’UTENTE
Inoculare i campioni rappresentativi con i seguenti ceppi (per informazioni più dettagliate, v.
ISTRUZIONI GENERALI PER L'USO). Incubare a 35 – 37 °C per 48 – 72 h in atmosfera
arricchita con anidride carbonica. In alternativa, il terreno inoculato può essere incubato in
atmosfera microaerobica, ad es., usando il sistema BD CampyPak.
Ceppi
Gardnerella vaginalis
ATCC 14018
Escherichia coli ATCC 25922
Proteus mirabilis
ATCC 14153
Candida albicans
ATCC 10231
Non inoculate
Risultati del test
Crescita da buona a eccellente, piccole colonie color
cenere circondate da diffusa beta-emolisi
Inibizione completa
Inibizione da parziale a completa; nessuna sciamatura
Inibizione da parziale a completa
Rosso (color sangue)
PROCEDURA
Materiali forniti
BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood (piastre impilate Stacker da 90 mm).
Microbiologicamente controllate.
Materiali non forniti
Terreni di coltura accessori, reagenti e apparecchiature di laboratorio necessarie.
Tipi di campioni
Si possono usare tamponi vaginali o altri campioni che si sospetta contengano G. vaginalis. È
preferibile eseguire due tamponi, uno per la coltura e l'altro per una colorazione di Gram diretta.
PA-254094.06
-2-
Se i campioni non vengono trattati immediatamente, usare un terreno di trasporto (ad es., BD
Port-A-Cul) (v. anche PERFORMANCE E LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA).
Procedura del test
Strisciare i campioni su BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood con una
tecnica di diluizione approvata e inoculare anche BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood.
Incubare entrambe le piastre a 36 ± 2 °C per 48 – 72 h in atmosfera aerobica arricchita con CO2
e preparare una colorazione di Gram diretta a partire da tutti i campioni vaginali.1,2,5
Risultati
Dopo l'incubazione, controllare su BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood se
sono presenti colonie da piccole a medie, circondate da diffusa beta-emolisi. Confrontare il
risultato con la crescita ottenuta su BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood. Se le colonie
beta-emolitiche appaiono solo sul terreno selettivo per Gardnerella, è altamente probabile che
siano presenti G. vaginalis. Se su entrambi i terreni appaiono colonie beta-emolitiche, controllare
con colorazione di Gram se il bacillo sul terreno selettivo per Gardnerella è piccolo, difteroide e
Gram-variabile. La presenza di cocchi nella colorazione di Gram ottenuta da una colonia betaemolitica su BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood indica che i bacilli isolati
sono streptococchi beta-emolitici o stafilococchi, ma non G. vaginalis. Si possono tralasciare le
colonie alfa- e non-emolitiche. Su terreni contenenti sangue di montone, Gardnerella produce
piccole colonie alfa- o non-emolitiche. Se la coltura presenta anche altri bacilli beta-emolitici,
effettuare una subcoltura delle colonie isolate da BD Gardnerella Selective Agar with 5%
Human Blood su entrambi i terreni e incubare come indicato in precedenza. È necessario
condurre ulteriori test biochimici per l'identificazione definitiva degli isolati. Consultare la
bibliografia.1,7,9
Se la paziente è affetta da vaginosi batterica, nella colorazione di Gram diretta dei campioni
vaginali appaiono le “cellule indizio” (= cellule dell'epitelio vaginale rivestite di piccoli batteri
Gram-variabili).1,5
Interpretazione dei risultati
Se la G. vaginalis viene isolata nei campioni vaginali, valutare attentamente anche i sintomi
soggettivi e oggettivi prima di porre la diagnosi. Se la Gardnerella è la causa della vaginosi
batterica, le pazienti lamentano un incremento di secrezioni maleodoranti. Il pH delle secrezione
è > 4,5 e le “cellule indizio” sono presenti nella colorazione di Gram. Per informazioni dettagliate,
consultare la bibliografia.1-3,5
PERFORMANCE E LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA
BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood è un terreno parzialmente selettivo per
l'isolamento di Gardnerella vaginalis.4,11 G. vaginalis produce colonie beta-emolitiche su terreni
con sangue umano e colonie alfa-emolitiche su terreni contenenti sangue di montone.
BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood non inibisce altri bacilli Gram-positivi,
come streptococchi, stafilococchi o Listeria, che possono eventualmente produrre beta-emolisi
su terreni contenenti sangue umano ed essere presenti nei campioni vaginali. Pertanto, sono
necessari esami microscopici e biochimici per confermare se un isolato è realmente costituito da
G. vaginalis.
La presenza di G. vaginalis in un campione vaginale non vuol dire necessariamente che il bacillo
isolato sia la causa di un'infezione.
Non usare BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood per individuare le reazioni
emolitiche di bacilli diversi dalla Gardnerella vaginalis.
BIBLIOGRAFIA
1. Clarridge, J.E., and C.A. Spiegel. 1995. Corynebacterium and miscellaneous irregular grampositive rods, Erysipelothrix, and Gardnerella. In: Murray, P. R., E. J. Baron, M. A. Pfaller, F.
C. Tenover, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 6th ed. American
Society for Microbiology, Washington, D.C.
2. Spiegel, C.A. 1991. Bacterial vaginosis. Clin. Microbiol. Rev. 4: 485-502.
PA-254094.06
-3-
3. Hammann, R., Lang, N., and H. Werner. 1984. Die Rolle von Gardnerella vaginalis und
Anaerobiern – Ätiologie der unspezifischen Kolpitis. Fortschr. Med. 102: 255-258.
4. Hammann, R., A. Kronibus, N. Lang, and H. Werner. 1987. Quantitative studies on the
vaginal flora of asymptomatic women and patients with vaginitis and vaginosis. Zbl. Bakt. A
265: 451-461.
5. Spiegel, C.A., Amsel, R., and K.K. Holmes. 1983. Diagnosis of bacterial vaginosis by direct
Gram stain of vaginal fluid. J. Clin. Microbiol. 18: 170-177.
6. Martius, J., and D.A. Eschenbach. 1990. The role of bacterial vaginosis as a cause of
amniotic fluid infection, chorioamnionitis and prematurity – a review. Arch. Gynecol. Obstet.
247: 1-13.
7. Greenwood, J.R. et al. 1977. Haemophilus vaginalis (Corynebacterium vaginale) method for
isolation and rapid biochemical identification. Health Lab. Sci. 14: 102
8. Kretzschmar, U.M., R. Hammann, H.J. Kutzner. 1991. Purification and characterization of
Gardnerella vaginalis hemolysin. Curr. Microbiol. 23: 7-13.
9. Piot, P., et al. 1982. Identification of Gardnerella (Haemophilus) vaginalis. J. Clin. Microbiol.
15: 19-24.
10. Harper, J.J, and G.H.G. Davis. 1982. Cell wall analysis of Gardnerella vaginalis
(Haemophilus vaginalis). Int. J. Syst. Bacteriol. 32: 48-50.
11. Goldberg, R.L. and J.A. Washington II. 1976. Comparison of isolation of Haemophilus
vaginalis (Corynebacterium vaginale) from Peptone-Starch-Dextrose Agar and Columbia
Colistin-Nalidixic Acid Agar. J. Clin. Microbiol. 4: 245.
CONFEZIONE/DISPONIBILITÀ
BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood
N. di cat. 254094
Terreni su piastra pronti all'uso, confezioni da 20
N. di cat. 257664
Terreni su piastra pronti all'uso, confezioni da 120
ULTERIORI INFORMAZIONI
Per ulteriori informazioni, rivolgersi al rappresentante BD di zona.
Becton Dickinson GmbH
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
[email protected]
http://www.bd.com
http://www.bd.com/europe/regulatory/
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection
BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company.
© 2014 BD
PA-254094.06
-4-