Presentazione standard di PowerPoint

ALLflow
Elution Technologies
Milk Proteins Rapid Test
Lateral Flow kit
Cat. N. ETMILK-1004
Kit per la rilevazione rapida delle proteine del latte
in campioni alimentari ed ambientali
Manuale d’uso
Leggere attentamente il manuale prima di procedere all’uso del kit
Via San Geminiano, 4
41030 San Prospero (MO)- Italy
(: +39 059 8637161
: +39 059 7353024
*: [email protected]
: www.generon.it
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User Manual - ALLflow Milk Proteins Rapid Kit Rev. 1 04/01/2016
1 – Principio del test e suo utilizzo
Il test si basa sulla tecnologia Lateral Flow Device (LFD) utilizzando un metodo analitico
immunocromatografico in cui un anticorpo policlonale specifico per l’identificazione delle proteine
totali del latte (caseina e del siero del latte) è immobilizzato su un supporto solido.
Questo test è stato progettato per l’identificazione di bassi livelli di proteine totali del latte fino a 2
ppm (la sensibilità dipende dalla matrice di utilizzo) in materie prime, prodotti finiti, acque di lavaggio
industriale (CIP - Clean in Place Solution), campionamenti da superficie mediante tamponi.
Il test può essere utilizzato per identificare proteine del siero del latte parzialmente idrolizzate fino a 2
ppm. I campioni che contengono una quantità maggiore del 3% di latte bovino posso generare falsi
negativi, per questa ragione è stato inserito un controllo interno, rappresentato dalla formazione di
una terza linea nel test (Hook Line). Se non si evidenzia la formazione di questa linea durante
l’esecuzione del test questo potrebbe indicare un sovraccarico del test, perciò è necessario diluire il
campione.
Se la linea di controllo non è visibile durante l’esecuzione del test, il test è da ritenersi non valido.
Come tutti i metodi di analisi per il settore alimentare anche questo test deve essere testato sulla
specifica matrice di interesse per escludere la presenza di inibitori che possono determinare risultati
non attendibili. Questo non è necessario per i test di igiene delle superfici.
Materiale
Il kit include: 25 ml di soluzione di estrazione (Extraction Buffer), 25 Lateral Flow Devices (LFD), 26
provette da microcentrifuga da 2 ml. II kit non include: tamponi per il prelievo del campione, pipette.
Istruzioni di conservazione
Le soluzioni possono essere conservate a temperatura ambiente per 90 giorni. Per tempi superiori
conservare a 4-8°C. Non congelare nessun componente nel kit. I reagenti non devono essere esposti
alla luce ultravioletta o a fonti di calore prolungato. Conservare in luogo pulito e asciutto.
Strumenti richiesti per l’esecuzione dell’analisi
Matrice
Centrifuga
Vortex
Bilancia
Timer
Liquida
Non richiesta
Non richiesto
Non richiesta
Richiesto
Solida
Non richiesta
Non richiesto
Richiesta
Richiesto
Liquida
contenente
cioccolata
Richiesta
Non richiesto
Non richiesta
Richiesto
Solida
contenente
cioccolata
Richiesta
Non richiesto
Richiesta
Richiesto
Indicazioni generali
• Ogni lotto di soluzione viene validata in modo specifico per ciascun lotto LFD e non è
intercambiabile con altri lotti.
• Per evitare problemi di contaminazioni non utilizzare la stessa pipetta per analizzare più campioni.
• Attendere che tutti i reagenti e il materiale siano a temperatura ambiente prima di effettuare
l’analisi, utilizzare la quantità richiesta di reagente e aver cura di conservare il rimanente in un luogo
refrigerato.
• Quattro gocce prelevate con una pipetta corrispondono a 100 µl circa.
• Per assistenza consultare i tecnici Generon (www.generon.it - email: [email protected]) o in
alternativa il sito www.elutiontechnologies.com dove sono disponibili istruzioni video per il corretto
utilizzo del test.
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User Manual - ALLflow Milk Proteins Rapid Kit Rev. 1 04/01/2016
2 – Preparazione dei campioni ambientali
2.1 Preparazione di campioni utilizzando la Cleaning Place Solution (CIP solution)
Questo passaggio consente di preparare la soluzione di estrazione per la successiva analisi per
l’identificazione del glutine.
1. Prelevare 800 µl di soluzione di estrazione (Extraction Buffer) e deporli in una provetta
da microcentrifuga.
2. Utilizzando la stessa pipetta aggiungere 200 µl di soluzione CIP, mescolare bene per
circa 30 secondi.
3. Vedi procedure specifiche per l’esecuzione del test LFD.
Per ottenere i migliori risultati il pH del campione dovrebbe essere compreso tra 5 e 10. Se il pH è al di
sopra o al di sotto di questi livelli, effettuare una diluizione mantenendo la proporzione 1:1 (100 µl di
campione e 100 µl di soluzione) fino a che il pH non rientra in questi parametri. Questo può ridurre la
sensibilità fino a 4 ppm.
Se si analizza più di un campione, assicuratevi di non utilizzare la stessa pipetta per ciascun campione
per evitare contaminazione incrociata.
2.2 Preparazione di campioni utilizzando un prelievo mediante tampone
1. Prelevare dal kit e siglare una microprovetta da centrifuga.
2. Aggiungere 500 µl di soluzione di estrazione (Extraction Buffer) nella provetta da
microcentrifuga.
3. Imbibire un tampone pulito nella soluzione contenuta nella provetta
microcentrifuga avendo cura nell’estrazione di eliminare la soluzione in eccesso.
da
4. Appoggiare il tampone bagnato sulla superficie da analizzare e strofinare la superficie
di interesse (vedi figura sottostante).
5. Inserire il tampone nella provetta da microcentrifuga e mescolare diverse volte in
modo da rilasciare il campione nella soluzione di estrazione.
6. Vedi procedure specifiche per l’esecuzione del test LFD.
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3 – Preparazione dei campioni alimentari
2.3 Preparazione del campione liquido (prodotto finito e ingrediente grezzo)
1. Prelevare dal kit e siglare una microprovetta da centrifuga.
2. Aggiungere 900 µl di soluzione di estrazione (Extraction Buffer) nella
microprovetta da centrifuga.
3. Aggiungere 100 µl del campione dopo averlo mescolato.
4. Mescolare bene.
5. Vedi procedure specifiche per l’esecuzione del test LFD.
2.4 Preparazione del campione solido e contenente cioccolato (liquido e solido)
Misurare 500 µl di campione rappresentativo del vostro ingrediente/prodotto fino a ottenere una
miscela omogenea in una provetta da 2ml.
A. Cioccolato liquido
1. Aggiungere 500 µl di soluzione di estrazione (Extraction
Buffer).
2. Procedere con le istruzioni del punto C. Per alcune
matrici questo passaggio può ridurre la sensibilità fino
a 4 ppm.
B. Campione solido
1. Macinare un campione rappresentativo del vostro ingrediente/prodotto e
macinarlo fino a ottenere una miscela omogenea.
2. Prelevare un Prelevare 0.2 g del campione macinato trasferendolo in una
microprovetta da centrifuga.
3. Aggiungere la soluzione di estrazione (Extraction Buffer) preriscaldata a ~50°C fino
alla tacca che indica 2 ml.
4. Mescolare bene facendo fondere l’eventuale cioccolata presente.
5. Procedere con le istruzioni del punto F.
C. Prelevare una provetta da 2 ml e siglarla.
D. Misurare 900 µl di soluzione di estrazione (Extraction Buffer)
E. Aggiungere 100 µl di campione ben mescolato (da punto A).
F.
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Centrifugare per 20-30 secondi a 5000-7000 rpm.
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4 – Procedure specifiche per l’esecuzione del test
Prima dell’uso attendere che il test LFD raggiunga la temperature ambiente
1. Prelevare una strip LFD dalla confezione e posizionarla su di una superficie pulita, piatta e asciutta.
2. Prelevare 100 μl dallo strato centrale della soluzione, utilizzando la stessa pipetta di trasferimento
utilizzata per la preparazione dell'estratto.
Depositare 100 μl del campione sull’area di applicazione (apertura rotonda) ad una estremità del
supporto LFD e attendere, dopo aver avviato il timer, 11 minuti.
Interpretazione dei risultati ottenuti
Disporre il test seguendo i seguenti riferimenti:
La linea superiore (linea di controllo o control line), sarà alla sinistra della lettera C.
La linea nella parte mediana (line di controllo interno o hook line)sarà alla sinistra della
lettera H.
La linea inferiore (linea del test o test line), apparirà a fianco della lettera T sul LFD.
Tabella riassuntiva dei risultati
Tempo di
lettura
Linea Controllo
Linea
“Hook”
Linea
Test
Risultato Test
11 minuti
(+/-1 minuto)
Assente
Presente o
Assente
Presente o
Assente
Test non
valido
11 minuti
(+/-1 minuto)
Presente
Presente
Presente
Valido
Maggiore di 2
ppm
11 minuti
(+/-1 minuto)
Presente
Presente
Assente
Valido
Minore di 2 ppm
Dopo 15 minuti
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Lettura non attendibile
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Concentrazione
5 – Domande frequenti
Domanda: il campione non riesce a migrare lungo la strip entro i primi 5 minuti.
Risposta: potrebbe essere necessario centrifugare il campione se questo non è stato già fatto durante
la preparazione. Se il campione è già stato centrifugato diluire ulteriormente il campione
mantenendo la proporzione 1:1 con il tampone. Questo potrebbe ridurre la sensibilità di 4 ppm per
alcune matrici.
Domanda: sulla linea del test compare un punto rosso ma tutto il resto è chiaro.
Risposta: centrifugare il campione e ripetere utilizzando un nuovo test. La causa potrebbe essere il
particolato contenuto nel campione stesso.
6 – Dichiarazione di non responsabilità
Generon srl non si assume responsabilità di alcun tipo, esplicite o implicite, eccetto garantire che i
materiali di cui i propri prodotti si compongono sono di qualità standard. In caso di materiale
difettoso, Generon srl si impegna a fornire un prodotto sostitutivo. Generon srl non è tenuta a
rispondere per qualunque danno, inclusi danni speciali o consequenziali o spese che derivano
direttamente o indirettamente dall`uso di questo prodotto. L’acquirente può duplicare questo
documento, in tutto o in parte, solo per scopi interni, a condizione che questa nota venga riportata in
tutte le copie. Nella duplicazione l’acquirente si impegna a compiere ogni ragionevole sforzo per
impedire l'uso non autorizzato e la distribuzione delle informazioni sulla proprietà. Questo manuale è la
semplice traduzione in lingua italiana del manuale in lingua straniera presente nel kit.
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