Staphaurex Plus [IT] - Thermo Fisher Scientific

IT
informazioni riportate sulle etichette dei prodotti.
REAGENTI
Componenti del kit
Staphaurex Plus*
Staphaurex Plus*
FINALITÀ D’USO
Staphaurex Plus* è un test rapido di agglutinazione al lattice
per l’identificazione degli stafilococchi che esprimono il fattore
di coagulazione, la proteina A e/o gli antigeni di superficie
caratteristici dello Staphylococcus aureus.
Riassunto e spiegazione del test
Lo Staphyloccocus aureus possiede numerose proprietà utili
per confermarne l’identificazione. Tra queste figurano la
coagulasi libera, il fattore di coagulazione (coagulasi legata), la
termonucleasi e la proteina A1. Il test di coagulasi in provetta
evidenzia la coagulasi libera ed è considerato quale test di
riferimento per S. aureus1. Questo test richiede tuttavia dalle 4
alle 24 ore e i campioni di plasma possono mostrare variazioni da
lotto a lotto2. Negli ultimi dieci anni sono stati realizzati dosaggi
di agglutinazione di particelle per fornire un’identificazione
molto più rapida3,4. Questi test di prima generazione sono basati
sull’uso di particelle al lattice o di globuli rossi rivestiti o solo
con fibrinogeno per rilevare il fattore di coagulazione o con
fibrinogeno e immunoglobulina G (IgG) per rilevare sia il fattore
di coagulazione sia la proteina A dello stafilococco.
Recentemente è stato osservato che questi test possono non
rilevare alcuni ceppi di S. aureus, in particolare una parte dei ceppi
meticillino/oxacillina-resistenti (MRSA)5,6,7. Alcuni di questi ceppi
possono esprimere livelli non rilevabili del fattore di coagulazione
e di proteina A8.
Due antigeni, somatico di tipo 189 e capsulare di tipo 510,11 sono
stati associati al fenotipo meticillino-resistente. L’incorporazione
di antisieri contro questi antigeni può migliorare la sensibilità
dei dosaggi di agglutinazione per i ceppi MRSA. Indagini su ceppi
risultati negativi con i test rapidi hanno dimostrato che anticorpi
contro un singolo antigene somatico o capsulare sono insufficienti
per potere rilevare tutti i ceppi negativi con i test di agglutinazione
di particelle di prima generazione. Staphaurex Plus* utilizza biglie
al lattice rivestite di fibrinogeno per evidenziare la maggior parte
dei ceppi di interesse clinico e di IgG specifiche per un gruppo
attentamente selezionato di ceppi negativi con i test di prima
generazione.
PRINCIPIO DEL METODO
Il Test al lattice Staphaurex Plus* è basato sull’uso di particelle al lattice
di colore giallo rivestite di fibrinogeno e IgG di coniglio specifiche per
S. aureus. Quando una goccia del reagente viene miscelata su un
cartoncino con lo S. aureus, si verifica una rapida agglutinazione
dovuta all’interazione tra (i) il fattore di coagulazione e il
fibrinogeno, (ii) il frammento Fc delle IgG e la proteina A o (iii)
IgG specifiche e antigeni cellulari di superficie.
Alcuni ceppi di Staphylococcus spp., in particolare S. saprophyticus,
possono causare un’aggregazione aspecifica delle particelle
al lattice. Per questo test viene pertanto fornito un Lattice di
controllo per l’identificazione di tali reazioni non specifiche.
1. Lattice test
(tappo giallo)
2. Lattice di controllo
(tappo grigio)
3. Cartoncini di
reazione monouso
(RT64/R30369001)
4. Bastoncini di
miscelazione monouso
5. Istruzioni per l’uso
ZL33/R30950102
150 test
ZL34/R30950201
450 test
1 flacone contagocce
3 flaconi contagocce
1 flacone contagocce
3 flaconi contagocce
2 confezioni
6 confezioni
3 mazzetti
1
9 mazzetti
1
Descrizione dei reagenti, preparazione per l’uso e
raccomandazioni per la conservazione
Fare riferimento anche alla sezione Avvertenze e precauzioni
di impiego.
Le sospensioni al lattice vengono fornite pronte per l’uso e devono
essere conservate in posizione verticale a 2-8°C, affinché
mantengano la propria attività almeno fino alla data di scadenza
indicata sull’etichetta del flacone. Non congelare. Evitare la
conservazione a temperatura ambiente (15-30°C). Proteggere il
reagente da luce intensa quando è posizionato sulla superficie
di lavoro.
Lattice test
Una sospensione tamponata di
particelle al lattice di polistirene di
colore giallo rivestite di fibrinogeno
umano e di IgG di coniglio. Contiene
Bronidox® allo 0,05% come
conservante12.
I materiali di origine umana, analizzati
per rilevare l’eventuale presenza
dell’antigene di superficie del virus
dell’epatite B e degli anticorpi antiHCV e anti-HIV-1/HIV-2, sono risultati
negativi.
Lattice di controllo
Una sospensione tamponata di
particelle al lattice di polistirene di
colore giallo rivestite di proteine
sieriche bovine, non reattive con
S. aureus. Contiene Bronidox® allo
0,05% come conservante12.
I Cartoncini di reazione e i Bastoncini di miscelazione devono
essere conservati a temperatura ambiente (15-30°C). Staphaurex
Plus* (ZL33/R30950102 e ZL34/R30950201) è stato prodotto per
l’uso con i Cartoncini di reazione monouso RT64/R30369001.
Non sostituire altri vetrini monouso con i Cartoncini di reazione
monouso RT64/R30369001 quando i campioni sono analizzati
con lo Staphaurex Plus*.
AVVERTENZE E PRECAUZIONI DI IMPIEGO
Esclusivamente per uso diagnostico in vitro.
Esclusivamente per uso professionale.
Attenzione: questo prodotto contiene gomma naturale secca.
Per informazioni su componenti potenzialmente pericolosi, fare
riferimento alle schede di sicurezza fornite dal produttore e alle
PRECAUZIONI DI SICUREZZA
1. ATTENZIONE: questo kit contiene componenti di origine
umana. Nessuno dei metodi analitici conosciuti può garantire
in modo assoluto che prodotti di origine umana non possano
trasmettere infezioni. Pertanto, tutti i materiali di origine
umana devono essere considerati potenzialmente infettivi. Si
raccomanda di trattare questi reagenti e i campioni in esame
in accordo con le norme di buona pratica di laboratorio.
2. Dopo l’uso il materiale non monouso deve essere sterilizzato
con un’adeguata procedura; il metodo preferito è la
sterilizzazione in autoclave per 15 minuti a 121°C. Il materiale
monouso deve essere sterilizzato in autoclave o incenerito.
Gli schizzi di materiali potenzialmente infettivi devono essere
immediatamente asciugati con carta assorbente e l’area
interessata deve essere decontaminata con un disinfettante
battericida d’uso comune. I materiali utilizzati per asciugare
gli schizzi, inclusi i guanti, devono essere smaltiti seguendo
la stessa procedura prevista per i rifiuti a rischio biologico.
3. Utilizzare un camice da laboratorio, guanti monouso e una
protezione per gli occhi quando si trattano i campioni e si
esegue il dosaggio. Al termine, lavarsi accuratamente le mani.
4. Se utilizzati in conformità ai principi di buona pratica di
laboratorio, agli standard operativi d’igiene del lavoro
e alle presenti Istruzioni per l’uso, i reagenti forniti non
rappresentano alcun rischio per la salute.
recauzioni analitiche
1. Non usare i reagenti oltre la data di scadenza indicata.
2. I Reagenti al lattice devono essere portati a temperatura
ambiente (15-30°C) prima dell’uso. I Reagenti al lattice che
presentano segni di aggregazione o “granulosità” prima
dell’uso potrebbero essere stati congelati e non devono essere
utilizzati.
3. È importante che i flaconi contagocce siano utilizzati tenendoli
in posizione verticale e che la goccia si formi all’estremità
del beccuccio. Se il beccuccio è bagnato potrebbe formarsi
una goccia di volume errato nell’area circostante e non
esattamente all’estremità; in questo caso occorre asciugare
il beccuccio prima di procedere.
4. Non toccare le aree di reazione dei cartoncini.
5. Non interpretare le agglutinazioni che compaiono dopo
30 secondi come un risultato positivo. Con alcuni isolati
coagulasi-negativi, una miscelazione con movimento rotatorio
prolungata può dare luogo a reazioni false-positive.
6.Evitare la contaminazione microbiologica dei reagenti in
quanto può ridurre la durata del prodotto e causare risultati
erronei.
Prelievo e conservazione del campione
Per ulteriori informazioni sul prelievo e il trattamento del
campione, si consiglia di consultare la bibliografia specializzata1.
Le colture possono essere analizzate a partire da uno qualsiasi
dei seguenti terreni:
Agar sangue
Agar nutriente
Agar triptone soia
Agar triptone soia con sangue al 5%
Agar sangue Columbia
Agar CNA Columbia
Agar Mueller Hinton on sangue
al 5%
Agar Baird-Parker
Agar sale-mannitolo† †Nota: i campioni in crescita sui terreni contenenti antibiotici o su
un terreno a elevato contenuto di sali quali agar sale-mannitolo
possono dare luogo a un’agglutinazione contenente aggregati
viscosi.
SI RACCOMANDA L’USO DI COLTURE FRESCHE SVILUPPATESI
DURANTE LA NOTTE.
Procedura
Materiali forniti
Sono forniti materiali sufficienti per 150 (ZL33/R30950102) o 450
test (ZL34/R30950201) (fare riferimento alla sezione Componenti
del kit).
Procedura del test
Si prega di leggere attentamente la sezione Precauzioni analitiche
prima di eseguire il test.
Fase 1
Agitare energicamente i reagenti al lattice
prima dell’uso e controllarne un’eventuale
aggregazione. Per ulteriori informazioni,
fare riferimento alle sezioni Controllo di
qualità e Controllo visivo.
Fase 2
Dispensare una goccia di Lattice test
1 goccia
perciascun campione da analizzare
e una goccia di Lattice di controllo in
cerchi separati di un Cartoncino di
reazione (RT64/R30369001). Accertarsi
che i flaconi contagocce siano tenuti
in posizione verticale in modo da
dispensare una goccia di volume adeguato.
Fase 3
Raccogliere con un bastoncino di
miscelazioneuna quantità di coltura, da
una coltura pura o da colonie ben isolate,
sufficiente a coprirne l’estremità smussata.
Indicativamente deve essere utilizzata una
quantità di coltura pressoché equivalente
a 6 colonie di dimensioni medie.
Fase 4Emulsionare il campione
Emulsionare
della coltura nella goccia di
il campione
Lattice test strofinandolo con
l’estremità piana del bastoncino.
Strofinare accuratamente, ma non
troppo energicamente per evitare
che la superficie del cartoncino possa
danneggiarsi. Alcuni ceppi, in particolare
di specie diverse da S. aureus, sono
difficili da emulsionare; ciò va tenuto in
considerazione al momento della lettura
dei risultati poiché il lattice potrebbe
presentare un aspetto “granuloso” o
“fibroso” a causa della presenza di granuli
di coltura non emulsionata. Distribuire
il lattice fino a coprire all’incirca la metà
della superficie del cerchio. Procedere
allo smaltimento del bastoncino di
miscelazione nel rispetto delle norme di
sicurezza vigenti.
Fase 5
Con un nuovo bastoncino,
Emulsionare
emulsionare una quantità simile di il campione
campione della stessa coltura
nel Lattice di controllo (fare
riferimento alla fase 4). Procedere allo
smaltimento del bastoncino di
miscelazione nel rispetto delle norme di sicurezza
vigenti.
Fase 6
Agitare lentamente il cartoncino
Agitare con
con movimento rotatorio per un
movimento
massimo di 30 secondi, prestando
rotatorio
attenzione al contempo all’eventuale
comparsa di agglutinazione. Il cartoncino
deve essere tenuto a una normale distanza
di lettura dagli occhi (25-35 cm). Non usare
lenti di ingrandimento.
Fase 7Eliminare il Cartoncino di reazione usato
nel rispetto delle norme di sicurezza
vigenti.
Risultati
Risultato positivo
L’agglutinazione del Lattice test accompagnata dall’assenza di
agglutinazione del Lattice di controllo indica la presenza di coagulasi,
proteina A o antigeni comunemente riscontrati nella coltura S. aureus
in esame. La maggior parte delle reazioni positive avviene quasi
istantaneamente. Si possono ottenere risultati falsi positivi se il test
viene letto dopo oltre 30 secondi.
Risultato negativo
L’assenza di agglutinazione in entrambi i reagenti indica che la coltura
in esame probabilmente non è della specie S. aureus.
Risultato non interpretabile
Un’agglutinazione visibile del Lattice di controllo, più o meno
accentuata rispetto al Lattice test, indica una reazione aspecifica.
Controllo di qualità
I test di controllo qualità devono essere effettuati con ciascuna
spedizione e nuovo numero di lotto dei kit ricevuti. Ogni laboratorio
deve rispettare le norme vigenti locali e governative.
Qualsiasi deviazione dai risultati previsti indica possibili problemi
dei reagenti che devono essere risolti prima della seduta successiva.
Controllo visivo
Le sospensioni al lattice devono essere sempre esaminate per
riscontrare l’eventuale presenza di aggregazione nel momento in cui
sono dispensate sul Cartoncino di reazione e, se si osservano segni
di agglutinazione prima dell’aggiunta del campione in esame,
la sospensione non deve essere utilizzata. Dopo un periodo di
conservazione prolungato potrebbero formarsi degli aggregati o
potrebbe verificarsi un essiccamento del lattice intorno all’apertura
dei flaconi. In questo caso, agitare energicamente i flaconi per qualche
secondo fino a quando i reagenti al lattice non siano stati riportati in
sospensione.
Procedura di controllo
Le prestazioni dei reagenti Lattice test e Lattice di controllo devono
essere confermate utilizzando colture fresche sviluppatesi durante la
notte di ceppi batterici di riferimento, seguendo il metodo descritto
nella sezione Procedura del test. Ceppi di riferimento adeguati sono
illustrati di seguito.
SpeciERisultato previsto
LatticeLATTICE
Test
DI CONTROLLO
S. aureus (ATCC® 25923TM)
S. epidermidis (ATCC® 12228TM)
+–
––
INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI
Una reazione positiva indica la presenza di fattore di coagulazione,
proteina A e/o antigeni di superficie cellulare nella coltura in analisi;
un risultato negativo ne indica l’assenza.
Limiti del metodo
1. I campioni in crescita su terreni contenenti antibiotici o su un
terreno a elevato contenuto di sali quali agar sale-mannitolo
possono dare luogo a un’agglutinazione contenente aggregati
viscosi.
2. Alcune specie di stafilococco oltre a S. aureus, in particolare
S. hyicus, S. intermedius, S. lugdunensis e S. schleiferi, possono
dare luogo a risultati positivi nei test di coagulasi e possono
anche reagire nelle procedure al lattice rapide. All’occorrenza,
queste specie possono essere identificate con procedure di analisi
biochimiche. S. hyicus e S. intermedius si riscontrano raramente
in laboratori clinici.
3. Alcune specie di stafilococchi coagulasi-negative, quale
S. capitis, possiedono dei fattori di legame delle proteine
plasmatiche che non reagiscono nel test Staphaurex Plus*.
Tuttavia, alcuni ceppi identificati biochimicamente come S.
saprophyticus hanno fornito reazioni debolmente positive e può
essere necessario procedere a un’ulteriore identificazione degli
isolati urinari.
4. Alcuni streptococchi, nonché possibilmente altri organismi,
possiedono immunoglobuline o altri fattori di legame delle
proteine plasmatiche che possono reagire nel test al lattice; vi
sono numerosi batteri come E. coli che sono in grado di agglutinare
in modo non specifico le particelle al lattice. Per eliminare la
potenziale interferenza da parte di questi organismi, deve essere
eseguita una colorazione di Gram e il test della catalasi in modo da
analizzare soltanto gli organismi dalla morfologia stafilococcica.
5. Tutti i risultati dubbi devono essere controllati per verificarne la
purezza e identificati mediante un metodo alternativo.
RISULTATI ATTESI
Forte agglutinazione con colture di S. aureus, nessuna agglutinazione
con stafilococchi dotati di fattore di coagulazione, proteina A o antigeni
di superficie caratteristici di S. aureus.
Caratteristiche specifiche di prestazione
Le prestazioni di Staphaurex Plus* sono state valutate presso quattro
laboratori microbiologici di riferimento nel Nord America e due in
Europa su un totale di 646 isolati clinici di routine (presumibilmente
stafilococcici) e 671 colture conservate. Le colture sono state analizzate
in parallelo con il test in provetta per la coagulasi, la colorazione di
Gram e almeno un test rapido alternativo per l’identificazione di S.
aureus. I risultati sono sintetizzati nelle Tabelle 1 e 2.
Isolati clinici
Altri stafilococchi
È stato inoltre analizzato un totale di 157 isolati freschi stafilococcici
non-S. aureus. Il test Staphaurex Plus* ha fornito un risultato negativo
per 150 di questi isolati che comprendevano S. saprophyticus,
S. epidermidis e S. haemolyticus. Le restanti sette colture che hanno
dato luogo a un risultato positivo con il test Staphaurex Plus*
comprendevano tre colture positive anche con un test al lattice
rapido alternativo.
La specificità del test Staphaurex Plus* con questo gruppo di colture
stafilococciche non-S. aureus è risultata pari al 95,54% (150/157).
Prestazioni complessive del test Staphaurex Plus* al confronto con
il test in provetta della coagulasi su isolati di S. aureus
Sensibilità relativa
99,4%
Specificità relativa
95,5%
Concordanza complessiva
98,4%
NOTA: il test Staphaurex Plus* ha fornito risultati non interpretabili
con lo 0,15% (1/646) delle colture fresche analizzate, che sono state
escluse dalla tabella sopra riportata.
Colture conservate
S. aureus meticillino-resistenti (MRSA)
È stato analizzato un totale di 282 colture conservate di S. aureus
resistenti a uno o più antibiotici. Staphaurex Plus* ha identificato
correttamente 281 di questi isolati. La coltura con risultato discrepante
è risultata positiva a un test in provetta per la coagulasi e negativa a un
test al lattice rapido alternativo.
La sensibilità del test Staphaurex Plus* con questo gruppo di colture
meticillino-resistenti (MRSA) è risultata pari al 99,65% (281/282).
S. aureus meticillino-sensibili (MSSA)
Il test Staphaurex Plus* ha correttamente identificato 242 delle
248 colture di S. aureus confermate nei laboratori microbiologici di
riferimento. Le colture con risultati discrepanti comprendevano quattro
colture negative anche con il test al lattice rapido alternativo.
La sensibilità del test Staphaurex Plus* con questo gruppo di colture
meticillino-sensibili (MSSA) è risultata pari al 97,6% (242/248).
Altri stafilococchi
È stato inoltre analizzato un totale di 139 colture stafilococciche
conservate di non-S. aureus. Il test Staphaurex Plus* ha fornito
un risultato negativo per 132 di questi isolati che comprendevano
S. saprophyticus, S. epidermidis e S. haemolyticus. Le restanti sette
colture che hanno dato luogo a un risultato positivo con il test
Staphaurex Plus* comprendevano due colture positive anche con un
test al lattice rapido alternativo.
La specificità del test Staphaurex Plus* con questo gruppo di colture
stafilococciche non-S. aureus è risultata pari al 95,0% (132/139).
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5 among oxacillin-resistant Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol., 25, 1932-1933.
12
Henkel KGaA. Manufacturers Information and Safety Data Sheet for
Bronidox® L.
1
CONFEZIONE
150
335
7
1
2
150
151
337
157
Il test Staphaurex Plus* ha fornito un risultato non interpretabile con 1
campione. Questo risultato non è incluso nella tabella.
Include S. saprophyticus, S. epidermidis e S. haemolyticus.
a
b
ZL33/R30950102....................................................150 test
ZL34/R30950201................................................... 450 test
Legenda dei simboli
Numero di codice
Dispositivo medico per la diagnostica in vitro
Consultare le Istruzioni per l’uso (IFU)
S. aureus meticillino-resistenti (MRSA)
S. aureus meticillino-sensibili (MSSA)
Isolati non-S. aureusb
282
248
139
Bibliografia
Risultati Staphaurex Plus*
Positivi Negativi Totale
1
6
132
Il test Staphaurex Plus* ha fornito un risultato non interpretabile con 2
campioni. Questi risultati non sono inclusi nella tabella.
b
Include S. saprophyticus, S. epidermidis e S. haemolyticus.
Sensibilità relativa
98,7%
Specificità relativa
95,0%
Concordanza complessiva
97,9%
NOTA: il test Staphaurex Plus* ha fornito risultati non interpretabili con lo
0,3% (2/671) delle colture conservate, che sono state escluse dalla tabella
sopra riportata.
Tabella 1
281
242
7
a
Prestazioni complessive del test Staphaurex Plus*
al confronto con il test in provetta della coagulasi
su colture conservate di S. aureus
Reattività del test Staphaurex Plus* su isolati
clinici presumibilmente stafilococcicia
Risultati Staphaurex Plus*
Positivi Negativi Totale
S. aureus meticillino-resistenti (MRSA)
S. aureus meticillino-sensibili (MSSA)
Colture non-S. aureusb
S. aureus meticillino-resistenti (MRSA)
Un totale di 151 colture fresche di S. aureus resistenti a uno o più
antibiotici sono state analizzate nei laboratori di riferimento americani
ed europei. Staphaurex Plus* ha identificato correttamente 150 di
questi isolati. L’isolato con risultato discrepante è risultato positivo a un
test in provetta per la coagulasi e a un test al lattice rapido alternativo.
La sensibilità del test Staphaurex Plus* con questo gruppo di colture
meticillino-resistenti (MRSA) è risultata pari al 99,34% (150/151).
S. aureus meticillino-sensibili (MSSA)
Staphaurex Plus* ha identificato correttamente 335 delle 337 colture
di S. aureus confermate nei laboratori microbiologici di riferimento. Gli
isolati con risultati discrepanti comprendevano un isolato che mostrava
un risultato negativo anche con un test al lattice rapido alternativo.
La sensibilità del test Staphaurex Plus* con questo gruppo di colture
meticillino-sensibili (MSSA) è risultata pari al 99,41% (335/337).
Tabella 2
Reattività del test Staphaurex Plus*
su colture stafilococciche conservatea
Limiti temperatura (Temp. conservazione)
Codice lotto (numero lotto)
Data di scadenza
Attenzione: consultare la documentazione allegata
fabbricante
Bronidox® è un marchio registrato di Cognis UK Ltd.
ATCC® è un marchio di fabbrica registrato di American Type Culture Collection.
*marchio registrato
IFU X7826 revisione marzo 2012
Remel Europe Ltd
Clipper Boulevard West, Crossways
Dartford, Kent, DA2 6PT
UK
Per l’assistenza tecnica, rivolgersi al distributore di zona.