Melannurca - Napoli Post

Università degli Studi
di Napoli Federico II
“Una mela al giorno toglie …
il medico di torno!”
Il concetto di salute oggi
“La salute è
un completo stato di benessere
fisico,mentale e sociale
e non soltanto
l’assenza di malattia…
… il mantenimento
dello stato di ben-essere e bell-essere
per piacere ed accettarsi”
Non solo ‘anni alla vita’ ma anche ‘vita agli anni’
Aspettativa di vita
Qualità della vita
‘Ciascun uomo desidera vivere a lungo, ma nessun uomo desidera invecchiare’
J. Swift
Come prevenire una malattia?
Farmaci
Nutraceutica
40%
MEDICINA D’ATTESA
60%
MEDICINA D’INIZIATIVA
I nutraceutici: Potenziale spazio terapeutico
Nutraceutico
1989 - Sthephen De Felice
Un alimento, o parte di esso, che dà effetti
benefici alla salute inclusa la prevenzione e/o il
trattamento di una malattia
e che associa all’alta digeribilità e alla
ipoallergenicità,
le proprietà curative di principi attivi naturali,
di comprovata e riconosciuta efficacia:
“beyond diet, before drug”
Da alimenti funzionali a nutraceutici
I nutraceutici: Potenziali ambiti terapeutici
 Malattie dell’apparato gastrointestinale
Malattie dismetaboliche e del sistema
cardiovascolare
 Prevenzione obesità
 Prevenzione cardiopatie
 Prevenzione dislipidemie
 Prevenzione diabete
 Prevenzione stress ossidativo
Mela Annurca Campana IGP
Mela Annurca Campana IGP
Target epidemiologico
Trial Clinico
MESSA A PUNTO DI NUOVI
PRODOTTI:
integratori, alimenti destinati
a fini medici speciali o
dispositivi medici
ALIMENTO
FRAZIONAMENTO
BIOGUIDATO
IDENTIFICAZIONE DEI
COMPOSTI RITENUTI
RESPONSABILI
TECNOLOGIA
FARMACEUTICA
FORME DI DOSAGGIO
STUDIO DEI MECCANISMI D’AZIONE
complesso e composti singoli
ATTIVITA’
BIOLOGICOFUNZIONALE
STUDIO DEL PROFILO METABOLICO E
IDENTIFICAZIONE DEI COMPOSTI
RESPONSABILI
HPLC-MSn/NMR
MICROBIOLOGIA- FARMACOLOGIA- BIOLOGIA
Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM) con aggiunta di:
 10% di siero bovino fetale
 100 U/mL di penicillina
 100 µg/mL di streptomicina a 37 °C in un’atmosfera umidificata al
5% di CO2.
 1 µg estratto polifenolico
M. Pumila Miller
cv Red Delicious
M. Pumila Miller
cv Pink Lady
M. Pumila Miller
cv Fuji
M. Pumila Miller
cv Golden Delicious
* Raiola at al.(2012) modificata
Digestione Salivare



I campioni di mela (20 g) mescolati con:
- 6 mL di saliva artificiale e 290 mg
di α-amilasi.
pH soluzione → 6,8 con HCl 0,1 N.
La miscela è introdotta in un sacchetto di
plastica con 40 ml di acqua , omogeneizzata
in Stomacher 80 Microbiomaster per 3 min.
Digestione Gastrica



Allestimento beuta con aggiunta di
: 0,5 g di pepsina (14.800 U) in HCl
0,1 N
pH regolato a 2,0 con HCl 6 N
miscela incubata a 37 ° C in
agitatore orbitale Polymax 1040
(250 rpm) per 2 h.
Digestione Intestinale



Determinazione del profilo polifenolico:
digeriti analizzati mediante HPLC-DAD-MS
pH aumentato a 6,5 ​con NaHCO3
0,5 N
aggiunti 5 ml miscela :
pancreatina (8,0 mg / ml)
sali biliari (50,0 mg / mL)
(1:1 v / v) disciolti in
20 mL H₂O
incubato a 37 ° C in un agitatore
orbitale (250 rpm) per 2 h
50
45
40
mg/100 g fw
35
30
Procianidine
25
Rutina
Florizina
20
15
10
5
0
Salivare
Gastrica
Intestinale
Buccia
Transepiteliale
Salivare
Gastrica
Intestinale
Polpa
Transepiteliale
Studio in vitro
Interazione con proteine plasmatiche
 Soluzioni base: 20 mM HEPES (pH 7,5), 0,9% NaCl, 0,5 M NaHCO3
 Soluzione di proteine ​plasmatiche costituita da: HAS, 42 mg/ml;
HDL, 1450 mg/ml; LDL, 780 mg/ml, VLDL, 120 mg/ml.
 Polifenoli incubati con proteine ​plasmatiche per 30 min a 37 °C.
 Campioni centrifugati a 25 °C per 30 min a 14000 x g.
Determinazione frazione polifenolica libera:
surnatanti estratti con miscela acetonitrile-acqua (84:16; v/v)
ed analizzati mediante HPLC
Interazione in vitro polifenoli proteine plasmatiche
Binding > 92%
HSA
HDL
LDL
VLDL
Procianidine
18.1 ± 0.9
58.7 ± 1.6
16.2 ± 1.1
0.4 ± 0.3
Rutina
56.5 ± 1.5
17.1 ± 1.0
19.6 ± 0.3
0.5 ± 0.1
Florizina
55.9 ± 2.0
16.8 ± 1.2
18.9 ± 0.8
0.4 ± 0.5
HDL principale lipoproteina plasmatica che lega procianidine
Brunet, et al.
Human Apo A-I and rat transferrin are the principal plasma proteins that bind wine catechins.
Journal ofAgricultural and Food Chemistry, 50, 2708–2712. (2002).
↑ trasporto colesterolo periferico al fegato
Jonas F.
Regulation of lecithin cholesterol acyl transferase activity.
Progressin Lipid Research, 37, 209–234 (1998).
Procianidine evitano l’ossidazione delle HDL
Composizione della frazione procianidinica
di differenti cultivar di mele
Annurca
RD
GS
F
GD
Dimers
28.3 ± 1.1
7.24 ± 0.7
11.13 ± 0.8
10.06 ± 0.7
8.70 ± 0.7
Trimers
9.06 ± 0.8
8.02 ± 0.9
12.57 ± 1.1
11.14 ± 1.0
8.64 ± 0.9
Tetramers
3.83 ± 0.5
5.68 ± 0.4
8.75 ± 0.7
7.88 ± 0.6
6.12 ± 0.5
Pentamers
5.20 ± 0.2
3.84 ± 0.2
5.87 ± 0.5
5.34 ± 0.4
4.62 ± 0.2
Procyanidin polymers
17.5 ± 1.8
16.8 ± 0.9
24.3 ± 1.3
23.4 ± 1.4
20.2 ± 1.2
Total procyanidins
62.91 ± 2.1
41.61 ± 1.8
62.40 ± 1.9
57.80 ± 1.0
51.70 ± 0.9
are expressed as % ± SD; n = 5; results were significantly different at a level of P = 0.001.
RD: Red Delicious; GS: Granny smith; F: Fuji; GD: Golden Delicious.
* Values
Trial clinico:
"Studio doppio-cieco verso placebo, cross-over, randomizzato, a gruppi paralleli,
monocentrico, sull’effetto di 5 varietà di MELE sull’ assetto lipidico"
250 soggetti sani - età 18-69 - colesterolo totale 200-260 mg/dL
suddivisi
5 gruppi/(28 uomini – 22 donne)
Annurca
Red Delicious
(RD)
Granny
smith
(GS)
Fuji
(F)
Golden
Delicious
(GD)
1 mela/200g die (due annurche/100gx2 die) x 30/60 giorni
Effetto delle mele sul colesterolo totale
Treatment
Pre-treatment
Post-treatment
Variation (%)
Annurca
239.1 ± 11.9
219.2 ± 12.8
-8.4
Red Deliciuos
235.9 ± 13.7
228.5 ± 14.2
-2.9
Granny Smith
237.6 ± 14.3
227.2 ± 13.5
-4.5
Fuji
235.5 ± 13.3
230.8 ± 14.1
-2.3
Golden Delicious
238.4 ± 15.3
235.3 ± 11.9
-1.1
Subjects consumed either one apple/day (two Annurca apples/day), for 2 months.
Value are means ± SD (n = 5).
Results were significantly different at a level of P = 0.001.
.
Effetto delle mele sui livelli di LDL
Treatment
Pre-treatment
Post-treatment
Variation (%)
Annurca
208.2 ± 11.7
183.01 ± 10.9
-14.5
Red Delicious
206.5 ± 12.3
202.6 ± 11.3
-5.8
Granny Smith
209.3 ± 11.6
203.4 ± 10.8
-8.3
Fuji
204.8 ± 11.1
202.3 ± 11.7
-4.7
Golden Delicious
207.4 ± 11.6
205.7 ± 12.0
-2.6
Subjects consumed either one apple/day (two Annurca apples/day) for 2 months.
Value are means ± SD (n = 5).
Results were significantly different at a level of P = 0.001.
Effetto delle mele sui livelli di HDL
Treatment
Pre-treatment
Post-treatment
Variation (%)
Annurca
38.5 ± 7.2
44.3 ± 7.9
+15.2
Red Delicious
37.9 ± 8.1
39.5 ± 7.5
+4.2
Granny Smith
35.4 ± 6.7
37.6 ± 8.0
+4.5
Fuji
36.7 ± 7.5
37.7 ± 6.8
+4.1
Golden Delicious
34.2 ± 6.9
34.7 ± 6.4
+2.6
Subjects consumed either one apple/day (two Annurca apples/day) for 2 months.
Value are means ± SD (n = 5).
Results were significantly different at a level of P = 0.001.
.
Applemets Trial clinico:
"Studio doppio-cieco verso placebo, cross-over, randomizzato, a gruppi paralleli, monocentrico,
sull’effetto dell’estratto polifenolico della mela Annurca sull’assetto lipidico"
250 soggetti sani - età 30-83 - colesterolo totale 214-254 mg/dL, razza bianca
116 Uomini (età 31-81) (TC: 214.1 – 254.3; HDL-C: 31.5 – 45.8; LDL-C: 189.5 – 206.1)
134 Donne (età 30-83) (TC: 215.0 – 251.1; HDL-C: 31.3 – 43.7; LDL-C: 192.6 – 205.2)
2 capsule (400 mg)/die per un periodo di 30/60 giorni
UOMINI
Media ponderata
Variazione %
Colesterolo tot.
t0
t 30
t 60
234.2
180.3
179.4
-25.1
t0
38.6
-25.6
HDL-C
t 30
56.5
LDL-C
t 30
128.4
t 60
56.9
t 60
127.8
+50.5
+50.4
-38.2
-38.4
HDL-C
t 30
54.9
t 60
55.2
LDL-C
t 30
130.3
t 60
129.7
+49.1
+48.7
-37.8
-38.0
t0
197.8
DONNE
Media ponderata
Variazione %
Colesterolo tot.
t0
t 30
t 60
233.0
181.1
180.7
-24.6% -24.4
t0
37.5
t0
198.9
Riduzione Colesterolo Totale
20
15
Variazione (%) TC dopo 30/60 giorni
10
5
0
Δ% TC
-5
-10
-15
-20
-25
-30
-35
-40
-45
pazienti (n = 250)
-50
-55
-60
-65
Valore medio = -25.0 %
Riduzione Colesterolo LDL
20
15
10
Variazione (%) LDL-C dopo 30/60 giorni
5
0
-5
-10
-15
Δ% LDL-C
-20
-25
-30
-35
-40
-45
-50
-55
pazienti (n = 250)
-60
-65
-70
-75
Valore medio = -38.1 %
Incremento Colesterolo HDL
Variazione (%) HDL-C dopo 30/60 giorni
110
100
90
80
Δ% HDL
70
60
50
40
30
20
10
0
pazienti (n = 250)
Valore medio = +49.7 %
Table 6 Colesterolo Totale
Effects of Annurca supplement (AMS) on plasma cholesterol, glucose and triglyceride metabolism in men subgroup
according to TC.
Men 214-229
Δ (%)
Men 230-245
Δ (%)
Men 246-254
Δ (%)
TC
(mg/dL)
HDL-C
(mg/dL)
LDL-C
(mg/dL)
Glucose
(mg/dL)
t0
222.1 ± 10.2
233.1 ± 12.3
248.0 ± 12.5
t 30
169.2 ± 12.5
-23.2
176.3 ± 10.4
-25.3
181.2 ± 14.3
-27.1
t 60
169.7 ± 13.0
-23.0
176.6 ± 11.1
-25.2
181.6 ± 13.1
-27.0
t0
41.1 ± 3.8
t 30
59.6 ± 4.2
+45.0
58.7 ± 6.1
+50.3
55.2 ± 4.4
+55.1
t 60
60.0 ± 3.7
+46.1
58.7 ± 4.8
+50.5
55.5 ± 6.1
+55.0
t0
165.3 ± 12.7
t 30
104.4 ± 13.2
-36.9
110.6 ± 12.8
-38.9
116.3 ± 13.3
-40.5
t 60
104.8 ± 12.6
-36.3
112.3 ± 12.8
-37.5
117.6 ± 11.7
-39.3
t0
109.7 ± 11.1
t 30
108.9 ± 12.9
-0.9
112.2 ± 12.5
-1.2
110.5 ± 11.8
-0.8
t 60
109.8 ± 13.6
-0.1
113.7 ± 10.3
+0.3
111.6 ± 12.7
+0.3
38.9 ± 5.3
35.6 ± 4.2
180.6 ± 13.1
195.1 ± 12.7
113.4 ± 11.8
100.2 ± 11.9
90.9 ± 9.3
t0
Triglycerides
101.0 ± 12.4
+0.8
92.6 ± 11.2
t 30
(mg/dL)
101.5 ± 11.7
+1.3
91.3 ± 10.6
t 60
Subjects were administered with 2 AMS capsules/day for 2 months.
Value are means ± SD (n = 5).
Results were significantly different at a level of P = 0.001.
111.2 ± 14.1
97.6 ± 11.1
+1.7
98.7 ± 11.4
+0.8
+0.4
98.2 ± 10.2
+0.6
Table 7 Età partecipanti allo studio
Effects of Annurca supplement (AMS) on plasma cholesterol, glucose and triglyceride metabolism in men subgroup
according to age.
Men 30-45
Δ (%)
Men 46-60
Δ (%)
Men 61-83
Δ (%)
TC
(mg/dL)
HDL-C
(mg/dL)
LDL-C
(mg/dL)
Glucose
(mg/dL)
233.6 ± 12.8
240.1 ± 13.1
t0
228.6 ± 11.5
t 30
174.4 ± 12.5
-23.9
175.7 ± 13.8
-24.8
176.2 ± 14.1
-26.9
t 60
174.6 ± 13.0
-23.6
175.3 ± 12.3
-25.1
175.7 ± 12.5
-26.8
t0
42.8 ± 3.7
t 30
61.4 ± 4.4
+43.2
58.6 ± 5.2
+49.1
54.1 ± 4.8
+58.1
t 60
62.1 ± 3.8
+45.3
59.0 ± 5.1
+50.7
53.3 ± 6.2
+56.2
t0
168.9 ± 13.0
t 30
109.1 ± 12.7
-35.4
110.8 ± 12.0
-38.8
112.5 ± 14.4
-41.5
t 60
108.3 ± 12.9
-35.9
111.7 ± 13.8
-38.3
112.0 ± 12.9
-41.8
t0
107.2 ± 13.8
t 30
106.2 ± 12.5
-0.9
111.2 ± 12.4
-1.2
112.2 ± 13.1
-1.5
t 60
106.7 ± 14.6
-0.5
114.4 ± 10.9
+1.3
114.4 ± 10.3
+0.9
39.1 ± 6.2
34.2 ± 5.3
181.1 ± 14.5
192.4 ± 13.8
112.9 ± 13.6
t0
98.2 ± 10.5
91.1 ± 10.3
Triglycerides
t 30
98.5 ± 11.2
+0.3
91.7 ± 12.8
(mg/dL)
t 60
99.5 ± 11.8
+1.3
91.2 ± 11.6
Subjects were administered with 2 AMS capsules/day for 2 months.
Value are means ± SD (n = 5).
Results were significantly different at a level of P = 0.001.
113.4 ± 11.9
99.4 ± 10.3
+0.7
100.2 ± 13.0
+0.8
+0.1
99.6 ± 11.5
+0.2
Estratto polifenolico di "Melannurca Campana IGP"
Trial clinico:
"Studio doppio-cieco verso placebo, cross-over, randomizzato, a gruppi paralleli,
monocentrico, sull’effetto dell’estratto polifenolico della mela Annurca sull’assetto lipidico"
Tossicità epatica/renale
AST (GOT) (U/L)
Media ponderata
t 30
t 60
t0
t 30
t 60
t0
t 30
t 60
21.6
21.5
21.5
27.9
27.5
27.6
37.2
36.2
34.4 222.6 220.4 215.9
-0.5
-0.5
-1.4
-1.1
-2.7
-7.5
LDH (U/L)
t0
Variazione %
ALP (U/L)
t0
Variazione %
Media ponderata
γ-GTP (U/L)
ALT (GPT) (U/L)
t 30
t 60
177.0 176.5 170.2
-0.28 -3.84
Albumina (g/dL)
t0
Bilirubina Tot. (mg/dL)
t 30
-0.98
t 60
-3.0
Creatinina (mg/dL)
t0
t 30
t 60
t0
t 30
t 60
t0
t 30
t 60
4.31
4.32
4.16
0.57
0.57
0.54
0.84
0.82
0.80
-
-5.26
-2.38
-4,76
+0.23 -3.48
Profilo lipidico di pazienti trattati con
Atorvastatina o con Nutraceutico
60
50
Atorvastatina
NUT
40
30
Δ (mg/dL)
20
10
0
TC
LDL-C
HDL-C
-10
-20
-30
-40
-50
Mela Annurca
Sviluppi Futuri
Effetti Concomitanti…..
Effetto di AppleMets Hair sulla crescita dei capelli
Effetto del trattamento per via sistemica
Dopo 30 gg con 2caps/die
Effetto del trattamento per via sistemica
dopo 60 gg con 2caps/die
Effetto di AppleMets Hair sulla crescita dei capelli
Inizio trattamento
2 cps/die
Dopo 30 gg
2 cps/die
Effetto del trattamento
per via sistemica
Dopo 60 gg
2 cps/die
Dopo 120 gg
2 cps/die
AppleMets hair
… il mantenimento
dello stato di ben-essere e bell-essere
per piacere ed accettarsi
Grazie per l’attenzione