Sono a rischio trombosi?
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Sono a rischio trombosi?
The Calibrated Automated Thrombogram CAT Sono a rischio trombosi? Generazione della trombina L’innovativo test della funzione fisiologica del sistema coagulativo Evidenzia il rischio trombotico o emorragico Monitora ogni trattamento farmacologico anti-trombotico o anti-piastrinico CABRU sas via Forlanini 52, 20043 Arcore (MB) Tel. 039.60.13.988 Fax 039.60.14.284 [email protected] www.cabru.it Generazione della trombina The Calibrated Automated Thrombogram ThrombinoSCOPE bv L’innovativo test della funzione fisiologica del sistema coagulativo La misura della generazione della trombina nel plasma che coagula, diviene un eccellente strumento per valutare la tendenza emorragica così come la formazione di trombi. The Calibrated Automated Thrombogram (CAT) misura la trombina nel plasma in presenza di tutti i naturali componenti. La tecnica automatizzata è basata sulla fluorescenza e quindi non è influenzata dalla presenza di un coagulo o dalla presenza di piastrine. In parallelo agli esperimenti di generazione della trombina viene misurata un’attività costante della trombina (il nostro calibratore brevettato della trombina) in un secondo campione dello stesso plasma. Un software, di semplice utilizzo, compara entrambi i segnali permettendo così il calcolo della concentrazione della trombina nel tempo. Questo tipo di esperimento si avvicina notevolmente alla situazione in vivo così come una ferita rimarginata o un trombo che si sta formando. È di fatto un esperimento condotto su un pezzo di organo isolato nel quale sono presenti tutte le interferenze conosciute o sconosciute e i meccanismi che svolgono un ruolo nel sistema. Stima del rischio trombotico o emorragico, monitoraggio del trattamento anti-coagulante Attraverso il saggio CAT i problemi che per molti anni hanno tormentato i fisiologi della coagulazione possono ora essere chiariti. I tradizionali test coagulativi per esempio non mostrano la tendenza del sangue a coagulare troppo rapidamente (ipercoaguabilità). Questo è un problema molto importante poiché circa la metà dei decessi e delle patologie sono causate da eventi trombotici (infarto del miocardio, colpo apoplettico, embolia polmonare). I trombi si formano quando si genera un quantitativo eccessivo di trombina e può essere prevenuto inibendo la formazione della trombina stessa. Il trattamento con farmaci anti-vitamina K, eparine di vario tipo, inibitori diretti della trombina, farmaci anti-piastrinici ecc…, ora può essere monitorato mediante questo metodo anziché utilizzare differenti saggi coagulativi. CAT è sensibile a tutti i farmaci anti-trombotici e a combinazioni di farmaci ed è comunque un eccellente strumento per monitorare e sviluppare trattamenti farmacologici. Alcuni soggetti generano più trombina rispetto alla norma ed hanno quindi probabilmente un maggior rischio trombotico. Ciò può essere causato da difetti congeniti (dovuti ad una o più delle 200 differenti mutazioni), stile di vita, dieta o altri fattori acquisiti. Solo un test completo della funzione fisiologica del sistema coagulativo può rispondere agli interrogativi circa la possibilità di un aumento del rischio trombotico. La misura di generazione della trombina, The CAT, è un eccellente strumento per rispondere al quesito: “Sarò a rischio trombosi?” Il più apprezzato test della funzione globale per emostasi e trombosi Il calibratore della trombina misurato in ciascun campione: - corregge per la differenza di colore del plasma da donatore a donatore - corregge per la non linearità del sistema di misura fluorogenico e per il consumo del substrato - consente di determinare accuratamente la concentrazione della trombina in tempo reale Reagenti standardizzati pronti all’uso: - calibratore della trombina - reagente PPP con fattore tissutale 1, 5 o 20 picomolare - FluCa, substrato fluorescente con cloruro di calcio Software di semplice utilizzo: - calcolo in tempo reale della trombina nel tempo - calcolo di tutti i parametri rilevanti: picco, tempo al picco, indice di velocità, lag time, ETP - misurazione contemporanea fino a 30 campioni La fluorescenza permette la misura sia in PPP che in PRP: - non è necessario inibire o rimuovere la fibrina - sensibile alle patologie plasmatiche e piastriniche Sensibile ai farmaci antitrombotici e antipiastrinici: - eccellente saggio per monitorare il trattamento farmacologico - facile strumento per lo sviluppo di nuovi farmaci Può essere utilizzato con plasma di animali quali topo, ratto, coniglio, maiale e cane. Bibliografia - C. Cimenti et al. “The respective and combined anticoagulant effects of recombinant human activated protein C, melagatran and heparins using CAT” – Thromb. Research 2007; 119(3): 361-7 - S. Liestol et al. “Decreased anticoagulant response to tissue factor pathway inhibitor type 1 in plasmas from patients with lupus anticoagulants” - British Journal of Haematology 2007; 136(1):131-7 - G. Gerotziafas et al. “Effect of the anti-factor Xa and anti-factor IIa activities of low-molecular-weight heparins upon the phases of thrombin generation” Journal Thromb. Haemost. 2007; 5: 955–62 - H.C. Hemker et al. “Thrombin generation, a function test of the haemostatic-thrombotic system” Thromb. Haemost. 2006; 96: 553–61 - R. Al Dieri et al. “Fixed dosage of low-molecular-weight heparins causes large individual variation in coagulability, only partly correlated to body weight” – Journal Thromb. Haemost. 2006; 4: 83–9 - Y. 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Thromb. 2002; 32: 249-253 Thrombinoscope Package codice 001TSTS10.00 Contiene tutto il materiale necessario per cominciare ad effettuare gli esperimenti: software, reagenti e la guida per Thrombogram (con una descrizione delle basi scientifiche del metodo, istruzioni dettagliate e un manuale per l’utilizzo del software) Thrombin calibrator codice 001TSTS20.00 20 vial da 1 ml Il calibratore della trombina è utilizzato in ogni esperimento in ciascun plasma. Dopo la ricostituzione in 1 ml di acqua deionizzata, la soluzione può essere utilizzata direttamente nel saggio. Utilizzare 20 ml di calibratore della trombina insieme a 80 ml di plasma. PPP-Reagent 5 pM codice 001TSTS30.00 20 vials da 1 ml È utilizzato come trigger da aggiungere a un plasma privo di piastrine per iniziare la generazione della trombina. Il reagente PPP contiene una miscela di fosfolipidi e fattore tissutale. Dopo la ricostituzione (aggiungere 1 ml di acqua deionizzata), la soluzione può essere utilizzata direttamente nel saggio. Utilizzare nei pozzetti 20 ml di reagente PPP insieme a 80 ml di plasma povero di piastrine. Dopo l’aggiunta di 20 ml di FluCa la miscela di reazione finale conterrà il fattore tissutale ad una concentrazione di 5 pM e i fosfolipidi ad una concentrazione di 4 µM. PPP-Reagent Low codice 001TSTS31.00 20 vials da 1 ml È utilizzato come trigger da aggiungere a un plasma privo di piastrine per iniziare la generazione della trombina. Il reagente PPP LOW contiene una miscela di fosfolipidi e fattore tissutale. Dopo la ricostituzione (aggiungere 1 ml di acqua deionizzata), la soluzione può essere utilizzata direttamente nel saggio. Utilizzare nei pozzetti 20 ml di reagente PPP insieme a 80 ml di plasma povero in piastrine. Dopo l’aggiunta di 20 ml di FluCa la miscela di reazione finale conterrà il fattore tissutale ad una concentrazione di 1 pM e i fosfolipidi ad una concentrazione di 4 µM. Il reagente PPP LOW viene particolarmente raccomandato per l’utilizzo con plasma emofilico in modo da aumentare la sensibilità ai fattori VIII, IX e XI. PPP-Reagent HIGH codice 001TSTS32.00 20 vials da 1 ml È utilizzato come trigger da aggiungere a un plasma privo di piastrine per iniziare la generazione della trombina. Il reagente PPP HIGH contiene una miscela di fosfolipidi e fattore tissutale. Dopo la ricostituzione (aggiungere 1 ml di acqua deionizzata), la soluzione può essere utilizzata direttamente nel saggio. Utilizzare nei pozzetti 20 ml di reagente PPP insieme a 80 ml di plasma povero di piastrine. Dopo l’aggiunta di 20 ml di FluCa la miscela di reazione finale conterrà il fattore tissutale ad una concentrazione di 20 pM e i fosfolipidi ad una concentrazione di 4 µM. Il reagente PPP HIGH viene particolarmente raccomandato per l’utilizzo con plasmi contenenti antitrombotici come plasmi eparinizzati. PRP-Reagent codice 001TSTS42.00 20 vials da 1 ml È utilizzato come trigger da aggiungere a un plasma ricco di piastrine per iniziare la generazione della trombina. Il reagente PRP contiene il fattore tissutale. Dopo la ricostituzione (aggiungere 1 ml di acqua deionizzata), la soluzione può essere utilizzata direttamente nel saggio. Utilizzare nei pozzetti 20 ml di reagente PPP insieme a 80 ml di plasma ricco in piastrine. Dopo l’aggiunta di 20 ml di FluCa la miscela di reazione finale conterrà il fattore tissutale ad una concentrazione di 0.5 pM. Il reagente PRP viene utilizzato con plasma ricco in piastrine ma anche in plasma povero di piastrine per la determinazione delle microparticelle. FluCa-kit codice 001TSTS50.00 Fluo-tampone Il Fluo-tampone insieme all’appropriato quantitativo di Fluo-substrato è utilizzato in ogni esperimento in ogni pozzetto e viene dispensato dallo strumento. Il Fluo-tampone contiene Hepes (pH 7.35) e cloruro di calcio. Si presenta in una provetta in plastica chiusa con tappo e deve essere incubato in un bagnetto ad acqua a 37°C prima di effettuare gli esperimenti. Fluo-substrato Il Fluo-substrato contiene il substrato fluorogenico solubilizzato in DMSO. Il FluCa Kit contiene 20 provette di Fluo-tampone e 1 di Fluo-substrato. Il Fluo-substrato viene aggiunto al tampone tiepido subito prima dell’esperimento (di norma 40 ml per provetta di Fluo-tampone) CABRU sas via Forlanini 52, 20043 Arcore (MB) tel.039.60.13.988 fax 039.60.14.284 [email protected] www.cabru.it