hemos ptt - Ral-sa

HEMOS PTT
Kit completo
Fabricante: RAL TÉCNICA PARA EL LABORATORIO, S.A.
Av. Mare de Déu de Montserrat 51
08970 Sant Joan Despí
IVD
PARA DIAGNOSTICO IN VITRO
CONSERVAR A 2-8ºC
CONSULTAR INSTRUCCIONES
REF
Cont.
Referencia:
GN 1030:
GN 1033:
Presentación:
3 x 10 mL ácido elágico + 3 x 10 mL CaCl2
3 x 4 mL ácido elágico + 3 x 4 mL CaCl2
USO PREVISTO:
El kit HEMOS PTT es un ensayo de diagnostico in Vitro usado para la
determinación del tiempo de tromboplastina parcial activado (APTT).
RESUMEN:
El tiempo de tromboplastina parcial activado (APTT) se usa como una prueba
discriminativa y cuantitativa general para determinar los factores intrínsecos
de la coagulación. El APTT es sensible a deficiencias o anomalías de los
factores VIII, IX, XI, XII, precalicreína, cininógeno de alto peso molecular
(HMWK), y fibrinógeno. El APTT es también sensible a inhibidores de la
coagulación de la sangre tales como inhibidor del lupus y productos de
degradación de fibrina/fibrinógeno (1). El APTT es el método usado más
general para el seguimiento de la terapia de anticoagulación de la heparina
intravenosa (2,3).
FUNDAMENTOS:
La capacidad de la sangre para formar un coágulo de fibrina por mecanismo
intrínseco de la coagulación requiere de los factores de coagulación I, II, V,
IX, X, XI y XII, plaquetas de lípidos y calcio (4). La prueba se realiza añadiendo
una suspensión de cefalina de cerebro de conejo con un activador de
superficie (1). El APTT se ha tomado como una sencilla y fiable medida del
mecanismo intrínseco de la coagulación.
REACTIVOS:
El reactivo HEMOS PTT ácido elágico es una preparación de cefalina de
cerebro de conejo y activador de ácido elágico con tampón, estabilizadores y
conservantes. El reactivo está listo para su uso.
El reactivo HEMOS PTT Ca Cl2 es una preparación líquida de Ca Cl2 0.02M y
conservantes.
PRECAUCIONES:
No ingerir. Evitar contacto con piel, ojos o ropa.
ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:
Una vez abierto el vial, el reactivo HEMOS PTT ácido elágico es estable
durante 4 semanas si se almacena a 2 - 8 ºC.
Una vez abierto el vial, el reactivo HEMOS PTT Ca Cl2 es estable hasta fecha
de caducidad si se almacena a 2 - 8 ºC.
RECOGIDA DE MUESTRAS Y PREPARACION:
El plasma debe prepararse de sangre total citratada sin heparina, EDTA u
oxalato.
1. Toma de muestra de sangre mediante jeringuilla: extraer sangre
venosa mediante jeringa de plástico o silicona. Transferir inmediatamente 9.0
mL de sangre en un tubo que contenga 1.0 mL de citrato sódico al 3.2%.
2. Toma de muestra de sangre mediante tubo de vacío: extraer sangre
venosa mediante jeringa de vacío que contenga citrato sódico al 3.2%. Hay
que asegurarse de que la toma de muestra es completa para que se respete
la proporción de 9 partes de sangre por 1 parte de citrato. No debe emplearse
cierre de heparina o catéter.
Generalmente se recomienda que el segundo o tercer tubo de extracción se
use para las pruebas de coagulación.
3. Preparación del plasma: Mezclar bien por inversión y centrifugar a 2500
x g durante 15 minutos rápidamente tras la recogida de muestra de sangre. Si
no se va a realizar la prueba inmediatamente, transferir el plasma a un tubo
plástico.
No analizar muestras hemolizadas, ni muestras que contengan más de 10.000
plaquetas por mm³ o con hematíes.
4. Almacenamiento del plasma: el plasma se debe transferir a un tubo de
plástico lo antes posible y almacenarse en frío (2 - 8º C). Los plasmas pueden
volverse a centrifugar antes de congelarlos para asegurar la eliminación de las
células. Realizar la prueba dentro de las 4 horas. Las muestras no se deben
incubar a 37ºC durante más de cinco minutos para evitar pérdida de los
factores V y VII.
Tel: (+34) 93 480 80 47
Fax: (+34) 93 373 00 92
PROCEDIMIENTO:
Este procedimiento pertenece a los sistemas manuales o semiautomáticos de
coagulación. Para los instrumentos automáticos ver más detalle en las
instrucciones específicas.
1.
Preincubar el HEMOS PTT Cloruro Cálcico (0.02M) a 37º C durante 10
minutos.
2.
Pipetear 100 μL de plasma (muestra o control) dentro de una cubeta de
test. Incubar a 37º C durante 1 a 2 minutos.
3.
Añadir 100 μL de reactivo HEMOS PTT ácido elágico a la cubeta que
contiene el plasma. Conservar la suspensión del reactivo mediante
agitación magnética o mezcla por inversión inmediatamente antes del
uso.
4.
Incubar la mezcla a 37º C durante 3 minutos.
5.
Añadir rápidamente 100 μL del HEMOS PTT Cloruro Cálcico (0.02M)
preincubado y simultáneamente cronometrar.
6.
Anotar el tiempo de coagulación en segundos.
CONTROL DE CALIDAD:
La fiabilidad de los resultados de la prueba se debe verificar usando Hemotrol
N y P. Cada laboratorio debe establecer un rango de aceptación del control
que representa la variación permisible.
CÁLCULO DE RESULTADOS:
Para mejores resultados, se recomienda duplicar las muestras.
Los resultados de APTT deberían tomarse como tiempo de coagulación en
segundos. Calcular el tiempo medio de coagulación de muestras duplicadas y
controles. Las diferencias entre resultados duplicados deberían ser menos del
5%. Repetir la prueba si fuera necesario.
LIMITACIONES:
Para evitar obtener resultados discrepantes la relación sangre anticoagulante
debe ser 9:1. Muestras extremadamente lipémicas o hemolizadas pueden
producir errores en los valores APTT (6).
Retraso en el test, dificultad en la recogida de muestras o una toma de
muestra por encima de un cierre de heparina puede provocar una falsa
prolongación de los resultados de APTT (7). Los resultados de APTT pueden
verse alterados por la ingesta de fármacos o drogas (8).Los resultados de APTT
pueden variar en pacientes bajo terapia de anticoagulación según el tipo y
dosis de anticoagulante, la ruta de la administración y el tiempo de
administración de la última dosis.
VALORES ESPERADOS:
Los resultados de APTT se ven influidos por el método de detección de
coagulación y pueden variar de laboratorio a laboratorio. En general, la prueba
de APTT dará un tiempo de coagulación de plasma normal en un rango de 24 a
39 segundos. Los rangos terapéuticos para seguir la terapia de anticoagulación
oral variará de laboratorio a laboratorio, por eso es esencial que cada
laboratorio establezca rangos de APTT específicos para su población de
pacientes.
Resultados anormales obtenidos con plasma de un paciente que no se
encuentre bajo terapia de anticoagulación puede indicar deficiencia de un
factor o la presencia de un inhibidor. El resultado también puede deberse a
los efectos de ciertas drogas y medicamentos. Procedimientos adicionales
tales como la prueba de PT y estudios de deficiencia de factores pueden ser
necesarios.
CARACTERÍSTICAS DEL METODO:
Precisión:
La precisión intra-ensayo fue evaluada usando controles de plasma normal y
anormal:
Nivel 1: media: 33.3 s, SD: 0.25; CV: 0.8%
Nivel 2: media: 60.3 s; SD: 0.51; CV: 0.8%
La precisión inter-ensayo fue evaluada usando controles de plasma normal y
anormal:
Nivel 1: media: 32.9 s, SD: 0.35; CV: 1.1%
Nivel 2: media: 59.1 s; SD: 0.83; CV: 1.4%
Correlación:
Se realizaron estudios de correlación frente a otros reactivos APTT en
coagulómetro automáticos. Se obtuvo un coeficiente de correlación de 0.988.
e-mail: [email protected]
web: www.ral-sa.com
Sensibilidad:
Los tiempos obtenidos de APTT con el reactivo HEMOS PTT fueron evaluados
con plasma con deficiencia de factor VIII en un sistema semiautomático. Los
resultados se muestran en la siguiente tabla:
Factor %
60
50
40
30
aPTT (s)
Factor VIII
24.5
25.2
26.0
27.2
Estos valores deberían usarse como indicativos. Cada laboratorio debería
establecer el Factor de sensibilidad a partir de los instrumentos, reactivos y
técnicas empleados.
Sensibilidad a Heparina:
La acción anticoagulante de la heparina depende de muchos factores. Cada
laboratorio debería determinar la sensibilidad relativa a heparina añadiendo
cantidades conocidas de heparina no fraccionada al pool de plasma normal y
determinar el aumento del tiempo de coagulación usando el reactivo HEMOS
PTT. Los resultados siguientes se obtuvieron usando un coagulómetro
automático y el reactivo HEMOS PTT.
Concentración de Heparina
(unidades/mL)
0.25
0.50
0.65
0.85
aPTT (s)
33
38
42
56
BIBLIOGRAFÍA:
1. Human Blood Coagulation, Hemostasis and Thrombosis, 3rd ed. R Biggs,
CR Rizza, Editors, Blackwell Scientific Publications, London (1984).
2. Cole E, Hall ER, Wu KK, Principles of Antithromboltic Therapy. In Wu KK,
Thomboembolic Disorders, PSG Publishing Co. Inc., Litteton, p 91 (1984).
3. Triplett DA, Heparin: Clinical use and Laboratory Monitoring. In Triplett DA,
Laboratory Evaluation of Coagulation, American Society of Clinical Pathologists
Press, Chicago p 272 (1982).
4. Hougie C, The Biochemistry of Blood Coagulation, In Laboratory Evaluation
of Coagulation, American Society of Clinical Pathologists Press, Chicago p 2
(1982).
5. Owen CA, Bowie EJW, Thomson JH, The Diagnosis of Bleeding Disorders,
Little Brown and Company, Boston p 110 (1975).
6. Harker LA, Hemostasis Manual, FA Davis Co, Philadelphia p 62 (1974).
7. Triplett DA, Harms CS, Procedures for the Coagulation Laboratory,
American Society of Clinical Pathologists Press, Chicago, p 7 (1981).
8. Young DS, Pestaner LC, Gibberman V, Effects of Drugs on Clinical
Laboratory Tests, Clin Chem 21; 1D (1975).
IU/GN/1030/R2/0314
HEMOS PTT
Complete kit / Kit complet
Manufacturer: RAL TÉCNICA PARA EL LABORATORIO, S.A.
Av. Mare de Déu de Montserrat 51
08970 Sant Joan Despí – Barcelona (SPAIN)
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FOR IN VITRO DIAGNOSTIC
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Cont.
Reference:
GN 1030
GN 1033
Package
3 x 10 mL Ellagic Acid + 3 x 10 mL CaCl2
3 x 4 mL Ellagic Acid + 3 x 4 mL CaCl2
INTENDED USE:
The HEMOS PTT kit is an in Vitro diagnostic test used to determinate the
activated partial thromboplastin time (APTT).
SUMMARY:
The activated partial thromboplastin time (APTT) is used as a discriminative
and a quantitative general assay to determinate the intrinsic factors of the
coagulation. APTT is sensitive to deficiencies or anomalies of the factors VIII,
IX, XI, XII, prekallikrein, high molecular weight kinikogen (HMWK), and
fibrinogen. APTT is also sensitive to inhibitors of blood coagulation such as
lupus inhibitor and fibrin/fibrinogen degradation products (1). The APTT is the
most widely used method for monitoring intravenous heparin anticoagulant
therapy (2,3).
PRINCIPLE:
The capacity of blood to form a fibrin clot by way of the intrinsic haemostasis
pathway requires coagulation factors I, II, V, IX, X, XI and XII, platelet lipids
and Calcium(4). The assay is performed by the addition of a suspension of
rabbit brain cephalin with a surface activator (1). The APTT has proven to be a
simple and highly reliable measurement of the intrinsic coagulation
mechanism (5).
REAGENTS:
The HEMOS PTT ellagic acid reagent is a preparation of rabbit brain cephalin
and ellagic acid activator with buffer, stabilizers and preservatives. The
reagent is provided ready to use.
The HEMOS PTT CaCl2 reagent is a liquid preparation of CaCl2 and
preservatives.
WARNINGS AND PRECAUTIONS:
Do not ingest. Avoid contact with skin, eyes or clothing.
STORAGE:
The HEMOS PTT Ellagic Acid reagent is stable for 4 weeks once opened if
stored at 2 - 8 ºC.
The HEMOS PTT CaCl2 is stable up to expiry date once opened if stored at 2 8 ºC.
SPECIMEN:
The plasma should be prepared from citrated whole blood without heparin,
EDTA or oxalate.
1. Blood collection using syringe method: Draw venous blood into a
plastic or siliconised syringe. Immediately transfer 9.0 mL of blood into a tube
containing 1.0 mL of 3.2 % Sodium citrate solution.
2. Blood collection using an evacuated blood collection tube: Draw
venous blood into a commercial vacuum tube containing 3.2 % Sodium citrate
solution. Insure that a full draw has been obtained since the ratio of 9 parts
blood to 1 part citrate is critical. A heparin lock or transfer line should not be
used. It is generally recommended that the second or third tube draw be used
for coagulation tests.
3. Plasma preparation: Mix well by inversion and centrifuge at 2.500 x g
for 15 minutes soon after blood collection. Unless samples are to be
processed immediately, transfer the plasma into plastic tube.
Plasma that is clearly haemolysed or contains > 10.000 platelets per mm³ or
red cells is not suitable for coagulation testing.
4. Plasma storage: Plasma samples should be transferred to a plastic tube
as soon as possible and stored refrigerated (2 to 8ºC): Plasma samples should
be tested within 4 hours and should not be incubated at 37ºC for more than 5
minutes to avoid loss of factors V and VII.
Tel: (+34) 93 480 80 47
Fax: (+34) 93 373 00 92
PROCEDURE:
This procedure pertains to manual and semi-automated coagulation systems.
Refer to your instrument manual for more detailed instrument specific
instructions.
1.
Pre-incubate the HEMOS PTT Calcium Chloride (0.02M) to 37º C
for 10 minutes.
2.
Pipette 100 μL of plasma (sample or control) into a test cuvette.
Incubate at 37º C for 1 or 2 minutes.
3.
Add 100 μL of HEMOS PTT ellagic acid reagent to the cuvette
containing the plasma. Maintain the suspension of the reagent by
magnetic stirring or mixing by inversion immediately prior to use.
4.
Incubate the mixture at 37º C for 3 minutes.
5.
Rapidly add 100 μL of the pre-incubated HEMOS PTT Calcium
Chloride (0.02M) and simultaneously start the timer.
6.
Record the clotting time in seconds.
QUALITY CONTROL:
Reliability of test results should be monitored within each run using Hemotrol
N and P. Each laboratory should establish a control range to determine the
allowable variation in day to day performance of each control plasma.
CALCULATION:
For best results, duplicate samples are recommended. APTT should be
reported as clotting time in seconds. Calculate the mean clotting time of
duplicate samples and controls. Differences between duplicate results should
be less than 5 %. Repeat the test if necessary.
LIMITATIONS:
To prevent discrepant results ensure the blood to anticoagulant ratio is 9:1.
Grossly lipaemic or haemolysed samples may produce erroneous APTT
values(6).
Delay in testing, difficulty in specimen collection or venipuncture above the
site of a heparin lock may result in falsely prolonged APTT results (7). The
APTT may also be influenced by certain drugs and medications (8). APTT
results can vary with anticoagulation therapy depending upon the type and
dosage of anticoagulant, the route of administration and the time of
administration of the last dose.
REFERENCE RANGE:
APTT results are influenced by the method of clot detection and can vary from
laboratory to laboratory. In general an APTT test performed will give clotting
time for normal plasma in the range of 24–39 seconds. Therapeutic ranges for
monitoring oral anticoagulant therapy will vary from laboratory to laboratory;
therefore it is essential that each laboratory establish relevant APTT ranges for
its respective patient population.
Abnormal results obtained with a plasma from a patient not on anticoagulant
therapy may indicate a factor deficiency or the presence of an inhibitor. The
result may also be due to the effects of certain drugs and medications.
Additional procedures such as the PT test and mixing studies using factor
deficient plasma are usually required.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS:
Precision:
The intra-assay precision was assayed using normal and abnormal plasma
controls:
Level 1: mean: 33.3 s, SD: 0.25; CV: 0.8%
Level 2: mean: 60.3 s; SD: 0.51; CV: 0.8%
The inter-assay precision was assayed using normal and abnormal plasma
controls:
Level 1: mean: 32.9 s, SD: 0.35; CV: 1.1%
Level 2: mean: 59.1 s; SD: 0.83; CV: 1.4%
Correlation:
Correlation studies were performed against another APTT reagent on fully
automated instruments. The obtained correlation coefficient was 0.988.
e-mail: [email protected]
web: www.ral-sa.com
Sensitivity:
APTT times obtained with the HEMOS PTT reagent were evaluated on factordeficient plasmas using an automated system. The results are shown in the
following table:
Factor %
60
50
40
30
aPTT (s)
Factor VIII
24.5
25.2
26.0
27.2
These values should be used as guidelines only. Each laboratory should
establish Factor sensitivity using their instruments, reagents and techniques.
Heparin sensitivity:
The anticoagulant action of heparin depends on many factors. Each laboratory
should determine the relative heparin sensitivity by adding known amounts of
unfractioned heparin to pooled normal plasma and determining the elevation
on clotting time using the HEMOS PTT reagent. The following results were
obtained using an automated instrument and the HEMOS PTT reagent. .
Heparin concentration
(units/mL)
0.25
0.50
0.65
0.85
APTT (s)
33
38
42
56
LITERATURE:
1. Human Blood Coagulation, Hemostasis and Thrombosis, 3rd ed. R Biggs,
CR Rizza, Editors, Blackwell Scientific Publications, London (1984).
2. Cole E, Hall ER, Wu KK, Principles of Antithromboltic Therapy. In Wu KK,
Thomboembolic Disorders, PSG Publishing Co. Inc., Litteton, p 91 (1984).
3. Triplett DA, Heparin: Clinical use and Laboratory Monitoring. In Triplett DA,
Laboratory Evaluation of Coagulation, American Society of Clinical Pathologists
Press, Chicago p 272 (1982).
4. Hougie C, The Biochemistry of Blood Coagulation, In Laboratory Evaluation
of Coagulation, American Society of Clinical Pathologists Press, Chicago p 2
(1982).
5. Owen CA, Bowie EJW, Thomson JH, The Diagnosis of Bleeding Disorders,
Little Brown and Company, Boston p 110 (1975).
6. Harker LA, Hemostasis Manual, FA Davis Co, Philadelphia p 62 (1974).
7. Triplett DA, Harms CS, Procedures for the Coagulation Laboratory,
American Society of Clinical Pathologists Press, Chicago, p 7 (1981).
8. Young DS, Pestaner LC, Gibberman V, Effects of Drugs on Clinical
Laboratory Tests, Clin Chem 21; 1D (1975).
IU/GN/1030/R2/0314/EA
HEMOS PTT
Complete kit / Kit complet
MODE OPÉRATOIRE:
Ce mode d’emploi est utilisé par des méthodes manuelles ou semiautomatiques de coagulation. Pour les instruments automatiques voir les
instructions plus spécifiques.
Fabricant: RAL TÉCNICA PARA EL LABORATORIO, S.A.
Av. Mare de Déu de Montserrat 51
08970 Sant Joan Despí (Barcelone) - Espagne
IVD
POUR LE DIAGNOSTIC IN VITRO
CONSERVER À 2-8ºC
1.
LIRE LES NOTICES
2.
REF
Cont.
Référence:
GN 1030:
GN 1033:
Emballage:
3 x 10 mL acide ellagique + 3 x 10 mL CaCl2
3 x 4 mL acide ellagique + 3 x 4 mL CaCl2
3.
USAGE:
Le kit HEMOS PTT est un essai de diagnostic in vitro utilisé pour la
détermination du temps de thromboplastine partielle activée (APTT).
4.
5.
INTÉRÊT CLINIQUE:
Le temps de thromboplastine partielle activée (APTT) est utilisé comme un
essai de monitorage et quantitative générale pour déterminer les facteurs
intrinsèques de la coagulation. L’APTT est sensible aux déficiences ou
anomalies des facteurs VIII, IX, XI, XII, prékallicréine, kinikogen d’haut poids
moléculaire (HMWK), et fibrinogène. L’APTT est aussi sensible aux inhibiteurs
de la coagulation du sang comme l’inhibiteur du lupus et des produits de la
dégradation de fibrine/fibrinogène (1). L’APTT es la méthode plus utilisée pour
le poursuit de la thérapie anticoagulante de l’héparine intraveineuse (2,3).
6.
PRINCIPE:
La capacité du sang pour former un coagule de fibrine par le mécanisme
intrinsèque de la coagulation a besoin des facteurs de coagulation I, II, V, IX,
X, XI et XII, plaquettes des lipides et calcium (4). L’essai est fait en ajoutant
une suspension de céphaline de cerveau de lapin avec un activateur de
surface (1). L’APTT est pris comme un essai facile et fiable de mesure du
mécanisme intrinsèque de la coagulation.
RÉACTIFS:
Le réactif d’acide ellagique HEMOS PTT est une préparation de céphaline de
cerveau de lapin et d’activateur d’acide ellagique avec du tampon, des
stabilisateurs et conservant. Le réactif est prêt à l’emploi.
Le réactif HEMOS PTT CaCl2 est une préparation liquide de CaCl2 et
conservateurs.
AVERTISSEMENTS ET PRÉCAUTIONS:
Ne pas ingérer. Éviter le contact avec la peau, les yeux ou la robe.
CONSERVATION:
Une fois ouvert le flacon du réactif HEMOS PTT acide ellagique est stable
pendant 4 semaines si est conservé à 2 – 8ºC.
Le CaCl2 HEMOS PTT est stable jusqu’à la date de péremption une fois ouvert
si est conservé à 2-8ºC.
SPÉCIMEN:
Le plasma doit être préparé à partir du sang total sans héparine, EDTA ou
oxalate.
1. Prise de l’échantillon avec la seringue: extraire le sang veineux avec la
seringue de plastique ou silicone. Transférer 9mL de sang dans un tube qui
contient 1 mL de citrate sodique au 3.2%.
2. Prise de l’échantillon avec tube sous vide: extraire le sang veineux
avec la seringue a vide qui contient citrate sodique au 3.2%. S’assurer que la
prise est complète pour respecter la proportion 9 parties de sang et 1 partie
de citrate. Ne pas utiliser fermeture d’héparine ou cathéter.
3. Préparation du plasma: Centrifuger le sang pendant 15 minutes à 2500
x g. Pipetter immédiatement après la fin de la centrifugation dans un tube sec
en polystyrène. Ne pas utiliser échantillons hémolysés, avec hématies ou qui
ont plus de 10.000 plaquettes par mm3.
4. Stockage du plasma: Le plasma doit être transfert à un tube en plastic
immédiatement et stocké à 2 – 8ºC. Les plasmas doivent être centrifugés
avant d’être congelés pour assurer l’élimination de cellules. Faire l’essai avant
de 4 heures de l’extraction. Ne couver le plasma à 37ºC plus de 5 minutes
pour éviter la perte des facteurs V et VII.
Tel: (+34) 93 480 80 47
Fax: (+34) 93 373 00 92
Préchauffer l’HEMOS PTT Chlorure Calcique (0.02M) à 37ºC pendant 10
minutes.
Pipetter 100 μL du plasma (échantillon ou contrôle) dans une cuvette de
réaction. Incuber à 37ºC pendant 1 à 2 minutes.
Ajouter 100 μL de réactif d’acide ellagique HEMOS PTT dans la cuvette
qui contienne le plasma. Conserver la suspension du réactif avec
agitation magnétique ou mixer par inversion immédiatement avant de
son usage.
Incuber le mélange à 37ºC pendant 3 minutes.
Ajouter rapidement 100 μL de l’HEMOS PTT Chlorure Calcique (0.02M)
préchauffé et simultanément activer le chronomètre.
Écrire le temps de coagulation en secondes.
CONTRÔLE DE QUALITÉ:
La fiabilité des résultats des essais doit être vérifiée en utilisant Hemotrol N et
P. Chaque laboratoire doit établir son propre range d’acceptation de contrôle
qui représente la variation permise.
CALCUL:
Pour meilleures résultats, c’est recommandé de faire les échantillons en
double. Les résultats d’APTT doivent être donnés en secondes. Calculer le
temps moyen de coagulation d’échantillons en double et des contrôles. Les
différences entre résultats doublés doivent être moins du 5%. Répéter l’essai
si nécessaire.
LIMITATIONS:
Pour éviter des résultats mauvais le ratio entre le sang et l’anticoagulant doit
être 9:1. Échantillons très lipémiques ou hémolysés peuvent donnés de
mauvais valeurs d’APTT (6).
Retard au moment de faire le test, difficulté pour recueillir les échantillons ou
une prise sur la fermeture d’héparine peut provoquer des valeurs longues
d’APTT (7). Les résultats d’APTT peuvent être altérés par la prise de
médicaments ou drogues (8). Les valeurs d’APTT peuvent varier en patients
sous thérapie anticoagulante selon le type et la dose d’anticoagulant, le
moyen d’administration et le temps d’administration de la dernière dose.
VALEURS USUELLES:
Les résultats d’APTT sont influencés par la méthode de détection de
coagulation et peuvent varier de laboratoire à laboratoire. En général, l’essai
d’APTT donnera un temps de coagulation de plasma normal dans un range de
24 à 39 secondes. Les ranges thérapeutiques pour suivre la thérapie
anticoagulante orale variera de laboratoire à laboratoire, c’est pour cela qu’il
faut que chaque laboratoire établisse les ranges d’APTT spécifiques pour la
population de patients.
Résultats anormaux obtenus avec du plasma d’un patient qui ne se trouve sous
thérapie anticoagulante peut indiquer une déficience d’un facteur ou la
présence d’un inhibiteur. Le résultat peut aussi être modifié par les effets des
drogues et des médicaments. Tests additionnels comme le test du PT et des
études de déficience de facteurs peuvent être nécessaires.
PERFORMANCES:
Précision:
La précision intra-série a été évaluée en utilisant les contrôles de plasma
normal et anormal:
Niveau 1: moyenne: 33.3 s, SD: 0.25; CV: 0.8%
Niveau 2: moyenne: 60.3 s; SD: 0.51; CV: 0.8%
La précision inter-série a été évaluée en utilisant les contrôles de plasma
normal et anormal:
Niveau 1: moyenne: 32.9 s, SD: 0.35; CV: 1.1%
Niveau 2: moyenne: 59.1 s; SD: 0.83; CV: 1.4%
Corrélation:
Les résultats des études de corrélation contre d’autres réactifs d’APTT sur des
coagulomètres automatiques ont donné 0.988 comme coefficient de
correlation.
e-mail: [email protected]
web: www.ral-sa.com
Sensibilité:
Les temps d’APTT obtenus avec le réactif HEMOS PTT ont été évalués avec du
plasma facteur déficient sur un semi-automatique. Les résultats se montrent
sur le tableau suivant:
Factor %
60
50
40
30
aPTT (s)
Factor VIII
24.5
25.2
26.0
27.2
Ces valeurs doivent être utilisées comme indicatives. Chaque laboratoire doit
établir le Facteur de sensibilité à partir des instruments, réactifs et méthodes
utilisés.
Sensibilité à l’Héparine:
L’action anticoagulante de l’héparine dépend de beaucoup de facteurs.
Chaque laboratoire doit déterminer la sensibilité relative à l’héparine en
ajoutant quantités connues d’héparine non fractionnée au pool de plasma
normal et déterminer l’augmentation du temps de coagulation en utilisant le
réactif HEMOS PTT. Les résultats suivants ont été obtenus en utilisant un
coagulomètre automatique et le réactif HEMOS PTT.
Concentration d’Héparine
(unités/mL)
0.25
0.50
0.65
0.85
aPTT (s)
33
38
42
56
RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES:
1. Human Blood Coagulation, Hemostasis and Thrombosis, 3rd ed. R Biggs,
CR Rizza, Editors, Blackwell Scientific Publications, London (1984).
2. Cole E, Hall ER, Wu KK, Principles of Antithromboltic Therapy. In Wu KK,
Thomboembolic Disorders, PSG Publishing Co. Inc., Litteton, p 91 (1984).
3. Triplett DA, Heparin: Clinical use and Laboratory Monitoring. In Triplett DA,
Laboratory Evaluation of Coagulation, American Society of Clinical Pathologists
Press, Chicago p 272 (1982).
4. Hougie C, The Biochemistry of Blood Coagulation, In Laboratory Evaluation
of Coagulation, American Society of Clinical Pathologists Press, Chicago p 2
(1982).
5. Owen CA, Bowie EJW, Thomson JH, The Diagnosis of Bleeding Disorders,
Little Brown and Company, Boston p 110 (1975).
6. Harker LA, Hemostasis Manual, FA Davis Co, Philadelphia p 62 (1974).
7. Triplett DA, Harms CS, Procedures for the Coagulation Laboratory,
American Society of Clinical Pathologists Press, Chicago, p 7 (1981).
8. Young DS, Pestaner LC, Gibberman V, Effects of Drugs on Clinical
Laboratory Tests, Clin Chem 21; 1D (1975).
IU/GN/1030/R2/0314/EF
HEMOS PTT
Complete kit / Kit complet
Fabbricante: RAL TÉCNICA PARA EL LABORATORIO, S.A.
Av. Mare de Déu de Montserrat 51
08970 Sant Joan Despí. (Barcelona) - Spain
IVD
DISPOSITIVO MEDICO DIAGNOSTICO IN VITRO
CONSERVARE A 2-8ºC
CONSULTARE LE ISTRUZIONI PER L’USO
REF
Cont.
Codice:
GN 1030:
GN 1033:
Taglio:
3 x 10 mL acido ellagico + 3 x 10 mL CaCl2
3 x 4 mL acido ellagico + 3 x 4 mL CaCl2
FINALITÀ DELL’USO:
Il reagente HEMOS PTT è un test diagnostico usato per determinare il tempo
di tromboplastina parziale attivato (APTT).
SOMMARIO:
L’ APTT è usato come test generale discriminante e quantitativo per
determinare i fattori intrinseci della coagulazione del sangue.
L’ APTT è sensibile alle carenze o anomalie dei fattori VIII, IX, XI, X e II,
precallicreina, chininogeno ad alto peso molecolare (HMWK) e fibrinogeno.
L’APTT è inoltre sensibile agli inibitori della coagulazione del sangue come
l’inibitore lupus ed i prodotti di decomposizione fibrina/fibrinogeno. L’ APTT è
il metodo più utilizzato per monitorare la terapia anticoagulante endovenosa
con eparina.
La capacità del sangue di formare un coagulo di fibrina attraverso la via
intrinseca dell’emostasi richiede la presenza dei fattori I, II, V, IX, X, XI e
XII, lipidi piastrinici e calcio.
L’esame si effettua aggiungendo una
sospensione di cefalina di cervello di coniglio con un attivatore di superficie.
E’ dimostrato che l’ APTT è un test semplice ed altamente affidabile per
verificare il normale flusso di tutto il processo coagulativo.
PRINCIPIO:
La capacità del sangue di formare un coagulo di fibrina attraverso la via
intrinseca dell’emostasi richiede la presenza dei fattori I, II, V, IX, X, XI e
XII, lipidi piastrinici e calcio. L’esame si effettua aggiungendo
una
sospensione di cefalina di cervello di coniglio con un attivatore di superficie.
E’ dimostrato che l’ APTT è un test semplice ed altamente affidabile per
verificare il normale flusso di tutto il processo coagulativo.
REAGENTI:
Il reagente HEMOS PTT è una preparazione di cefalina di cervello di coniglio
con acido ellagico come attivatore, in soluzione tampone con stabilizzanti e
conservanti. Il reagente è fornito pronto per l’ uso.
PRECAUZIONI:
Non ingerire. Evitare il contatto con la pelle, occhi o indumenti.
CONSERVAZIONE:
Il reagente HEMOS PTT Acido Ellagico è stabile per 4 settimane dopo l’
apertura se conservato ad una temperatura compresa tra 2 e 8 °C.
RACCOLTA E PREPARAZIONE DEL CAMPIONE:
Il plasma da testare si ottiene da sangue intero usando sodio citrato come
anticoagulante, in assenza di eparina, EDTA od ossalato.
1. Raccolta sangue mediante siringa: aspirare il sangue venoso con
siringa di plastica o siliconata. Trasferire subito 9.0 mL di sangue in una
provetta contenente 1.0 mL di sodio citrato 3.2 %.
2. Raccolta del sangue mediante tubo sottovuoto: aspirare il sangue
venoso in un tubo sottovuoto del commercio contenente sodio citrato 3.2%.
Data la criticità del rapporto di 9+1 di sangue/anticoagulante, assicurarsi che
il tubo sia riempito come indicato. Per i test di coagulazione si raccomanda di
utilizzare il sangue prelevato nella seconda o terza provetta.
3. Preparazione del plasma: mescolare bene per inversione e centrifugare
a 2.500 x g per 15 minuti subito dopo il prelievo. Se non si sottopongono a
test i plasmi entro le 2 ore, trasferirli in provette di plastica. Si ricorda che i
plasmi che appaiono visibilmente emolizzati o che contengono > 10.000
piastrine per mm3 oppure le emazie non sono adatti per l’esecuzione del test
di coagulazione.
4. Conservazione dei plasmi: i campioni di plasma devono essere trasferiti
in tubi di plastica quanto più rapidamente possibile dopo il prelievo e
conservati tra 2 ed 8 °C: testare i plasmi entro le 4 ore e non incubare a 37
°C per più di 5 minuti al fine di evitare la perdita dei fattori V e VII.
Tel: (+34) 93 480 80 47
Fax: (+34) 93 373 00 92
PROCEDURA:
Questa procedura è adatabile a sistemi di coagulazione manuali e semiautomatici. Fare riferimento al manuale del vostro strumento per le specifiche
istruzioni d’uso.
7.
Pre-incubare il Cloruro di Calcio (0.02M) incluso nel kit HEMOS PTT a
37ºC per 10 minuti.
8.
Pipettare 100 μL di plasma (campione o controllo) in una cuvetta test,
Incubare a 37ºC per 1 o 2 minuti.
9.
Aggiungere 100 μL di reagente HEMOS PTT alla cuvetta contenente il
plasma. Mantenere in sospensione il reagente tramite agitazione
magnetica o mescolare per inversione subito prima dell’uso.
10. Incubare la miscela a 37ºC per 3 minuti.
11. Aggiungere rapidamente 100 μL di Cloruro di Calcio (0.02M) preincubato, con simultanea partenza del timer.
12. Registrare il tempo di coagulazione ottenuto in secondi.
CONTROLLO DI QUALITA’
Si raccomanda l’uso dei plasmi di controllo Hemotrol N e P insieme ai plasmi
dei pazienti. Hemotrol N è un plasma normale mentre Hemotrol P è
leggermente carente. Testare i controlli prima di ogni seduta analitica o
almeno una volta nel corso della stessa. I controlli vanno testati anche ad
ogni cambio di reagente od intervento sullo strumento. Nei laboratori con
alto carico di lavoro si consiglia di eseguire i controlli ogni 40 campioni. Ogni
laboratorio dovrebbe definire un range di valori che permetta di determinare
le variazioni accettabili di giorno in giorno per ciascun plasma di controllo.
CALCOLO DEI RISULTATI:
Per ottenere i migliori risultati si raccomanda di lavorare in doppio. L’APTT
viene riportato come tempo in secondi. S deve calcolare il tempo medio
ottenuto sui campioni ed i plasmi di controllo testati in doppio. La differenza
tra i due risultati in duplicato dovrebbe essere meno del 5%. Ripetere il test
se necessario.
LIMITI DEL METODO:
Per prevenire risultati anomali, accertarsi che il rapporto tra sangue e
anticoagulante sia esattamente 9:1. Campioni molto lipemici o emolizzati
possono dare valori alterati di APTT. Il ritardo nell’esecuzione del test,
difficoltà nel prelievo oppure l’uso di prelievo eparinizzato possono dare
risultati di APTT falsamente prolungati. L’APTT può anche essere
influenzato da talune droghe o farmaci. I risultati di APTT possono variare
con la terapia anticoagulante orale a seconda del tipo di farmaco e della sua
concentrazione, oltre che dalle modalità di assunzione e dal tempo intercorso
dall’ ultima somministrazione.
INTERVALLO DI RIFERIMENTO:
I risultati di APTT sono influenzati dal metodo di determinazione del coagulo e
possono variare da laboratorio a laboratorio. In generale un test APTT
dovrebbe dare per un plasma normale un tempo tra 24 e 39 secondi. Il range
terapeutico per monitorare la terapia con anticoagulanti orali, sarà diverso per
ogni laboratorio; perciò è importante che ogni laboratorio stabilisca i range
rilevanti di APTT per la rispettiva popolazione di pazienti.
Risultati anormali ottenuti in pazienti che non siano in terapia anticoagulante
possono indicare carenza di un fattore o presenza di inibitori. Il risultato
può anche essere influenzato dall’uso di talune droghe e farmaci. In questo
caso sono pertanto consigliati altri test quali il PT o test ad incrocio eseguiti
con plasmi carenti per determinati fattori.
CARATTERISTICHE DEL METODO:
Precisione:
La precisione intra-serie è stata valutata testando plasmi normali e patologici su
strumenti differenti:
Livello 1: valore medio: 33.3 s, SD: 0.25; CV: 0.8%
Livello 2: valore medio: 60.3 s; SD: 0.51; CV: 0.8%
La precisione inter-serie è stata valutata testando plasmi normali e patologici su
strumenti differenti:
Livello 1: valore medio: 32.9 s, SD: 0.35; CV: 1.1%
Livello 2: valore medio: 59.1 s; SD: 0.83; CV: 1.4%
Correlazione:
Gli studi di correlazione sono stati condotti effettuati usando un diverso
reagente APTT su strumenti automatici. Il coefficiente di correlazione ottenuto
è stato di 0.988.
e-mail: [email protected]
web: www.ral-sa.com
Sensibilità:
I tempi di APTT ottenuti col reagente HEMOS PTT sono stati confrontati
utilizzando un sistema automatico con plasmi fattore-carente. I risultati
vengono sotto riportati.
Fattore %
60
50
40
30
aPTT (s)
Fattore VIII
24.5
25.2
26.0
27.2
Questi valori sono indicativi. Ogni laboratorio dovrebbe stabilire il fattore di
sensibilità.
Sensibilità a Eparina:
L’azione anticoagulante dell’eparina dipende da molti fattori. Ogni laboratorio
dovrebbe determinare la sensibilità relativa ad eparina (si aggiungono
quantità conosciute di eparina non frazionata al pool di plasma normal e si
determina l’incremento nel tempo di coagulazione con il reattivo HEMOS PTT).
Risultati ottenuti con il reattivo HEMOS PTT in uno strumento automatico:
Concentrazione di Eparina
(unità/mL)
0.25
0.50
0.65
0.85
APTT (s)
33
38
42
56
BIBLIOGRAFIA:
1. Human Blood Coagulation, Hemostasis and Thrombosis, 3rd ed. R Biggs,
CR Rizza, Editors, Blackwell Scientific Publications, London (1984).
2. Cole E, Hall ER, Wu KK, Principles of Antithromboltic Therapy. In Wu KK,
Thomboembolic Disorders, PSG Publishing Co. Inc., Litteton, p 91 (1984).
3. Triplett DA, Heparin: Clinical use and Laboratory Monitoring. In Triplett DA,
Laboratory Evaluation of Coagulation, American Society of Clinical Pathologists
Press, Chicago p 272 (1982).
4. Hougie C, The Biochemistry of Blood Coagulation, In Laboratory Evaluation
of Coagulation, American Society of Clinical Pathologists Press, Chicago p 2
(1982).
5. Owen CA, Bowie EJW, Thomson JH, The Diagnosis of Bleeding Disorders,
Little Brown and Company, Boston p 110 (1975).
6. Harker LA, Hemostasis Manual, FA Davis Co, Philadelphia p 62 (1974).
7. Triplett DA, Harms CS, Procedures for the Coagulation Laboratory,
IU/GN/1030/R2/0314/EI