Estrazione del DNA dalla frutta

Scopo esperienza: Osservare DNA tramite estrazione
Richiami teorici: Il DNA è una sostanza bianca, zuccherina, leggermente acida, costituita da
nucleotidi che a loro volta sono composti da: uno zucchero (desossiribosio), una base azotata e un
gruppo fosfato. Il DNA è contenuto nel nucleo di tutte le cellule. Per liberarlo e necessario demolire
le membrane cellulari e le membrane nucleari costituite da fosfolipidi, molecole ricche di grassi,
tramite la soluzione A. Il DNA inoltre è avvolto da proteine chiamate istoni che vengono distrutte
dalla bromelina, enzima contenuto nel succo d’ananas fresco. Il DNA è molto solubile nell’acqua,
dove diviene invisibile. Per renderlo visibile aggiungiamo alcool nel quale il DNA precipita
rendendosi visibile ad occhio nudo (DNA insolubile nell’alcool).
Materiale:
•
Soluzione A: 10ml detersivo liquido, 3g NaCl, 90ml d’acqua
•
Banana o kiwi o caco
•
Ananas fresco
•
Forchetta
•
Colino
•
Foglio carta assorbente
•
Siringhe
•
Beker graduato
•
Ghiaccio
•
Stufa termostatata
•
Alcool etilico 95%
•
Bacchetta di vetro
Procedimento:
•
•
•
preparare del ghiaccio un giorno prima
mettere l’alcool etilico in freezer 2 ore prima dell’esperimento
preparare la soluzione d’estrazione (soluzione A)
Detersivo per piatti(10ml), acqua(90ml),
3g NaCl
•
preparare una poltiglia di frutta (banana o kiwi o caco)
•
versare la poltiglia in un beker e successivamente aggiungere la soluzione A; mescolare
•
riscaldare il beker con il contenuto a 60°C per 10 min nella stufa termostatata
Questa operazione serve per accelerare il processo di demolizione delle membrane cellulari, ma
dev’essere applicata per breve tempo, altrimenti l’alta temperatura danneggerebbe il DNA.
•
raffreddare il beker con il contenuto nel ghiaccio per 5min
•
filtrare il composto con un colino e carta assorbente
Questa operazione serve per lasciar passare il DNA e trattenere i residui cellulari.
•
preparare del succo d’ananas fresco
Il succo d’ananas contiene un enzima proteolitico chiamato bromelina in grado di distruggere gli
istoni, proteine che avvolgono il DNA.
•
In una provetta mettere 5 cc di filtrato e aggiungere 1cc di succo d’ananas
•
Attendere 2-3 minuti
•
Versare lentamente 5cc di alcool etilico 95% gelido, senza mescolare
•
lasciare riposare per 5 min
Conclusioni: abbiamo ricavato una sostanza bianca, visibile a occhio nudo. Questa è il
DNA.
Le bollicine evidenziano la diversa solubilità dei gas atmosferici. Imprigionati nell’etanolo freddo
tendono a liberarsi quando sono nella provetta che contiene l’estratto a temperatura più elevata.
•
Successivamente, abbiamo osservato al microscopio ottico la sostanza bianca, il DNA,
ricavato dal nostro esperimento, colorandola con blu di metilene.