Phadebact Streptococcus-IT.indd

53-1115-02, Mar-12
Phadebact® Streptococcus Tests
(A, B, C, G), (A-D, F, G) e (A-D, G)
Phadebact® Strep Respiratory Test (A, C, G)
Phadebact® Strep A Test
Phadebact® Strep B Test
Phadebact® Strep D Tests
Phadebact® Strep F Test
Istruzioni per l’uso
MKL Diagnostics AB
Kung Hans Väg 3
SE-192 68 Sollentuna
Sweden
Co-agglutinazione
Stafilococchi ricoperti di anticorpi
Microrganismo con gli antigeni
corrispondenti
UTILIZZO
Phadebact® Streptococcus Tests, Strep Respiratory Test, Strep A Test, Strep B Test, Strep D Tests e Strep F Test sono
stati messi a punto per l’identificazione degli streptococchi beta-emolitici appartenenti ai gruppi A, B, C, D, F e G.
SOMMARIO E SPIEGAZIONE DEL TEST
La differenziazione degli streptococchi beta-emolitici nei gruppi Lancefield è importante sia per il trattamento che per
la prognosi del paziente (1). Fornendo al medico le informazioni sul gruppo sierologico, un trattamento corretto può
essere effettuato ed un inutile uso di antibiotici può essere evitato (2). Gli streptococchi appartenenti ai gruppi A, B, C,
D, F e G sono quelli più frequentemente associati con infezioni umane di streptococchi (3-9).
Esistono diversi metodi per l’identificazione degli streptococchi. Le reazioni biochimiche ed il disco bacitracine
forniscono un’identificazione presunta. La tecnica di Lancefield con precipitin, l’immunoelettroforesi e l’agglutinazione
di latex forniscono un’identificazione definitiva. Comunque con questi metodi è necessaria l’estrazione degli antigeni
specifici per gruppo. Phadebact® Streptococcus Test, basato sulla tecnica di co-agglutinazione (10) permette
un’identificazione definitiva dei gruppi stafilococchi A, B, C, D, F e G adoperando una tecnica slide semplice e
veloce.
PRINCIPIO DELLA PROCEDURA
La tecnica di co-agglutinazione: Anticorpi di coniglio, specifici dei gruppi streptococchi A, B, C, D, F e G sono legati
alla Proteina A presente sulla superficie di stafilococchi non vitali. Quando un campione contenente streptococchi
appartenenti a uno di questi gruppi viene mescolato con il suo reagente, gli antigeni specifici sulla superficie dello
streptococco si legano agli anticorpi specifici corrispondenti. Si forma una grata di co-agglutinazione visibile ad
occhio nudo.
REAGENTI
Ogni confezione Phadebact® per l’analisi di streptococchi contiene reagenti sufficienti per il seguente numero di
rilevazioni:
Prodotto
Phadebact® Streptococcus Test (A, B, C, G)
Phadebact® Strep A-D, F, G Test
Phadebact® Strep A-D, G Test
Phadebact® Strep Respiratory Test (A, C, G)
Phadebact® Strep A Test
Phadebact® Strep B Test
Phadebact® Strep D 100 Test
Phadebact® Strep D Test
Phadebact® Strep F Test
Rilevazioni
300
300
250
200
100
100
100
50
50
I reagenti sono colorati blu (blu Metilene) per facilitare l’interpretazione dei risultati.
Ingredienti reattivi
Gli ingredienti reattivi contenuti nei prodotti qui elencati sono i seguenti :
Phadebact® Streptococcus Test (A, B, C, G)
Antisiero di coniglio, specifico per gruppo, legato a stafilococchi non vitali.
•
Una fiala di reagenti Strep per ciascuno dei gruppi A, B, C e G.
Phadebact® Strep A-D, F, G Test
Antisiero di coniglio, specifico per gruppo, legato a stafilococchi non vitali.
•
Una fiala di reagenti Strep per ciascuno dei gruppi A, B, C, D, F e G.
Phadebact® Strep A-D, G Test
Antisiero di coniglio, specifico per gruppo, legato a stafilococchi non vitali.
•
Una fiala di reagenti Strep per ciascuno dei gruppi A, B, C, D e G.
Phadebact® Strep Respiratory Test (A, C, G)
Antisiero di coniglio, specifico per gruppo, legato a stafilococchi non vitali.
•
Una fiala di reagenti Strep per ciascuno dei gruppi A, C e G.
•
Reagente Phadebact® Control:
Gammaglobulina di coniglio non immunizzato legata a stafilococchi non vitali.
Phadebact® Strep A Test
•
Reagente Strep A:
Anticorpi di coniglio specifici legati a stafilococchi non vitali.
•
Reagente Phadebact® Control:
Gammaglobulina di coniglio non immunizzato legata a stafilococchi non vitali.
Phadebact® Strep B Test
•
Reagente Strep B:
Anticorpi di coniglio specifici legati con stafilococchi non vitali.
•
Reagente Phadebact® Control:
Gammaglobulina di coniglio non immunizzato legata a stafilococchi non vitali.
1 fiala
1 fiala
1 fiala
1 fiala
1 fiala
Phadebact® Strep D 100 Test
•
Reagente Strep D:
Anticorpi di coniglio specifici legati a stafilococchi non vitali.
•
Reagente Phadebact Control:
Gammaglobulina di coniglio non immunizzato legata a stafilococchi non vitali.
Phadebact® Strep D Test
•
Reagente Strep D:
Anticorpi di coniglio specifici legati a stafilococchi non vitali.
•
Reagente Phadebact Control:
Gammaglobulina di coniglio non immunizzato legata a stafilococchi non vitali.
Phadebact® Strep F Test
•
Reagente Strep F:
Anticorpi di coniglio specifici legati con stafilococchi non vitali.
•
Reagente Phadebact Control:
Gammaglobulina di coniglio non immunizzato legata a stafilococchi non vitali.
2 fiale
2 fiale
1 fiala
1 fiala
1 fiala
1 fiala
Altri componenti
•
Contagocce
•
Slides usa e getta
•
Istruzioni per l’Uso
Precauzioni
Per un uso diagnostico in vitro.
Attenzione! I controlli contengono Sodio azide (NaN3) come conservante. Il Sodio azide può reagire con il piombo
e il rame presenti nell’impianto idraulico formando metalli azidi altamente esplosivi. Pertanto, se si utilizza l’impianto
idraulico per disfarsi dei controlli, far scorrere grande quantità di acqua per prevenire accumulo di azide. Fare riferimento
alle procedure di decontaminazione come illustrato dal CDC (18).
Preparazione dei reagenti
I reagenti sono PRONTI PER L’USO.
Modalità di conservazione e scadenza
La data di scadenza è riportata sull’etichetta esterna e sulle etichette delle fiale. Si raccomanda di conservare il kit ad
una temperatura di 2-8oC. I controlli devono essere protetti dal congelamento.
RACCOLTA E TRATTAMENTO DEI CAMPIONI
Si prega di riferirsi ad un libro di testo standard di microbiologia per quanto riguarda l’informazione sulla raccolta e
sul trattamento dei campioni. Campioni per la ricerca possono essere prelevati da qualsiasi parte del corpo in cui
organismi vitali sono presenti. Se il campione deve essere trasportato al laboratorio, il tampone deve essere immerso
in una soluzione di trasporto come per esempio una soluzione di Stuart. Il tampone deve raggiungere il laboratorio
tra le 24 e le 48 ore. Non è necessaria l’aggiunta di nessun additivo o conservante durante il trasporto o la coltura.
Campioni provenienti da pazienti sotto cura antibiotica possono contenere o pochi batteri o batteri non vitali.
PROCEDURA
Materiali forniti
Vedere sotto REAGENTI.
Materiali richiesti ma non forniti
•
Colture primarie
•
Brodo arricchito (É molto raccomandato l’utilizzo del Brodo di Todd-Hewitt prodotto da BBL) necessario soltanto
per il metodo con brodo di riferimento.
•
Pipette Pasteur
•
Occhielli inoculanti usa e getta o l’equivalente
•
Incubatore 35-37oC (se si usa il metodo del brodo di riferimento).
•
Orologio con indicatore di secondi facilmente leggibile
Parametri del metodo
Temperatura di reazione
Tempo di reazione
Volume dei reagenti
Temperatura ambiente
1 minuto
Una goccia per ciascun gruppo da analizzare
Preparazione dei campioni
Fare riferimento ai libri di testo standard di microbiologia riguardanti informazioni dettagliate sulla preparazione di
colture primarie. Esistono tre procedure alternative per la preparazione dei campioni che possono essere utilizzati con
Phadebact® Streptococcus Test.
I. Campioni di colonia
•
Ispezionare attentamente la piastra di crescita primaria per verificare la presenza di colonie beta-emolitiche.
•
Prelevare da 1 a 5 colonie di streptococchi beta-emolitici con un occhiello usa e getta o l’equivalente in un numero
sufficiente a essere spalmato nei cerchi selezionati sulla slide.
•
Queste colonie vengono usate per il test.
II. Procedura opzionale di estrazione diretta da colonie
Una procedura opzionale di estrazione diretta da colonie – usando Phadebact® Extraction Solutions disponibile presso
MKL Diagnostics AB – può essere presa in considerazione in quelle situazioni occasionali in cui:
•
Il materiale del campione è insufficiente a soddisfare le condizioni richieste per l’analisi diretta delle colonie (1-5
colonie per reagente).
•
Si ottengono risultati non definitivi testando direttamente le colonie.
Nota! Strep D e Strep F non sono concepito per l’estrazione (Si raccomanda l’inoculazione in brodo).
III. Inoculazione in brodo
•
Verificare attentamente la presenza di colonie beta-emolitiche sulla piastra di crescita.
•
Prelevare 1 o più colonie di streptococchi beta-emolitici.
•
Inoculare in 2 mL di brodo arricchito.
•
Incubare a 35-37oC durante la notte o fino ad ottenere una turgidità evidente (equivalente a una densità standard
Mac-Farland di 2-3). Solitamente, quando si utilizzano 0,5 mL di brodo arricchito e più colonie, c’è già una crescita
sufficiente dopo solo 4 ore di incubazione.
•
Gocce di questa soluzione sono usate per il test.
Protocollo del test
•
Prima dell’uso, mescolare bene i reagente agitandoli.
•
Prima dell’uso i reagenti devono raggiungere temperatura ambiente.
•
Una buona pratica di laboratorio suggerisce l’uso appropriato di controlli negativi e positivi come in qualsiasi
procedura di analisi.
I. Test diretto di colonie
Su una slide usa e getta,
marcare un ovale per
ciascun reagente di gruppo
selezionato per il test.
Spalmare completamente e
delicatamente le colonie
sulla slide nell’intera area
del cerchio interno di
ciascun ovale marcato.
Fig 1.
Versare una goccia di
ciascun reagente selezionato
sulle colonie spalmate nei
corrispondenti ovali marcati.
Fig. 2.
Fig. 2
Fig. 1
Usando degli stick-applicatori di legno
nudo o occhielli di plastica usa e getta,
mescolare completamente le gocce di
reagenti nelle colonie spalmate. Usare
un nuovo stick o occhiello per ciascun
ovale.
AVVERTENZA:
- Stick-applicatori di carta possono
assorbire i reagenti dando nessuna o
una scarsa reazione.
- Spalmando il reagente su un’area
più grande delle colonie presenti
all’interno dell’ovale, si ottiene un
risultato più facilmente leggibile.
Fig. 3.
Fig. 4
Fig. 3
Fare oscillare la slide e
leggere i risultati entro 1
minuto. Fig. 4.
II. Procedura opzionale di estrazione diretta di colonie
•
Prelevandole dalla confezione Phadebact® Extraction Solution, mescolare in una piccola provetta (8 x 50mm) 4
gocce di Extraction Solution 1 con 4 gocce di Extraction Solution 2.
•
Estrarre 1-3 colonie di streptococchi beta-emolitici dalla piastra primaria e sospenderle nella miscela di
Extraction Solution.
•
Incubare a temperatura ambiente per 10-15 minuti o a 100oC per 1 minuto.
•
Usando una pipetta Pasteur versare una goccia di colonia estratta in ogni ovale marcato per il test sulla slide
usa e getta.
•
Versare una goccia di ogni reagente Phadebact selezionato per il test sulle gocce delle colonie estratte
marcate in maniera corrispondente.
•
Usando un occhiello usa e getta o uno stick-applicatore di legno nudo, spalmare le gocce in un’area più grande
del cerchio interno ad ogni ovale. Assicurarsi di mescolare bene il reagente con la soluzione di estratto mentre
si spalma ogni ovale. Usare un nuovo occhiello usa e getta o uno stick-applicatore per spalmare ogni campione.
•
Fare oscillare la slide e leggere i risultati entro 1 minuto.
III. Test con brodo di riferimento
•
Su una slide usa e getta marcare gli ovali in modo corrispondente a ciascun reagente di gruppo selezionato per
l’analisi.
•
Versare una goccia del brodo di coltura nel piccolo cerchio interno ad ogni ovale marcato.
•
Versare una goccia di ogni reagente selezionato sulle gocce di brodo negli ovali corrispondenti marcati.
•
Usando un occhiello uso e getta o uno stick-applicatore di legno nudo, spalmare le gocce su un’area più grande
di quella del cerchio interno. Assicurarsi di mescolare bene le gocce del reagente e del brodo mentre si spalma
ogni ovale. Usare un nuovo occhiello o un nuovo stick-applicatore per spalmare ciascun campione.
•
Fare oscillare la slide e leggere i risultati entro 1 minuto.
Stabilità della miscela finale di reazione
La reazione di co-agglutinazione è stabile, ma una buona pratica di laboratorio suggerisce che il risultato va letto
entro 1 minuto (notare che c’è il rischio che il seccarsi dei reagenti può essere misinterpretato come una reazione
positiva).
Calibrazione
Nessuna calibrazione è necessaria.
Controllo di qualità
Controllo Positivo
•
Phadebact® Positive Control è disponibile presso MKL Diagnostics AB. La confezione contiene fiale separate di
antigene proveniente da colture pure di gruppi streptococchi A, B, C, D, F e G.
•
Poiché questi controlli di antigene sono separati e purificati, essi possono essere utilizzati per testare la
specificità e la reattività dei reagenti Phadebact® Streptoccocus. Perciò controlli con organismi vivi non sono
necessari.
•
Questi controlli positivi sono testati nella stessa maniera dei batteri sconosciuti provenienti da un brodo di
coltura.
•
Alternativamente si possono utilizzare famiglie di gruppi streptococchi identificati in laboratorio cioè Strep A
(ATCC 19615), Strep B (ATCC 12401), Strep C (ATCC 9892), Strep D (ATCC 9812), Strep F (ATCC 12392) e
Strep G (ATCC 12395).
Controllo negativo
•
L’uso simultaneo di più reagenti per testare un controllo o un campione sconosciuto costituisce un controllo
negativo implicito. Se il batterio sconosciuto è uno streptococco del gruppo A, una co-agglutinazione
deve occorrere nel reagente A. I reagenti B, C e G devono dare un risultato negativo (o una reazione
significativamente più debole).
•
Quando si utilizza un kit contenente un unico reagente, per esempio Phadebact® Strep A Test, Phadebact®
Strep B Test, Phadebact® Strep D Tests o Phadebact® Strep F Test, un controllo negativo è un altro gruppo
streptococco (di controllo o identificato in laboratorio).
Aspetto della reazione
Nessuna reazione
Reazione positiva
RISULTATI
Risultato positivo
Una reazione significativamente più forte e più rapida in uno dei reagenti, quando viene paragonata agli altri tre
reagenti, costituisce un risultato positivo utilizzando Phadebact® Streptococcus Test. Il Phadebact® Control deve
essere utilizzato per gli altri test.
Risultato negativo
L’assenza di reazione in ogni reagente indica con forza che il batterio testato non appartiene ai gruppi A, B, C, D, F o
G; oppure che il campione non contiene abbastanza materiale antigene. Vedere sotto LIMITI DELLA PROCEDURA.
Risultati non interpretabili
Se una co-agglutinazione ugualmente intensa e veloce occorre con più di uno dei reagenti streptococchi, si prega di
riferirsi ai LIMITI DELLA PROCEDURA.
LIMITI DELLA PROCEDURA
•
I gruppi di streptococchi usati per la produzione del nostro antisiero sono cresciuti in brodo Todd-Hewitt prodotto
da Difco. Per cui non è raccomandato l’uso di brodo Difco per la coltura dei campioni da testare con i reagenti
Phadebact®.
•
Se i risultati ottenuti utilizzando il test diretto di colonie (I) sono inconcludenti poiché il materiale per il test non è
sufficiente, si raccomanda di ripetere il test con la procedura opzionale di estrazione diretta di colonie (II).
•
Se i risultati ottenuti utilizzando il test con brodo di 4 ore (III) sono incerti a causa di una crescita insufficiente, si
raccomanda di incubare nuovamente il brodo durante la notte e di testarlo nella maniera normale.
•
Se una co-agglutinazione di intensità e velocità ugualmente forte si verifica con più di un reagente streptococco,
si raccomanda di ripetere il test usando la procedura opzionale di estrazione diretta di colonie.
•
Le famiglie Listeria posseggono caratteristiche antigene simili al gruppo streptococco B e possono perciò
reagire positivamente con il reagente del gruppo B. Per differenziare le famiglie Listeria dal gruppo streptococco
B si può utilizzare il test catalasi: gli streptococchi sono catalasi-negativi mentre i le famiglie Listeria sono
catalasi-positive.
•
Phadebact® Strep D e Phadebact® Strep F non sono concepito per le procedure di estrazione diretta di colonie.
CARATTERISTICHE DI RENDIMENTO
Specificità e sensibilità
I.
Test diretti di colonie
Negli studi clinici (11,12) riguardanti i test diretti di colonie, 263/279 (94,3%) campioni di streptococchi beta-emolitici
testati con questo metodo sono stai identificati correttamente.
II.
Test con brodo – 4 ore di incubazione
Gli studi clinici (13,14,15) hanno dimostrato che se comparata alla tecnica di Lancefield, 272/285 (95,4%) campioni di
streptococchi beta-emolitici sono stati identificati dopo 4 ore di incubazione.
III. Test con brodo – 24 ore di incubazione
Gli studi clinici (16,17) hanno dimostrato che il 99% di campioni streptococchi sono stati identificati dopo 24 ore di
incubazione.
IV. Streptococcus gruppo A
V. Streptococcus gruppo B
Campione
batteriologico
Numero delle
famiglie coagglutinanti
Campione
batteriologico
Numero delle
famiglie coagglutinanti
Strep A
166/168
Strep B
128/130
Non-strep A
(beta-emolitico)
1/56
Non-strep B
(beta-emolitico)
1/18
Strep D
0/13
Strep. alfa-emolitico
0/109
S. pneumoniae
1/11
Strep. non-emolitico
0/98
Klebsiella spp.
0/10
Enterococchi
0/28
0/10
Stafilococchi
0/118
Staphylococcus spp.
0/20
Sensibilità: 98.5%
Accuratezza: 99.4%
Sensibilità: 98.8%
Accuratezza: 99.1%
Specificità: 99.7%
H. influenzae
Specificità: 99.4%
VI. Streptococcus gruppo D
VII. Streptococcus gruppo F
Campione
batteriologico
Numero delle famiglie coagglutinanti
Campione
batteriologico
Test diretti di
colonie
Brodo 4 ore
Strep F
77/81
Strep D
178/190
226/240
Strep A
1/26
Strep A,B,C,G
0/40
0/40
Strep B
1/24
S. mutans
0/11
0/11
Strep C
0/21
S. sangius
4/19
-
Strep D
0/7
S. uberis
0/2
0/2
Strep G
2/19
S.mitis
3/4
0/1
S. pneumoniae
1/71
S. milleri
0/11
0/11
Sensibilità: 95.0%
Accuratezza: 96.4%
Sensibilità: 93.4%
Accuratezza: 93.4%
Specificità: 92.8%
Specificità: 97.0%
Numero delle
famiglie coagglutinanti
Nota! Se vengono testati alcuni batteri diversi dagli streptococchi beta-emolitici, possono verificarsi risultati
non corretti. Per esempio ceppi di Streptococcus faecalis possono dare una co-agglutinazione nel reagente C.
Streptococcus pneumoniae (Diplococcus pneumoniae) può co-agglutinare con il reagente del gruppo C, il che si
accorda con le note similarità intercorrenti tra gli antigeni S. pneumoniae e gli streptococchi del gruppo C.
Riproducibilità
I reagenti usati in questo test sono periodicamente controllati rispetto ai ceppi conosciuti per assicurare la
riproducibilità.
GARANZIA
I dati di rendimento qui presentati sono stati ottenuti usando le procedure indicate. Qualsiasi cambiamento o modifica
nelle procedure non raccomandato da MKL Diagnostics AB può affettare i risultati. In tal caso, MKL Diagnostics AB disconosce
tutte le garanzie, espresse, implicite o statuarie, incluse le garanzie implicate nella commerciabilità e nella convenienza per
l’uso. MKL Diagnostics AB, e i sui rivenditori autorizzati, in tali casi non saranno considerati responsabili per qualsiasi danno
diretto, indiretto o consequenziale.
Riferimenti:
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(New York, London) 1972.
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(1977), 23-26.
18. Manual Guide-Safety Management, No CDC-22, 4/30/76.
PRODOTTI
Phadebact® COA System
Phadebact® Streptococcus Tests
Phadebact® Streptococcus Respiratory Test
Phadebact® Strep A Test
Phadebact® Strep B Test
Phadebact® Strep D Test
Phadebact® Strep F Test
Phadebact® Strep Positive Controls
Phadebact® Pneumococcus Test
Phadebact® Haemophilus Test
Phadebact® GC Positive Controls
Phadebact® CSF Test
Phadebact® CSF Positive Controls
Phadebact® Extraction Solutions
Phadebact® Monoclonal GC Test
Phadebact® ETEC-LT Test
Phadebact® Salmonella Test
Phadebact® Staph Aureus Test
Near Patient Testing
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Phadirect®
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