Purezza con SPE

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Purezza con SPE

Prodotti Oasis per l'estrazione dei campioni
Purezza
con SPE
I PRODOTTI SPE PIÙ DIFFUSI
NEI LABORATORI DI ANALISI
BIOLOGICHE
La linea di prodotti Oasis offre:
n Il massimo grado di recupero SPE
n Gli estratti più puri
n Riduzione dell'effetto matrice
n La minor variabilità dei metodi
* Brevetti U.S.A. 5,882,521 (1996), 5,976,376 (1998), 6,106,721 (1999), 6,254,780 (2001), 6,322,695 (2001),
6,468,422 (2002), 6,726,842 (2004), 6,773,583 (2004), 6,723,236 (2004), altri brevetti in attesa di approvazione.
2
L'innovativo design della linea di prodotti Oasis® per l'estrazione in
fase solida mira a semplificare e migliorare la preparazione dei campioni.
Il connubio tra l'adsorbente opportuno, il formato dei dispositivi e la
metodologia consente ai ricercatori che eseguono analisi biologiche di
avvalersi costantemente di metodi SPE affidabili, riproducibili e sensibili.
Gli adsorbenti Oasis per SPE, coperti da nove brevetti USA*, offrono
caratteristiche uniche di purezza, stabilità e ritenzione. La rivoluzionaria
piastra brevettata Oasis µElution è la prima del genere a consentire di
ottenere volumi di eluizione degli estratti puri di soli 25 µL, garantendo al
contempo un elevato recupero SPE degli analiti.
[ 3 ]
Le ragioni alla base della scelta SPE
Per le analisi ad alta sensibilità, per esempio le applicazioni UPLC®/MS/MS, la
corretta preparazione dei campioni è una fase cruciale per minimizzare l'effetto
matrice e concentrare gli analiti di interesse. La preparazione dei campioni
eseguita con i prodotti Oasis può essere utilizzata con i sistemi UPLC/MS/MS per
ottenere estratti di massima purezza.
Il sistema qui illustrato integra il modello
Xevo™ TQ MS, uno spettrometro di
massa all'avanguardia che coniuga il
software MassLynx™ e l'innovazione delle
tecnologie ScanWave™ e IntelliStart, e il
sistema Waters ACQUITY UPLC®.
La preparazione dei campioni è una fase essenziale di ogni metodo analitico (per es. LC/MS/MS). Si calcola che, dal 60 al 80 % dell'attività e dei costi
operativi di un laboratorio analitico, viene impiegato nella preparazione dei campioni da introdurre nello strumento.
L'importanza della preparazione dei campioni, in particolare nel caso delle applicazioni SPE, è legata a quattro fattori principali: la rimozione dell'effetto
matrice (inclusa la riduzione della soppressione ionica), la diminuzione della variabilità dei metodi, la concentrazione degli analiti di interesse e il
miglioramento delle prestazioni del sistema di analisi.
S P E off re soluzioni ai seguent i t re p rincipali p robl emi nella sepa razione dei cam pioni
Rimozione delle interferenze dalla matrice DEL CAMPIONE
Concentrazione dell’analita o degli analiti DI INTERESSE
L'estrazione in fase solida (SPE) è uno strumento di comprovata
efficacia per la rimozione di interferenze e consente di eseguire analisi
LC/MS/MS sensibili, selettive e affidabili.
Spesso i composti di interesse sono presenti in concentrazioni troppo
basse per poter eseguire analisi quantitative accurate e precise. La
tecnica SPE consente di arricchire analiti specifici senza concentrare
le specie interferenti.
Riduzione della so pp ressione ionica
Miglioramento delle prestazioni dei sistemi ANALITICI
I prodotti Oasis per SPE rimuovono efficacemente fosfolipidi
e liso-fosfolipidi, ossia i principali fattori alla base della
soppressione ionica nelle analisi LC/MS/MS. La rimozione di tali
interferenze consente di ridurre la variabilità dei metodi e di
incrementare la risposta MS, permettendo quindi di ottenere LOQ
più bassi.
I miglioramenti della tecnologia SPE, coniugati all'automazione,
rendono l'SPE non soltanto uno strumento economicamente
conveniente ma anche una tecnica di preparazione dei campioni
efficace in termini di tempo. Ciò si traduce in un miglioramento delle
prestazioni dei sistemi di analisi grazie a:
n
Introduzione di analiti in solventi compatibili con i metodi MS
n
Prolungamento della durata delle colonne analitiche,
riduzione dei tempi di inattività/manutenzione
n
Riduzione della soppressione ionica per migliorare la
risposta del segnale
[ 4 ]
CHIMICA
Innovazioni Wat e rs nell’est razione su fase solida (S P E)
Nel 1996 Waters ha rivoluzionato la tecnologia SPE grazie all'introduzione di Oasis HLB, il primo
adsorbente polimerico bagnabile con acqua e idrofobo allo stesso tempo. Il lancio di questo prodotto
ha modificato per sempre i metodi SPE. La linea Oasis include cinque prodotti SPE brevettati ideali
per soddisfare ogni esigenza di preparazione dei campioni:
n Oasis
HLB:
Adsorbente in fase inversa a bilancio idrofilo-lipofilo (HLB) per
acidi, basi e neutri
n Oasis
MCX:
Adsorbente in modalità mista a scambio cationico (MCX) in
fase inversa per basi
n Oasis
MAX:
Adsorbente in modalità mista a scambio anionico (MAX) in
fase inversa per acidi
n Oasis
WCX:
Adsorbente in modalità mista a scambio cationico debole (WCX) in fase
inversa per basi forti e ammine quaternarie
n Oasis
WAX:
Adsorbente in modalità mista a scambio anionico debole (WAX) in
fase inversa per acidi forti (quali i solfonati)
OASIS MAX
OASIS MCX
OASIS HLB
pKa <1
1 meq/g
Hydrophilic
Retention of Polars
OASIS WCX
pKa >18
0.25 meq/g
Lipophilic
RP Retention
OASIS WAX
Water-wettable
Stable from pH 0–14
No silanol interactions
pKa ~6
0.6 meq/g
pKa ~5
0.75 meq/g
[ 5 ]
Adsorbente
Adsorbent e Oasis HLB
Esclusivo copolimero Oasis HLB bagnabile con acqua
Adsorbente universale per composti acidi,
neutri e basici
Oasis HLB è un adsorbente in fase inversa bagnabile con acqua
a bilancio idrofilo-lipofilo che soddisfa ogni esigenza dei metodi
SPE. È costituito da un rapporto bilanciato di due monomeri:
n-vinilpirrolidone idrofilo e divinilbenzene lipofilo. La presenza di un
“gancio” polare neutro migliora la ritenzione di analiti polari in fase
inversa.
Waters ha prodotto una linea di adsorbenti SPE che vantano alcune
caratteristiche speciali di questo substrato unico: stabilità a pH
estremi e in un ampio spettro di solventi, straordinaria ritenzione
dei composti polari e una capacità di ritenzione idrofoba relativa 3
volte superiore rispetto ai tradizionali adsorbenti per SPE in silice a
fase inversa. Gli adsorbenti bagnabili con acqua Oasis presentano
un’eccellente capacità di ritenzione per un più ampio spettro di analiti
polari anche nei casi in cui il letto di adsorbente si secca durante
il condizionamento o il caricamento dei campioni. Ciò consente di
usufruire di metodi SPE più robusti e di eliminare la necessità di
ripetere la preparazione dei campioni.
N-VINYLPYRROLIDONE
DIVINYLBENZENE
HYDROPHILIC-LIPOPHILIC BALANCE
Specific Surface Area: 810 m2/g, Average Pore Diameter: 80 Å
Total Pore Volume: 1.3 cm3/g, Average Particle Diameter: 5 µm, 15 µm, 25 µm, 30 µm or 60 µm
Effetto dell’essicamento durante il recupero
La maggiore capacità di ritenzione (k) consente di trattenere più
analiti, riducendo le perdite e migliorando la riproducibilità e il
recupero complessivi del metodo SPE.
No impact of sorbent drying on HLB
High, consistent recovery
L’adsorbente Oasis HLB è disponibile in cinque dimensioni delle
particelle (60 µm, 30 µm, 25µm, 15 µm e 5 µm) e nei formati
cartuccia, piastra e colonna, e permette quindi di selezionare il
prodotto adatto in base al volume, alla viscosità e alla torbidità dei
campioni.
Oasis HLB Cartridge (30 mg)
C18 Cartridge (100 mg)
100
100
80
Procainamide
Acetaminophen
Ranitidine
Propranolol
Doxepin
60
40
20
Riproducibilità eccezionale da lotto a lotto
0
Gli adsorbenti tradizionali in silice a fase inversa non offrono
riproducibilità da lotto a lotto perchè presentano scarsa stabilità a pH
acido, capacità ionica relativamente bassa e difficoltà di legame. Per
garantire prestazioni uniformi gli utilizzatori controllano la qualità
degli adsorbenti e conservano lotti specifici.
0
% Recovery
% Recovery
80
5
10
Drying Time (minutes)
60
40
20
0
0
4
Drying Time (minutes)
8
Riproducibilità da batch a batch dell'adsorbente
Oasis HLB —Uno straordinario decennio di
risultati uniformi
No Batch Reservations Needed: Consistently high recoveries over more than 10 years of production.
% Recovery
105
95
85
Recovery for:
Procanamide – 1.90% RSD
Gli adsorbenti Oasis hanno garantito un'eccellente riproducibilità a
lungo termine da batch a batch per oltre dieci anni. Come risultato di
un attento processo di design e delle più stringenti regole di controllo
qualità, è stato raggiunto un nuovo standard di riproducibilità per
gli adsorbenti SPE. L'intera linea di adsorbenti e dispositivi Oasis
è prodotta negli stabilimenti Waters certificati ISO 9000 e in
Ranitidine – 1.68% RSD
Acetaminophen – 1.65% RSD
conformità alle linee guida cGMP dell'FDA degli Stati Uniti relative ai
dispositivi medicali di classe 1.
Batch multipli di ciascun prodotto Oasis HLB, MCX, MAX, WCX e WAX
sono stati utilizzati con successo per saggi bioanalitici validati in
un ambiente di laboratorio regolamentato.
[ 6 ]
Adsorbente
Adsorbent e Oasis MC X
Interazione composto-adsorbente su adsorbente
Oasis MCX
Adsorbente in modalità mista a scambio
e in fase inversa
Highly selective retention enables much stronger washes,
resulting in very clean extracts.
Elevata selettività e sensibilità per composti basici
L'adsorbente Oasis MCX è ideato per superare le limitazioni dei
tradizionali adsorbenti in silice per modalità mista SPE. Si tratta di
un adsorbente polimerico bagnabile con acqua in modalità mista
a scambio cationico prodotto da Waters mediante un innovativo
processo brevettato che ne garantisce la riproducibilità. Oasis MCX
offre due modalità di ritenzione, scambio ionico e fase inversa, su
un unico copolimero organico, pulito, stabile, ad ampia superficie e
stabile per valori di pH compresi tra 0 e 14.
O
N
MCX sorbent
Mixed-mode Cation eXchange
SO–3
SO–3
Strong cationexchange mode
Best retention at least
2 pH units below pKa
of the analyte
Reversed-phase
interaction
Oltre alla stabilità in un ampio intervallo di pH tipica dei polimeri
DVB, Oasis MCX presenta una maggior capacità legante rispetto
ad altri adsorbenti in silice in modalità mista per SPE. La capacità
di manipolare completamente il pH (0-14) durante lo sviluppo,
l’ottimizzazione e l’uso di metodi SPE su adsorbenti in modalità
mista, consente un facile sviluppo di metodi ed assicura procedure
ad elevata robustezza. Non vi è presenza di bassi recuperi o perdita
di composti polari dovuta alla dissoluzione di particelle di silice ad
elevato pH e scissione di fasi legate a basso pH.
+
N
H H
O
CH 3
OH
Sulfonic-acid-cationexchange capacity:
1.0 meq/g
L’uso efficiente di adsorbenti SPE in modalità mista per l’estrazione
di composti basici da matrici biologiche (quali plasma, urina, bile e
omogenati) richiede elevata capacità di ritenzione, in fase inversa per
la ritenzione delle interferenze e a scambio ionico per la ritenzione
selettiva degli analiti. I comuni adsorbenti in modalità mista in
CH 3
Propranolol
(basic drug)
silice sono sintetizzati tramite un processo complesso e difficile
da controllare e presentano valori di capacità di scambio ionico
relativamente contenuti (compresi nell'intervallo 0,06-0,2 meq/g).
Il processo produttivo innovativo, controllabile e riproducibile
sviluppato da Waters si traduce in prodotti Oasis WCX che offrono
capacità di scambio ionico dell'acido carbossilico pari a 1,0 meq/g.
Oasis MAX è disponibile in due dimensioni di particelle: 60 µm e 30 µm.
Adsorbent e Oasis MAX
Adsorbente in modalità mista a scambio anionico
(MAX) e in fase inversa
Oasis MAX
Elevata selettività e sensibilità per composti acidi
L'adsorbente Oasis MAX è ideato per superare le limitazioni dei
tradizionali adsorbenti in silice per modalità mista SPE. Si tratta di
un adsorbente polimerico bagnabile con acqua in modalità mista
a scambio anionico forte, stabile per valori di pH da 0 a 14. Ora è
possibile utilizzare metodi SPE affidabili per rilevare, confermare
o quantificare composti e/o metaboliti acidi nei fluidi biologici. Le
procedure SPE che impiegano la selettività e la robustezza di Oasis
MAX consentono di separare gli analiti dai campioni complessi in
due frazioni: composti acidi e composti basici/neutri. Gli estratti di
frazionamento possono essere analizzati con più metodi analitici o
addirittura con tecniche combinate (LC/MS e GC/MS).
O
MAX sorbent
Mixed-mode Anion eXchange
N
CH 3
+
CH 2 N C H
4 9
R+
CH 3
Strong anionexchange mode
Best retention at least
Reversed-phase
retention
sviluppato da Waters si traduce in prodotti Oasis MAX che offrono
capacità di scambio ionico dell'ammina quaternaria pari a 0,25
meq/g. Oasis MAX è disponibile in due dimensioni di particelle: 60
µm e 30 µm.
S
COO
Quaternary-amineanion-exchange capacity:
0.25 meq/g
[ 7 ]
O
CH 3
–
2 pH units above pKa
of the analyte
Suprofen
(acidic drug)
Adsorbente
Adsorbent e Oasis WC X
Oasis WCX
adsorbente in modalità mista a scambio cationico
debole (WCX) e in fase inversa
Selettività e sensibilità elevate per basi forti
Oasis WCX è stato ideato per fornire preparazioni di campioni
di qualità superiore per le basi forti e le ammine quaternarie. Si
tratta di un adsorbente polimerico bagnabile con acqua in modalità
mista a scambio cationico debole, stabile per valori di pH da 0 a
14 e che offre tutti i vantaggi di Oasis HLB. I metodi SPE robusti
e ad alta selettività che utilizzano Oasis WCX consentono di
rilevare, confermare e quantificare composti basici forti e ammine
quaternarie nei fluidi biologici.
O
N
WCX sorbent
Weak Cation eXchange
COO Weak cation-exchange
interaction
CH 3 O
sviluppato da Waters si traduce in prodotti Oasis WCX che offrono
capacità di scambio ionico dell'acido carbossilico pari a 0,75
meq/g. Sono disponibili tre dimensioni delle particelle: 60 µm, 30
µm, e 5 µm.
Reversed-phase
interaction
H3 C
CH 3
O
N
+
CH 3
CH 3
Carboxylic-acid-cationexchange capacity: 0.75 meq/g
Adsorbent e Oasis WAX
Oasis WAX
adsorbente in modalità mista a scambio anionico debole
(WCX) e in fase inversa
Selettività e sensibilità elevate per acidi forti
Oasis WAX è stato ideato per fornire preparazioni di campioni di qualità
superiore per gli acidi forti. Si tratta di un adsorbente polimerico
bagnabile con acqua in modalità mista a scambio anionico debole,
stabile per valori di pH da 0 a 14 e che offre tutti i vantaggi di Oasis
HLB. I metodi SPE robusti e ad alta selettività che utilizzano Oasis WAX
consentono di rilevare, confermare e quantificare acidi forti nei fluidi
biologici.
O
N
WAX sorbent
Weak Anion eXchange
+
NH
SO–3
sviluppato da Waters si traduce in prodotti Oasis WAX che offrono
capacità di scambio ionico della piperazina pari a 0,6 meq/g. Sono
disponibili tre dimensioni delle particelle: 60 µm, 30 µm, e 5 µm.
Reversed-phase
interaction
Piperazine-anion-exchange
capacity: 0.6 meq/g
[ 8 ]
+
NH2
Weak anion-exchange
interaction
FORMATO
Linea di p rodot t i Oasis pe r S P E
L'intera linea di adsorbenti e dispositivi Oasis è prodotta negli stabilimenti Waters
certificati ISO 9000 e in conformità alle linee guida cGMP dell'FDA degli Stati Uniti
relative ai dispositivi medicali di classe 1.
n
Piastre Oasis µElution
n
Piastre di estrazione Oasis a 96 pozzetti
n
Cartucce per cilindri siringa Oasis
n
Cartucce in vetro Oasis
n
Colonne on-line Oasis
[ 9 ]
FORMATO
Linea di p rodot t i Oasis per SP E
Piast re Oasis μElut ion
n Design brevettato delle piastre µElution*
n La tecnologia alla base delle piastre consente di
ottenere volumi di eluizione minimi di soli 25 µL
n Evaporazione e ricostituzione non sono necessarie; è
sufficiente eluire e iniettare
n Ideale per volumi ridotti di campione
n Incremento nella concentrazione fino a 15 volte
n Compatibili con la maggior parte dei sistemi
robotizzati di gestione dei campioni liquidi per una
SPE automatica, affidabile e ad alta produttività (HTSPE)
Piast re di est razione Oasis a 96 pozzet t i
n Design innovativo di pozzetto a due fasi
(premiato dal riconoscimento R&D 100, 1999)
n Produttività e recupero elevati
n Disponibili nei formati da 5 mg, 10 mg, 30 mg
e 60 mg per pozzetto
n Compatibili con la maggior parte dei sistemi robotizzati
di gestione dei campioni liquidi per una SPE automatica,
affidabile e ad alta produttività (HT-SPE)
* Patente en EE.UU. nº 6,723,236
[ 10 ]
FORMATO
Ca rt ucc e pe r cilindri siringa Oasis
n Cilindro siringa e filtri porosi ultra-puliti
n Disponibile in cartucce da 1 cc a 35 cc
n Disponibile da 10 mg a 5 g di adsorbente per
cartuccia
n Cartucce per cilindri siringa senza flangia
disponibili: 1 cc, 3 cc, 6 cc
n Sono inoltre disponibili: cartucce Plus con attacco
Luer e punta di uscita, 225 mg
Ca rt ucc e in v et ro Oasis
n Siringa in vetro ultra-pulita con filtro poroso in Teflon ®.
n Analisi di interferenti endocrini a livelli di parte per
bilione
n Disponibili nel formato da 5 cc (200 mg)
n Analisi on-line estremamente veloci, riproducibili e
robuste
n Compatibili con ogni sistema di analisi on-line
n Ampia scelta di configurazioni, dimensioni delle
particelle e fasi stazionarie degli adsorbenti
[ 11 ]
FORMATO
Piast re Oasis μElut ion
La riduzione del volume di eluizione SPE è essenziale per le
prestazioni, il recupero e la precisione delle applicazioni SPE. I
volumi di eluizione tipici delle piastre Oasis µElution sono compresi
nell'intervallo 25–50 µl, nettamente inferiori ai normali volumi di
eluizione della tecnologia su disco SPE, che variano tra 75 e 300 µl.
L’ultima innovazione Waters nella tecnologia SPE
n Eluizione in un volume minimo di soli 25 µL
L'eluizione riproducibile in un volume di soli 25 µL migliora e
ottimizza i metodi SPE. È possibile eseguire le applicazioni SPE
su volumi estremamente ridotti di campione. L'arricchimento
del campione migliora di ben 15 volte. Scegliendo il solvente di
eluizione in modo che sia compatibile con la fase mobile LC/MS,
non è più necessario eseguire la laboriosa fase di evaporazione
dell'eluato, né l'evaporazione/ricostituzione. Le caratteristiche
innovative delle piastre Oasis µElution consentono di ottenere
risultati sensibili, affidabili e riproducibili senza ricorrere
all'evaporazione né alla ricostituzione. Le prestazioni analitiche sono
superiori in termini di sensibilità, selettività e robustezza.
n Evaporazione né ricostituzione non necessarie
n Ideale per volumi ridotti di campione
n Incremento nella concentrazione fino a 15 volte
Finalmente potete eseguire con fiducia le purificazioni SPE
el’arricchimento degli analiti per volumi estremamente ridotti di
campione (10-25 µL) fino a un massimo di 375 µL. Le piastre
Waters Oasis µElution coniugano il design brevettato, i comprovati
adsorbenti Oasis e i semplici protocolli che garantiscono l’elevato
recupero degli analiti e la purezza degli estratti in volumi di
eluizione minimi di soli 25 μL.
Confronto tra tecnologia da µEluizione e
tecnologia su disco
Elution Technology
Disk Technology
Wide and Short
Sorbent Bed
Narrow and Tall
Sorbent Bed
Ratio Bed H/D = 1.15
Ratio Bed H/D = 0.13
Vacuum
Vacuum
Confronto tra le tecnologie Oasis µElution e su disco
Attualmente sul mercato sono disponibili due principali tecniche
SPE per l'eluizione di volumi ridotti: tecnologia su disco SPE e Oasis
µElution. Le prestazioni offerte dalle due tecnologie differiscono
in misura considerevole a causa di tre fattori: rapporto altezza/
diametro, volume di esclusione e volume di eluizione.
Esiste una correlazione tra il rapporto altezza/diametro (H/D)
della fase e le sue prestazioni in un dispositivo SPE. Un rapporto
altezza/diametro inferiore a 1,0 non è consigliabile in rapporto alle
prestazioni. Nel caso della tecnologia su disco SPE (per esempio
disco a membrana/fibra di vetro), una massa ridotta di adsorbente
è integrata in una struttura di supporto sottile che presenta buone
proprietà di flusso ma un rapporto altezza diametro contenuto
(H/D=0,13). Al contrario, la tecnologia Oasis µElution impiega
un pozzetto rastremato internamente, impaccato con adsorbente
Oasis ad alta capacità e con un valore H/D pari a 1,15, circa 9 volte
superiore rispetto alla tecnologia su disco SPE. I pozzetti delle
piastre Oasis µElution funzionano in modo analogo a una colonna
cromatografica, minimizzando la perdita di analita nel corso delle
fasi critiche della procedura SPE e incrementando l'efficienza di
estrazione complessiva.
Confronto sul recupero tra tecnologia da
µEluizione e tecnologia su disco
T he innovative features of the Oasis µElution plates enable sensitive,
robust, reproducible results without evaporation and reconstitution.
Oasis µElution Technology
Disk Technology
>85% recovery in 25 µL
25 µL
Minimum of 100 µL needed for best result
75 µL
75 µL
75 µL
100
Elution Volume
Un piccolo volume di esclusione è necessario per raggiungere un
volume di eluizione minimo. Le piastre su disco SPE presentano
volumi di esclusione compresi nell'intervallo 35-65 µl, mentre le
piastre Oasis µElution dotate di filtri porosi vantano volumi minimi di
soli 15 µl. La presenza di un volume di esclusione 2-4 volte inferiore
minimizza il volume di eluizione e riduce la perdita di analita durante
l'eluizione, migliorando quindi recupero e precisione.
[ 12 ]
% Recovery
80
60
40
20
0
Oasis HLB
Brand E C18
Brand E UR
Brand S C18
µElution plate
100 µL Spiked Saline
acetaminophen
practolol
N-acetylprocainamide
betamethasone
caffeine
naproxen
amitriptyline
propranolol
FORMATO
Protocollo SPE per
piastre Oasis MCX µElution a 96 pozzetti
Capacità di carico delle piastre µElution
La capacità dei dispositivi SPE è definita come la massa totale
di analiti e componenti endogeni del campione che il letto di
adsorbente ritiene in presenza delle condizioni di carico. La
perdita di analita ha luogo quando si supera la capacità del letto di
adsorbente. Le proprietà chimico-fisiche degli adsorbenti Oasis sono
state sviluppate per offrire capacità di carico estremamente elevate,
nonostante ciascun pozzetto di una piastra Waters Oasis µElution
contenga soltanto 2 mg di adsorbente Oasis.
Condition:
200 µL CH3OH
Equilibrate:
200 µL H2O
Load:
Various volumes of:
- Plasma diluted 1:1 with 4% H3PO4 in H2O
- Urine diluted 1:1 with H2O
Wash 1:
200 µL 2% CHOOH in H2O
Per determinare la capacità delle piastre Oasis μElution, in una serie
di volumi crescenti di campioni di plasma e urina (da 50 µL a 350 µL
con incrementi pari a 50 µL) sono stati iniettati imipramina (base non
polare) in concentrazione 200 ng/mL e atenololo (base polare) in
concentrazione 200 ng/mL. Le aliquote di plasma sono state diluite
in rapporto 1:1 con una soluzione acquosa di H3PO4 mentre le
aliquote di urina sono state diluite in rapporto 1:1 con H2O e quindi
caricate sulla piastra µElution. Il recupero SPE è stato calcolato e
riportato in un grafico per ciascun livello di carico.
Wash 2:
200 µL CH3OH
Elute:
2 x 25 µL 5% NH4OH in 60:40
CH3CN:CH3OH
Dilute:
50 µL H2O
Inject:
5 µL
SPE Recovery for 200 ng/mL Imipramine and 200 ng/mL Atenolol on Oasis MCX µElution Plate
n=8
100
100
80
80
60
60
40
40
20
20
0
0
50
100 150
200 250 300
350 µL
Loaded Plasma Volumes (Undiluted)
Matrix Effects for Polar and
Non-Polar Analytes in Plasma
Ion Suppression Ion Enhancement
Imipramine
(non-polar)
SPE Recovery for Polar and
Non-Polar Analytes in Urine Example
% Recovery
Atenolol (polar)
% Recovery
SPE Recovery for Polar and
Non-Polar Analytes in Plasma Example
50
100 150
200 250 300
Loaded Urine Volumes (Undiluted)
350 µL
40
30
20
10
0
-10
-20
-30
-40
50
100 150 200 250 300
350 µL
Loaded Plasma Volumes (Undiluted)
Piast re Oasis a 96 pozzet t i
Ve rsat ili piast re di est razione Oasis a 96 pozzet t i pe r a pp licazioni ad alta p rodut t iv ità
Il design premiato delle piastre Waters, disponibile con cinque
adsorbenti e quattro opzioni di massa di adsorbente, garantisce
un elevato rendimento SPE in un unico dispositivo. Le piastre
Oasis a 96 pozzetti sono progettate per l'utilizzo con numerose
stazioni di estrazione e con la maggior parte dei sistemi robotizzati
per la gestione dei liquidi. Grazie all'esclusivo equilibrio tra
proprietà idrofobe e bagnabilità in acqua degli adsorbenti Oasis,
l'essiccamento di specifici pozzetti della piastra a 96 pozzetti non
incide sulla qualità dei risultati. Come d'abitudine, i prodotti Oasis
per SPE garantiscono affidabilità grazie a un recupero elevato e
riproducibile per un ampio spettro di analiti, compresi i composti
polari e basici, con deviazioni standard relative inferiori al 5%
(n=96).
Design delle piastre Waters a 96 pozzetti
Design di pozzetto
a due fasi premiato
dal riconoscimento
R&D100, 1999
5 mg
10 mg
30 mg
60 mg
Variando la dimensione e la posizione del filtro di ingresso colonna (frit), è possibile
riempire i singoli pozzetti della piastra con quantità di adsorbente diverso. Il design
della piastra consente recuperi ottimali, anche con piccole quantità di adsorbente per
volumi di eluizione più piccoli.
[ 13 ]
FORMATO
Colonne S P E on-line pe r LC /MS/MS
2
Sono disponibili tre configurazioni di colonne on-line Oasis per
l’HPLC ideate per rispondere a ogni esigenza di analisi on-line.
1
n La colonna a cartuccia Oasis è compatibile con il supporto
Sentry™ dotato di raccordo da stringere a mano per le
sostituzioni veloci e pratiche (1).
n La colonna a connessione diretta Oasis può essere avvitata
direttamente su una valvola di commutazione o collegata ai
raccordi tipici delle colonne HPLC convenzionali (2).
n La colonna Oasis è dotata dei raccordi e dell’hardware delle
3
tradizionali colonne HPLC (3).
I vari modelli sono disponibili con i cinque adsorbenti Oasis brevettati (HLB, MCX, MAX, WCX, WAX) e per un'ampia gamma di dimensioni
delle particelle e formati. Le colonne on-line Oasis consentono di analizzare un analita specifico in una matrice se utilizzate congiuntamente
alle opportune colonne analitiche narrow-bore Waters (quali le colonne XBridge™, SunFire™, Atlantis ®, XTerra® o Symmetry®).
Configurazione dei sistemi on-line
Oasis
On-Line Column
Isocratic
HPLC
Waste
10 Port Valve
2 positions
Gradient
HPLC
Mass
Spectrometer
Narrow Bore
Analytical Column
10
1
2
8
3
7
4
5
515
System
9
10
9
2
Oasis
1
Waste
INJECTION
POSITION
515
System
Waste
6
8
3
7
4
Alliance HT
Alliance HT
Mass
Spectrometer
Mass
Spectrometer
Analytical
Column
5
6
Analytical
Column
[ 14 ]
Oasis
LOAD
POSITION
METODOLOGIA
Metodologia OASIS
Lo sviluppo di metodi SPE implica la conoscenza della matrice del campione, ossia la natura e la
concentrazione relativa degli analiti interessati come pure i composti endogeni che potrebbero
interferire. Dopodiché, scelte giudiziose di sorbenti e solventi per le fasi di carico, lavaggio ed
eluizione creano protocolli stabili, affidabili e selettivi.
Il team di chimici della Waters ha sviluppato diverse strategie per semplificare questo processo.
n
Metodo Oasis 2x4
n
Metodologia ottimizzata Oasis 2x4
n
Metodo Oasis 2x4 ottimizzato
per piastre µElution
n
Metodo Oasis HLB generico
n
Metodologia ottimizzata Oasis HLB
n
Metodologia avanzata Oasis
[ 15 ]
Metodologia
3A: Metodo Oasis 2x4
Oasis 2x4 Method
Only 2 protocols and 4 sorbents to
analyze all types of compounds:
acids, bases, and neutrals
Il metodo Oasis 2x4 rappresenta una tecnica semplice
e logica per la selezione di un sorbente e protocollo
SPE. Due protocolli e quattro adsorbenti forniscono la
flessibilità per l’estrazione di acidi, basi e neutri per
elevati recuperi SPE rimuovendo nello stesso tempo
i componenti della matrice che potrebbero interferire
con l’analisi.
For Bases
pKa 2-10:
Use Oasis MCX
Le fasi indicate nel seguente diagramma permettono
di ottenere recuperi elevati e gli estratti più puliti:
n Scelta di uno dei quattro adsorbenti Oasis.
n Applicazione del protocollo indicato (1 o 2).
Prepare Sample
Prepare Sample
Condition/Equilibrate
Load Sample
Load Sample
Wash:
2% HCOOH
Wash:
5% NH4OH
Elute 1:
100% CH3OH
Base
Notare che gli analiti neutri possono essere isolati da tutti
e quattro gli adsorbenti nella fase Eluizione 1 in entrambi i
protocolli. È necessario scegliere l’adsorbente a scambio ionico
che meglio rimuove le interferenze specifiche dalla matrice.
Segue un esempio.
Scelta di adsorbente e protocollo ottimali per i
composti neutri Esempio: prednisone nel plasma
SPE Recovery
0
%
50
100%
3.08
Oasis MCX — Protocol 1
%
100
Protein
Precipitation
3.26
3.16
2.52
2.60
2.50
Oasis MAX — Protocol 2
%
100
2.522.60
Oasis WAX — Protocol 1
2.50
2.60
%
100
Strong Acid
Oasis WCX — Protocol 2
1: MRM of 5 Channels ES+
TIC
2.55e7
%
0
1.75
2.00
2.25
2.50
2.75
3.00
3.25
2% Phospholipids
TIC
2.55e7
9% Phospholipids
TIC
2.55e7
11% Phospholipids
Recovery is high on all four Oasis sorbents,
but removal of phospholipids, a primary cause
of matrix ion suppression, is best on Oasis MCX.
Protein precipitation is a poor choice for sample
preparation prior to LC/MS/MS analysis.
3.50
Strong Base
Il kit di cartucce e piastre per la selezione dell'adsorbente Oasis
consente il rapido sviluppo di metodi SPE per le analisi LC/MS.
Grazie alla disponibilità dei quattro adsorbenti a scambio ionico
Oasis (MCX, MAX, WAX e WCX) su una sola piastra è possibile
determinare facilmente il miglior metodo di isolamento di composti
sconosciuti, composti zwitterionici o miscele di analiti che
presentano proprietà di ritenzione/eluizione distinte.
100% Phospholipids
TIC
2.55e7
TIC
2.55e7
2.52
2.60
Acid
Kit di cartucce e piastre per la selezione
dell'adsorbente Oasis
Valutazione del metodo Oasis 2x4 per la
cefalexina
0
100
Elute 2:
2% HCOOH in CH3OH
Monitoring 5 Phospholipid
MRM Transitions
Cleanliness of 100% MeOH Elute 1
100
Weaker
Bases
Elute 1:
100% CH3OH
Neutrals
Elute 2:
5% NH4OH in CH3OH
analisi LC.
For Strong Bases
pKa >10:
Use Oasis WCX
Apply Protocol 2
Weaker
Acids
n Determinazione dei recuperi SPE mediante
For Acids
pKa 2-8:
Use Oasis MAX
Apply Protocol 1
n Caratterizzazione dell'analita (composto neutro,
acido o base, pKa).
For Strong Acids
pKa <1:
Use Oasis WAX
3.75
12% Phospholipids
4.00 Min
O
H
Oasis WAX
OH
NH
pKa = 7.3
2
H H
N
H
O
Oasis MAX
Protocol 2 – Elute 2
H
O
Oasis WCX
Prednisone
S
N
HO
OH
H
O
100%
Oasis MCX
O
SPE Recovery
50
O
pKa = 2.6
Cephalexin
[Cephalosporin antibiotic]
A difficult amphoteric analyte
Aliquots of prepared sample processed using Oasis 2x4 Method protocol designated for each
of 4 sorbents. Eluates from Elute 1 and Elute 2 steps analyzed by LC/MS/MS.
Clearly, Oasis MCX is the sorbent of choice.
[ 16 ]
Metodologia
Método Oasis 2x4: demostración del concepto
L’analita neutro è stato analizzato su tutti e quattro gli adsorbenti,
come indicato nella pagina precedente. Tra i quattro metodi
disponibili, l'adsorbente Oasis MCX con il protocollo 1 si è
dimostrato superiore per la rimozione di quasi tutti i fosfolipidi,
eliminando quindi la principale fonte di effetti della matrice,
un fattore noto di soppressione ionica, perdita di sensibilità e
quantificazione inaccurata nel caso delle analisi LC/MS.
Per dimostrare la semplicità, la logica e l'efficacia del metodo
Oasis 2x4, sono stati preparati cinque campioni di plasma di
ratto, ciascuno contenente uno dei seguenti analiti:
n Imipramina, una base – pKa dell’acido coniugato = 9,4
n Ibuprofen, un acido – pKa = 5,2
n Acido decanosulfonico, un acido forte – pKa < 0,5
n Valetamato, un’ammina quaternaria (base forte)
– pKa dell’acido coniugato > 12
n Prednisone, un composto neutro
Ciascun campione di plasma è stato diluito (1/1, v/v) e acidificato
con acido fosforico (4% in acqua). Le rispettive aliquote sono
state quindi analizzate impiegando il protocollo e l'adsorbente a
modalità mista a scambio ionico Oasis indicato dal metodo Oasis
2x4 per il corrispondente tipo di analita. Per determinare i recuperi
SPE è stata utilizzata l’analisi LC/MS/MS.
Test con il metodo Oasis 2x4 su MCX: isolamento
base
L'impiego della combinazione consigliata di adsorbente/
protocollo del metodo Oasis 2x4 ha consentito di ottenere recuperi
praticamente quantitativi ed eccellente purezza per ciascuno degli
analiti ionici o ionizzabili utilizzati nel test. I risultati di questo
esperimento sono mostrati nelle seguenti quattro figure.
Test con il metodo Oasis 2x4 su WAX: isolamento
acido forte
For Bases
pKa 2–10:
Use Oasis MCX
Oasis MCX
For Strong Acids
pKa < 1:
Use Oasis WAX
Oasis WAX
Protocol 1
Protocol 1
Imipramine
Decanesulfonic
acid
SPE Recovery: 108%
n=4, 2–18% RSD
SPE Recovery: 94%
n=8, 3–6% RSD
pKa <1
3.19
2.71
pKa ~6
MRM ES+
281.2 > 85.95
4.16e6
N
N
O
Imipramine [pKa = 9.4]
0
1
3
pKa ~18
0
1
3
5 min
Test con il metodo Oasis 2x4 su WCX: isolamento
base
For Acids
pKa 2–8:
Use Oasis MAX
Oasis MAX
O– Na+
Decanesulfonic acid [pKa <0.5]
5 Min
Test con il metodo Oasis 2x4 su MAX: isolamento
acido
S
MRM ES+
221.1 > 79.8
2.85e3
O
For Strong Bases
pKa > 10:
Use Oasis WCX
Oasis WCX
Protocol 2
Protocol 2
Ibuprofen
Valethamate
SPE Recovery: 100%
n=6, 6–13% RSD
SPE Recovery: 106%
n=4, 9–13% RSD
pKa ~5
2.63
2.71
O
MRM ES+
205 > 161
1.34e4
OH
O
N+
Br –
MRM ES+
306.2 > 163
2.10e6
O
Ibuprofen [pKa = 5.2]
0
1
3
Valethamate [pKa >12]
5 min
[ 17 ]
0
1
3
5 min
Metodologia
3B: Metodologia ot t imizzata Oasis 2x4
L'ottimizzazione del metodo Oasis 2x4 su adsorbenti in modalità
mista (MCX, MAX, WCX, WAX) sfrutta l'intero potenziale di
due diversi meccanismi di separazione cromatografica: fase
inversa e scambio ionico. Le variazioni di pH sono utilizzate per
manipolare i rispettivi stati di ionizzazione dei siti di scambio
ionico sull'adsorbente e delle frazioni acide o basiche degli
analiti e delle specie interferenti. In questo modo, la ritenzione
può essere condotta in maniera selettiva tramite
interazioni idrofobe o ioniche. Allo stesso tempo, la
concentrazione del solvente organico viene modificata per
perfezionare l'eluizione in base alle caratteristiche idrofobe
relative. Ciò consente di ottenere estratti più puri che riducono
gli effetti della matrice, migliorano la sensibilità e riducono la
variabilità del metodo analitico.
Gli esempi che seguono dimostrano come l'utilizzo di semplici
studi di lavaggio-eluizione, nei quali la percentuale di solvente
organico viene variata in maniera sistematica, permette di
determinare la composizione ottimale delle fasi mobili SPE per
i processi di lavaggio ed eluizione selettivi. Esperimenti simili
possono essere ideati per altre variabili quali il pH o la forza
ionica.
3B–1: metodo Oasis MCX 2x4 — Ottimizzato per le basi
Quando sono necessarie la massima selettività e sensibilità
per i composti basici [pKa 2–10] per ottenere i più bassi
limiti di rivelazione (LOD) e quantificazione (LOQ), si consiglia
l'ottimizzazione del protocollo 1. Come esempio, è stato
effettuato uno studio di lavaggio-eluizione per determinare i
parametri ottimali di ritenzione ed eluizione dell'imipramina
su Oasis MCX (sotto a sinistra). Successivamente, i dati
sperimentali ottenuti sono stati usati per ottimizzare un metodo
selettivo Oasis MCX SPE (sotto a destra) al fine di rimuovere le
interferenze causate da composti neutri, acidi e basi.
Metodo Oasis MCX ottimizzato per l'imipramina
Studio lavaggio-eluizione
Imipramina
N
[% CH3OH in H2O] : [conc. NH4OH] 95:5 v/v
N
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
90%
100%
Condition/Equilibrate:
1 mL CH3OH/H2O
Basic drug is loaded in
ionized [or neutral] form
if sample was pretreated
with acid [or base]
Load sample:
1 mL plasma or urine
Locks ionized drug on
strong cation-exchange
sites; removes proteins
and salts
Indicates Peak Area
of Analyte in LC Analysis
of Eluate
Maximum
% Organic Wash
20
30
40
50
60
70
80
90
Removes interfering
acids [unionized] and
neutral compounds and
acidic interferences
Wash 2:
Minimum
% Organic Elute
1 mL 100% CH3OH
Neutralizes bases;
removes more polar
basic interferences
0
10
Wash 1:
1 mL 2% HCOOH
100
Wash 3:
1 mL 5% NH4OH in CH3OH/H2O 55/45
% CH3OH in H2O
Basic analyte is
eluted; hydrophobic
basic interferences
are retained
Elute:
Experiment for Oasis MCX 96-Well Plate 30 mg
Un secondo esempio illustra gli straordinari vantaggi di un metodo
Oasis MCX ottimizzato per la determinazione delle metanfetamine
nelle urine. È stato utilizzato uno studio di lavaggio-eluizione per
individuare la concentrazione ottimale di trietilammina (TEA) per
la soluzione di lavaggio 3 (sotto a sinistra). Ciò ha consentito di
Analisi delle urine con Oasis MCX:
anfetamina e metanfetamina
rimuovere in maniera selettiva le interferenze causate dalle ammine
terziarie e aromatiche. Come indicato nei dati LC/UV (sotto a destra),
sono stati ottenuti eccellenti valori di deviazione standard relativa
per la determinazione quantitativa degli analiti amminici primari e
secondari.
Metodo Oasis MCX ottimizzato per la
quantificazione delle metanfetamine nelle urine
Load:
10 mL spiked urine
(acidified with 100 µL 5 N HCI)
Locks ionized drug on
strong cation-exchange
sites; removes proteins
and salts
Wash 1:
Wash 2:
2 mL 100% CH3OH
Weak base removes
tertiary and
aromatic amines
Blank without
T EA Wash
0.01
2 mL 5% CH3OH in 0.1 N HCI
Removes interfering
acids [unionized] and
neutral compounds and
AU
1
0.00
Wash 3:
1.5 mL 2.5% TEA in CH3OH
0
Elute:
4 µg/mL n=6
1. Amphetamine
2. Methamphetamine
3. Phentermine (I.S.)*
* Internal Standard
2 mL 5% NH4OH in CH3OH
[ 18 ]
2
Recovery
RSD
96.8% 1.35%
90.4% 4.01%
—
—
4
3
2
Blank with
2.5% T EA Wash
Spiked Sample
with 2.5% T EA Wash
6
NH
Amphetamine
2
H
N
Methamphetamine
NH
Phentermine
2
Metodologia
3B–2: metodo Oasis WAX 2x4 — Ottimizzato per gli acidi forti
Quando sono necessarie la massima selettività e sensibilità per
gli acidi forti (pKa <1) per ottenere i più bassi limiti di rivelazione
(LOD) e quantificazione (LOQ), si consiglia l'ottimizzazione
del protocollo 1. Come esempio, è stato effettuato uno studio
di lavaggio-eluizione per determinare i parametri ottimali di
ritenzione ed eluizione dell'acido decanosulfonico su Oasis WAX
(sotto a sinistra). Successivamente, i dati sperimentali ottenuti
sono stati usati per ottimizzare un metodo selettivo Oasis WAX
(sotto a destra) al fine di rimuovere le interferenze causate da
composti neutri, acidi e basi.
Metodo Oasis WAX ottimizzato
per l'acido decanosulfonico
[% CH3OH in H2O] : [conc. NH4OH] 95/5 v/v
O
S
O
O– Na+
Acido decanosulfonico
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
90%
100%
1 mL CH3OH/H2O
Load sample:
Wash 1:
Indicates Peak Area
of Eluate
1 mL 2% HCOOH
Maximum
% Organic Wash
Minimum
% Organic Elute
Removes interfering
bases [ionized] and neutral
compounds [including
unionized acids]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Wash 2:
1 mL 100% CH3OH
Wash 3:
% CH3OH in H2O
Strongly acidic analyte is
eluted; more hydrophobic
are retained
Experiment for Oasis WAX 96-Well Plate 30 mg
Ionizes weak anionexchange sites to
lock on analytes; removes
proteins and salts
Neutralizes anionexchange sites; removes
more polar strongly
Elute:
3B–3: metodo Oasis MAX 2x4 — Ottimizzato per gli acidi
Quando sono necessarie la massima selettività e sensibilità per i
composti acidi (pKa 2-8) per ottenere i più bassi limiti di rivelazione
(LOD) e quantificazione (LOQ), si consiglia l'ottimizzazione
del protocollo 2. Come esempio, è stato effettuato uno studio
di lavaggio-eluizione per determinare i parametri ottimali di
ritenzione ed eluizione dell'ibuprofen su Oasis MAX (sotto a sinistra).
Successivamente, i dati sperimentali ottenuti sono stati usati per
ottimizzare un metodo selettivo Oasis MAX SPE (sotto a destra) al fine
di rimuovere le interferenze causate da composti neutri, acidi e basi.
Metodo Oasis MAX ottimizzato per l'ibuprofen
OH
[% CH3OH in H2O] : [conc. HCOOH] 98/2 v/v
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
O
80%
90%
Ibuprofen
100%
1 mL CH3OH/H2O
Acidic drug is loaded in
ionized [or neutral] form
if sample was pretreated
with base [or acid]
Indicates Peak Area
of Eluate
Wash 1:
Maximum
% Organic Wash
1 mL 5% NH4OH
Minimum
% Organic Elute
Removes interfering
bases [unionized] and
neutral compounds
0
10
20
Load sample:
30
40
50
60
70
80
90
1 mL 100% CH3OH
Wash 3:
100
1 mL 2% HCOOH in CH3OH/H2O 45/55
% CH3OH in H20
Experiment for Oasis MAX 96-Well Plate 30 mg
Wash 2:
Acidic analyte is eluted;
more hydrophobic acidic
interferences are retained
[ 19 ]
Locks ionized analyte
on strong anion-exchange
sites; removes
proteins and salts
Elute:
Neutralizes acids;
removes more polar
Metodologia
3B–4: Metodo Oasis WCX 2x4 — Ottimizzato per le basi forti
Quando sono necessarie la massima selettività e sensibilità per le
basi forti, quali le ammine quaternarie (pKa >10) per ottenere i più
bassi limiti di rivelazione (LOD) e quantificazione (LOQ), si consiglia
l'ottimizzazione del protocollo 2. Come esempio, è stato effettuato
uno studio di lavaggio-eluizione per determinare i parametri ottimali
di ritenzione ed eluizione del valetamato su Oasis WCX (sotto a
sinistra). Successivamente, i dati sperimentali ottenuti sono stati
usati per ottimizzare un metodo selettivo Oasis WCX SPE (sotto a
destra) al fine di rimuovere le interferenze causate da composti
neutri, acidi e basi.
Metodo Oasis WCX ottimizzato per il valetamato
O
O
[% CH3OH in H2O] : [conc. HCOOH] 98/2 v/v
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
90%
N+
Br–
100%
Veletamate
1 mL CH3OH/H2O
Load sample:
Indicates Peak Area
of Eluate
Maximum
% Organic Wash
Wash 1:
Minimum
% Organic Elute
1 mL 5% NH4OH
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
% CH3OH in H2O
Removes interfering
acids [ionized] and neutral
compounds [including
unionized bases]
Wash 2:
1 mL 100% CH3OH
Wash 3:
Experiment for Oasis WCX 96-Well Plate 30 mg
Strongly basic analyte is
eluted; more hydrophobic
basic interferences
are retained
Ionizes weak cationexchange sites to lock on
analytes; removes
proteins and salts
Neutralizes cationexchange sites; removes
more polar strongly
basic interferences
Elute:
3C: Metodo Oasis 2x4 ot t imizzato per piast re µElution
For Bases
pKa 2-10:
Use Oasis MCX
For Strong Acids
pKa <1:
Use Oasis WAX
For Acids
pKa 2-8:
Use Oasis MAX
Apply Protocol 1
For Strong Bases
pKa >10:
Use Oasis WCX
Apply Protocol 2
Prepare Sample
Prepare Sample
Load Sample
Load Sample
Wash:
2% HCOOH
Wash:
5% NH4OH
Elute 1:
100% CH3OH
Elute 2: 5% NH4OH in
60:40 CH3CN:CH3OH
Base
Strong Acid
Elute 1:
100% CH3OH
Neutrals
Elute 2: 2% HCOOH in
60:40 CH3CN:CH3OH
Acid
Strong Base
Il solvente di eluizione del comprovato metodo Oasis 2x4 è
ottimizzato per soddisfare il requisito eluotropico del volume di
eluizione ridotto. Il metanolo è un valido solvente di eluizione
generico, ma spesso non è sufficientemente forte per i volumi di
eluizione di 25 µL. Il solvente di eluizione consigliato per l'utilizzo
con le piastre μElution deve possedere una forza eluotropica
sufficientemente elevata per eluire completamente gli analiti in
volumi ridotti ed essere compatibile con una serie di analiti distinti.
Il solvente di eluizione consigliato per il metodo Oasis 2x4
ottimizzato per le piastre µElution è una miscela CH3CN/CH3OH
60:40 con un modificatore. Questo solvente è stato scelto come
punto di partenza in quanto soddisfa ogni criterio precedentemente
citato.
Le fasi indicate nel seguente diagramma permettono di ottenere
recuperi elevati e gli estratti più puliti:
n Caratterizzazione dell’analita (composto neutro, acido o base,
pKa).
n Scelta di uno dei quattro adsorbenti Oasis.
n Applicazione del protocollo indicato (1 o 2).
n Determinazione dei recuperi SPE mediante analisi LC.
[ 20 ]
Metodologia
Metodo Oasis 2x4 – Prova della validità
Analiti iniettati nel plasma di ratto
Studio di recupero:
Per dimostrare la semplicità, la logica e l'efficacia del metodo
Oasis 2x4, sono stati preparati cinque campioni di plasma di
ratto, in ognuno dei quali è stato iniettato uno degli analiti di test
caratterizzati in precedenza e riportati di seguito:
O
O
N
Br–
N+
O
O
H
Imipramina (B)
(SA) pKa = 9,4, 2 ng/mL
— Imipramina: pKa = 9,4 (base)
O F
HO
— Ibuprofen: pKa = 5,2 (acido)
F F F F
— Acido nonafluoropentanoico: pKa <0,5 (acido forte)
Prednisone (N)
10 µg/mL
OH
F
F
O
Acido nonafluoropentanoico
(SA) pKa <0,5, 200 ng/mL
— Valetamato: pKa >12 (ammina quaternaria)
Ibuprofen (A)
(SA) pKa = 5,2, 200 ng/mL
Protocol 1
Oasis MAX
Oasis WCX
100
% SPE Recovery
80
60
40
20
0
)
(sb
ate
ham
let
(n)
Va
ne
iso
dn
(a)
fen
pro
(n)
Ibu
ne
iso
dn
(n)
ic
no
nta
pe
id
Ac
Elute 1: CH3OH
oro
flu
ne
iso
dn
na
No
Pre
(b)
ine
am
i pr
(n)
Im
ne
iso
dn
Pre
Ciascun campione di plasma è stato diluito (1:1, v:v) e acidificato
con acido fosforico (4% in acqua). Le rispettive aliquote sono quindi
state analizzate impiegando il protocollo e l'adsorbente a modalità
mista a scambio ionico Oasis indicato dal metodo Oasis 2x4 per
il corrispondente tipo di campione. Per determinare i recuperi
SPE è stata utilizzata l’analisi LC/MS/MS. L'analita neutro è stato
analizzato su ciascuno dei quattro adsorbenti utilizzati.
Oasis WAX
Pre
Oasis MCX
Protocol 2
Pre
— Prednisone: composto neutro
H
O
Valetamato (QA)
(SA) pKa >12, 2 ng/mL
F
F
OH
H
N
OH
)
(sa
Elute 2: 60:40 CH3CN/CH3OH + modifier
3D: Metodo Oasis HLB generico
9 volte), che interagiscono tramite legame a idrogeno con le
frazioni amidiche della struttura HLB, potrebbero richiedere un
solvente protico (per esempio, metanolo) anziché un solvente
aprotico (per esempio, acetonitrile) per garantire un'eluizione
efficiente.
Nel 1996 Waters ha introdotto Oasis HLB, il primo adsorbente
SPEpolimerico a bilancio idrofilo-lipofilo (HLB). Il design
mirato della sua struttura chimica e della morfologia delle
particelle (vedere pagina 6), ha consentito di incrementare
significativamente le prestazioni SPE.
Per isolare una serie di composti acidi, basici e neutri, è
consigliabile utilizzare un metodo Oasis HLB generico per
eliminare i componenti della matrice non ritenuti (per esempio
sali, zuccheri, lipidi polari, proteine) e ottenere al tempo stesso
la ritenzione riproducibile, e quindi l'eluizione, degli analiti
acidi, basici e neutri caratterizzati da un'ampio spettro di polarità
cromatografica.
Quando si trasferiscono i metodi con fase legata C18, tenere
presente i seguenti tre vantaggi esclusivi offerti da Oasis HLB:
n L'eccellente stabilità nell'intervallo di pH compreso tra 0
e 14 e la compatibilità con un ampio spettro di solventi
organici facilita lo sviluppo di metodi robusti e affidabili.
Metodo Oasis HLB generico
per acidi/composti neutri/basi
n La maggior capacità (area superficiale 2–3 volte superiore)
comporta l'utilizzo di una quantità proporzionalmente
minore di adsorbente. Possibile riduzione del letto e dei
volumi di eluizione. I dispositivi di formato ridotto sono più
efficienti.
Prepare Sample
(typically acidify)
CH3OH/H2O
n La maggior capacità di ritenzione (3–5 volte superiore) riduce
Load sample solution
la perdita di analita, incrementa i fattori di arricchimento e
permette di perfezionare le fasi del gradiente migliorando la
selettività delle sequenze di lavaggio ed eluizione. Gli analiti
particolarmente idrofobi possono richiedere solventi di eluizione
più forti. I composti polari come i fenoli (k superiore di oltre
Wash:
CH3OH/H2O 5/95
Elute:
CH3OH
[Optional; e.g.,
often not required in
µElution plate format]
[ 21 ]
Evaporate and Reconstitute
(optional)
[e.g., acidify
to disrupt drug–
protein binding]
Metodologia
3E: Metodologia ot t imizzata Oasis HLB
Per ottimizzare i metodi Oasis HLB è possibile applicare i principi
chimici e cromatografici. La selettività viene incrementata regolando
il pH e il rapporto di solvente organico con acqua nella fase mobile,
per manipolare la ritenzione.
Se gli analiti o le specie interferenti sono ionizzabili, i rispettivi
ioni altamente polari possono essere eluiti nelle fasi mobili
deboli. Cambiando il pH, vengono convertiti alla forma neutra e
ritenuti principalmente dalla forza della loro interazione idrofoba
con la superficie dell’adsorbente. Per una separazione riuscita
sono necessarie fasi mobili più forti, con concetrazioni superiori
di solvente organico.
Gli studi pubblicati dai chimici Waters dimostrano chiaramente i
benefici di un tale processo bidimensionale (2D) su Oasis HLB.
Le figure seguenti illustrano la teoria della ritenzione, gli studi
di lavaggio-eluizione per il verapamil e per due suoi metaboliti
e i successivi miglioramenti di selettività ottenuti tramite
l'ottimizzazione del metodo Oasis HLB.
Teoria: Grafico del fattore di ritenzione (k) / pH
per acidi, basi e composti neutri
Studio di lavaggio-eluizione per verapamil e
metaboliti nel plasma
40
Acid Retained
Acid [HA]
Retention Factor k
32
3
3
indicates
peak area of analyte
in LC analysis of eluate
Base [B]
2
Maximum
% Methanol Wash
1
1
2
Maximum
% Methanol Wash
Neutrals
24
8
20
2
4
6 pH 8
Recommended pH range for silica
CN
80
H
N
H 3 CO
0
100
OCH
3
H 3 CO
OCH
3
H 3 CO
14
40
60
% MeOH
CN
N
80
OCH
3
OCH
3
100
2. Verapamil
CN
H 3 CO
N
H 3 CO
OCH
0
20
1. Norverapamil
12
10
40
60
% MeOH
H 3 CO
Low Retention for Acid
Low Retention for Base
0
0
Acid [A–]
Base [BH+]
Minimum
% Methanol Elution
0
0
pKa = 9.0
pKa = 4.8
16
0
2% CH3COOH Modified Wash
2% NH4OH Modified Wash
Base Retained
3
OCH
3
OCH
3
3. Methoxyverapamil
Recommended pH range for Oasis Sorbents
®
Come un metodo otttimizzato incide sulla cromatografia: verapamil nel plasma
Oasis HLB Generic Method
Modified Oasis HLB Generic Method
Optimized Oasis HLB Method
Prepare sample solution
[acidified to disrupt protein binding]
1 mL CH3OH/H2O
1 mL CH3OH/H2O
1 mL CH3OH/H2O
Load sample:
Load sample:
Load sample:
1 mL plasma
1 mL plasma
1 mL plasma
Wash 1:
Wash 1:
Wash 1:
1 mL 5% CH3OH
1 mL 5% CH3OH with 2% CH3COOH
1 mL 5% CH3OH
Elute:
Wash 2:
Wash 2:
1 mL 100% CH3OH
1 mL 5% CH3OH with 2% NH4OH
Wash 3:
Elute:
Elute:
Peak Identification:
Peak 1: Norverapamil
Peak 2: Verapamil
Peak 3: Methoxyverapamil [I.S.]
0.004 AU
0.004 AU
1
1
2
3
2
4
6
8
2
1
3
3
Sample
Blank
0
0.004 AU
2
10 min
Sample
Blank
0
2
4
6
[ 22 ]
8
10 min
Sample
Blank
0
2
4
6
8
10 min
Metodologia
3F: Metodologia avanzata Oasis
La linea di adsorbenti Oasis esclusivi, brevettati e disponibili
in formati flessibili e le strategie di sviluppo di metodi Waters
semplificano e ottimizzano le tradizionali applicazioni SPE.
Questi prodotti, inoltre, consentono di soddisfare le nuove
esigenze di preparazione dei campioni, sia nel caso delle
applicazioni all'avanguardia sia per i problemi SPE ormai
considerati insolubili.
SPE ortogonale utilizzando due cartucce — La metodologia più efficace
Nel caso delle matrici molto complesse, il metodo ottimale per
la purificazione e l'isolamento consiste nell'utilizzo combinato
di metodi di separazione ortogonali (per esempio fase inversa
e scambio ionico). Le singole cartucce possono essere collegate
con un adattatore. Pianificando attentamente la compatibilità
della fase mobile e le sequenze di modalità di ritenzione,
l'eluato finale ottenuto dalla prima cartuccia può essere caricato
direttamente nella seconda. Quindi, dopo aver eliminato la prima
cartuccia, la seconda può essere lavata ed eluita con volumi di
solvente appropriati. L’uso di una prima cartuccia più grande
rimuove le interferenze dalla matrice. Una seconda cartuccia più
piccola concentra ulteriormente l'analita migliorando il fattore di
arricchimento.
Risultati con il metodo Oasis MAX – MCX tandem
per gli antibiotici di fluorochinolone nel rene di
manzo – con standard interno di 1 µg/kg
Chromatogram 1: Result from a single Oasis MAX Cartridge
Ciprofloxacin
Enrofloxacin
0
Gli omogenati dei tessuti animali sono matrici complesse
contenenti una serie di specie interferenti endogene che possono
sovraccaricare la capacità di scambio ionico e di fase inversa di un
adsorbente SPE. Altre difficoltà si presentano quando gli analiti,
per esempio gli antibiotici fluorochinolonici, sono anfoteri. Se
confrontato con una purificazione a singola cartuccia, il metodo
tandem Oasis MAX–MCX è ottimale per superare con successo
tali difficoltà. I cromatogrammi a destra illustrano l'isolamento
selettivo e la precisa determinazione di ciprofloxacina ed
enrofloxacina a livelli sub-ppb.
8
16
24 min
Chromatogram 2: Result from Tandem Oasis MAX + MCX
N
HN
N
N
N
OH
F
pKa of acid ~ 5
pKa of base ~ 8–9
0
O
Ciprofloxacin
24 min
16
Metodo Oasis MAX–MCX tandem per gli antibiotici di fluorochinolina anfoteri
Stage 1:
Condition, Load, and Wash
Oasis MAX
6 cc 150 mg Cartridge
Stage 2:
Condition
Oasis MCX
1 cc 30 mg Cartridge
1 mL CH3OH/1 mL 5 N NaOH;
1 mL H2O
Condition:
Elute & Wash:
1 mL CH3OH
2 mL 0.2 N HCl in CH3OH
MAX Cartridge
Wash 1:
MCX Cartridge
Load:
5 mL of prepared sample
Stage 3:
Attach MCX Cartridge
to outlet of MAX Cartridge;
Elute from MAX into MCX
Stage 4:
Discard MAX Cartridge;
Wash & Elute
MCX Cartridge
Wash:
2 mL of CH3OH
Elute:
500µL of 10% NH4OH in CH3OH
MCX Cartridge
1 mL 5% NH4OH in H2O
Wash 2:
MCX Cartridge
MAX Cartridge
1 mL CH3OH
After NaOH treatment,
MAX retains amphoteric
analytes as anions.
Wash steps remove basic
and neutral matrix interferences.
HCl converts
amphoteric analytes
to cations.
They elute from MAX
into lower MCX bed where
they are retained. Acidic interferences
are neutralized by HCl and washed
out of both cartridges by CH3OH.
[ 23 ]
OH
O
Enrofloxacin
O
8
N
F
Neutralize eluate with HCOOH
and bring to 1 mL with
buffered mobile phase.
Smaller bed in 1-cc MCX
Cartridge enables elution
in a smaller volume,
increasing enrichment factor.
O
INFORMAZIONI SUGLI ORDINI
Prodotti Oasis HLB per l'estrazione dei campioni
Descrizione
Dimensioni
particelle
Quantità
N. catalogo
100/scatola
186000383
Prodotti Oasis MCX (scambio cationico)
per l'estrazione dei campioni
Dimensioni particelle
Quantità
N. catalogo
1 cc/30 mg
30 µm
100/scatola
186000252
1 cc/30 mg
30 µm
100/scatola
186001881
Cartuccia Oasis MCX
1 cc/60 mg
60 µm
100/scatola
186000782
Cartuccia Oasis MCX
3 cc/60 mg
30 µm
100/scatola
186000254
Cartuccia senza flangia Oasis MCX
3 cc/60 mg
30 µm
100/scatola
186001882
WAT058882
Cartuccia Oasis MCX
3 cc/60 mg
60 µm
100/scatola
186000253
6 cc/150 mg
30 µm
30/scatola
186000256
Descrizione
Cartuccia Oasis HLB
1 cc/10 mg
30 µm
Cartuccia Oasis HLB
1 cc/30 mg
30 µm
100/scatola
WAT094225
Cartuccia Oasis MCX
NUOVA cartuccia Oasis HLB
1 cc/30 mg
30 µm
1000/scatola
186003908
Cartuccia senza flangia Oasis MCX
Cartuccia senza flangia Oasis HLB
1 cc/30 mg
30 µm
100/scatola
186001879
186000988
Cartuccia Oasis HLB conadattatore Gilson
ASPC
1 cc/10 mg
ASPC
1 cc/30 mg
30 µm
30 µm
500/scatola
500/scatola
Cartuccia Oasis HLB
3 cc/60 mg
30 µm
100/scatola
WAT094226
Cartuccia Oasis MCX
3 cc/60 mg
30 µm
100/scatola
186001880
Cartuccia Oasis MCX
6 cc/150 mg
60 µm
30/scatola
186000255
Cartuccia Oasis MCX
6 cc/500 mg
60 µm
30/scatola
186000776
Cartuccia Oasis MCX
20 cc/1 g
60 µm
20/scatola
186000777
Cartuccia Oasis MCX
35 cc/6 g
60 µm
10/scatola
186000778
Cartuccia Oasis MCX Plus
225 mg
60 µm
50/scatola
186003516
ASPC
3 cc/60 mg
Cartuccia Oasis HLB
6 cc/200 mg
30 µm
30/scatola
WAT106202
Oasis HLB
3 cc/400 mg
60 µm
100/scatola
186003849
NUOVA cartuccia Oasis HLB
3 cc/540 mg
60 µm
100/scatola
186004134
3 cc/540 mg
60 µm
100/scatola
186003852
Cartuccia Oasis MCX Vac RC
20 cc/60 mg
30 µm
50/scatola
186000261
Cartuccia Oasis HLB
6 cc/150 mg
30 µm
30/scatola
186003365
20 cc/60 mg
60 µm
50/scatola
186000380
Cartuccia Oasis HLB
6 cc/150 mg
60 µm
30/scatola
186003379
10 x 1 mm
30 µm
96/scatola
186002098
Cartuccia Oasis HLB
6 cc/500 mg
60 µm
30/scatola
186000115
Cartuccia Oasis MCX Vac RC
Cartuccia Oasis MCX Prospekt 2/
Symbiosis*
Cartuccia Oasis HLB
12 cc/500 mg
60 µm
20/scatola
186000116
Cartuccia Oasis HLB
20 cc/1 g
60 µm
20/scatola
186000117
2,1 x 15 mm
30 µm
1/conf.
186002050
Cartuccia Oasis HLB
35 cc/6 g
60 µm
10/scatola
186000118
Colonna a collegamento diretto
Oasis MCX
Colonna Oasis MCX
2,1 x 20 mm
30 µm
1/conf.
186002046
Cartuccia Oasis HLB Plus
225 mg
60 µm
50/scatola
186000132
Colonna-cartuccia Oasis MCX
2,1 x 20 mm
30 µm
1/conf.
186002051
Cartuccia Oasis HLB Vac RC
20 cc/30 mg
30 µm
50/scatola
186000382
Colonna Oasis MCX
3,0 x 20 mm
30 µm
1/conf.
186002047
Cartuccia Oasis HLB Vac RC
20 cc/60 mg
30 µm
50/scatola
186000381
Cartuccia in vetro Oasis HLB
5 cc/200 mg
60 µm
30/scatola
186000683
Colonna Oasis MCX
3,9 x 20 mm
30 µm
1/conf.
186002048
Cartuccia Oasis HLB Prospekt 2/Symbiosis*
1,0 x 10 mm
30 µm
96/scatola
186001196
Colonna Oasis MCX
4,6 x 20 mm
30 µm
1/conf.
186002049
Cartuccia Oasis HLB Prospekt 2/Symbiosis*
2,0 x 10 mm
30 µm
96/scatola
186003925
Recipiente da 30 cc per cartucce Oasis
48/scatola
WAT011390
Piastra Oasis MCX µElution
96 pozzetti
30 µm
1/conf.
186001830BA
Recipiente da 60 cc per cartucce Oasis
12/scatola
WAT024659
Piastra Oasis MCX
10 mg/96 pozzetti
30 µm
1/conf.
186000259
Adattatore per recipiente per cartucce da 1 cc, 3 cc, 6 cc
10/scatola
WAT054260
Adattatore per recipiente per cartucce da 12 cc, 20 cc, 35 cc
10/scatola
WAT048160
Piastra Oasis MCX
30 mg/96 pozzetti
30 µm
1/conf.
186000248
Piastra Oasis MCX
30 mg/96 pozzetti
60 µm
1/conf.
186000250
10/conf.
405000934
Piastra Oasis MCX
60 mg/96 pozzetti
60 µm
1/conf.
186000678
30 µm
Adattatore per recipiente per cartucce da 5 cc, Teflon
500/scatola
WAT058883
Colonna Oasis HLB
2,1 x 20 mm
5 µm
1/conf.
186002034
Colonna Oasis HLB
3,0 x 20 mm
5 µm
1/conf.
186002037
Colonna Oasis HLB
3,9 x 20 mm
5 µm
1/conf.
186002040
Colonna-cartuccia Oasis HLB
3,9 x 20 mm
5 µm
1/conf.
186001413
Colonna Oasis HLB
4,6 x 20 mm
5 µm
1/conf.
186002043
Colonna Oasis HLB
2,1 x 20 mm
15 µm
1/conf.
186002035
Colonna Oasis HLB
3,0 x 20 mm
15 µm
1/conf.
186002038
Colonna Oasis HLB
3,9 x 20 mm
15 µm
1/conf.
186002041
3,9 x 20 mm
15 µm
1/conf.
186001414
Colonna Oasis HLB
4,6 x 20 mm
15 µm
1/conf.
186002044
Colonna Oasis HLB
2,0 x 15 mm
25 µm
1/conf.
186001792
Colonna Oasis HLB
2,1 x 20 mm
25 µm
1/conf.
186002036
2,1 x 20 mm
25 µm
1/conf.
186000706
Colonna Oasis HLB
3,0 x 20 mm
25 µm
1/conf.
186002039
Colonna Oasis HLB
3,9 x 20 mm
25 µm
1/conf.
186002042
Colonna Oasis HLB
4,6 x 20 mm
25 µm
1/conf.
186002045
Kit di supporto per colonna-cartuccia da 2,1 x 20 mm
1/conf.
186000262
1/conf.
WAT046910
Raccordo per colonna di estrazione
1/conf.
WAT082745
Kit per filtro precolonna in linea
1/conf.
WAT084560
Filtri
5/conf.
WAT005139
Guarnizioni in acciaio
1/conf.
WAT084567
Piastra Oasis HLB µElution
2 mg/96 pozzetti
30 µm
1/conf.
186001828BA
Piastra Oasis HLB
5 mg/96 pozzetti
30 µm
1/conf.
186000309
Piastra Oasis HLB
10 mg/96 pozzetti
30 µm
1/conf.
186000128
Piastra Oasis HLB
30 mg/96 pozzetti
30 µm
1/conf.
WAT058951
Piastra Oasis HLB
60 mg/96 pozzetti
60 µm
1/conf.
186000679
* Da utilizzare con i sistemi Spark Holland Prospekt 2 e Symbiosis
[ 24 ]
Prodotti Oasis MAX (scambio anionico)
Prodotti Oasis WCX (scambio cationico debole)
Dimensioni
Descrizione
particelle
Quantità
N. catalogo
Descrizione
Dimensioni
particelle
Quantità
N. catalogo
Cartuccia Oasis MAX
1 cc/30 mg
30 µm
100/scatola
186000366
Cartuccia Oasis WCX da 1 cc
30 mg
30 µm
100/scatola
186002494
Cartuccia senza flangia Oasis MAX
1 cc/30 mg
30 µm
100/scatola
186001883
60 mg
30 µm
100/scatola
186002495
Cartuccia Oasis MAX
3 cc/60 mg
30 µm
100/scatola
186000367
NUOVA cartuccia Oasis WCX da 6 cc
150 mg
30 µm
30/scatola
186002498
Cartuccia Oasis MAX
3 cc/60 mg
60 µm
100/scatola
186000368
30 mg
60 µm
100/scatola
186002496
Cartuccia senza flangia Oasis MAX
3 cc/60 mg
30 µm
100/scatola
186001884
60 mg
60 µm
100/scatola
186002497
Cartuccia Oasis MAX
6 cc/150 mg
30 µm
30/scatola
186000369
Cartuccia Oasis WCX Plus
225 mg
60 µm
50/scatola
186003518
Cartuccia Oasis MAX
6 cc/150 mg
60 µm
30/scatola
186000370
Piastra Oasis WCX µElution
2 mg/96 pozzetti
30 µm
1/conf.
186002499
Cartuccia Oasis MAX
6 cc/500 mg
60 µm
30/scatola
186000865
Cartuccia Oasis MAX Plus
225 mg
60 µm
50/scatola
186003517
Piastra Oasis WCX a 96 pozzetti
10 mg/96 pozzetti
30 µm
1/conf.
186002501
Cartuccia Oasis MAX Vac RC
20 cc/30 mg
30 µm
50/scatola
186000372
Piastra Oasis WCX a 96 pozzetti
30 mg/96 pozzetti
30 µm
1/conf.
186002503
20 cc/60 mg
30 µm
50/scatola
186000371
Cartuccia Oasis WCX Prospekt 2/Symbiosis*
1,0 x 10 mm
30 µm
96/scatola
186002892
20 cc/60 mg
60 µm
50/scatola
186000378
10 x 1 mm
30 µm
96/scatola
186002099
Cartuccia Oasis MAX Prospekt 2/
Symbiosis*
Colonna a collegamento diretto Oasis
MAX
Colonna Oasis MAX
2,1 x 15 mm
30 µm
1/conf.
186002056
2,1 x 20 mm
30 µm
1/conf.
186002052
Colonna-cartuccia Oasis MAX
2,1 x 20 mm
30 µm
1/conf.
186002057
Colonna Oasis MAX
3,0 x 20 mm
30 µm
1/conf.
186002053
Colonna Oasis MAX
3,9 x 20 mm
30 µm
1/conf.
186002054
Colonna Oasis MAX
4,6 x 20 mm
30 µm
1/conf.
186002055
Piastra Oasis MAX µElution
2 mg/96 pozzetti
1/conf.
186001829
Piastra Oasis MAX
Piastra Oasis MAX
Piastra Oasis MAX
Piastra Oasis MAX
10 mg/96 pozzetti
30 mg/96 pozzetti
60 mg/96 pozzetti
60 mg/96 pozzetti
30 µm
30 µm
30 µm
60 µm
1/conf.
1/conf.
1/conf.
1/conf.
Colonna Oasis WCX da 2,1 x 20 mm
30 µm
186002505
30 µm
186002507
5 µm
186002510
5 µm
186002512
Prodotti Oasis WAX (scambio anionico debole)
Dimensioni
Descrizione
186000375
186000373
186001256
186001205
particelle
Quantità
N. catalogo
Cartuccia Oasis WAX da 1 cc
30 mg
30 µm
100/scatola
186002489
60 mg
30 µm
100/scatola
186002490
150 mg
30 µm
30/scatola
186002493
30 mg
60 µm
100/scatola
186002491
60 mg
60 µm
100/scatola
186002492
Cartuccia Oasis WAX Plus
225 mg
60 µm
50/scatola
186003519
Piastra Oasis WAX µElution
96 pozzetti
30 µm
1/conf.
186002500
Piastra Oasis WAX a 96 pozzetti
10 mg/96 pozzetti
30 µm
1/conf.
186002502
Piastra Oasis WAX a 96 pozzetti
30 mg/96 pozzetti
30 µm
1/conf.
186002504
NUOVA piastra Oasis WAX a 96 pozzetti
60 mg
30 µm
1/conf.
186003915
Cartuccia Oasis WAX Prospekt 2/Symbiosis*
1,0 x 10 mm
30 µm
96/scatola
186002893
* Da utilizzare con i sistemi Spark Holland Prospekt 2 e Symbiosis
Kit per lo sviluppo dei metodi Oasis
Descrizione
Piastra per la selezione dell'adsorbente Oasis
3 righe ciascuna:
96 pozzetti
MCX, MAX, WCX, WAX
NUOVA piastra per la µElution selezione
dell'adsorbente OasisµElution, 3 righe ciascuna: 96 pozzetti
MCX, MAX, WCX, WAX
Kit di cartucce per la selezionedell'adsorbenteOasis, 10 ciascuno:
1 cc/30 mg
MCX, MAX, WCX, WAX
Dimensioni particelle
N. catalogo
30 µm
186003249
30 µm
186004475
30 µm
186003463
[ 25 ]
Colonna Oasis WAX da 2,1 x 20 mm
30 µm
186002508
30 µm
186002509
5 µm
186002511
5 µm
186002513
Stazione di estrazione per piastra
Stazione di estrazione per cartucce
Descrizione
Quantità
N. catalogo
Stazione di estrazione per piastra Oasis a 96 pozzetti
1/scatola
186001831
Descrizione
N. catalogo
Stazione di estrazione Waters a 20 posti senza rack(include 20 punte di ago, 25 tappi e
uno strumento di espulsione)
WAT200677
Stazione di estrazione Waters a 20 posti(fornita con rack per provette da 13 x 75 mm)
WAT200606
WAT097945
WAT200607
WAT097946
WAT200608
WAT200609
Kit A per stazione di estrazione per piastra (comprende la stazione
di estrazione per piastra, vassoio, lamina di tenuta e piastra di
raccolta dei campioni da 350 µl)
WAT097944
Kit B per stazione di estrazione per piastra
(come il kit A, con piastra di raccolta dei campioni da 1 ml)
Kit C per stazione di estrazione per piastra
(come il kit A, con piastra di raccolta dei campioni da 2 ml)
Piastra Oasis µElution a 96 pozzetti
Piastra Oasis a 96 pozzetti
(richiede lo spaziatore della stazione)
(non richiede lo spaziatore)
Spaziatore per piastra
µElution (incluso
nel kit della stazione)
Collettore della piastra
di estrazione
Piastra di
186001831
raccolta
Stazione di estrazione Waters
Accessori per stazione di estrazione per piastra
Descrizione
Accessori per colonne e cartucce di estrazione
Quantità
N. catalogo
Descrizione
Quantità
N. catalogo
Vassoio eliminabile
25/scatola
WAT058942
1/conf.
186000262
Piastra di raccolta dei campioni, 350 µl
50/scatola
WAT058943
1/conf.
WAT046910
Piastra di raccolta dei campioni, 2 ml
50/scatola
WAT058958
Raccordo per colonna di estrazione
1/conf.
WAT082745
Kit per filtro precolonna in linea
1/conf.
WAT084560
Filtri
5/conf.
WAT005139
1/conf.
WAT084567
Lamina di tenuta e piastra di raccolta dei campioni da 96 pozzetti
50/conf.
WAT058959
Pompa per vuoto (115 V 60 Hz) per SPE
725000417
Guarnizioni in acciaio
725000418
186003522
Kit di guarnizioni per la pompa pervuotoIl kit include: 2 guarnizioni in espanso 2
O-ring arancione
Kit di guarnizioni per la
pompa per vuoto
725000417
725000418
Recipiente da 30 cc (per cartucce Oasis Plus, Light, Vac e Classic)
48/conf.
WAT011390
Recipiente da 60 cc (per cartucce Oasis Plus, Light e Vac)
12/conf.
WAT024659
Adattatore, Luer maschio-maschio (per cartucce Oasis Classic)
100/conf.
WAT024310
Adattatore (per collegare il recipiente alle
cartucce Oasis Vac da 1, 3 e 6 cc)
12/conf.
WAT054260
Adattatore (per collegare il recipiente alle
cartucce Oasis Vac da 12, 20 e 35 cc)
10/conf.
WAT048160
Pompa per vuoto per SPE
(include due vacuometri e regolatore di pressione)
[ 26 ]
[ 27 ]
Uffici vendita
Austria e area di esportazione europea
(Europa centrale, meridionale e orientale,
CSI e Medio Oriente) +43 1 877 18 07
Corea 82 2 820 2700
Australia 61 2 9933 1777
Paesi Bassi 31 76 508 7200
Belgio 32 2 726 1000
Norvegia 47 63 84 60 50
Brasile 55 11 5094-3788
Polonia 48 22 833 4400
Canada 1 800 252 4752 x2205
Portorico 1 787 747 8445
Cina 86 21 6879 5888
Singapore 65 6273 1221
CIS/Russia +7 495 3367000
Spagna 34 93 600 9300
Repubblica Ceca 420 2 617 1 1384
Svezia 46 8 555 11 500
Danimarca 45 46 59 8080
Svizzera 41 56 676 70 00
Finlandia 09 5659 6288
Taiwan 886 2 2543 1898
Francia 33 1 30 48 72 00
Regno Unito 44 208 238 6100
Germania 49 6196 400600
Tutti gli altri Paesi:
Waters Corporation U.S.A.
1 508 478 2000
1 800 252 4752
Hong Kong 852 29 64 1800
Ungheria 36 1 350 5086
India e subcontinente indiano
91 80 2837 1900
Messico 52 55 5200 1860
www.waters.com
Irlanda 353 1 448 1500
Italia 02 265 0983
Giappone 81 3 3471 7191
Il sistema di gestione della qualità degli stabilimenti produttivi Waters di Taunton,
nel Massachusetts, e Wexford, in Irlanda, è conforme alla norma internazionale
ISO 9001:2000 per la gestione e l'assicurazione della qualità. Il sistema di
gestione della qualità Waters viene periodicamente sottoposto a revisione da parte
dell'ente di certificazione per garantirne la conformità.
©2008 Waters Corporation. Waters, ACQUITY UPLC, Atlantis, IntelliStart, MassLynx,
Oasis, Quattro Premier, ScanWave, Sentry, Sirocco, SunFire, Symmetry, The Science
of What’s Possible, UPLC, XBridge, Xevo e XTerra sono marchi di fabbrica di Waters
Corporation. Teflon è un marchio di fabbrica di DuPont.
Tutti i marchi di fabbrica utilizzati sono riconosciuti. Tutti i diritti riservati.
Luglio 2008,
720001692IT 2008 IH-PDF

Purezza con SPE

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